lncRNA调控miRNA在骨关节炎中的研究进展

非编码RNA被认为是可以通过软骨内成骨的方式调控关节软骨,其由微小RNA（mRNA-interfering complementary RNA,miRNA）和长链非编码RNA（long non-coding RNAs,lncRNA）组成。有越来越多的实验证据揭示了非编码RNA在软骨细胞分化中的作用,以及包括骨关节炎在内...     

脂质相关miRNA研究进展

脂质代谢在人体生命活动中发挥重要作用,脂质稳态失调严重危害人类健康。MicroRNA(miRNA)是一类在转录后水平调控基因的非编码、短链RNA,其功能涉及多种生物学过程。多种miRNA参与调节脂质合成、分解及转运等过程,并在血脂异常患者中表达量发生变化,在脂质代谢相关疾病中发挥重要作用。本文综述近年来脂质相关miRNA的研究进展。     

利用高压注射体内转染法实现HBsAg在小鼠肝脏中的高效表达

目的：观察能否应用高压注射体内转染法实现外源DNA在肝脏中高效表达,为嗜肝病毒分子生物学研究奠定方法学基础.方法：将大容量乙肝病毒表面抗原表达质粒pVAX1/S DNA溶液,通过尾静脉快速注射入小鼠体内,用免疫组化检测小鼠心、肺、肝、脾、肾组织中HBsAg的表达情况.结果：经小鼠尾静脉高压注射pVAX1/S质粒DNA后,HBsAg主要在肝脏表达;且高压注射组明显强于缓慢注射组;高压注射5μg pVAX1/S质粒DNA后8小时,在肝脏观察到较强的HBsAg表达.结论：通过尾静脉高压注射,能实现HBsAg主要在肝脏高效表达.     

超声介导脂膜微泡靶向传输绿色荧光蛋白基因的体内实验研究

目的探讨超声（US）对裸鼠人宫颈癌（Hela）皮下移植瘤绿色荧光蛋白（EGFP）基因传输和定位的作用以及脂膜微泡（LSMB）对转染的增强作用。方法将LSMB和质粒经裸鼠尾静脉注入,并予以超声辐照（LSMB＋US）,辐照条件为：2.0W/cm^2,20%占空比,2min,以仅质粒注射（P）、质粒注射加超声辐照（US＋P）、LSMB和质粒注射（LSMB＋P）作为对照,行冰冻切片和组织学检查,通过荧光评分评估EGFP表达,并对表达持续时间和靶向性进行分析。结果注射质粒和LSMB联合超声辐照可明显增加基因转染效率,LSMB＋US组的裸鼠皮下移植瘤内有显著的EGFP表达,均高于P组、US＋P组或LSMB＋P组（P〈0.01）;基因表达的最佳时间是第3天（P〈0.01）;无论有否超声照射,裸鼠其他器官组织中均无明显的EGFP表达,且未观察到明显的组织损伤。结论超声辐照联合LSMB和质粒注射的方法能显著增加裸鼠移植瘤的基因转染,而无明显的副作用,是一种高效的非病毒基因传输方法,为目前的基因治疗提供新思路。     

基因治疗进展与展望-磁性转染

基因输送是基因治疗中非常关键的技术,作为运载工具,非病毒载体可避免病毒载体的安全性等问题。近年来非病毒基因载体的开发颇受关注,许多新的物理化学技术应运     

超声靶向微泡破坏技术介导基因转染的研究进展

基因转染技术的高速发展不仅革新了生物学和医学许多基本问题的研究,也推动了诊断和治疗的进步。基因作为核酸类生物活性大分子,极易在体内降解,因此传递基因的载体尤为重要。超声靶向微泡破坏(UTMD)技术利用超声波和微泡之间的相互作用,以及其产生的生物学效应,使微泡携基因进行转染,并与多种载体联合应用,为疾病的治疗提供了有效手段。本文就UTMD技术介导基因转染的研究进展进行综述。     

miRNA在乳腺癌中作用的初步研究状况

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤。近年来,其发病率在全球范围内呈增长趋势。虽然有关乳腺癌的研究较多,并取得一定成果,但是该肿瘤的侵袭和转移机制仍然未彻底阐明。最近有研究发现miRNA的异常表达与乳腺癌的发生发展密切相关,且具有一定的临床应用价值。现就miRNA对乳腺癌发生发展、诊断、治疗和预后相关研究作一综述。     

实时PCR定量分析体内基因转染效率的可行性

为了探索实时PCR技术评价基因转染效率的可行性，利用克隆PCR检测逆转录病毒载体介导的neo基因导入原代成肌细胞的转染效率，同时行实时PCR检测，对二结果进行对比分析；利用线性扩增介导的PCR(LAM—PCR)技术和逆转录病毒5’LTR插入细胞基因组位点的分析，确定单细胞内基因转染的拷贝数。结果显示：①在低转柒率的情况下(＜36％)二的结果相近，但是在高转染率情况下二的结果差别明显；②逆转录病毒载体介导的转染，在原代成肌细胞中为单拷贝基因导入基因组内。结论：实时PCR可以比较精确地估计体内病毒载体介导的基因转染效率；而在体外由于多为高转染率，不适合用此方法进行检测。     

稳定转染靶向bcl-2的shRNA对胃癌SGC-7901细胞株增殖影响

目的探讨稳定转染靶向bcl-2的小发夹RNA（shRNA）对胃癌细胞株SGC-7901的长效影响。方法构建针对bcl-2的shRNA质粒表达载体,转入SGC-7901细胞,筛选稳定转染的细胞克隆继续压力培养。RT-PCR方法检测稳定转染后SGC-7901细胞bcl-2 mRNA的表达以及对细胞增殖和凋亡的影响。结果稳定转染shRNA后,SGC-7901细胞的bcl-2 mRNA表达明显下降;细胞增殖能力及凋亡率无明显变化。结论稳定转染shRNA能长效抑制SGC-7901细胞bcl-2 mRNA的表达,为后续基因治疗研究提供了实验依据。     

非病毒载体介导脑源性神经营养因子基因转染骨髓间充质干细胞:脂质体及电穿孔转染法的比较

背景:基因转染细胞有病毒及非病毒载体法,因病毒载体面临安全性、免疫排斥等问题,实验探讨脂质体及电穿孔转染法.目的:比较脂质体及电穿孔法介导人脑源性神经营养因子基因转染骨髓间允质干细胞的细胞转染特性和体外表达情况,建立基因工程细胞.方法:①脂质体法:取体外分离、培养的第3代豚鼠骨髓间充质干细胞,将质粒-脂质体混合物加入含细胞的培养基中培养6 h,再加入胎牛血清的培养基,孵育48 h后行免疫组织化学检测,即为瞬时表达.48 h后加入含G418培养基筛选.②电穿孔法:取骨髓间充质干细胞,胰酶消化,用无血清培养基重悬细胞,将细胞悬液加入电转化池中,加入质粒,将电转化池移至电极间放电转导.转染48 h后,检测目的基因瞬时表达.48 h后加入含G418培养基筛选.用免疫组织化学及RT-PCR检测两种方法脑源性神经营养因子基因表达情况.结果与结论:免疫组织化学显示脂质体介导转染的脑源性神经营养因了瞬时表达率约为5.80%,电穿孔法约为24.29%.脂质体法转染筛选14 d后细胞几乎全部死亡;电穿孔法转染后筛选并扩大培养建立工程细胞,免疫组织化学显示工程细胞脑源性神经营养因子阳性表达率达90%以上,RT-PCR扩增产物电泳证实目的基因阳性条带.结果表明,用电穿孔法可成功建立脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间充质干细胞的工程细胞,并用免疫组织化学和RT-PCR办法证实细胞体外表达目的基因.     

EB病毒相关胃癌迁移、侵袭相关miRNA和lncRNA研究进展

胃癌是全球第五大常见恶性肿瘤,死亡率居肿瘤相关死亡的第3位。EB病毒（EBV）感染在人群中非常普遍,与各种人类肿瘤有关,如鼻咽癌、胃癌和淋巴瘤,其中EB病毒相关胃癌（EBVaGC）约占所有胃癌的1.3%～30.9%。在EBV相关肿瘤中,许多非编码RNA(ncRNA)参与了肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭等过程的调控,ncRNA与潜在靶基因的相互作用逐渐成为研究热点。文章综述了与胃癌迁移、侵袭相关的ncRNA的研究进展,以期为后续胃癌的研究提供参考。     

趋化因子受体CXCR4 miRNA真核表达载体的构建

目的构建趋化因子受体4（CXCR4）的特异RNA干扰载体。方法在GenBank数据库查询CXCR4基因的登陆号为NM-003467。使用Invitrogen公司的在线设计软件Invitrogen’sRNAi Designer,设计miR RNAi,选择713这个位点设计成相应的Oligo DNA,退火DNA oligos生成双链oligos,应用T4DNA连接酶连接双链oligos与表达载体pcDNA^TM6．2-GW／EmGFP-miR。酶切鉴定和测序鉴定。结果合成的基因序列完全正确并成功克隆到真核表达载体上。结论CXCR4miRNA真核表达载体构建成功,可作为进一步研究该基因的功能和探索肿瘤的基因治疗的工具。     

微小RNA与非霍奇金淋巴瘤关系的研究进展

微小RNA(microRNA)是一类长度为18～24个核苷酸非编码小分子RNA,它不仅参与个体发育、细胞凋亡、增殖、分化;还参与肿瘤的发生和发展。最近研究发现,miRNA的表达失调与非霍奇金淋巴瘤的关系也很密切。     

非编码RNA在多发性骨髓瘤中的研究进展

研究发现,非编码RNA(non-coding RNAs,ncRNA)在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)的发生发展以及治疗中起到了重要作用。例如:某些微小RNA(microRNA,miRNA)可以调控基因表达,影响细胞自噬、凋亡等生理病理进程及蛋白质合成等,从而为MM诊断、治疗及预后评估提供依据。长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)可以参与细胞分化,结合转录因子修饰组蛋白,特异性调控基因组等,为MM患者提供潜在的治疗靶点。而环状RNA(circular RNA,circRNA)拥有转录后调节功能,可以调节基因表达,从而抑制MM的细胞活性及细胞增殖,进一步诱导细胞凋亡。本文就不同非编码RNA的功能特征以及其在多发性骨髓瘤中的研究进展作一综述。     

基因转染技术提高体内构建组织工程化软骨质量的实验研究

目的：研究转化生长因子β(TGF—β1)cDNA基因转染对软骨细胞Ⅱ型胶原表达的调控作用，为基因转染技术在软骨组织工程中的应用提供理论依据。方法：利用脂质体Fugene6将含TGF-β1基因的其核表达载体及空白载体分别转染至软骨细胞(基因转染组和对照组)，RT—PCR、Nonhem—Blots、原位杂交及免疫组化检测TGF—β1调节体外培养软骨细胞II型胶原表达的变化。结果：TGF-β1基因转染软骨细胞后，其II型前胶原mRNA及其蛋白的表达均显著增强，且随着TGF—β1蛋白表达的丧失，其对软骨细胞II型前胶原mRNA表达的促进作用亦逐渐减弱。结论：TGF—β1可以上调体外培养软骨细胞II型胶原的表达。     

贮存末期血小板miRNA的表达谱分析

目的 了解在体外常规贮存血小板微小RNA(miRNA)的表达谱变化,探讨miRNA参与调控血小板贮存损伤(PSL)的分子机制.方法 留取来自无偿献血者的单采血小板20(人)份(5 mL/份),摇匀后等量混合,贮存于(22±2)℃恒温血小板振荡保存箱中,分别在d1和d5取样,采用纳米球(DNB)测序技术对血小板miRNA...     

腺相关病毒及慢病毒载体对骨髓间充质干细胞基因转染效率的比较

目的比较腺相关病毒(AAV)载体和慢病毒(LV)载体在间充质干细胞(MSCs)基因转染中的效率。方法密度梯度离心法分离培养MSCs,HE 染色、Nestin 免疫荧光染色鉴定,BrdU 标记观察增殖情况。分别包装AAV 与LV 假病毒颗粒,并感染MSCs,通过β-gal 染色和绿色荧光蛋白检测,分别计算两者的转染效率。结果MSCs成功从骨髓分离。AAV载体介导的基因转染率为49.1%,LV载体的转染率为91.4% (P<0.01)。结论LV载体介导的基因转染方法转染效率更高。     

miRNA在气道重构中的研究进展

气道重构是指气道组织由于反复慢性炎症刺激损伤及不全性修复所导致的结构功能变化,多见于哮喘、COPD等慢性气道炎症性疾病,是导致气道不可逆性狭窄和气流受限的重要原因。微RNA(miRNA)参与人体几乎所有的病理生理过程,是功能优异的基因调控因子。近年,研究者发现miRNA通过不同的通路和靶点影响气道平滑肌细胞的增殖和迁移、上皮细胞的增殖和黏附、成纤维细胞增生、气道血管生成、杯状细胞的分泌和气道炎症的发生,从而影响气道重构。该文就miRNA在气道重构中的研究进展进行综述。     

慢病毒载体介导RNA干扰质粒转染小鼠血管瘤内皮细胞的条件优化

目的 优化在慢病毒介导下将含有针对小鼠α1,3GT的RNA干扰质粒导入小鼠血管瘤内皮细胞(EOMA)时的转染条件.方法 按是否加入促转染剂Polybrene(8μg/ml),感染复数(MOI)分别为1、5、10、15和20,感染时间分别为4、6、12和24 h,将EOMA细胞分为40个纽,分别加入相应的慢病毒转染混合液,于转染后140 h在荧光显微镜下计数阳性细胞率,台盼蓝染色法检测各转染条件下的EOMA细胞活性.结果 不同病毒感染复数、不同感染时间及有、无促转染剂Polybrene的各组间病毒对EOMA细胞的转染效率差异有统计学意义,其中当加入Polybrene(8 μg/ml),MOI=5,感染时间为6 h时,转染效率达到最高(83%),细胞活性良好,存活率为96%,此后再增加MOI值和感染时间,转染效率未继续增加,而对细胞的毒性作用明显增强.结论加入Polybrene(8 μg/ml),MOI=5,感染时间为6 h时可以实现慢病毒载体对EO-MA细胞的高效转染并保持较高的细胞活性.     

慢病毒载体介导survivin基因siRNA对裸鼠移植人肺腺癌的体内抗癌机制研究

目的探讨慢病毒载体介导survivin基因小片段干扰RNA(siRNA)对裸鼠移植人肺腺癌的体内抑瘤活性。方法制备表达survivin-siRNA的慢病毒载体,构建裸鼠移植人肺腺癌模型,将裸鼠分为空白组(PC组)、空白载体组(NC组)、实验组(RNAi组)3组,分别给予生理盐水、空白病毒载体和siRNA;siRNA组肿瘤组织局部注射表达survivin-siRNA的慢病毒载体,观察肿瘤体积及其随时间的生长变化曲线;分别采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及蛋白质印迹法检测各组裸鼠肿瘤组织中survivin基因的信史RNA(mRNA)及其表达的蛋白水平变化;采用流式细胞术检测肿瘤细胞周期组方图变化。结果慢病毒载体介导survivin-siRNA对裸鼠肺腺癌的抑瘤率为46.07%;siRNA组瘤重与NC组和PC组比较,差异有统计学意义(P0.05),而NC组与PC组瘤重比较差异无统计学意义(P0.05);siRNA组survivin基因mRNA及蛋白表达较NC组和PC组明显降低,抑制率分别为72.00%、53.00%;G1期细胞百分比明显增加,S期细胞百分比则明显减少。结论慢病毒载体介导的siRNA能有效抑制裸鼠移植人肺腺癌survivin基因的表达,有效激发细胞凋亡。