健脾、补肾和健脾补肾三法对慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞功能的影响

[目的]比较健脾法、补肾法和健脾补肾法对慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血树突状细胞(DCs)功能的影响。[方法]收集24例CHB患者和10例健康人的抗凝外周静脉血,分离外周血单个核细胞(PBMCs),进一步分离提取培养DCs,采用大鼠健脾、补肾和健脾补肾药物血浆进行干预。检测DCs细胞表面分子CD1α、CD80、CD86及藻红蛋白(HLA-DR)分子的表达。[结果]CHB组DCs表面分子CD1α、CD80、CD86及HLA-DR的表达较健康对照组低(P<0.05)。3组药物血浆干预后上述DCs表面分子表达率均有升高。其中,补肾药物血浆干预后DCs表面分子CDlα、CD80、CD86、HLA-DR表达率较干预前均有明显提高(P<0.05),且CD1α、CD86及HLA-DR表达率的提高较另2组明显(P<0.05)。[结论]健脾法、补肾法和健脾补肾法均能调节CHB患者DCs细胞免疫功能,以补肾法影响更为明显。     

CpG-ODN对慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞表型和功能的影响

研究含非甲基化CpG基序的寡核苷酸(CpG-ODN)对慢性乙型肝炎患者(CHB)外周血树突状细胞(den- dritic cell,DC)表型和功能的影响。以CpG-ODN刺激CHB和健康者外周血单核细胞衍生的DC成熟,结果显示,与 non-ODN和PBS组比,CpG-ODN能明显提高CHB患者DC的HLA-DR、CD86表达,使其IL-12分泌增加,刺激T 细胞增殖的能力亦显著增强(P<0．05),但不能明显提高CD1a表达。因此,CpG-ODN与TNF-α一样能促进CHB 患者外周血DC成熟进瓶增强其抗原提呈功能;CHB患者的細胞因子环境可能是DC功能沉默的重要原因。     

CpG-ODN联合HBsAg对慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞表型和功能的影响

目的　研究含非甲基化CpG基序的免疫刺激寡核苷酸 (CpG- ODN)与重组HBsAg对慢性乙型肝炎患者 (CHB)外周血树突状细胞 (dendriticcell ,DC)表型和功能的影响。方法　以重组人GM CSF、IL 4自CHB患者和健康者外周血单个核细胞诱导扩增DC ;以CpG ODN和HBsAg单独或联合刺激DC ,并与TNF α比较 ,评价其对DC表达表面分子HLA DR、CD86、CD1a ,分泌IL 12p70以及刺激同种T细胞增殖能力的影响 ;同时检测血浆TGF- β、IFN- γ含量。 结果　与PBS组比 ,CpG- ODN单用或联合HBsAg均能明显提高CHB患者DC表面分子HLA DR的表达 ,使IL- 12分泌增加 ,刺激同种T细胞增殖的能力亦增强 ,CpG ODN联合HBsAg尚能明显提高CD1a的表达 ;CpG- ODN的上述刺激作用类似于TNF α ;CHB患者血浆TGF- β、IFN -γ含量明显高于正常对照。 结论　CpG -ODN与TNF α一样能够促进CHB患者外周血DC分化和成熟 ;CpG- ODN与HBsAg联合刺激能协同增强DC的特异性抗原递呈作用 ;CHB患者的细胞因子环境可能是DC功能沉默的重要原因。     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞功能的研究

目的研究慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞(DC)的免疫功能.方法从慢性乙型肝炎患者外周血中分离单个核细胞,用无血清培养法分离培养DC,用流式细胞仪检测DC表型,用液闪计数仪观察DC对T细胞的增殖作用,用ELISA法检测混合淋巴细胞反应(MLR)中细胞因子的分泌水平.结果患者组DC的CD86的表达率为(70.2±5.2)%,明显低于正常人组(95.3±3.8)%,P＜0.01;其诱导T细胞增殖能力每分钟液闪计数cpm为10000±2000,明显低于正常人组(cpm为30000±3000),P＜0.01患者MLR中IL-12为(120.0±19.7)pg/ml,γ-干扰素为(799.0±161.3)pg/m1,明显低于正常人组的(280.0±41.1)pg/ml和(3359.0±635.4)pg/ml,P＜0.01.结论慢性乙型肝炎患者外周血DC免疫功能低下,并与DC表面CD86的表达率下降及DC分泌IL-12减少密切相关.     

慢性乙型肝炎树突状细胞表型和功能的变化与免疫耐受

目的 观察慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者树突状细胞（DC）形态和功能的改变。方法 从13例慢性乙型肝炎患者和11例健康人外周血中分离和培养DC,观察DC的形态,用流式细胞仪检测DC表面标记HLA－DR、CD1a、CD80和CD86的表达,用^3H-TdR掺入法测定DC诱导混合性淋巴细胞反应（MLR）的能力。结果 正常DC较慢性乙型肝炎患者在形态上更为典型,不规则,HLA－DR、CD80和CD86分子的表达水平较高（P＜0.05）,诱导MLR的能力较强（P＜0.05）。结论 慢性乙型肝炎患者外周血DC处于不完全成熟状态,其免疫刺激能力较低。     

干扰素治疗慢性乙型肝炎与外周血树突状细胞表型的关系

在干扰素抗病毒治疗中，其疗效与树突状细胞(DC)的功能状态关系如何现在还不清楚，为此对干扰素治疗前、后24例CHB患者外周血DC的一些重要表面分子进行检测，试图对此进行初步探讨。     

乙型肝炎患者外周血树突状细胞的培养及表型分析

树突状细胞（dendritic cells，DC）是已知体内功能最强及唯一能活化静息T细胞的专职抗原递呈细胞,并且在增强或调节细胞介导的免疫反应中起管决定性作用．在CHB患者中不仅DC的表型不成熟并且存在着功能的缺失，树突状细胞这种功能改变及数量变化与乙型肝炎患者针对HBV特异的CTL反应下降有密切关系。     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞的成熟度研究

目的：研究慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血树突状细胞（DC）的成熟度及其占单核细胞的比例,探讨CHB患者DC免疫治疗的机制。方法选取20例CHB患者和10例健康人,分别采集外周抗凝全血2 mL,流式细胞仪检测DC表面CD80、CD86、CD83的表达量及单核细胞表面CD14的表达。结果两组DC表面CD80、CD86、CD83分子表达无差异（P＞0．05）;CHB组较健康对照组单核细胞表面分子 CD14表达明显增多,具显著统计学差异（P＜0．05）;CHB组CD80、CD86、CD83三者表达之和占CD14的比例明显高于CHB组,两者有显著统计学意义（P＜0．05）。结论CHB患者外周血存在单核细胞增多、成熟DC减少现象,恢复DC功能是治疗CHB的手段之一。     

清热解毒法与疏肝健脾法对慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞功能的影响

目的:比较清热解毒法与疏肝健脾法对慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血树突状细胞(DCs)成熟与功能的影响。方法:采集20例CHB患者和10例健康人的抗凝外周静脉血,分离外周血单个核细胞(PBMCs),体外培养使DCs增殖、成熟,大鼠清热解毒和疏肝健脾药物血浆干预;检测DCs表面HLA-DR、CD-1α、CD80及CD86的表达,DCs培养上清液IL-12的水平及DCs刺激同种异体T细胞增殖能力;比较干预前后DCs功能的变化。结果:清热解毒药物血浆、疏肝健脾药物血浆干预后CD80表达率升高,且疏肝健脾组大鼠CD80表达率的提高要超过清热解毒组,而HLA-DR、CD-1α、CD86的表达水平在干预前后差异无显著性意义。两组含药血浆干预后DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力提高,但两组药物血浆之间差异无显著性意义。两组含药血浆干预前后DCs分泌IL-12水平无明显变化。结论:清热解毒法和疏肝健脾法都能促进CHB患者DCs功能的恢复,疏肝健脾法对CHB患者DCs功能的影响更为显著。     

拉米夫定体外对慢性乙型肝炎患者树突状细胞功能的影响

目的:体外研究不同浓度拉米夫定(lamivu- dine,LAM)对慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者树突状细胞(dendritic cell,DC)功能影响．方法:分离慢乙肝患者外周血单核细胞,在含GM-CSF IL-4及不同浓度LAM(0,0．125, 0．25,0．5,1,2 mmol／L)培养条件下制备DC．观察DC形态学变化并用MTT法测定DC刺激同种异体淋巴细胞增殖能力,流式细胞仪(FCM) 测定其细胞表型分子CD1a,CD83,CD80及 HLA-DR的表达,ELISA法检测培养上清中 IL-12和IL-6含量．结果:在LAM 0．5 mmol／L组,DC表型分子 CD83,CD1a,HLA-DR的表达最高,CD80与 LAM未处理组相比无明显差异．与LAM未处理组相比,LAM 0．5 mmol／L处理组DC膜表面分子CD1a,CD83,HLA-DR表达增高(CD1a: 54．0±9．2 vs 33．6±10．1,P<0．05;CD83:20．3 ±6．1 vs 11．8±6．2,P<0．05;HLA-DR:74．5± 7．1 vs 52．9±7．7,P<0．05);其上清液中IL-12 分泌水平增高(810．0±91．5 ng／L vs 268．0± 34．3 ng／L,P<0．05),IL-6则显著降低(28．1± 2．6 ng／L vs 55．3±7．4 ng／L,P<0．05);刺激同种异体淋巴细胞增殖能力(SI)增强(1．9±0．6 vs 1．2±0．5,P<0．05)．结论:LAM体外可增强慢乙肝患者树突状细胞活性．     

慢性乙型重型肝炎患者外周血单个核细胞衍生的树突状细胞表型与功能

目的 通过检测慢性乙型重型肝炎(CSHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)衍生的树突状细胞(MoDC)经聚肌胞苷酸刺激后表型变化及细胞因子分泌情况,了解MoDC的免疫调节功能及其在慢性乙型肝炎(CHB)重症化中的作用.方法 采集CSHB组患者37例、CHB组患者20例和健康对照者20例的外周血,分离PBMC,免疫磁珠细胞分选法获得纯化的PBMC,体外培养诱导为未成熟树突状细胞(iDC),聚肌胞苷酸刺激为成熟树突状细胞(mDC).流式细胞术检测iDC及mDC细胞表面人类白细胞DR抗原(HLA-DR)、CD83、CD86、CD80的平均荧光强度(MFI);ELISA测定聚肌胞苷酸刺激后12、24、48 h的MoDC培养上清液中IL-12、IL-6、TNF-α分泌水平.多组间比较采用单因素方差分析,并进行方差齐性检验.结果 3组iDC表面HLA-DR、CD83、CD86、CD80的MFI比较,差异无统计学意义.CSHB组患者mDC表面HLA-DR、CD83、CD86、CD80的MFI与CHB组、健康对照组比较,显著低下(F值分别为59.73、13.95、34.80和73.02,均P＜0.05).聚肌胞苷酸刺激12、24、48 h时IL-12分泌量为:健康对照组＞CHB组＞CSHB组(F值分别为151.34、126.65、72.76,均P＜0.05),其中24 h时分泌量最高,分别为(48.2±7.6)、(56.7±11.8)、(97.8±16.2)ng/L.IL-6在上述3个时间点的分泌量为:CSHB组＞CHB组＞健康对照组(F值分别为92.50、86.89、64.57,均P＜0.05),其中12 h分泌量最高,分别为(1698.3±340.4)、(965.8±231.7)、(697.8±213.6)ng/L.TNF-α在上述3个时间点的分泌量为:CSHB组＞CHB组＞健康对照组(F值分别为58.66、122.36、44.73,均P＜0.05),24 h表达量分别为(19 672.7±4214.7)、(9946.1±2586.5)、(6659.2±955.8)ng/L.结论 CSHB患者MoDC成熟障碍,表现为IL-12分泌低下,而IL-6及TNF-α分泌亢进,可能是加剧肝脏炎性反应致重型肝炎的重要因素.     

不同病毒载量的慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞的表型和功能

目的观察研究不同HBV DNA载量的CHB患者外周血DC表型及功能变化,探讨HBV在DC成熟障碍中的作用机制。方法筛选血清HBV DNA>10~5拷贝/ml且无其他肝脏疾病及自身免疫性疾病的CHB患者28例。所有病例予核苷类似物抗病毒治疗24周。治疗前后测定外周血HBV DNA并经肝穿刺明确肝组织病理状态。将治疗前患者设为高载量组(HBV DNA>10~5拷贝/ml),共28例;治疗后患者设为低载量组(HBV DNA<10~3拷贝/ml),共25例。从患者外周血分离单核细胞,体外诱导培养DC。用流式细胞仪测定DC表型,MTT法测定DC对同种异体淋巴细胞的刺激增殖作用,ELISA法测定DC分泌IL-12和IL-10的量。同时以10名健康人作对照。结果DC在体外经细胞因子的刺激可明显增殖,但CHB患者DC的扩增数量、速度低于正常人。DC表面标记:正常人的HLA-DR、CD86、CD80和CD83表达阳性率均大于80%,显著高于两组CHB患者;不同HBV DNA载量的两组CHB患者间差异无统计学意义。两组CHB患者的DE在混合淋巴细胞反应中的刺激能力差异无统计学意义,但明显低于正常对照组。CHB患者和正常人DC上清液中IL-10的量,各组间差异无统计学意义;高载量组与低载量组纯DC培养和混合淋巴细胞反应上清液中IL-12量的差异无统计学意义,而分别明显低于正常人DC。结论在HBV持续感染期间,CHB患者DC的表型变化及功能下调与外周血HBV DNA载量间差异无统计学意义。     

白细胞介素-18对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞的作用及意义

目的 探讨白细胞介素-18(IL-18)对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)的作用及体外对转染乙型肝炎病毒(HBV)基因的人肝癌细胞系2.2.15(HepG2.2.15)细胞HBV DNA分泌的影响。方法 分离25例正常人及25例慢性乙型肝炎患者的PBMC,在乙型肝炎核心抗原(HBcAg)及不同浓度IL-18刺激下培养72h,收集其培养上清液,采用酶联免疫试验办法检测其中干扰素γ(IFN-γ)的含量;收集1例慢性乙型肝炎患者的PBMC,与已培养了24 h的HepG2.2.15细胞共孵育,经过不同浓度的IL-18刺激培养96h后,收集其培养上清液,采用聚合酶链反应(PCR)检测HBV DNA的含量。结果 PBMC在HBcAg联合0.2、1.0、5.0ng/ml的IL—18刺激下,慢性肝炎组培养上清液中IFN-γ的水平均较正常对照组明显增高(0.2ng/ml组:t 11.7,P<0.01;1.0ng/ml组:t-16.19,P<0.01;5.0ng/ml组:t-20.12,P<0.01);在HBcAg联合IL-18和IL-12刺激下,慢性肝炎IFN-γ的水平亦较正常对照组明显增高,分别为(1313.20±187.76)pg/ml和(390.75±43.23)pg/ml,t—23.94,P<0.01;在慢性肝炎轻、中、重度患者中,单独HBcAg刺激组与HBcAg联合不同浓度的IL-18刺激组相比,联合刺激组的IFN-γ的水平均较单独刺激组增高;HBcAg联合IL-18刺激组与联合IL-12和同一浓度的IL-18刺激组相比,IFN-γ的水平后者显著高     

慢性乙型肝炎病毒感染产妇的胎儿脐带血树突状细胞的表型及功能

目的探讨孕妇慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染对其胎儿脐血的树突状细胞(DC)的表型和功能的影响,并与健康胎儿、健康成人及成人慢性HBV感染者进行对比研究。方法体外分离慢性HBV 感染产妇及健康产妇胎儿脐带血、健康成人及慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞进行树突状细胞转化,行流式细胞术对其表型进行分析,通过交叉混合淋巴细胞培养和DC培养上清液白细胞介素(IL)-12检测来分析DC的功能。结果慢性HBV感染产妇脐血来源DC的CD 80、CD 83的表达显著低于健康胎儿组、健康成人组、成人慢性HBV感染组,CD14的表达则显著高于此三组,P值均<0.0 5;慢性HBV感染产妇脐带血DC分泌的IL-12水平也明显低于健康产妇、健康成人组及慢性乙型肝炎患者(P<0.05);促异体T淋巴细胞增殖能力的强弱依次为健康成人DC-健康脐血T淋巴细胞>健康成人DC-健康成人异体T淋巴细胞>健康脐血DC-异体健康脐血T淋巴细胞>健康脐血DC-健康成人T淋巴细胞>孕母HBV感染脐血DC-健康脐血T淋巴细胞>孕母HBV感染脐血DC-健康异体成人T淋巴细胞。结论慢性HBV感染产妇胎儿脐血DC的成熟和功能显著低于健康胎儿脐血DC、健康成人甚至慢性乙型肝炎患者外周血DC。     

Dysfunction of peripheral blood dendritic cells from patients with chronic hepatitis B virus infection

AIM: To identify the property of dendritic cells (DCs) of peripheral blood monocytes (PBMC) in patients with chronic HBV infection. METHODS: Twenty patients with persistent HBV infection were included in this study, 10 healthy subjects being used as a control group. The peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of T cell-depleted populations were incubated and induced into mature dendritic cells in the RPMI-1640 medium in the presence of cytokines GM-CSF, IL-4, FLt-3,TNF-alpha and 100mL.L(-1 )of fetal calf serum for a total of 10-12 days. The expressions of surface markers on DCs were evaluated using flow cytometric analysis. ELISA method was used to determine the cytokine levels of interleukin-12 (IL-12) and IL-10 in the supernatant produced by DCs. For detection of the stimulatory capacity of DCs to T cell proliferation, mytomycin C-treated DC were incubated with allogenic T cells. RESULTS: A typical morphology of mature DCs from healthy subjects and HBV-infected patients was induced in in vitro incubation, but the proliferation ability and cellular number of DCs from HBV-infected patients significantly decreased compared with healthy individuals. In particular, the expression levels of HLA-DR, CD80 (B7-1) and CD86 (B7-2) on DC surface from patients were also lower than that from healthy individuals (0.46 vs 0.92 for HLA-DR, 0.44 vs 0.88 for CD80 and 0.44 vs 0.84 for CD86,P<0.05). The stimulatory capacity and production of IL-12 of DCs from patients in allogenic mixed lymphocyte reaction (AMLR) significantly decreased, but the production level of nitric oxide (NO) by DCs simultaneously increased compared with healthy subjects (86 +/- 15 vs 170 +/- 22 micromol.L(-1), P <0.05). CONCLUSION: The patients with chronic HBV infection have the defective function and immature phenotype of dendritic cells, which may be associated with the inability of efficient presentation of HBV antigens to host immune system for the clearance of HBV.     

慢性乙型肝炎病人外周血树突状细胞对 HBsAg的提呈作用

目的 研究慢性乙型肝炎（乙肝）病人外周血培养的树突状细胞（dendritic cell,DC)对HBsAg的提呈作用。方法 从乙肝病人外周血中培养扩增DC,以不同浓度的HBsAg与DC共同孵育1.5h,然后再与10倍的自体T细胞混合培养5d,结束培养前13h加入37kBq/孔（1uCi=37kBq)^3H胸腺嘧啶。收获细胞,用γ液体闪烁计数仪测定cpm。结果 抗原处理的DC刺激T细胞增殖效应（cpm）明显高于未经抗原处理的DC。结论 从慢性乙肝病人外周血培养的DC对HBsAg有较强的提呈作用。     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞上Toll样受体的表达变化

目的 分析慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞(DC)上Toll样受体3(TLR3)的表达变化及其临床意义.方法 随机筛选慢性乙型肝炎(CHB)患者20例,并以10例健康者作对照,分别从外周血分离单个核细胞,体外诱导培养DC.流式细胞仪(FCM)测定未成熟期DC(imDC)与成熟期DC(mDC)的表型;分别应用流式细胞仪和Western印迹法测定imDC与mDC上TLR3的表达率和受体蛋白的表达.结果 在健康对照组,mDC表面分子CD80、CD86、组织相容性白细胞抗原(HLA)-DR、CD83的表达率分别为(82.35±8.67)%、(79.61±10.08)%、(92.79±8.48)%和(83.76±5.47)%,imDC表面分子表达率分别为(28.31±8.79)%、(31.17±11.23)%、(27.61±10.28)%和(23.46±11.53)%,各组间比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);而在CHB组,mDC与imDC表面分子表达率分别为(42.46±9.22)%、(40.72±11.24)%、(48.57±12.51)%、(22.25±11.22)%和(18.57±10.22)%、(24.16±10.46)%、(17.87±10.38)%、(14.28±6.77)%,各组间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);健康者组mDC上表面分子的表达率与CHB患者组比较,各组间差异均有统计学意义,而两组受试者imDC上表面分子的表达率比较,差异均无统计学意义.健康对照imDC上TLR3的表达率明显高于mDC(P＜0.01),而CHB患者imDC与mDC上TLR3的表达率差异无统计学意义(P＞0.05);且CHB患者imDC上TLR3的表达率明显低于健康对照(P＜0.01).结论 CHB患者外周血DC上存在TLR3的表达下调,可能是HBV感染慢性化的重要原因.     

肝素对慢性乙型肝炎患者树突状细胞免疫功能的作用

慢性乙型肝炎(CHB)发生的重要原因之一是患者的机体不能对乙型肝炎病毒川BV)形成充分有效的免疫应答以清除病毒。树突状细胞(DC)是目前发现的功能最强的抗原呈递细胞,在激活T细胞介导的免疫中具有重要的作用。近期文献报道及我们的研究结果提示CHB患者DC不仅数量较少而且发育障碍、功能低下。所以促进CHB患者DC发育并改善其功能,对提高CHB患者的免疫功能以清除体内的HBV有重要意义。本文通过研究肝素在体外对CHB患者DC功能的调节作用,为寻找能促进DC成熟的经济有效的诱导因子提供实验依据。一、材料与方法 1．材料：巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)(北京医科大学免疫室提供)；白细胞介素(IL)4、肿瘤坏死因子(TNF) α、干扰素(IFN)γ(美国Promega公司产品)；荧光标记的抗人CDla、CD40、CD80、CD83、CD86、人类白细胞抗原-DR 单克隆抗体(美国lmmunotech公司产品)；RPMI 1640培养基、MTT、异硫氰酸荧光素(FITC)-Dextran(美国Sigma