苦参中生物碱的FTIR分析

药用苦参是豆科槐属植物普参(Sophora Flayes-cens Ait)的干燥根。有清热燥湿之功效。近代药理实验证明,苦参具有抗癌、平喘和抗心律不齐等作用。本实验用生物碱系从苦参根中提取分离得到,经熔点、紫外光谱、红外光谱、核磁共振谱、质谱等,确定为以下6种化合物:苦参碱(Matrine),氧化苦参碱(Oxymatrine),槐果碱(Sophocarpine),氧化槐果碱(Oxysophocarpine),槐定碱(sophoridine)和槐醇     

槐定碱预处理对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞c-Jun表达的影响

目的 观察槐定碱预处理对LPS刺激RAW264.7巨噬细胞c-Jun表达的影响,探讨槐定碱抗内毒素机制.方法 培养RAW264.7巨噬细胞,以槐定碱(31.25mg·L-1)预处理细胞24h后给予LPS(E.coli 055:B5)100μg·L-1刺激细胞,并于刺激后5、30、60、120min收集细胞;再以槐定碱31.25、15.63、7.81mg·L-1三个浓度同上预处理细胞,于IPS刺激后60min收集细胞.利用免疫细胞化学技术检测RAW264.7巨嘴细胞中c-Jun的表达.结果 单独槐定碱对c-Jun表达尢影响;LPS模型组各时间点c-Jun阳性细胞数均显著高于巨噬细胞对照组(P<0.01),且随LPS刺激时间延长而升高,持续升至120min;槐定碱预处理组在LPS作用后30、60、120min时c-Jun阳性细胞数均较同时间点LPS模型组降低,差异有统计学意义(均P<0.01),但槐定碱预处理组各时间点c-Jun阳性细胞数无明显变化.不同浓度槐定碱(31.25、15.63、7.81 mg·L-1)预处理细胞,对LPS刺激的c-Jun表达均有显著抑制作用(P<0.01),且31.25 mg·L-1的作用强于另两个浓度(15.63、7.81mg·L-1),差异有统计学意义(P<0.05).结论 槐定碱预处理RAW264.7巨噬细胞能显著抑制LPS诱导的c-Jun蛋白表达,其作用有剂量依赖性.     

槐定碱对急性心肌缺血大鼠血清MDA、SOD、GSH-PX及NO的影响

目的 研究槐定碱对急性心肌缺血大鼠血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)及NO的影响.方法 将SD大鼠随机分为8组,每组8只,分别为正常对照组、假手术组、模型组、丹参组、硝酸甘油组、槐定碱2.5、5和10mg/kg剂量组.结扎左冠状动脉前降支(LAD)制备大鼠急性心肌缺血模型,采用比色法检测静脉注射槐定碱各组血清中MDA、NO含量和SOD、GSH-PX活性.结果 与模型组相比,槐定碱2.5、5、10mg/kg组可降低急性心肌缺血大鼠血清MDA含量、升高SOD活性和NO含量(P<0.05或P<0.01).槐定碱5、10mg/kg组能升高GSH-PX活性(P<0.05或P<0.01).结论 槐定碱对急性心肌缺血损伤保护作用的机制可能与其清除氧自由基和抗脂质过氧化作用有关.     

槐定碱对小鼠免疫器官的影响

[摘要] 目的 观察槐定碱(SRI)观察对昆明小鼠免疫器官的影响。方法 将50只昆明小鼠分为槐定碱高剂量组(SRI H)、槐定碱低剂量组(SRI L)、氟尿嘧啶组(5-FU)、槐定碱+氟尿嘧啶合用组和生理盐水阴性对照组,腹腔注射给药两周。计算不同组别小鼠的胸腺指数、脾脏指数,进行胸腺、脾脏、肝脏、肾脏的病理组织学观察。结果 槐定碱组小鼠的胸腺、脾脏指数与阴性对照组比较均无显著变化(P>0.05);5-FU组小鼠胸腺和脾脏指数与阴性对照组比较显著降低(P<0.01);合用组小鼠的胸腺和脾脏指数与阴性对照组相比显著降低(P<0.01),胸腺指数与各组相比均有显著性差异(P<0.01),脾脏指数与5-FU组相比差异有显著性 (P<0.01),与对照组、槐定碱组比较差异无显著性 (P>0.05)。结论 SRI对昆明小鼠的免疫功能无明显抑制作用,可以拮抗5-FU对脾脏的免疫抑制。     

槐果碱对肺癌A549细胞增殖凋亡的作用机制

目的 探讨槐果碱对肺癌细胞的体外抑制作用及可能的作用机制.方法 不同浓度(1、2、4、8、16、32、64 mmol/L)槐果碱处理肺癌细胞A549,MTT检测槐果碱对A549的IC50,选择适宜浓度的槐果碱处理肺癌细胞A549(槐果碱组),未作处理的A549细胞作为对照组,克隆形成实验和BrdU实验检测两组细胞增殖,TUNEL和流式细胞数检测两组细胞凋亡,Western blot检测增殖细胞核抗原(PC-NA)、MYC、Bax、Bcl-2和脂质运载蛋白型前列腺素D合成酶(L-PGDS)和PTGDR2蛋白表达,A549细胞给与5 ng/ml PGD2激活剂处理(PGD2组),克隆形成实验、TUNEL实验和Western blot实验检测PGD2对A549细胞增殖和凋亡的影响.结果 槐果碱对A549的IC50为5.196 mmol/L.克隆形成和BrdU实验结果显示,5 mmol/L槐果碱处理的槐果碱组肺癌细胞A549细胞增殖低于对照组,凋亡高于对照组,PC-NA、MYC、Bcl-2蛋白表达低于对照组,Bax蛋白表达高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);槐果碱组L-PTGDS和PTGDR2蛋白表达高于对照组(P＜0.05),给予5 ng/ml PGD2激活剂处理的A549细胞增殖受到抑制,凋亡显著增加(P＜0.05).结论 槐果碱可以抑制肺癌细胞增殖,促进凋亡,激活PGD2/PTGDR2通路,从而抑制肺癌的发生.     

槐胺碱的抗实验性心律失常作用

槐胺碱(20mg/kg)静脉注射可拮抗乌头碱(20μg/kg)、BaCl_2(4mg/kg)在大鼠所诱发的心律失常(P<0.05),拮抗氯仿-肾上腺素所致的兔心律失常。在豚鼠槐胺碱增加哇巴因诱发室早,室速、室颤及心跳停止所需要的用量。此药在10～20mg/kg腹腔注射还可减少氯仿所致的大鼠室颤,和乙酰胆碱-CaCl_2研致的房颤(扑),槐胺碱显著降低大鼠的心率并拮抗异丙肾上腺素的正性变速作用。     

高效液相色谱法对大鼠体内槐果碱的药代分析

目的研究苦参中有效成分槐果碱在大鼠体内血、组织和脏器中的浓度,进行药代动力学分析.方法建立槐果碱的高效液相色谱法(HPLC),对大鼠静注槐果碱(20 mg/kg)后的药时曲线、组织分布进行研究;房室模型及药动学参数通过3p87软件拟合计算.结果槐果碱的相对回收率100.7%～108.7%,日内、日间精密度RSD＜5%.血药浓度在0.625～20.0μg/mL、组织浓度在2.5～80.0μg/g范围内呈线性关系(r分别为0.99998、0.9964).大鼠静注槐果碱后,药代过程符合二室模型.组织分布以肾最高,多数脏器给药后15 h仍能测到.结论槐果碱在大鼠体内的药代动力学过程符合二室模型,且与组织有特异性结合.     

槐定碱预防小鼠内毒素性肝损伤的作用及对肝脏CD14、TLR4表达的影响

目的 研究预防性给予槐定碱对小鼠内毒素血症急性肝损伤的影响及对CD14、TLR4表达的调节.方法 观察槐定碱12、6、4mg/kg三个剂量预防性处理的小鼠,在给予内毒素后2、6、12、24h时各组小鼠一般状况、肉眼及光镜下肝组织的病理变化,赖氏法测定血清丙氨酸氨基转氨酶(ALT)浓度,RT-PCR与Western Blot分别检测肝组织CD14及TLR4的mRNA与蛋白表达,放免法检测血清TNF-α含量的变化.结果 槐定碱三个剂量预防性给予,各个时间点结果均表明改善了内毒素血症模型小鼠的一般状况,减轻了肝组织病理改变;槐定碱三个剂量组的ALT值均低于同时间点的LPS模型组(P<0.01或P<0.05);槐定碱三个剂量组与同时间点LPS模型组比较,均下调肝组织CD14、TLR4 mRNA和蛋白的表达(P<0.01或P<0.05);槐定碱三个剂量组血清TNF-α水平均较同时间点LPS模型组降低(P<0.01或P<0.05),并在24h时均降至正常对照组水平.结论 槐定碱12、6、4mg/kg三个剂量预防性给予,可抑制内毒素血症小鼠肝脏炎症反应,其机制可能与下调LPs识别受体CD14、TLR4表达,并进而抑制下游炎症因子分泌有关.     

槐定碱对小鼠巨噬细胞TLR4及JNK/c-jun mRNA表达的影响

目的观察槐定碱预处理对LPS刺激RAW 264.7巨噬细胞表达TLR4、JNK和c-jun mRNA及分泌TNF-α的影响,探讨槐定碱抗内毒素机制。方法培养RAW 264.7巨噬细胞,实验分为4组:空白对照组、槐定碱对照组、LPS组、槐定碱预处理组,用RT-PCR技术检测RAW 264.7细胞TLR4、JNK和c-jun的mR-NA表达量,放免法检测细胞培养液TNF-α分泌量。结果槐定碱对RAW 264.7巨噬细胞TLR4、JNK、c-jun的mRNA及细胞培养液中TNF-α基础表达无影响,但对经LPS激活的巨噬细胞的TLR4、JNK mRNA表达有显著抑制作用(均P<0.01),c-jun mRNA表达亦降低,但与LPS模型组比较差异尚无统计学意义。槐定碱预处理组细胞液中TNF-α含量显著低于LPS模型组(P<0.01)。结论槐定碱抗内毒素机制与其抑制LPS引起的TLR4、JNK的mRNA高表达,并减少TNF-α分泌有关。     

高效液相色谱法对大鼠体内槐果碱的药代分析

目的 研究苦参中有效成分槐果碱在大鼠体内血、组织和脏器中的浓度,进行药代动力学分析。方法建立槐果碱的高效液相色谱法(HPLC),对大鼠静注槐果碱(20 mg/kg)后的药时曲线、组织分布进行研究;房室模型及药动学参数通过3p87软件拟合计算。结果 槐果碱的相对回收率100.7％～108.7％,日内、日间精密度RSD<5％。血药浓度在0.625～20.0μg/mL、组织浓度在2.5～80.0μg/g范围内呈线性关系(r分别为0.99998、0.9964)。大鼠静注槐果碱后,药代过程符合二室模型。组织分布以肾最高,多数脏器给药后15 h仍能测到。结论 槐果碱在大鼠体内的药代动力学过程符合二室模型,且与组织有特异性结合。     

基于液相质谱联用测定复方苦参汤中三种生物碱的含量

目的基于LC-MS/MS测定复方苦参汤中苦参碱、氧化槐果碱、氧化苦参碱的含量。方法采用LC-MS/MS(Agilent 1260液相色谱仪,AB SCIEX 4000QTRAP三重四级杆质谱仪),Agilent 5 TC-C18(2)(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-水,梯度洗脱,流速400μL/min,进样量5μL,柱温30℃;离子源为ESI源,采用正离子模式进行检测,检测离子对质荷比为:苦参碱(249.2/148.3)、氧化槐果碱(262.9/136.1)、氧化苦参碱(265.3/136.1)。结果苦参碱、氧化槐果碱、氧化苦参碱的线性关系良好(r0.995),平均加样回收率分别为99.7%(RSD=3.4%)、102.1%(RSD=3.1%)、100.8%(RSD=2.9%),10批样品中苦参碱、氧化槐果碱、氧化苦参碱含量分别在0.4475～0.5229 mg/mL、0.0564～0.0812mg/mL、0.1512～0.2142mg/mL范围内。结论该法简便、快捷、可行性强,可用于测定复方苦参汤中苦参碱、氧化苦参碱、氧化槐果碱含量。     

苦参碱、氧化苦参碱和槐定碱对巨噬细胞RAW264.7表达CD91、CD13和分泌TNF α的抑制作用

目的探讨苦参碱、氧化苦参碱和槐定碱对巨噬细胞RAW264.7表达CD91、CD13和分泌TNF-α的抑制作用。方法(1)用6孔板培养巨噬细胞RAW264.7,制作细胞爬片,然后与不同浓度(0、12.5、25、50、100、200mg/L)的苦参碱、氧化苦参碱和槐定碱共培养,细胞爬片免疫组化染色,检测CD91和CD13的表达情况,并采用MediaCybernetics公司的图像分析系统进行定量分析,测量积分光密度(IOD)值。(2)6孔培养板培养巨噬细胞RAW264.7,加入不同浓度的苦参碱、氧化苦参碱和槐定碱与巨噬细胞共培养1d后,收集培养孔中的培养液,采用ELISA方法检测培养液中TNF-α的含量。结果苦参碱、氧化苦参碱和槐定碱均能抑制巨噬细胞表达CD91和CD13,其抑制作用随浓度变化也有不同,苦参碱更明显。不同浓度的苦参碱、氧化苦参碱和槐定碱对巨噬细胞分泌TNF-α有抑制作用,苦参碱对巨噬细胞RAW264.7分泌TNF-α的抑制作用更明显。结论苦参碱、氧化苦参碱和槐定碱对巨噬细胞表达CD91、CD13和分泌TNF-α有明显的抑制作用。     

HPLC法测定苦参生物碱部位中4种成分含量

目的建立苦参生物碱部位中4种成分氧化苦参碱、氧化槐果碱、苦参碱和槐果碱的HPLC含量测定方法。方法采用Agilent Zorbax C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),系统A为10 mmol/L醋酸铵水溶液(0.1%氨水,pH=9.2),系统B为20 mmol/L醋酸铵的甲醇-乙腈(1∶1)混合溶液,梯度洗脱,洗脱流速为0.8 mL/min,检测波长220 nm。结果氧化苦参碱、氧化槐果碱、苦参碱、槐果碱平均回收率分别为101.43%、99.08%、102.59%和102.06%,RSD分别为1.30%、0.94%、1.69%和1.10%。结论3批样品测定结果表明,该方法简便、准确,可用于苦参生物碱部位中4种生物碱成分的含量测定。     

槐定碱对内毒素血症小鼠肺组织p38MAPK/AP-1表达的影响

目的观察槐定碱对内毒素血症小鼠p38MAPK信号分子、转录因子激活蛋白1(AP-1)及下游炎症因子TNF-α影响,探讨槐定碱抗内毒素的药理机制。方法 BALB/c小鼠尾静脉注射LPS(7mg.kg-1)制备内毒素血症小鼠模型,30min后腹腔注射槐定碱,剂量分别为12、6和3mg.kg-1,6h后取血和肺组织。免疫印迹法(Western-blot)检测肺组织总p38MAPK、磷酸化p38 MAPK蛋白表达,RT-PCR检测肺组织c-jun和c-fos mRNA表达,放免法检测血清中TNF-α含量。结果与内毒素血症模型组比较,三个剂量槐定碱干预组肺组织中磷酸化p38蛋白表达显著降低(P<0.01或P<0.05),c-jun和c-fos mRNA表达显著减少(P<0.01或P<0.05),血清中TNF-α含量明显下降(P<0.01或P<0.05)。结论槐定碱可抑制肺组织中p38MAPK的磷酸化,下调c-jun和c-fos mRNA的表达,抑制下游炎症因子TNF-α表达。     

槐定碱预处理对LPS诱导RAW264.7细胞表达NF-κB的影响

目的观察槐定碱预处理对LPS诱导RAW264.7细胞NF-κB p65、TNF-α表达的影响,探讨槐定碱抗内毒素机制。方法培养RAW264.7细胞,分为空白对照组、槐定碱预处理对照组、LPS模型组、槐定碱预处理+LPS组。各组处理完毕后5、30、60、120min,分别获取细胞与细胞培养液。Western Blot和RT-PCR分别检测细胞NF-κB p65蛋白与mRNA表达,放免法检测细胞培养液TNF-α含量。结果单独槐定碱对NF-κB p65以及TNF-α表达无影响;LPS模型组各时间点NF-κB p65 mRNA与蛋白以及TNF-α表达均显著高于空白对照组(P<0.01),且随LPS刺激时间延长而持续升高,至120min未见下降;槐定碱预处理+LPS组NF-κB p65mRNA与蛋白及其下游TNF-α表达均较同时间点LPS模型组降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论槐定碱预处理可通过抑制LPS诱导的RAW264.7细胞的NF-κB p65表达及TNF-α分泌发挥抗炎作用。     

槐定碱、氧化槐定碱的药理学研究进展

槐定碱(sophoridine,SR)、氧化槐定碱(oxysophoridine,OSR)是从豆科槐属植物苦豆子(sophora alopecuroides L)中提取到的一对重要的生物碱,其基本结构是由2个三价氮原子稠和的双哌啶环。近几年,关于这两种生物碱的研究又有了很大的进展,探索了其多方面的药理活性。本文对其药代动力学、药理作用、作用机制及应用前景做一综述,为进一步认识、研究、开发利用这一对生物碱提供参考。     

RP-HPLC法测定苦豆子总碱注射液中槐定碱、苦参碱和槐果碱的含量

目的建立苦豆子总碱注射液的含量测定方法。方法采用RP—HPLC法同时测定苦豆子总碱注射液中的槐定碱、苦参碱、槐果碱的含量。结果槐定碱、苦参碱、槐果碱的线性范围分别为7．32～732、1．43～143、0．372～37．2μg／mL,平均回收率分别为101．3％、98．74％、99．58％,RSD分别为0．86％、1．32％、1．13％。结论该方法简便、准确、重现性好,可作为苦豆子总碱注射液中生物碱的质量控制方法。     

槐定碱致大鼠惊厥作用的研究

目的 观察槐定碱(sophoridine)致惊厥大鼠清醒核团脑电变化,探讨槐定碱致惊厥作用特点.方法 采用慢性埋藏电极记录清醒状态大鼠核团脑电的方法,观察槐定碱致惊厥的脑电特点并确定惊厥原发部位.结果 杏仁核(amygdale)和海马(hippocampus)脑区对于槐定碱致惊厥作用敏感.杏仁核或(和)海马-内嗅皮层-颞叶皮层通路可能是槐定碱致惊厥样放电扩布到整个皮层的主要途径.结论 杏仁核或(和)海马内部异常放电在槐定碱致惊厥作用中起重要作用.     

苦参碱类药物新型给药系统研究进展

<正>苦参碱类药物主要包括苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱等一类独特的生物碱[喹里西啶生物碱,也称羽扇生物碱(tetracyclo-quinolizindine alkaloids)]。苦参碱首先在1958年被分离确认,此后几十年里,陆续从苦参中发现氧化苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱、槐定碱、槐胺碱等。这些生物碱均具有较好的生物活性,但目前临床上仅有肌注型苦参碱注射液及以氧化苦参碱为主要成分的苦参素注射液应用于慢性肝     

槐果碱的体外抗弓形虫作用

[目的]评估槐果碱的体外抗弓形虫作用.[方法]采用CCK-8法测定槐果碱对HeLa细胞的毒性和对弓形虫选择性作用的效果,光学显微镜下观察细胞形态变化,应用台盼蓝拒染法检测活细胞百分比.[结果]槐果碱浓度为500μmol/L时,对HeLa细胞有明显的抑制作用;槐果碱体外抗弓形虫作用的选择性指数为0.96,效果低于乙胺嘧啶(1.77),但优于螺旋霉素(0.73);给予200μmol/L槐果碱治疗24 h后,HeLa细胞破损程度明显降低,细胞内外速殖子数量显著减少,且在10~200μmol/L浓度范围内时活细胞比例随给药浓度的增加而明显上升.[结论]槐果碱在体外表现出良好的抗弓形虫活性,且对弓形虫感染的HeLa细胞具有一定程度的保护作用.