薄层层析法检测板蓝根所含靛玉红、靛蓝的方法研究

目的:对板蓝根所含靛玉红、靛蓝的薄层色谱进行实验性研究。方法:采用硅胶G板点样,选择最佳展开系统和样品最低检出量。结果:获得最佳色谱条件①硅胶G板为吸附剂;②石油醚-乙酸乙酯-氯仿(1∶1∶8)为展开剂。该色谱条件下,样品所含靛玉红、靛蓝的最低检出量分别为20μl、12μl。结论:本方法简便、快速、有效,可以作为板蓝根提取液靛玉红及靛蓝的相对含量的检测方法。     

脑室注射促甲状腺素释放激素对脑内痛放电的影响

用细胞外记录单位放电和脑室微量注射的方法,在58只大鼠的中脑网状结构(MRF)内,观察了71个痛兴奋神经元(PEN)对促甲状腺素释放激素(TRH)的放电反应。结果:脑室注射TRH(10μg/10μl),引起MRF内PEN痛放电频率的显著降低;在电针“足三里”结合脑室注射TRH(10μg/10μl)的实验中,TRH加强电针抑制痛放电的效应;TRH的这种抑制作用可被脑室预先注射阿托品(5μg/10μl)所取消或明显减弱。本文对其机理进行了讨论。     

固相萃取RP-HPLC测定小鼠肝脏组织中的德氮吡格

目的:建立小鼠肝脏组织中德氮吡格(Tetrazanbigen)的反相高效液相色谱(RP-HPLC)测定方法.方法:精密称取小鼠肝脏组织,匀浆后同相萃取(Solid phase extraction,SPE).液相色谱采用Lichrospher C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以甲醇-0.1%三乙胺水溶液(pH6.5)(体积比90:10)为流动相,流速1.0ml/min,检测波长260 nm,进样量20 μl.结果:实验表明,肝脏组织匀浆液中德氮吡格在2～20μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 3),平均回收率为106.47%.最低定量限为1.0μg/ml.结论:本文建立的固相萃取RP-HPLC方法简便、准确、选择性和重现性好,适合于德氮吡格的肝脏组织浓度检测.     

小柴胡汤高效液相色谱指纹图谱的建立

目的 建立小柴胡汤小分子成分指纹图谱.方法 色谱柱为Thermo Scientific Syncronis C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm,5μm),以乙腈-水(含0.1％甲酸)为流动相梯度洗脱,流速1.0 ml/min,检测波长276 nm,进样量20μl.采用Q-TOF-MS-IDA-MS/MS方法对19个特征色谱峰中的11个色谱峰进行了定性鉴别.结果 该方法精密度、稳定性和重复性良好.结论 该方法为小柴胡汤质量评价提供了依据.     

山奈酚和槲皮素对大鼠细胞色素P450酶活性的影响

目的:观察山奈酚和槲皮素两种银杏黄酮对细胞色素P450的影响。方法:原代培养大鼠肝细胞,接触0.1~10.0μm o l/L的山奈酚或槲皮素,作用12 h、24 h和48 h,用N ash法检测细胞色素P450同工酶-红霉素N-脱甲基酶(ENRD)和氨基比林N-脱甲基酶(ADM)的活性。分别以红霉素(10.0μm o l/L)和二甲基亚砜(DM SO)作为阳性对照和溶剂对照。结果:0.1、1.0和10.0μm o l/L山奈酚作用24 h,ENRD酶活性分别为(0.088±0.008)、(0.074±0.006)和(0.041±0.003)μm o l/(m g.m in-1);槲皮素相同浓度和作用时间处理的ENRD酶活性分别为(0.082±0.007)、(0.063±0.007)和(0.034±0.005)μm o l/(m g.m i-n 1)。其中1.0和10.0μm o l/L山奈酚和槲皮素处理的肝细胞ENRD酶活性都显著低于溶剂对照组(0.085±0.011)μm o l/(m g.m in-1),且呈剂量-效应关系(P<0.01)。10μm o l/L山奈酚处理细胞12 h和48 h后,ENRD酶活性为(0.053±0.006)和(0.037±0.007)μm o l/(m g.m i-n 1);10μm o l/L槲皮素处理细胞12 h和48 h后,ENRD酶活性为(0.067±0.005)和(0.032±0.004)μm o l/(m g.m i-n 1),都具有明显的时间-效应关系(P<0.01)。山奈酚只有在10μm o l/L浓度下作用24 h对ADM活性出现抑制,槲皮素对ADM活性没有明显影响。结论:在本实验条件下,山奈酚和槲皮素能明显抑制大鼠肝细胞ENRD活性;山奈酚在10μm o l/L浓度下能轻度抑制ADM,而槲皮素对ADM活性没有明显的抑制作用。     

襄樊地区健康成人尿液有形成分参考值范围探讨

目的 使用非离心直接定量计数法,调查襄樊地区健康成人尿液中白细胞、红细胞、上皮细胞和管型的定量参考值.方法 选择1185例健康体检者,使用一次性定量计数板和UF-100全自动尿液有形成分分析仪,直接计数随机尿中红细胞、白细胞、上皮细胞和管型的数量.结果 (1)定量计数板法男性:白细胞0～10/μl,红细胞0～5/μl,上皮细胞0～5/μl;女性:白细胞0～27/μl,红细胞0～13/μl,上皮细胞0～33/μl.(2)UF-100法男性:白细胞0～11/μl,红细胞0～6/μl,上皮细胞0～5/μl;女性:白细胞0～28/μl,红细胞0～14/μl,上皮细胞0～35/μl.两种方法的参考值的差异无统计学意义(P＞0.05),而男性与女性的参考值的差异有统计学意义(P＜0.05).结论 使用尽量不破坏尿液中有形成分的定量计数法,可提供更加接近真实情况的参考值,为尿液有形成分检查的规范化、标准化和临床应用提供了依据.     

PDGF-B链基因的三链形成寡核苷酸对大鼠脑胶质瘤生长及细胞周期的影响

目的:观察血小板衍生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)B链基因的三链形成寡核苷酸(triplex formingoligonucleotide,TFO)对大鼠胶质瘤细胞生长及细胞周期的影响.方法:所有SD大鼠(36只,体质量220～250 g)均在右尾状核区微量灌注1×106个C6胶质瘤细胞,其中实验Ⅰ组和Ⅱ组(n=12)在细胞接种后的第8天开始分别原位注射TFO 1.5mg/20μl和3.0 mg/20 μl的生理盐水,以后每隔72 h注射相同剂量的TFO,共注射3次.对照组(n=12)在相同时间原位注射20μl生理盐水.实验3周时处死所有的大鼠,观察肿瘤的生长情况,标本做常规H E染色.流式细胞仪检测肿瘤PDGF-B、PCNA的表达及细胞周期.结果:实验Ⅰ组、Ⅱ组的成瘤抑制率分别为66.1%、91.8%,两者相比有显著差异(P＜0.01).TFO对胶质瘤细胞PDGF-B、PCNA表达有明显的抑制作用(P＜0.01);TFO能明显降低胶质瘤细胞G2-M期和S期(DNA合成期)的百分率,阻止细胞由静止期(G0-G1期)进入DNA合成期(S期,P＜0.01).以上作用均存在浓度依赖性.结论:原位应用TFO能抑制PDGF-B表达,阻碍细胞进入S期,使胶质瘤细胞增殖降低,达到抗胶质瘤生长的作用.     

侧脑室注射5-羟色胺对大鼠胃运动的影响

采用定点记录大鼠胃运动的方法,观察了侧脑室内注入微量5-羟色胺(5-HT)对胃运动的影响。结果:①分别向侧脑室内注入5-HT12.5μg/10μl,25μg/10μl,50μg/10μl,可显著增强胃收缩幅度;②预先侧脑室内注入赛庚啶15μg/10μl,切断双侧隔下述走神经,阿托品0.2mg/kg,皮下注射(i.H)或 5μg/10μl侧脑室内注射(icv),均可完全阻断这一增强效应;③酚妥拉明2.5μg/kg肌肉注射(im)或5μg/10μl,icv,心得安5mg/kg,im或50μg/10μl,icv,对侧脑室内注入5-HT增强胃运动的作用均无影响(P>0.05)     

加味地黄丸质量标准研究

目的:建立加味地黄丸的质量标准.方法:采用薄层色谱法(TLC)对处方中女贞子、牡丹皮和黄柏进行定性鉴别,并采用高效液相色谱(HPLC)法检测加味地黄丸中齐墩果酸含量.以齐墩果酸对照品作对照,外标法检测,色谱柱ODS HYPERSIL C18 5μm( 4.6mm.I.D.×200mm);检测波长215nm;流动相甲醇-水(84:6);柱温25℃;进样量10μl.结果:TLC法定性分离度好、专属性强.HPLC法在优化色谱条件下,补肾调降丸中的齐墩果酸线性范围1.0～40μg.回归方程为Y=332.07338X+69.863160,r=0.9997.含量测定的回收率为97.72%,RSD=0.89%.结论:所建立的方法专属性强,操作简便,结果准确,重现性好,可用于加味地黄丸的内在质量控制. 作对照,外标法检测,色谱柱ODS HYPERSIL C18 5μm( 4.6mm.I.D.×200mm);检测波长215nm;流动相甲醇-水(84:6);柱温25℃;进样量10μl.结果:TLC法定性分离度好、专属性强.HPLC法在优化色谱条件下,补肾调降丸中的齐墩果酸线性范围1.0～40μg.回归方程为Y=332.07338X+6 .863160,r=0.9997.含量测定的回收率为     

河南省116例首诊艾滋病患者抗病毒治疗免疫学效果评价

目的分析河南省2009年首诊为艾滋病(AIDS)后随即接受抗病毒治疗的患者CD4+T淋巴细胞计数的变化情况。方法收集河南省艾滋病检测实验室网络数据库登记的116例河南省2009年首诊为AIDS后当年即接受抗病毒治疗的患者资料,将其按照治疗前CD4+T淋巴细胞数分成3组(<20个/μl,20~99个/μl和100~350个/μl),使用SPSS 14.0软件对患者治疗前、治疗后约2个月及5个月的CD4+T淋巴细胞数进行统计学分析。结果首诊后接受治疗的3组患者在治疗约2个月后CD4+T细胞计数同治疗前比较都有提高[<20个/μl组:(84.93±64.33)个/μlvs(9.39±5.10)个/μl,P=0.000;20~99个/μl组:(178.71±135.34)个/μlvs(46.62±18.71)个/μl,P=0.001;100~350个/μl组:(316.81±128.81)个/μlvs(197.66±67.59)个/μl,P=0.002],但是在治疗5个月后3组患者CD4+T细胞计数同治疗2个月时比较差异均无统计学意义。治疗前CD4+T细胞基线低的组达到的治疗效果较差。结论早发现、早治疗仍应是河南省开...     

头孢噻肟钠聚合物测定实验条件的改进

目的:对中国药典收载的头孢噻肟钠聚合物测定条件进行改进。 方法 :采用高效液相色谱法 ,以Sephadex G- 10色谱柱 4 2 cm× 1.3cm对 6批样品进行分析 ,分别进样 5 0μl和 2 0 0μl,按外标法计算聚合物的量。结果:头孢噻肟钠在 10～ 6 0 μg/m l范围内线性关系良好 (r=0 .9995 ) ,高中低浓度的加样回收率分别为 10 0 .2 %、10 0 .4 %、99.7% ;RSD分别为 1.7%、1.5 %、1.9% (n =3)。该方法与药典方法比较 ,差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。 结论:本方法简便、快速、可行 ,具有实用价值     

猪牙皂的薄层色谱鉴别研究

目的:确定猪牙皂薄层色谱鉴别的实验条件.方法:采用3种不同的展开剂分别进行猪牙皂薄层色谱鉴别研究.结果:猪牙皂薄层色谱条件为:采用硅胶G板,以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(14∶4∶0.5)为展开剂展开,10%硫酸乙醇溶液为显色剂,在105℃加热至斑点显色清晰.结论:本实验精密度好且操作简便易行.     

阻断缰核对伏核注射TRH抑制丘脑束旁核痛放电的影响

用细胞外记录神经元单位放电和核团微量注射法,观察了阻断缰核对伏核注射促甲状腺素释放激素(TRH)抑制大鼠丘脑束旁核痛兴奋性神经元(PEN)痛放电的影响。结果表明,向缰核分别预先注射2％利多卡因(0.5μl)、氟哌啶醇(2.5μg/μl)均可明显减弱伏核注射TRH对束旁核PEN痛放电的抑制作用。而在缰核内分别预先注射纳洛酮(5μg/μl)、阿托品(10μg/μl)则不影响伏核注射TRH抑制束旁核PEN痛放电的作用。以上结果提示,缰核是伏核下行性抑制的一个中继站,TRH在伏核的抗伤害性感受作用可能下行通过缰核内的多巴胺能神经元完成。     

退热口服液质量控制方法研究

目的建立退热口服液的质量控制方法,方法采用RP HPLC法,YWG G18(4.6mm×250mm 10μl)色谱柱,甲醇水冰乙酸(47∶53∶0 2)为流动相;流速0 7 ml·min-1;柱温35℃;波长280nm.结果黄芩苷在0 0796~0 398μg范围内浓度与峰面积呈良好的线形关系,回归方程为y=62285 56x+401 15,相关系数为r=0 9999,回收率为101 3%.结论该方法简便准确,具有良好的重现性,可作为含量测定方法.     

黄蜀葵花对肾病综合征模型大鼠肾小管损伤保护作用的研究

为探讨中药黄蜀葵花对肾病综合征肾小管损伤的保护作用 ,将每只实验大鼠静脉注射阿霉素 5mg/kg,同时饲以黄蜀葵花 ,观察其对大鼠尿Ⅲ型胶原、N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶 (NAG)、β2 微球蛋白 ( β2 MG)总排泄量的影响。结果 :阿霉素肾病模型大鼠尿Ⅲ型胶原、NAG、β2 MG水平均显著高于对照组 (P <0 .0 1 ) ,而黄蜀葵花治疗组的上述 3项指标与对照组相比无差异 ,且显著低于模型组 (P <0 .0 1 )。结果提示 :阿霉素肾病综合征模型大鼠存在肾小管间质损害 ,黄蜀葵花对其具有保护作用     

基于UPLC-Q/TOF-MS研究蚕砂不同炮制品主成分差异

目的:比较蚕砂不同炮制品之间主成分差异,筛选优质饮片.方法:采用UPLC-Q/TOF-MS检测,选择Ultimate AQ-C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以0.1％甲酸水(A)-乙腈(B)进行梯度洗脱,电喷雾离子源(ESI),在正、负离子模式进行数据采集,运行45min;使用质谱分析软件中的目...     

SARS患者T淋巴细胞亚群变化的初步研究

目的探讨严重急性呼吸综合征(SARS)患者T淋巴细胞亚群的变化.方法采用流式细胞术对30例SARS患者进行外周血T淋巴细胞亚群进行测定.结果SARS患者在病程早期外周血白细胞(4153.25±515.61)μl和淋巴细胞(1 535.14±147.91)μl,CD3+(941.45±101.64)μl,CD4+(378.35±42.51)μl,CD8+(436.39±52.41)μl及CD4+/CD8+比值(0.95±0.54),较正常人外周血白细胞(6958.52±789.45)μl和淋巴细胞(2589.63±351.81)μl,CD3+(1 465.28±139.23)μl,CD4+(798.65±69.35)μl,CD8+(563.89±71.81)μl及CD4+/CD8+比值(1.49±0.64)均明显降低(P均＜0.05).结论SARS患者外周血T淋巴细胞亚群的变化对阐明SARS的发病机制及指导临床合理用药有一定意义.     

薄层扫描法测定益肾抗衰片中黄芪甲苷的含量

益肾抗衰片系由人参、黄芪、淫羊藿、山楂等 8味中药制成的片剂 ,具有补气养血、益肾填精之功效 ,适用于气血虚损诸症。其中黄芪所含的黄芪甲苷为其主要活性成分。我们应用薄层色谱扫描法测定益肾抗衰片中黄芪甲苷的含量。1　仪器与试药CAMAG 型薄层色谱扫描仪 ,定量毛细管 ,CAMAG自动薄层铺板仪 ,硅胶 G(青岛海洋化工厂 ) ,硅胶 G薄层板 (厚 30 0μm) ,黄芪甲苷对照品与人参皂苷对照品 (中国药品生物制品鉴定所 ) ,益肾抗衰片 (河南省信阳大别山制药厂 ) ,试剂均为分析纯。2　实验条件的选择2 .1　展开剂的选择 :实验了不同展开条件进…     

A-O组合染色法显示神经尼氏小体、髓鞘和红细胞成分的应用

在实验动物和人体的神经组织染色中 ,神经尼氏小体和髓鞘染色应用较广。为了能够在组织中同时显示这些成分 ,我们选用天青 A和橘黄 G进行组合染色 (简称 A- O组合染色 ) ,染色效果满意 ,现报告如下。1　材料和方法1.1　材料及试剂　狗神经脊髓组织 5 0例由本校实验动物中心提供 ,经 15 %中性甲醛固定液 [1 ] 及时固定 ,常规组织脱水、透明、浸蜡、包埋和切片。天青 A乙醇原液 :天青 A (上海试剂三厂 ) 0 .5 g,2 0 %乙醇 10 0 m l;天青 A乙醇应用液 ,天青A乙醇原液 10 ml,2 0 %乙醇 90 m l,使用临时配制。橘黄 G染色液 :橘黄 G(上海试剂…     

吗啡对新生期大鼠脊髓背角长时程增强的作用

目的:评价吗啡对电刺激坐骨神经诱发新生期大鼠脊髓背角浅层长时程增强(LTP)的影响。方法:雄性SD大鼠20只,日龄18-21d,体重60-65g,随机分为对照组、吗啡组(M组)、纳洛酮组(N组),纳洛酮+吗啡组(MN组),每组8例。麻醉下分离左侧坐骨神经,记录电极插于左侧T13-L1脊髓背角浅层,刺激电极刺激左侧坐骨神经,给予4V、0.5ms、1/60Hz单个方波电刺激30min以诱发场电位,抽取生理盐水10μl、吗啡10μl(15μg/μl)、纳洛酮10μl(2.5μg/μl)、纳洛酮(2.5μg/μl)和吗啡(15μg/μl)各5μl的混合液,在脊髓上方3mm,经2min内缓慢滴注,给药后5min时,给予4串条件电刺激(8V、0.5ms、100Hz、串长1s、串间隔10s)后,再给予单个方波电刺激120min以上,记录强直刺激前30min、条件电刺激后0-30,35-60,65-120min时段平均场电位幅值及潜伏期。结果:与强直刺激前30min比较,C组和N组A类特征的波在强直刺激后各时段平均场电位幅值升高,潜伏期缩短,M组A类特征的波在强直刺激后各时段平均场电位幅值降低,潜伏期延长,MN组A类特征的波在强直刺激后0-30min平均场电位幅值升高,潜伏期缩短,35-120min时段平均场电位幅值降低,潜伏期延长,以上P<0.05或0.01,C类特征的波在刺激前后变化不明显。结论:吗啡可抑制电刺激新生期大鼠坐骨神经诱发脊髓背角以A类特征波的突触LTP,可能是其所处神经发育阶段决定的。