S期激酶相关蛋白2在胶质瘤中的表达及临床意义

目的 探讨S期激酶相关蛋白2(Skp2)在胶质瘤中的表达情况及其功能意义.方法 收集海军总医院神经外科2001年6月-2006年6月手术切除的原发胶质瘤标本60例,根据WHO胶质瘤分类法(2000年),其中星形细胞瘤(WHOⅡ级)、间变性星形细胞瘤(WHOⅢ级)、胶质母细胞瘤(WHO Ⅳ级)各20例,另取4例正常脑组织作为对照.采用Western blotting及免疫组化法检测正常脑组织及不同恶性程度胶质瘤组织中Skp2的表达情况.结果 western blotting结果显示,正常脑组织中Skp2表达明显低于胶质瘤组织,且随着胶质瘤恶性程度的增高,Skp2蛋白表达逐渐增强.免疫组化染色显示,正常脑组织及胶质瘤组织中均有Skp2阳性表达,其中正常脑组织和WHOⅡ级胶质瘤中Skp2呈弱阳性,多位于胞质,WHOⅢ级和Ⅳ级胶质瘤中Skp2表达呈强阳性,阳性染色颗粒集中于细胞核.胶质瘤组织中的血管内皮细胞也有Skp2阳性染色,且在血管周围有Skp2阳性染色的肿瘤细胞聚集.统计学分析显示,Skp2在高度恶性胶质瘤组织(WHOⅢ级、Ⅳ级)中的表达明显高于正常脑组织和低度恶性的胶质瘤组织(WHOⅡ级),差异有统计学意义(P＜0.01).结论 随着胶质瘤的恶性进展,Skp2表达逐渐增强,且由细胞质转移至细胞核;在胶质瘤组织新生血管内皮细胞及血管周围肿瘤细胞中均有Skp2阳性表达.Skp2的表达变化可能与胶质瘤的恶性进展、新生血管的形成及肿瘤细胞的转移密切相关.     

星形胶质瘤细胞摄取BPA的时间及细胞周期相关性研究

目的　研究两种星形胶质瘤细胞系C6和SHG 4 4摄取BPA(p boronophenylalanine)的孵育时间与细胞周期的相关性 ,探讨BPA的选择性作用机制。方法　细胞计数法测定C6和SHG 4 4胶质瘤细胞和星形胶质细胞的生长曲线 ;将三种细胞分别培养在含BPA的培养液中 (BPA浓度为 5mmol/L ,10 B浓度相当于 5 0 μg/ml) ,4、8、12、16、2 0和 2 4h后采用感应耦合等离子体原子发射光谱 (ICP AES)法测定细胞内硼的含量 ,绘制硼含量 时间曲线 ;含硼培养液孵育 2 4h后 ,流式细胞术分离G0 /G1和G2 /M期细胞 ,ICP AES法测定不同周期细胞硼的含量。结果　C6和SHG 4 4的倍增时间均为 18 5h,星形胶质细胞的倍增时间为 2 8h。相同时间下两种胶质瘤细胞硼含量均高于对照组的胶质细胞 ,差异有统计学意义 (P <0 0 1)。两种胶质瘤细胞G2 /M期比G0 /G1期硼含量明显增高 ,差异有统计学意义 (P <0 0 1) ,而星形胶质细胞两期硼浓度差异无统计学意义 (P >0 0 5 )。两种胶质瘤细胞G2 /M期硼浓度均高于星形胶质细胞 ,差异有统计学意义 (P <0 0 1)。在G0 /G1期 ,C6和SHG 4 4与星形胶质细胞硼浓度比值分别为 1 4 6和 1 5 1,而在G2 /M期该比值则分别为 3 6 5和3 96。结论　实验中合成的BPA具备了应有的生物学活性 ,即对胶质瘤细胞的高选择性 ;有     

含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸7909对X射线诱导人肺腺癌A549细胞周期阻滞和凋亡的影响与ATM激酶的关系

目的 探讨含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸( unmcthylated cytosine-phosphateguanine oligodeoxynucleotides,CpG ODN) 7909对X射线诱导人肺腺癌A549细胞周期阻滞和凋亡的影响及毛细血管扩张共济失调突变( ATM)激酶磷酸化在这一过程中的作用.方法 人肺腺癌A549细胞用随机表法分为5组,对照组、CpG组、单纯照射组、CpG+X射线组和ATM siRNA+CpG+X射线组.采用集落形成法观察细胞存活率.流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡.Western blot检测ATM激酶及其下游底物周期检测点激酶2(checkpoint kinase 2,Chk2)和P53蛋白的表达.结果 A549细胞经CpG ODN7909预处理后,在X射线照射下生长缓慢,集落形成明显减少,与单纯照射组比较,差异有统计学意义(t=13.41,P＜0.05);增强了X射线诱导的人肺腺癌A549细胞G2/M期阻滞和凋亡,与单纯照射组比较,差异有统计学意义(t=17.32和7.71,P＜0.05);明显增加了X射线诱导的ATM、Chk2及P53蛋白磷酸化水平;小分子干扰RNA暂时性抑制ATM的表达后,CpG ODN7909对X射线诱导G2/M期阻滞及凋亡的作用减弱,与CpG+X射线组比较,差异有统计学意义(t=26.84和2.98,P＜0.05).结论 CpG ODN7909在体外增强了X射线诱导的人肺腺癌A549细胞ATM激酶磷酸化,这一作用可能参与G2/M期阻滞和凋亡的调节.     

hTERT和GFAP双启动子条件复制腺病毒介导放射性碘治疗脑胶质瘤的实验研究

目的 利用条件复制腺病毒Ad-Tp-E1a-Gp-NIS感染脑胶质瘤细胞,探讨其介导靶向性放射性碘治疗脑胶质瘤的可行性。方法 克隆人端粒反转录酶（hTERT）和神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）启动子,荧光素酶分析法检测启动子启动效率。构建并纯化条件复制腺病毒Ad-Tp-E1a-Gp-NIS,进行肿瘤选择性病毒复制实验。U87和U251细胞感染Ad-Tp-E1a-Gp-NIS后,进行Western blot分析蛋白质表达,¹²⁵I内流及外流和¹³¹I克隆形成实验。结果 荧光素分析实验证明,hTERT和GFAP启动子分别可以引导荧光素蛋白在U251和U87细胞中表达,表达效率为37.31%~49.00%（F=5.87,P<0.05）和59.75%~62.10%（F=11.89,P<0.01）。Ad-Tp-E1a-Gp-NIS能够在hTERT阳性和GFAP阳性实现肿瘤选择性复制,且在GFAP启动子引导下能成功表达hNIS基因。Western blot分析表明,hTERT蛋白和GFAP蛋白在U87和U251细胞中显示出相对分子质量为120×10³和49×10³的条带。感染Ad-Tp-E1a-Gp-NIS后,U87细胞摄碘能力提高78.80倍（F=2 914.58,P<0.01）,U251细胞摄碘能力提高92.48倍（F=2 275.91,P<0.01）。体外细胞克隆分析证明,感染病毒并在¹³¹I中孵育12 h后,超过90%的肿瘤细胞被杀死,而对照组细胞仅有65%（t=11.73~78.33,P<0.01）。结论 Ad-Tp-E1a-Gp-NIS能实现条件性复制并具有明确的肿瘤靶向性。在细胞水平实验中,能引导放射性¹³¹I杀死胶质瘤细胞。     

基于ADC和增强MRI的影像组学模型预测低级别胶质瘤TERT启动子突变状态

目的:探讨基于ADC和增强MRI的影像组学模型对低级别胶质瘤端粒酶逆转录酶基因（TERT）启动子突变状态的预测价值。方法:回顾性搜集109例经病理证实的低级别胶质瘤患者,所有患者术前均行MRI检查,在ADC和对比增强T₁WI（T₁CE）图像上选取病灶最大层面,沿肿瘤边缘勾画ROI,提取影像组学特征。采用三联法（Fisher, POE+ACC,MI）和最小绝对收缩选择算子（LASSO）进行特征筛选,然后行多因素logistic回归分析,构建影像组学预测模型。采用ROC曲线评估预测模型的诊断效能。结果:在ADC和T₁CE图像上分别提取279个影像组学特征,最终筛选出11个影像组学特征,分别建立ADC模型、T₁CE模型和联合分析（ADC+T1CE）模型共3个影像组学模型。联合分析模型的预测效能最佳,训练集中曲线下面积（AUC）为0.928（95%CI:0.859～0.996）,验证集中AUC为0.878（95%CI:0.758～0.997）。结论:基于ADC和增强MRI的影像组学模型能有效预测低级别胶质瘤...     

室管膜下室管膜瘤的影像学诊断(附三例分析)

目的 探讨室管膜下室管膜瘤的ＣＴ及ＭＲＩ特征。方法 经手术病理证实的室管膜下室管膜瘤３例,回顾分析其ＣＴ及ＭＲＩ表现。结果 室管膜下室管膜瘤的特征表现为：（１）幕上肿瘤位于侧脑室内孟氏孔附近,ＣＴ平扫呈等密度或低密度,很少显示钙化及坏死;（２）ＭＲＴ１ＷＩ示肿瘤呈等、低信号,其内可见多数微囊状更低信号区,肿瘤飘浮于侧脑室中;Ｔ２ＷＩ示肿瘤呈均匀高信号;（３）ＣＴ、ＭＲ增强扫描,病灶未见强化征象。结     

~(60)Coγ射线照射诱导人卵巢癌细胞凋亡及细胞周期的改变

目的　探讨6 0 Coγ射线照射对人卵巢癌细胞株A2 780及其顺铂耐药株A2 780 CP体外生长、凋亡及细胞周期的影响。方法　采用四甲基偶唑蓝 (MTT)比色法分析不同辐照剂量 (1～10Gy)对A2 780及A2 780 CP两种细胞株体外生长的影响 ,用流式细胞术 (FCM)比较两者辐照后凋亡及细胞周期的变化。结果　 (1) 1～ 10Gy6 0 Coγ射线照射引起A2 780细胞株明显的生长抑制和凋亡 ,而A2 780 CP细胞则表现出明显的辐照抗性 .(2 ) 6Gy6 0 Coγ射线照射后 6～ 48hA2 780细胞呈现G1 期细胞阻滞和S期细胞比例下降 ,A2 780 CP细胞则呈G1 期细胞比例减少和S期细胞比例增加。结论卵巢癌耐药细胞具有辐射抗性和特征性的细胞周期变化 ,流式细胞术测定辐照诱导肿瘤细胞凋亡及细胞周期的变化可预测恶性肿瘤细胞的辐射敏感性。     

乏氧对人肺腺癌细胞A549细胞周期阻滞和p53表达的影响

据报道，细胞周期阻滞与放射敏感性有着十分密切的关系，乏氧可诱导细胞周期阻滞，并可导致肿瘤细胞出现G0/G1阻滞，并认为乏氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1 a1pha，HIF-1α)是乏氧诱导细胞周期G0/G1阻滞的必需元件，但作用机理及对细胞周期阻滞的影响程度目前尚不清楚。p53作为抑癌基因，是影响细胞周期调控机理的重要基因。     

视神经损伤后修复再生的GAP-43原位杂交和免疫细胞化学动态研究

目的研究和探讨视神经损伤后的自然修复再生和脑源性神经营养因子及睫状神经营养因子互补辅助再生的GAP-43mRNA原位杂交组织化学和分子神经生物学变化特征，寻找视神经有效再生的新途径。方法用猫作为实验对象，术前动物被分为四组：①正常对照组；②单纯球后视神经1／2截断组；③视神经1／2截断并定时玻璃体内注射生理盐水对照组；④视神经1／2截断并定时玻璃体内注射脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子复合因子辅助再生组。动物模型制做为以眶外侧入路方法手术开眶，暴露眼球后视神经，在眼球后5mm处准确行视神经的1／2截断术。术后四组动物共同在正常视环境中饲养4～8个月，视神经1／2截断并玻璃体内注射脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子辅助再生组，在术后即日注射脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子复合液（10ng），并在以后每周注射脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子复合液2次。在视神经损伤后第4个月和第8个月后将动物处死行外侧膝状体的GAP43免疫细胞化学和原位杂交组织化学检测。结果在视神经损伤4个月时，四组的外侧膝状体的损伤眼相应输入层GAP43免疫阳性神经元的细胞数密度和积分光密度比较为：正常对照组与视神经1／2截断组和视神经1／2截断并定时玻璃体内注射生理盐水对照组比较都有显著差异性（P均〈0．001），而与视神经1／2截断并定时玻璃体内注射脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子复合因子辅助再生组比较有显著差异性（P〈0．01）；视神经1／2截断并定时玻璃体内注射脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子复合因子辅助再生组与视神经1／2截断并定时玻璃体内注射生理盐水对照组和视神经1／2截断组比较都有显著差异性（P均〈0．001），在视神经损伤8个月时，四组的外侧膝状体的损伤眼相应输入层GAP43免疫阳性神经元的细胞数密度和积分光密度比较为：正常对照组与视神经1／2截断组和视神经1／2截断并定时玻璃体内注射生理盐水比较都有显著差异性（P均〈0．001），而视神经1／2截断并定时玻璃体内注射脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子复合液组比较也有差异（P〈0．05）；视神经1／2截断并定时玻璃体内沣射脑源性神经营养因子和睫状神经营养因予复合液组与视神经1／2截断并定时玻璃体内注射生理盐水组和视神经1／2截断组比较都有显著差异性（P均〈0．01）。损伤第4个月和第8个月时外侧膝状体的损伤眼相应输入层的GAP43 mRNA原位杂交阳性信号积分光密度和数密度经计算机图像分析及统计学处理发现原位杂交组织化学图像分析结果与免疫细胞化学图象分析结果相一致。结论①视神经1／2损伤后可以施加条件因素辅助再生，脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子对促进视神经损伤后的再生有调节局部微环境和互补促生长作用；②原位杂交组织化学实验观察也证实了视神经1／2损伤后的复合神经营养因子辅助视神经再生具有显著的拮抗损伤效应。     

Water diffusion in a rat glioma during ganciclovir-thymidine kinase gene therapy-induced programmed cell death in vivo: correlation with cell density

PURPOSE: To study the characteristics of diffusion magnetic resonance imaging (MRI) contrast in a rat brain BT4C glioma during progression of ganciclovir (GCV)-thymidine kinase gene therapy-induced programmed cell death (PCD) in vivo. MATERIALS AND METHODS: The trace of the diffusion tensor (Dav = 1/3TraceD), T2, and spin density were determined by MRI and the apparent diffusion coefficient (ADC) of water by diffusion nuclear MR (NMR) spectroscopy using largely varying b values and diffusion times (tD) at 4.7 T. Cell count and apoptotic cells were quantified by histological means. RESULTS: Decline in cell count was strongly associated with increase in both Dav and T2. Spin density ratio between tumor and contralateral parietal cortex increased with a very similar time course as Dav and T2, indicating net water gain into the eradicating tumor. Diffusion spectroscopy showed a nonmonoexponential signal decay at all tD values ranging from 14-192 msec. During PCD, the ADC of the component yielding fast diffusion coefficient (D1), as acquired with tD > or = 47 msec, increased with kinetics similar to those of Dav (tD = 4.8 msec). The fractional size of D1 increased by 10% to 15% throughout the entire tD range. Apparent water residence time of the slow diffusion component, D2, shortened from a value of 38.3 +/- 1.7 msec on day 0 to 33.4 +/- 0.5 msec by day 8. CONCLUSION: The present results show that reduced cell density and increased water content, leading to altered water microenvironment, are associated with increased water diffusion coefficient in eradicating gliomas as a result of PCD.     

RGDS四肽对肝星状细胞增殖、胶原合成及FAK mRNA表达的影响

目的 研究精-甘-天冬-丝氨酸（RGDS）四肽对大鼠肝星状细胞（HSC）增殖和胶原合成的抑制作用以及对黏着斑激酶（FAK）的影响。方法 以不同剂量的RGDS干预纤维黏连蛋白（FN）刺激的HSC,通过甲苯胺蓝染色测定细胞黏附率,^3H-胸腺嘧啶（^3H-TdR）、^3H-脯氨酸（^3H-Pro）掺入法测定HSC增殖及胶原合成能力,RT-PCR检测FAKmRNA的变化。结果 与单纯FN组相比较,不同剂量（25mg/L、50mg／L和100mg／L）的RGDS作用于HSC48h及100mg／L的RGDS作用于HSC不同时间（12h、24h和48h）后,HSC的增殖明显受抑,胶原合成能力降低,同时FAK mRNA表达水平也下降。结论 RGDS能够抑制FN与HSC黏附,并抑制HSC增殖及胶原合成。FAK的下调可能是RGDS抑制HSC增殖及胶原合成的分子机制之一。     

前列腺癌特异性启动子P（A）PTp的构建及评价

目的构建前列腺癌特异性启动子PSAe（AREc）-PSMAe-TARPp[P（A）PTp],并在腺病毒水平评价其启动目的基因表达的效率和特异性。方法巢式PCR扩增基因组DNA获得PSAe的AREc区基因、PSMAe基因和TARPp基因,并依次连接获得嵌合启动子P（A）PTp。采用Adeasy系统构建并制备P（A）PTp启动增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）表达的重组腺病毒Ad-pSh-P（A）PTp-EGFP。不同感染复数（multi-plicity of infection,MOI）的Ad-pSh-CMV-EGFP感染各细胞系后48 h,流式细胞术确定最佳MOI;并以最佳MOI的Ad-pSh-P（A）PTp-EGFP感染各细胞系,检测EGFP的表达效率。结果 PCR成功扩增并连接获得嵌合启动子基因P（A）PTp。采用Adeasy系统,构建并制备了重组腺病毒Ad-pSh-P（A）PTp-EGFP。Ad-pSh-CMV-EGFP感染后,流式检测结果显示,前列腺癌细胞PC3和PC3M细胞的最佳MOI为100 MOI;而前列腺癌细胞DU145以及肝癌细胞SMMC-7721和HepG2为250 MOI。最佳MOI的Ad-pSh-P（A）PTp-EGFP感染后,EGFP在各细胞系中的表达效率[P（A）PTvsCMV]为：PC3（25.56%vs77.76%）、DU145（50.50%vs65.26%）、PC3M（30.81%vs89.70%）、HepG2（6.26%vs63.76%）、7721（2.27%vs67.84%）。结论成功构建前列腺癌特异性嵌合启动子P（A）PTp,并证实能在前列腺癌细胞中特异并有效地启动EGFP的表达。     

Tumor tissue characterization evaluating the luciferase activity under the control of a hsp70 promoter and MR imaging in three tumor cell lines

We investigated the luciferase activity under the control of a hsp70 promoter and MR imaging for three tumor cell lines. Three tumor cell lines, SCCVII, NIH3T3 and M21 were transfected with a plasmid containing the hsp70 promoter fragment and the luciferase reporter gene and grown in mice. Bioluminescence imaging of the tumors was performed every other day. MR imaging, pre- and post-contrast T1-wt SE, T2-wt FSE, Diffusion-wt STEAM-sequence, T2-time determination were obtained on a 1.5-T GE MRI scanner at a tumor size of 600–800 mm³ and 1400–1600 mm³. Comparing the different tumor sizes the luciferase activity of the M21 tumors increased about 149.3%, for the NIH3T3 tumors about 47.4% and for the SCCVII tumors about 155.8%. Luciferase activity of the M21 tumors (r = 0.82, p < 0.01) and the SCCVII tumors (r = 0.62, p = 0.03) correlated significant with the diffusion coefficient. In the NIH3T3 tumors the best correlation between the luciferase activity and the MRI parameter was seen for the SNR (T2) values (r = 0.78, p < 0.01). The luciferase activity per mm³ tumor tissue correlated moderate with the contrast medium uptake (r = 0.55, p = 0.01) in the M21 tumors. In the NIH3T3 and SCCVII tumors a negative correlation (r = −0.78, p < 0.01, respectively, r = −0.49, p = 0.02) was found with the T2 time. Different tissue types have different luciferase activity under the control of the same hsp70 promoter. The combination of MR imaging with bioluminescence imaging improves the characterization of tumor tissue giving better information of this tissue on the molecular level.     

基于形状因子分析的重叠细胞自动判别技术研究

重叠细胞的判别在细胞计数和参数测量中有非常重要的意义.本文根据重叠细胞的形态特征,提出根据形状因子来判断细胞是否重叠.首先研究了形状因子的计算方法,对重叠细胞形状因子的阈值P0进行了探讨和实验,得出P0=0.5:当PE≤P0,认为目标存在细胞重叠;PE＞P0,认为目标不存在细胞重叠.实验结果证明本技术能检测出不同形状的重叠细胞,准确率为95%.     

MAPK反义寡核苷酸对乙醛活化HSC增殖和JNK信号通路的影响

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)反义寡核苷酸(ASO)对乙醛活化肝星状细胞(HSC)增殖和MAPK中的c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的影响。方法:用脂质体转染法将MAPKASO导入乙醛活化HSC中,通过MTT法检测细胞增殖情况、流式细胞仪检测MAPK-JNK表达。结果:MAPK ASO可明显抑制细胞增殖及抑制JNK信号通路的表达,其抑制率分别为40.81%、60.6%。与对照组比较有显著差异(P<0.05)。结论:MAPKASO能够抑制HSC的增殖,阻断JNK信号通路,这可能成为治疗肝纤维化的一个有效途径。     

EGFR-TKI在非小细胞肺癌二线治疗与一线治疗中的疗效比较

含铂两药联合化疗方案目前仍是晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的标准一线治疗方案,分子靶向药物为晚期NSCLC患者提供了新的治疗选择.临床研究证实,在晚期NSCLC患者的二线治疗中,表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)与标准化疗相比具有明确的非劣效性.然而,肿瘤组织标本检测显示EGFR基因突变阳性的NSCLC患...     

肾癌的螺旋CT双期扫描及CT分期

目的：探讨肾癌的螺旋CT双期扫描表现及CT分期的价值。方法：对36例手术病理证实的肾癌患者CT双期扫描图像进行分析。结果：CT平扫等密度者17例，低密度者15例，高密度者4例；增强扫描动脉期呈均质强化者7例，不均质强化者29例；高强化者27例，弱强化者9例；实质期肾静脉癌栓者10例(占28％)，下腔静脉癌栓者3例，淋巴结转移者6例。结论：螺旋CT双期扫描可对肾癌做出明确诊断，CT分期对指导治疗方案有较大价值。