类风湿关节炎患者外周血淋巴细胞趋化因子受体CCR7的表达及其临床意义

目的 探讨CC族趋化因子受体CCR7在类风湿关节炎(RA)发病机制中的作用及其临床意义.方法 选取30例RA患者(RA组)和20例健康体检者(正常对照组).应用流式细胞检测术检测两组受检者外周血淋巴细胞表面CCR7的表达,并根据患者的触痛关节数、肿胀关节数、红细胞沉降率计算出患者的疾病活动性积分(DAS28),分析CCR7的表达与疾病活动性的关系.结果 RA组患者外周血CD+4T细胞和CD+8T细胞上CCR7的表达率[(74.5±13.7)%与(57.9±11.8)%]均显著高于正常对照组[(16.7±2.0)%与(16.6±1.6)%],差异有统计学意义(P＜0.01);且RA组患者外周血CD+4T细胞上CCR7的表达率显著高于CD+8T细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).RA组患者外周血CD+4T细胞CCR7的表达与DAS28呈正相关(r=0.836,P＜0.01).结论 CCR7在RA患者外周血淋巴细胞上的表达异常增加,尤其是在CD+4T细胞上;CCR7在CD+4T细胞上的异常表达可能是导致RA病情活动的重要因素之一.     

原发干燥综合征伴发间质性肺疾病患者淋巴细胞CCR7的表达及临床意义

目的 探讨CC族趋化因子受体7(CCR7)在原发干燥综合征(pSS)伴发间质性肺疾病(ILD)发病机制中的作用及其临床意义.方法 选择31例原发干燥综合征患者,其中无脏器受累者18名,伴有ILD者13名.正常对照组20名,为健康体检者.应用流式细胞检测术检测外周血淋巴细胞表面CCR7的表达.结果 原发干燥综合征组CD4+T细胞和CD8+T细胞上CCR7的表达均高于正常对照组(P＜0.01),且原发干燥综合征组CD4+T细胞上CCR7的表达高于CD8+T细胞(P＜0.05);其中pSS伴间质性肺疾病组CCR7在CD4+T细胞上的表达高于pSS无脏器受累组(P＜0.05),也高于同组的CD8+T细胞(P＜0.01);而CCR7在两组CD8+T细胞上的表达无统计学差异(P＞0.05).结论 原发干燥综合征患者外周血淋巴细胞上CCR7的表达明显增加,且此种增加在肺部受累的pSS患者表现更为明显.     

树突细胞及其相关趋化因子受体在慢性阻塞性肺疾病大鼠肺部的表达变化及其意义

目的 了解树突细胞（DC）及其趋化因子受体CCR6、CCR7在慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠肺部的表达变化,并探讨其意义。方法 选用20只清洁级健康Wistar大鼠,采用随机数字表法分为健康对照组（10只）和COPD组（10只）。COPD组使用香烟烟雾刺激和气道内注入脂多糖（LPS）的方法制备COPD模型。第29天取大鼠肺组织,制作病理切片,行HE染色观察其病理学改变;采用免疫组织化学技术检测肺部OX+62DC、CD+83DC的表达水平,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中CCR6和CCR7的表达水平。结果 COPD组大鼠肺组织HE染色符合COPD典型病理表现,OX62和CD83的阳性染色均主要表达于细胞的胞质,呈棕黄色。COPD组OX+62DC表达水平高于健康对照组,CD+83DC表达水平低于健康对照组,差异均有统计学意义（P＜0.01）。COPD组BALF中CCR6表达水平高于健康对照组,CCR7表达水平低于健康对照组,差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论 DC及其趋化因子受体CCR6在COPD大鼠肺部增多,而成熟DC及其趋化因子受体CCR7在COPD大鼠肺部减少。     

CCR5基因沉默对RA大鼠滑膜细胞炎症反应的影响

【摘要】 目的 探讨CCR5基因沉默对类风湿关节炎（RA）大鼠滑膜细胞炎症因子TNF-α、IL-6、MMP-1及MMP-3 的影响。方法 将SPF级Wistar雄鼠饲养一周后随机分为Control(WC)组与RA模型组,采用胶原诱导法构建RA大鼠模型,然后分离和培养RA大鼠滑膜细胞,再将细胞分为4组：RA组（RA大鼠滑膜细胞）、RA+NC组（加入脂质体包裹的NC siRNA）、RA+mock组（加入脂质体）、RA+siRNA组（加入脂质体包裹的CCR5 siRNA）。利用RNA干扰技术干扰大鼠滑膜细胞CCR5的表达,干扰后用qRT-PCR检测各组滑膜细胞CCR5及炎症因子TNF-α、IL-6、MMP-1及MMP-3 mRNA相对表达水平,用Western Blot检测其CCR5蛋白表达情况,并用ELISA方法检测各组滑膜细胞上清液中TNF-α、IL-6、MMP-1、MMP-3的水平。结果 干扰大鼠滑膜细胞CCR5的表达后,与RA组比较,RA+siRNA组CCR5 mRNA及TNF-α、IL-6、MMP-1、MMP-3 mRNA及蛋白水平均显著降低（P＜0.05）,而RA+NC组、RA+mock比较组差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论 沉默CCR5可抑制CCR5 mRNA及其蛋白的表达,并有助于降低RA大鼠滑膜细胞的炎症因子TNF-α、IL-6、MMP-1及MMP-3的表达,减轻大鼠滑膜细胞的炎症反应,并为以后利用RNA干扰技术沉默CCR5用于RA的治疗提供新的方向。     

趋化因子受体CCR3、CCR5和CXCR3与自然流产的相关性

目的 探讨外周血、脾脏、胸腺趋化因子受体CCR3、CCR5、CXCR3与自然流产的关系.方法 用双标记流式细胞分析技术检测自然流产模型组小鼠(CBA/J×DBA/2,n=14)、正常妊娠模型组小鼠(CBA/J×BALB/c,n=13)和正常非孕组小鼠(CBA/J,n=11)外周血、脾脏以及胸腺中CD4+T细胞CCR3、CCR5和CXCR3这三类趋化因子受体的表达.结果 自然流产模型组外周血CD4+T细胞CCR3的表达率低于正常妊娠模型组(P<0.01),CCR5和CXCR3高于正常妊娠模型组(P<0.05,P<0.01);但三个指标与正常非孕组相比,差异均无统计学意义(P>0.05).自然流产模型组脾脏CD4+ T细胞CCR3的表达率低于正常妊娠模型组(P<0.01).高于正常非孕组(P<0.05);而CCR5和CXCR3高于正常妊娠模型组(P<0.05),但与正常非孕组相比,差异无统计学意义(P>0.05).自然流产模型组胸腺CD4+ T细胞CCR3的表达率低于正常妊娠模型组(P<0.05),高于正常非孕组(P<0.01);而CXCR3的表达率高于正常妊娠模型组(P<0.05).但与正常非孕组相比,差异无统计学意义(P>0.05);CCR5与其他两组相比,差异无统计学意义(P>0.05).结论 CD4+T细胞上CCR3、CCR5和CXCR3的表达异常可能在自然流产的发病中起作用.     

趋化因子受体CCR3、CCR5和CXCR3与自然流产的相关性

目的探讨外周血、脾脏、胸腺趋化因子受体CCR3、CCR5、CXCR3与自然流产的关系。方法用双标记流式细胞分析技术检测自然流产模型组小鼠（CBA／J&#215;DBA／2，n=14）、正常妊娠模型组小鼠（CBA／J&#215;BALB／c，n=13）和正常非孕组小鼠（CBA／J，n=11）外周血、脾脏以及胸腺中CD4^＋T细胞CCR3、CCR5和CXCR3这三类趋化因子受体的表达。结果自然流产模型组外周血CD4^＋T细胞CCR3的表达率低于正常妊娠模型组（P〈0．01），CCR5和CXCR3高于正常妊娠模型组（P〈0．05，P〈0．01）；但三个指标与正常非孕组相比，差异均无统计学意义（P〉0．05）。自然流产模型组脾脏CD4^＋T细胞CCR3的表达率低于正常妊娠模型组（P〈0．01），高于正常非孕组（P〈0．05）；而CCR5和CXCR3高于正常妊娠模型组（P〈0．05），但与正常非孕组相比，差异无统计学意义（P〉0．05）。自然流产模型组胸腺CD4^＋T细胞CCR3的表达率低于正常妊娠模型组（P〈0．05），高于正常非孕组（P〈0．01）；而CXCR3的表达率高于正常妊娠模型组（P〈0．05），但与正常非孕组相比，差异无统计学意义（P〉0．05）；CCR5与其他两组相比，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论CD4^＋T细胞上CCR3、CCR5和CXCR3的表达异常可能在自然流产的发病中起作用。     

Th17细胞表面CCR4、CCR6、CXCR3表达量检测对慢性乙型肝炎患者病情评估的价值

摘要：目的  分析外周血中辅助性T 细胞17（Th17）表面CC趋化因子受体4（CCR4）、CC趋化因子受体6（CCR6）、CXC亚族趋化因子受体3（CXCR3）表达量检测对慢性乙型肝炎患者病情评估的价值。方法  选取2013年8月-2015年12月在该院接受治疗的乙型肝炎患者118例作为观察组,同期在该院接受健康体检的肝功能正常人群142例作为对照组,对比两组外周血Th17细胞表面CCR4、CCR6、CXCR3表达水平,血清纤维化指标及肝功能指标,并进一步分析CCR4、CCR6、CXCR3表达量与慢性乙肝患者病情严重程度的相关性。结果  慢性乙肝患者的外周血Th17细胞表面CCR4、CCR6、CXCR3表达水平,透明质酸（HA）、层黏连蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（Ⅳc）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）值,丙氨酸转移酶（ALT）、白蛋白（Alb）、总胆红素（TBIL）值均高于对照组,球蛋白（Glo）值低于对照组,随着慢性乙肝病情加重,外周血Th17细胞表面CCR4、CCR6、CXCR3表达水平,HA、LN、Ⅳc、PCⅢ值,ALT、Alb、TBIL值进一步上升,Glo值下降。CCR4、CCR6、CXCR3表达量与慢性乙肝患者的外周血HA、LN、Ⅳc、PCⅢ、ALT、Alb、TBIL呈正相关,与Glo呈负相关（P <0.05）。结论  慢性乙肝患者存在外周血Th17细胞表面CCR4、CCR6、CXCR3异常表达,其与患者病情严重程度直接相关,可以作为乙肝治疗的新靶点。

     

趋化因子受体CCR5及其配体在类风湿关节炎患者滑液及滑膜中的表达

目的查明趋化因子C-C亚族受体5(CCR5)及其配体在外周血、关节滑膜和滑液的表达及分布,探讨Th1细胞选择性聚集于类风湿关节炎(RA)患者关节中的机制.方法采用两色和三色免疫荧光标记、流式细胞术及激光扫描共聚焦显微技术,对15例RA患者外周血、关节液及滑膜中Th细胞亚群,以及趋化因子受体CCR5和CXCR3的表达细胞,和C-C亚族趋化因子巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1β的产生细胞,进行了测定和分析比较.结果(1)RA患者关节滑液细胞内细胞因子分泌模式明显向Th1偏移,Th1样细胞在关节内占优势.(2)RA患者滑液中T细胞受体CCR5的表达率为52%±8%,CXCR3的表达率为61%±12%,与自身及正常人(外周血单个核细胞)比较明显升高(P＜0.01).(3)RA患者滑膜组织中大量浸润的T细胞(尤其是CD4+细胞)、单核/巨噬细胞(Mo/Mac)、B细胞多表达CCR5的配体MIP-1β.结论RA患者的关节内,T细胞、B细胞、Mo-Mac产生MIP-1β、RANTERS等趋化因子,能趋化表达CCR5、CXCR3的Th1细胞选择性进入关节组织,导致Th1/Th2细胞失衡.     

支气管哮喘患者外周血Th17细胞及相关趋化因子表达水平检测

目的探讨支气管哮喘患者外周血Th17细胞及相关趋化因子表达水平与肺功能的关系。方法选取60例支气管哮喘患者分为急性发作组和缓解组,每组各30例,另选取健康体检者30例为对照组。采用流式细胞术检测三组人群外周血中Th17细胞(CD4+IL-17+)上CCR4、CCR6表达水平,用ELISA法检测患者血清中总IgE、IL-17、IL-23、CCL20的蛋白表达水平。结果 1急性发作组哮喘患者外周血Th17细胞CCR4、CCR6表达水平明显高于缓解组哮喘患者(P<0.05),缓解组哮喘患者外周血Th17细胞CCR4、CCR6表达水平高于健康对照组(P<0.05);2急性发作组哮喘患者外周血血清中总IgE、IL-17、IL-23、CCL20的蛋白表达水平明显高于缓解组哮喘患者(P<0.05),缓解组哮喘患者外周血血清中总IgE、IL-17、IL-23、CCL20的蛋白表达水平高于健康对照组(P<0.05);3CCR4、CCR6表达水平与患者的总IgE、IL-17、IL-23、CCL20的蛋白表达水平正相关(P<0.05)。结论支气管哮喘患者外周血中Thl7细胞相关趋化因子CCR4、CCR6表达增高并与Th17细胞造成的炎症损伤有关。     

不同期别梅毒患者外周血CD4~+T细胞表面趋化因子受体的研究

目的探讨不同期别梅毒患者外周血CD4~+T细胞表面趋化因子受体的水平。方法选取我院2014年2月-2016年9月收治的梅毒患者,检测不同期别梅毒患者的外周血CD4~+T细胞表面趋化因子受体水平,以同期于我院体检的健康人群作对照,分析趋化因子受体在梅毒发生发展中的作用。结果各组受试者趋化因子受体表达水平比较二、三期梅毒患者与一期梅毒患者比较,外周血CCR3水平增高,CCR5水平降低,比较差异具有统计学意义(P0.05);二、三期梅毒患者与正常对照组比较,外周血CCR3水平增高,CCR5水平降低,比较差异具有统计学意义(P0.05);三期梅毒患者与二期梅毒患者比较,外周血CCR3水平增高,比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论趋化因子受体在各期梅毒患者体内的免疫应答中可能起着重要作用,提示免疫调节可能是治疗梅毒的新方向。     

中国人群CCR5△32、CCR2-64I、SDF1-3’A基因多态性与HIV-1感染相关性的Meta分析

目的探讨中国人群CCR5△32、CCR2-64I、SDF1-3’A三种基因的多态性与HIV-1感染之间的关系。方法检索国内外有关中国人群CCR5△32、CCR2-64I、SDF1-3’A基因多态性与HIV感染相关性的病例对照研究文献并进行Meta分析。结果符合CCR5△32的研究共14个,累计HIV感染者病例1607例,正常对照组1632例。杂合子(wt/mt)、纯合子(mt/mt)和杂合子加纯合子(wt/mt+mt/mt)与野生基因型(wt/wt)相比合并的OR值(95%CI)分别为1.156(0.808,1.654)、0.997(0.198,5.022)、1.149(0.808,1.634)。符合CCR2-64I的研究共12个,累计HIV感染者病例1415例,正常对照组1239例。杂合子(wt/mt)、纯合子(mt/mt)和杂合子加纯合子(wt/mt+mt/mt)与野生基因型(wt/wt)相比合并的OR值(95%CI)分别为1.005(0.844,1.197)、1.191(0.808,1.754)、1.028(0.870,1.214)。符合SDFl-3’A的研究10个,累计HIV感染者病例1179例,正常对照组1003例。杂合子(wt/mt)、纯合子(mt/wt)和纯合子加杂合子(wt/mt+mt/mt)与野生基因型(wt/wt)相比合并的OR值(95%CI)分别为1.010(0.830,1.228)、1.188(0.860,1.643)、1.038(0.861,1.250)。结论中国人群CCR5△32、CCR2-64I、SDFl-3’A三种抗性基因与HIV-1感染之间无相关性,显示CCR5△32、CCR2-641、SDFl-3’A三种基因对中国人群HIV-1感染可能不具有保护作用,提示中国人群可能为易感人群。     

老年高血压患者CCR基因多态性研究

目的探索中国老年汉族人群中CCR5和CCR2基因多态性与原发性高血压的相关性。方法入选的高血压患者(n=187)和非高血压对照者(n=98)均为中国老年汉族人群,提取外周血基因组DNA。采用PCR法检测CCR5Δ32突变,PCR-测序法检测CCR2-64I基因型。结果所有被研究者中均未发现CCR5Δ32突变基因型。高血压组中CCR2-64I杂合子59例(31.55%),纯合子16例(8.56%),CCR2-64I等位基因频率为24.3%;非高血压对照组中CCR2-64I杂合子34例(34.69%),纯合子4例(4.08%),CCR2-64I等位基因频率为21.4%。等位基因多态性在该群体中呈Hardy-Weinberg平衡分布,两组等位基因频率及基因型比较有差别,但均无统计学意义(P>0.05)。结论该研究在中国老年汉族人群中未检出CCR5Δ32突变基因型,且未证实CCR2-64I基因位点与高血压相关。     

CCR2和CCR5基因多态性与结核性脓胸的关系

目的探讨CCR2基因-190 G/A和CCR5基因-59029 G/A单核苷酸多态性(SNP)与结核性脓胸的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对结核性脓胸患者300例和健康对照组300例进行CCR2基因-190 G/A和CCR5基因-59029 G/A SNPs检测。结果与CCR2基因-190 GG基因型相比,携带AG和AA基因型均可增加结核性脓胸发病风险(OR=2.254,95%CI 1.043~4.868;OR=8.728,95%CI 4.224~18.033)。进行分层分析发现,无卡介苗(BCG)接种史、体质量指数(BMI)<18.5 kg/m~2均增加结核性脓胸发病风险(OR=3.309,95%CI 2.108~4.382;OR=2.767,95%CI 1.918~3.993)。CCR5基因-59029 G/A各基因型未入选回归方程,无统计学意义(P>0.05)。结论CCR2基因-190 G/A SNP可能与结核性脓胸的发病风险有关;CCR5基因-59029 G/A SNP可能与结核性脓胸无关。     

趋化因子受体CCR7在胃癌组织中的表达及意义

目的探讨趋化因子受体CCR7在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法采用RT—PCR及Western blot法检测32例胃癌及其癌旁对照组织中CCR7的表达。结果CCR7mRNA在胃癌组织中的表达水平为癌旁对照组的1．66倍（P〈0．01），且其表达水平与肿瘤TNM分期（P〈0．05）、浸润深度（P〈0．05）及淋巴结转移有关（P〈0．05）；Western blot结果显示CCR7蛋自在胃癌组织中的表达水平为癌旁对照组的2．3倍（P〈0．01），且高表达于肿瘤分期较晚（P〈0．05）、分化较差（P〈0．05）、浸润较深（P〈0．05）、有淋巴结转移（P〈0．05）和远处转移（P〈0．05）的组织。结论趋化因子受体CCR7可能与胃癌的发生、发展、侵袭、转移有关。     

银屑病患者外周血单个核细胞CCR5的表达及其意义

目的研究银屑病患者外周血单个核细胞趋化因子受体5(CCR5)的表达及其与银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)的关系。方法分离35例中重度寻常型银屑病患者及30例健康对照者外周血单个核细胞(PBMCs),用RT-PCR法测定PBMCs培养前后CCR5 mRNA的表达水平,免疫荧光标记-流式细胞仪检测CCR5阳性细胞比率。结果治疗前银屑病患者外周血单个核细胞中CCR5 mRNA表达水平明显高于治疗后及健康对照组,并与PASI呈正相关(r=0.516,P<0.05)。结论 CCR5可能通过活化与趋化单个核细胞到银屑病皮损而参与了银屑病的发病。     

靶向CCR7基因shRNA表达载体的构建及鉴定

目的设计并构建靶向CCR7基因shRNA真核表达质粒,并检测其干扰效果。方法以CCR7为靶基因设计具有短发夹结构的模板寡核苷酸,退火形成互补双链结构,再克隆至pGC-silencer-CRM30载体,构建的3条重组短发夹shRNA表达载体分别命名为pGC-silencer-CRM30-CCR7A、-CCR7B和-CCR7C。采用测序法鉴定寡核苷酸序列。将构建好的真核表达载体转染人结肠癌SW480细胞,荧光显微镜观察转染效果,RT-PCR法检测CCR7干扰效率。结果重组质粒测序结果与Genebank中的CCR7 cDNA序列相符,转染SW480细胞后,荧光显微镜下可观察到绿色荧光蛋白,RT-PCR结果表明,pGC-silencer-CRM30-CCR7C干扰效果最强。结论靶向CCR7基因shRNA表达载体构建无误,为进一步探讨趋化因子受体CCR7在胃肠道恶性肿瘤生物学行为中的作用奠定了基础。     

趋化因子受体CCR5胞外段重组蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定

目的:构建趋化因子受体5(CCR5)胞外段重组蛋白(命名为:rCCR5)原核表达载体,并进行诱导表达.对表达产物进行纯化和鉴定.方法:截取CCR5胞外结构4个片段N-Term,ECL1, ECL2和ECL3的氨基酸序列,应用柔性linker分别串联,模拟CCR5胞外结构,依据大肠杆菌偏爱密码子人工合成基因.运用基因重组方法在大肠杆菌中进行表达,表达产物经纯化、复性后进行Western blot鉴定.结果:目的蛋白以包涵体形式存在,经包涵体洗涤、变性溶解,SephacrylS-300凝胶过滤层析及SephacrylS-100凝胶柱复性获得了纯化的蛋白质,目的蛋白能与CCR5 mAb特异性结合.结论:获得了大量纯化的rCCR5重组蛋白,可作为研制CCR5自体蛋白疫苗以阻断HIV-1感染的候选抗原蛋白.     

趋化因子受体CCR7在乳腺癌淋巴结转移中的作用

目的:探讨趋化因子受体CCR7在乳腺癌中的表达意义. 方法:应用RT-PCR及免疫组织化学方法检测42例乳腺癌组织和10例乳腺纤维腺瘤中CCR7的表达. 结果:在乳腺癌组织中CCR7 mRNA表达42.9%, CCR7蛋白表达35.7%,在乳腺纤维腺瘤中仅有1例CCR7 mRNA表达. 无淋巴结转移者CCR7蛋白阳性表达率为11.1%(2/18),而有淋巴结转移阳性表达率为54.2%(13/24)(P＜0.01);临床TNM分期Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ期的阳性表达率分别为0%,39.1%,60.0%(P＜0.01). 结论:CCR7可能是介导淋巴结转移和组织浸润的重要机制之一.