人表皮细胞培养方法的改进

表皮细胞体外培养技术的建立和发展,为烧伤治疗和皮肤病学研究等方面开拓了新的途径。目前国内外对表皮细胞培养技术仍处在不断探索和研究阶段。为进一步寻求更佳的表皮细胞培养方法,笔者在前人工作的基础上对表皮细胞的分离和培养过程进行了改进并获得成功。     

一种改进的人脐静脉平滑肌细胞培养方法

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle,VSMC)在心血管疾病的发生中占有重要的地位.采用培养的VSMC进行相关机制研究是一种普遍应用的实验方法.由于人体组织取材限制,很难获取大量原代培养的人VSMC.本室以健康胎儿脐静脉血管为材料,建立起一套完整的人脐静脉平滑肌细胞(human umbilical vein smooth muscle cells,hUVSMC)培养方法,具有周期短,细胞长出率高,可大规模培养等特点.     

人表皮细胞培养方法的研究

将手术中所致的薄皮，制成单细胞悬液，培养出表皮细胞膜片，这为解决严重烧伤病人皮源缺乏问题提供了一条途径，多次传代培养的表皮细胞抗原性下降或消失，又可作异体移植。     

人表皮细胞培养方法的研究

将手术中所取的薄皮，制成单细胞悬液，培养出表皮细胞膜片。这为解决严重烧伤病人皮源缺乏问题提供了一条途径，多次传代培养的表皮细胞抗原性下降或消失，又可作异体移植。     

大鼠星形胶质细胞培养方法的改进

目的 改进星形胶质细胞的体外纯化培养方法,为研究星形胶质细胞的生物学功能提供实验模型.方法 采用新生 SD大鼠,无菌操作取其大脑皮质,用0.025%的胰酶吹打消化成单个细胞,替代传统的0.25%的胰酶水浴消化15 min,单个细胞悬液接种于预先包被好PDL的24孔板或25 cm2的细胞培养瓶中,体外培养9~14天至细胞完全融合并铺满瓶底后进行传代.第2代细胞应用抗GFAP的抗体进行免疫荧光染色来鉴定星形胶质细胞的纯度.结果 免疫荧光染色结果显示这种培养方法分离培养出的星形胶质细胞纯度达到90%以上.结论 采用本实验改进的方法,培养的大鼠星形胶质细胞纯度高、生长状态良好,符合体外研究要求.     

人胃癌原代细胞培养方法的探讨

目的探讨一种经济、易行的人胃癌原代细胞培养的方法。方法培养瓶瓶底用鼠尾胶原包被,放置经过处理的1mm×1mm×1mm大小的人胃癌组织块数个,加入适量培养液使组织块底部刚好没入液体内,24小时换液一次,至大量肿瘤细胞培养出来。结果肿瘤细胞在2天￣3天后从组织块内爬出,呈半贴壁生长,并开始大量生长,蔓延至整个瓶底。结论利用经济易行的方法对人胃癌新鲜标本进行原代细胞培养,可以得到存活的肿瘤细胞。     

肺泡Ⅱ型细胞培养方法的探讨

目的 :研究不同方法对体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间的影响。方法 :不同浓度胰蛋白酶消化法和胰蛋白酶加胶原酶消化法消化、分离组织 ,低密度接种 ,常规浓度含血清培养和无血清培养 ,抗大鼠IgG包被与不包被 ,倒置显微镜观察细胞生长 ,检测细胞活力 ,免疫组织化学方法鉴定细胞纯度和电镜检测鉴定细胞。结果 :两种方法消化、分离组织 ,肺泡Ⅱ型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间经统计学分析无显著性差异。结论 :不同浓度胰蛋白酶消化分离肺组织程序相对简单、低密度接种、无血清培养所得细胞纯度能够满足体外研究肺泡Ⅱ型上皮细胞功能的需要 ,从而简化了体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞的程序。     

羊水细胞培养及制备方法改进的探讨

目的:探讨改进的羊水细胞培养及制备方法对产前诊断的价值。方法:对羊水细胞原位培养法进行改进,采用等量羊水与培养液混合培养,选择适当的时机终止培养,同时对羊水细胞染色体的制片方法作了改进。结果:64例羊水细胞培养及制备无一失败,发现1例44,XX,-14,-21,t(14;21)(p11;q11)。2例母血污染的羊水培养也获得成功。结论:本文改进的方法,克服了传统方法羊水细胞不易培养,培养周期长,染色体核型数量少,分散较差的缺点,获得了满意的效果。     

人表皮细胞培养及同种移植方法的研究

目的：为解决大面积烧伤及其它创伤性皮肤缺损创面覆盖问题，我们对人表皮细胞培养法及同种移植进行了研究。方法：采用细胞悬液培养及组织块培养方法对人表皮细胞进行了培养并对其临床同种移植进行了探讨。结果：组织块培养法皮片形成率为５４．１７％，细胞悬液培养法皮片成活率为４９．０５％，皮片形成率虽然不够理想，但我们的细胞悬液培养法皮片成活率比以前的方法大大提高。临床同种移植皮片共５２片，成活２３片。随访最长者达１５个月，皮片仍存活且无排异现象。结论：两种表皮细胞培养法简便、可行，提高了皮片形成率。表皮细胞皮片同种移植组织能在体内继续生存     

人脐动脉平滑肌细胞培养方法的探讨

目的研究人脐动脉血管平滑肌细胞的培养方法.方法运用贴块法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的培养,并用倒置显微镜进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定.结果运用贴块法成功培养了人脐动脉血管平滑肌细胞,培养的细胞呈典型"峰谷"样生长,免疫组化S-P法检测α-平滑肌肌动蛋白单克隆抗体(α-SMActin)表达,确认为人血管平滑肌细胞.经传代培养至3～5代,细胞生长特性未见异常改变.结论贴块法培养的人脐动脉血管平滑肌细胞生长稳定性好,且培养与纯化能同步进行.     

简便人大肠癌原代细胞培养方法的探讨

目的探讨简便、实用的人大肠癌原代细胞培养方法。方法在培养瓶底放置经过高浓度抗生素和两性霉素B反复处理的约1 mm3大小的人大肠癌组织块数个,加入2 ml含高浓度抗生素和两性霉素B的RPMI 1640培养液,直立培养7～10 h,轻轻放平培养24 h后再加入2 ml高浓度抗生素和两性霉素B的RPMI 1640培养液,至大量肿瘤细胞培养出来。结果肿瘤细胞在3～4 d后从组织块内爬出,贴壁大量生长,细胞融合成片,蔓延至整个瓶底。结论 利用简便易行的方法对大肠癌新鲜标本进行原代细胞培养可以得到存活的肿瘤细胞。     

肺泡型细胞培养方法的改良及其应用

目的研究不同方法对体外培养肺泡型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间的影响。方法采用不同浓度胰蛋白酶消化法和胰蛋白酶加胶原酶消化法消化、分离组织,低密度接种,常规浓度含血清培养和无血清培养,抗大鼠IgG包被与不包被,倒置显微镜观察细胞生长,检测细胞活力,免疫组织化学方法鉴定细胞纯度和电镜检测鉴定细胞。结果两种方法消化、分离组织,肺泡型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间经统计学分析无显著性差异。结论不同浓度胰蛋白酶消化分离肺组织程序相对简单、低密度接种、无血清培养所得细胞纯度能够满足体外研究肺泡型上皮细胞功能的需要,从而简化了体外培养肺泡型上皮细胞的程序。     

人离体子宫内膜细胞培养方法的建立

目的：建立分离培养人在位及异位子宫内膜间质及腺上皮细胞的方法，为进一步探讨子宫内膜异位症发生，发展的分子生物学机制提供一个理想的实验模型。方法：对36例在位子宫内膜及19例异位内膜随机分为离心分离组及筛网分离组进行体外培养。通过光镜观察及S－P免疫组化染色法，对间质及上皮细胞进行鉴定。结果：离心分离法培养的在位和异位内膜细胞中，成功率分别为61．1％和30％；筛网分离法培养的在位和异位内膜细胞中，成功率分别为83．3％和77．8％。结论：采用筛网分离法及离心分离法均能获得纯度较高的间质与上皮细胞。人子宫内膜细胞分离体外培养的成功，有助于揭示子宫内膜异位症的发病机制，为临床治疗提供重要的理论依据。     

人透明软骨抗OS-732细胞系浸润的研究——细胞培养及透射电镜观察

本文研究成骨肉瘤OS-732细胞系浸润软骨的机理,指出经盐酸胍处理后的软骨可被瘤细胞所浸润,这些浸润细胞在电镜下见其有生长、代谢旺盛的特点,提示正常软骨内含有抑制肿瘤细胞浸润的因子存在。     

人表皮细胞培养的研究进展

皮肤是人体体内最大的器官,它是由位于皮肤浅层的表皮和位干皮肤深层的真皮组成.由于其结构和功能的特殊性,形成了机体与外界环境之间的天然屏障.皮肤不但具有防御功能,还是个有独特免疫功能的组织器官.随着科学技术的发展,科研手段的日新月异,人们越来越重视到研究表皮的组织结构及其功能的重要性.其中组织细胆培养技术不乏是贯穿始终的一项皮肤研究手段,它为表皮的研究奠定了实验基地.     

肺泡Ⅱ型细胞培养方法的改良及其应用

目的：研究不同方法对体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间的影响。方法：采用不同浓度胰蛋白酶消化法和胰蛋白酶加胶原酶消化法消化、分离组织，低密度接种，常规浓度含血清培养和无血清培养，抗大鼠IgG包被与不包被，倒置显微镜观察细胞生长，检测细胞活力，免疫组织化学方法鉴定细胞纯度和电镜检测鉴定细胞。结果：两种方法消化、分离组织，肺泡Ⅱ型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间经统计学分析无显著性差异。结论：不同浓度胰蛋白酶消化分离肺组织程序相对简单、低密度接种、无血清培养所得细胞纯度能够满足体外研究肺泡Ⅱ型上皮细胞功能的需要，从而简化了体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞的程序。     

含AB型血清培养体系人角质形成细胞培养

目的：探讨人体角质形成细胞的培养技术，观察人角质形成细胞生长的过程，为培养角质形成细胞膜片提供新的方法。方法：采用改良后的含胎牛和人AB型血清培养体系进行人角质形成细胞的培养。结果：含人AB型血清培养体系培养的角质形成细胞5d融合达70％，9d达90％，11d完全融合，细胞分裂指数高峰在9d左右，可达1．1％，而不合AB型血清组培养的细胞5d后即出现退化样生长，不形成细胞膜片。进一步对含A13型血清的不同培养系统进行培养，将增殖高峰期培养的角质形成细胞应用MTT比色法测细胞增殖活性，进行比较，P〉0．05，表明添加F12、TC199、1640后对培养的角质形成细胞增殖作用无差异。结论：人AB型血清能够对体外培养的角质形成细胞生长起到刺激作用。