依那西普对磨屑诱导骨溶解影响的实验研究

[目的]检测依那西普（Etanercept，Enbrel）对钛颗粒刺激巨噬细胞（macrophages，MФ）分泌肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白介素1（interleukin-1，IL-1）、白介素6（interleukin-6，IL-6）的影响，探讨依那西普防治人工关节无菌性松动的可能性。[方法]分离、培养小鼠腹腔巨噬细胞，24h后分为5组。A组：仅为MФ；B组：MФ＋钛颗粒；C组：MФ＋钛颗粒＋依那西普（10ng／m1）；D组：MФ＋钛颗粒＋依那西普（100ng／ml）；E组：MФ＋钛颗粒＋依那西普（1000ng／ml）。培养18h后，用酶联免疫法（ELISA）检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-1、IL-6的含量。[结果]B组TNF-α、IL-1、IL-6含量明显高于A、D、E组（P〈0．001），E组TNF-α、IL-1、IL-6的含量明显低于B组、C组（P〈0．001，E组和D组间无统计学意义（P〉0．05）。[结论]钛颗粒可以刺激MФ分泌大量的TNF-α、IL-1、IL-6，依那西普能够呈剂量依赖型地有效抑制钛颗粒诱导的MФ分泌TNF-α、IL-1、IL-6，有望成为预防人工关节无菌性松动的药物。     

右美托咪定对神经病理性疼痛大鼠镇痛作用及与TNF-α因子相关性的研究

目的：观察右美托咪定对神经病理性疼痛（ SNL）大鼠的镇痛效果,探讨右美托咪定镇痛与细胞因子TNF-α的相关性。方法雄性SD大鼠32只,200-220 g,随机分4组（每组8只）：假手术组（ S组）、SNL组、右美托咪定SNL组（ DSNL组）、依那西普SNL组（ ESNL组）。S组仅暴露脊神经但不结扎,其余组建立SNL模型。术毕即刻,DSNL组和ESNL组鞘内分别给予右美托咪定1μg或依那西普50μg连续7 d,S组和SNL组给予等量生理盐水。于术前、术后1 d、3 d、5 d、7 d测试各组大鼠机械缩足反射阈值（ PWPT）和热缩爪潜伏期（ PWL）。术后第7天取脊髓腰膨大组织采用ELSIA试剂盒测量TNF-α的表达。结果与S组相比,术后3 d、5 d、7 d各组PWPT和PWL明显降低（ P﹤0.05）,TNF-α表达增多（ P﹤0.05）;与SNL组比,DSNL组和ESNL组3 d、5 d、7 d的PWPT和PWL明显增高（ P﹤0.05）,TNF-α表达降低（ P﹤0.05）。结论在SNL大鼠模型中,右美托咪定可以产生良好的镇痛作用,其镇痛作用可能与降低TNF-α的表达有关。     

肿瘤坏死因子-α基因抑制耐药性人乳腺癌细胞的研究

目的 观察肿瘤坏死因子－α（TNF-α)基因对耐药细胞生长的抑制作用及机制。方法 以重组逆转录病毒为载体将TNF－α基因导入耐药性人乳腺癌细胞系MCF7／ADR，获阳性克隆MCF7／ADR－TNF1与MCF7／ADR－TNF2。体外观察并比较野生型和转基因癌细胞的生长速度，流式细胞仪分析细胞周期的变化。端粒酶重复扩增实验（TRAP）综合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银梁法测定端粒酶活性的变化。结果 MCF7／ADR－TNF1与MCF7／ADR－TNF2细胞中有TNF－α基因的整合和表达，病毒上清中TNF－α含量分别为1737μg/L（10^6个细胞／48h）、2875μg/L。与阴性对照细胞相比，MCF7／ADR－TNF1与MCF7／ADR－TNF2细胞的生长速度明显减慢，生长抑制率分别为32.4%、54.8%，细胞周期阻滞于S＋G2／M期，端粒酶活性降低。结论 外源性TNF－α基因的导入能有效抑制耐药细胞，阻滞细胞周期、抑制端粒酶活性可能为其主要机制。     

结肠癌组织TNF-α及p55与肿瘤细胞分化程度的相关性研究

为探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及其受体p55在结肠癌组织中的表达水平,以及其与肿瘤细胞分化程度的相关性,对32例结肠癌标本,采用免疫组化方法染色,观察TNF—α与其受体p55阳性率及表达强度,并分析其与肿瘤细胞分化程度的关系。结果显示,结肠癌组织TNF—α及受体蛋白p55表达阳性率分别为80．7％及67．7％,多为中等强度表达,TNF-α及p55表达与肿瘤细胞分化程度呈负相关。结果表明,TNF-α及其受体蛋白p55在结肠癌组织中存在高表达现象,其可能通过影响肿瘤细胞分化发挥抗肿瘤作用。     

表皮生长因子对肿瘤坏死因子α致HaCaT细胞凋亡的抑制作用

目的了解肿瘤坏死因子α（TNF-α）导致HaCaT细胞凋亡过程中过氧化物酶体增殖物激活受体B（PPAR[3）的表达情况，探讨表皮生长因子（EGF）对HaCaT细胞的保护机制。方法将培养的HaCaT细胞分为正常对照组（不作任何处理）、TNF—α小剂量组（10ng／ml TNF-α处理）、TNF—α大剂量组（20ng／mlTNF-α处理）、EGF＋TNF—α小剂量组、EGF＋TNF—α大剂量组，后2组先用20ng／mlEGF培养4h后，再分别予以10、20ng／ml TNF—α处理。采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（easpase．3）荧光检测试剂盒测定caspase-3的活性，噻唑蓝比色法检测细胞存活率。以5、10、20、40ng／ml的EGF处理HaCaT细胞，采用反转录．PCR和蛋白质印迹法检测PPAR[3mRNA及其蛋白的表达。结果与TNF-α小剂量组[（32±6）％]、TNF-ct大剂量组[（57±6）％]比较，EGF＋TNF—α小剂量组、EGF＋TNF-α大剂量组细胞凋亡率[（20±3）％、（28±4）％]明显下降（P〈0．01），caspase-3活性降低、存活率上升（P〈0．01）。20ng／mlEGF处理细胞时，PPAR[3mRNA及其蛋白表达最强。结论EGF在抑制TNF-α导致的HaCaT细胞凋亡的同时，亦增强细胞中PPARβ的表达。     

肿瘤坏死因子-α对肝星状细胞形态及表达结缔组织生长因子的影响

目的 通过观察肿瘤坏死因子（TNF）-α对肝星状细胞（HSC）形态和结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响，探讨TNF—α在肝纤维化中的作用机制。方法 采用体外培养大鼠肝星状细胞，加入TNF-α和TGF-β1，透射电镜观察肝星状细胞的形态学改变并应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测不同处理组HSC中CTGF的表达。结果 TNF-α、TGF—β1均诱导HSC中CT-GF表达；10μg／L浓度的TNF-α作用6、24和48h后，检测到CTGFmRNA表达，而TGF-β1在1μg/L浓度作用4h后，即可诱导HSC中CTGFmRNA表达。结论 TNF-α诱导HSC中CTGF的表达可能参与早期肝纤维化的形成。     

串联亲和纯化标记的HMGB1细胞因子诱导片段1融合表达载体构建和蛋白纯化及其功能初步探讨

目的：构建高迁移率族蛋白B1（HMGB1）中细胞因子诱导片段1（CIF1）与串联亲和纯化（TAP）系统中纯化标签链霉亲和素结合肽（SBP）和钙调蛋白结合肽（CBP）序列相融合的原核表达载体,观察重组蛋白对小鼠单核／巨噬细胞白血病细胞释放肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响,为HMGB1参与炎症反应作用机制的研究以及CIF1结构域细胞膜表面受体蛋白的获得和鉴定奠定基础。方法：采用PCR方法分别扩增出cBP-SBP和CIF1的编码序列,构建表达质粒pET-14b／CBPSBP—CIF。利用Ni—NTA亲和树脂纯化融合蛋白,纯度达85％以上。采用纯化后的蛋白诱导小鼠单核／巨噬细胞白血病细胞RAW264．7,利用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测RAW264．7细胞释放TNF-a的水平变化。结果：表达载体构建正确,CIF1重组蛋白表达量高,纯度好。当蛋白浓度大于0．5ng／μl时,CIF1重组蛋白诱导细胞TNF-α的分泌量与对照组相比差异具有显著性（P〈0．05）,并且在CIF1蛋白浓度O～2．5ng／μl范围内,TNF-α的分泌量与CIF1重组蛋白的浓度呈显著的剂量依赖关系。结论：原核表达纯化了His—CBP—SBP—CIF1融合蛋白,该融合蛋白可以有效地作用于巨噬样细胞内的信号转导过程,介导了炎症因子TNF—α的分泌表达。     

肿瘤坏死因子可溶性受体为类风湿性关节炎、慢性骨髓炎和骨关节炎患者外科手术后的急时相反应物

在类风湿性关节炎(RA),肿瘤坏死因子α(TNF-α)已被推荐为一种重要的炎症前细胞素。本文研究活动性RA患者TNF-α、TNF可溶性受体弱(TNF-sR55)和TNF可溶性受体75     

肿瘤坏死因子-α与神经根炎症研究进展

Marshall等于1977年首次提出腰椎化学性神经根炎（chemical radiculitis）这一概念。它是指由于纤维环破裂、髓核液漏至椎间盘外并沿着神经根扩散引起神经根炎症的一种状态。近年研究发现,神经根炎症反应是一种由多种细胞、多种因子共同参与的非常复杂的过程。参与炎症反应的因子主要包括促炎或抗炎因子、炎症介质。目前发现的促炎细胞因子包括肿瘤坏死因子一仅（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1）和白细胞介素-6（IL-6）,其中最重要的促炎因子是TNF-α和IL-1。1975年,Carswell等给接种过卡介菌（BCG）的小鼠注射脂多糖（LPS）后,在其血清中发现一种能直接杀伤某些肿瘤细胞或诱导体内肿瘤组织发生出血坏死的因子,即肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）。1985年Shalaby把单核巨噬细胞产生的TNF命名为TNF-α,把T淋巴细胞产生的淋巴毒素（lymphotoxin,LT）命名为TNF—β。TNF—α主要由活化了的单核巨噬细胞产生,中性粒细胞、内皮细胞、T淋巴细胞、平滑肌细胞受刺激后也能产生。TNF-α单体是一条相对分子质量为17000的肽链。近年来,关于TNF-α与神经根炎症的研究较多,现作一综述。     

肿瘤坏死因子-α对血管内皮细胞通透性影响的实验研究

目的：观察人肿瘤坏死因子-α（TNF—α）对人血管内皮细胞（EA.hy926）单层通透性的影响并初步探讨其作用机制。方法：测定异硫氰酸荧光素（FITC）标记的葡聚糖透过Transwell小室的荧光强度,以表示EA．hy926细胞单细胞层的通透性大小;激光共聚焦显微镜观察细胞骨架肌动蛋白（F—actin）和血管内皮钙黏蛋白（VE—cadherin）的形态分布;蛋白免疫印迹检测钙黏蛋白的表达。结果：与对照组比较,TNF-α使EA.hy926内皮细胞的通透性明显增加（P〈0．05）,诱导肌动蛋白重新分布及应力纤维形成,并使钙黏蛋白排列紊乱、断裂、细胞问裂隙形成增多。免疫印迹检测表明TNF-α减少钙黏蛋白表达呈剂量和时间依赖性。结论：TNF-α诱导内皮细胞通透性增高,其机制可能与其破坏内皮细胞屏障功能的完整性有关。