白藜芦醇对高糖诱导肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及机制

目的探讨白藜芦醇抑制高糖诱导人近端肾小管上皮细胞株(HK-2)的凋亡及可能机制。方法 MTT检测HK-2细胞活力;Hoechst染色法、caspase-3活性检测细胞凋亡;DCFH-DA检测细胞内活性氧水平;Real-time PCR检测Nrf2 mRNA表达;Western印迹法检测Nrf2蛋白表达。结果30 mmol/L葡萄糖能显著降低HK-2细胞活力,诱导细胞凋亡,上调细胞内活性氧的水平,并下调Nrf2 mRNA和蛋白表达。10μmol/L白藜芦醇预处理能部分逆转高糖的作用。结论白藜芦醇对高糖诱导的HK-2凋亡的保护机制可能与抑制活性氧的生成和上调Nrf-2的表达有关。     

罗汉果皂苷提取物通过调控miR-199a-3p对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响

目的 探究罗汉果皂苷提取物对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响及潜在分子机制。方法 体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,采用高糖和罗汉果皂苷提取物干预HK-2细胞，细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力，流式细胞术分析细胞凋亡率，Western印迹分析B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-199a-3p的表达，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-8的表达。结果 高糖能够抑制HK-2细胞活力，促进细胞凋亡和Bax的表达，抑制Bcl-2的表达，提高TNF-α、IL-6和IL-8的含量；罗汉果皂苷提取物能够抑制高糖诱导的HK-2细胞凋亡，提高细胞活力，促进miR-199a-3p的表达，降低TNF-α、IL-6和IL-8的含量；过表达miR-199a-3p能够抑制高糖诱导的HK-2细胞损伤，下调miR-199a-3p能够逆转罗汉果皂苷提取物对高糖诱导的HK-2细胞损伤保护作用。结论 罗汉果皂苷提取物能够通过上调miR-199a-3p的表达对高...     

艾塞那肽对糖尿病大鼠心肌组织Bcl-2、Bax表达的影响

目的 观察艾塞那肽（EX）对糖尿病（DM）大鼠心肌组织Bcl-2、Bax表达的影响.方法 高糖高脂饲料喂养联合尾静脉注射小剂量链脲佐菌素建立DM大鼠模型20只,随机分为DM组、EX组,EX组皮下注射EX 1.0nmol/（kg·d）,设正常对照10只（N组）.12周后,应用实时定量PCR、Western blot法检测大鼠心肌组织中的Bcl-2、Bax.结果 EX组大鼠空腹血糖（FBG）、糖化血红蛋白（HbA1c）与DM组比较,P均＞0.05.与N组比较,DM组大鼠心肌Bcl-2 mRNA和蛋白表达降低（P均≤0.01）,Bax mRNA和蛋白表达升高（P均≤0.01）,且Bcl-2与BaxmRNA和蛋白表达比值下降（P均≤0.01）;EX组较DM组大鼠心肌Bcl-2 mRNA和蛋白表达升高（P均≤0.01）,BaxmRNA和蛋白表达降低（P均≤0.01）,Bcl-2与Bax mRNA和蛋白表达比值增加（P均≤0.01）.结论 艾塞那肽可能通过上调DM大鼠心肌组织Bcl-2表达、下调Bax表达,从而抑制心肌细胞凋亡,延缓DM心肌病变的发生、发展.     

山楂酸减少高糖介导的心肌细胞损伤和凋亡及其机制

目的 探讨山楂酸处理对高糖介导大鼠心肌细胞H9c2损伤和凋亡分子机制影响。 方法 以高糖诱导大鼠心肌细胞 H9c2为模型,采用乳酸脱氢酶（LDH）法检测细胞损伤情况,TUNEL化学染色检测细胞凋亡率,Western blot检测AMPK的磷酸化水平以及Bcl-2、Bax的表达水平,免疫荧光检测细胞活性氧（ROS）的生成。 结果 ①与对照组相比,高糖组细胞LDH活性和细胞凋亡比率显著增高（P<0.05）,山楂酸处理却能抑制高糖诱导的H9c2细胞LDH的积累,降低细胞凋亡（P<0.05）。②Western blot检测显示,与对照组相比,高糖组p-AMPK、Bcl-2下调（P<0.05）,Bax上调（P<0.05）;与高糖组相比,山楂酸处理组p-AMPK、Bcl-2上调（P<0.05）,Bax下调（P<0.05）,给予AMPK阻断剂 Compound C后可以抑制山楂酸诱发的这些效应（P<0.05）。③ROS检测显示,山楂酸能够抑制高糖刺激的ROS的产生（P<0.05）,而AMPK拮抗剂compound c却能够拮抗山楂酸对ROS的抑制（P<0.05）。 结论 山楂酸能通过激活AMPK信号通路,从而增强BCl-2表达、抑制Bax和ROS生成,拮抗高糖诱导的大鼠心肌细胞H9c2凋亡,对心肌细胞起保护作用。     

莪术油对棕榈酸诱导的肾小管上皮细胞脂毒性反应的抑制作用观察

目的 观察莪术油对棕榈酸诱导的肾小管上皮细胞毒性反应的抑制作用,并探讨其可能分子机制。方法 体外培养肾小管上皮细胞HK-2细胞株分为对照组、棕榈酸组和莪术油组。对照组不作处理,棕榈酸组分别加入终浓度为0.2、0.8 mmol/L的棕榈酸,莪术油组加入终浓度为0.2、0.8 mmol/L的棕榈酸与20 mg/L的莪术油。采用油红染色法检测两组细胞内脂质沉积情况;MTT法检测细胞增殖情况;Real-time PCR法测定细胞内TNF-α、p53 mRNA表达;Western blot法检测p53上调凋亡调控因子（PUMA）、细胞死亡调节因子（Bim）蛋白表达。结果 对照组HK-2细胞无明显脂质沉积,棕榈酸组与莪术油组细胞内均有明显脂质沉积,但两组差异不大。棕榈酸组与莪术油组细胞增殖量低于对照组（P均〈0.05）;TNF-α、p53 mRNA、PUMA相对表达量高于对照组,且莪术油组低于棕榈酸组（P均〈0.05）;各组Bim蛋白表达无明显差异。结论 莪术油可抑制棕榈酸诱导的肾小管上皮细胞增殖,其机制可能与抑制TNF-α、p53 mRNA及PUMA蛋白表达有关。     

脂联素对高糖环境下人心肌细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达的影响

目的 探讨脂联素(ADPN)对高糖环境下人心肌细胞株(HCM)的凋亡及凋亡因子Bax、Bcl -2表达的影响,揭示脂联素对高糖环境中心肌细胞可能的保护机制.方法 将培养的HCM随机分为正常对照组、高糖组、高糖十脂联素组,分别培养24 h、48h、72 h,运用MTT法测定不同时间段细胞增殖情况；流式细胞术测定细胞凋亡率；实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术测定细胞Bax/Bcl -2表达情况.结果 与对照组相比,高糖持续作用抑制细胞增殖,增加细胞凋亡率,并使Bax表达上调,而Bcl -2表达下降.脂联素组细胞增殖明显增加,并通过下调Bax和上调Bcl -2抑制细胞凋亡,且该作用呈时间依赖性,与高糖组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 脂联素可以抑制心肌细胞凋亡,对高糖作用下的心肌细胞具有保护作用.     

左旋肉碱对氧化应激损伤肾小管上皮细胞的保护作用

目的观察左旋肉碱对过氧化氢（H2O2）应激损伤人肾小管上皮细胞的保护作用,并探讨其可能机制。方法用H2O2作用于人肾小管上皮细胞系HK-2,建立肾小管上皮细胞氧化应激损伤模型;MTT法检测左旋肉碱预处理后HK-2细胞的活力;用酶化学法测定HK-2细胞超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）、过氧化氢酶（CAT）活性及总抗氧化能力（T—AOC）、丙二醛（MDA）;荧光显微镜观察及流式细胞仪测定细胞内活性氧（ROS）及HK-2细胞凋亡率。结果左旋肉碱预处理12h能抑制H2O2损伤所导致的HK-2细胞活力降低,增加细胞中SOD、GSH—Px和CAT含量,提高细胞T-AOC,降低细胞中MDA和ROS水平,抑制HK-2细胞凋亡。结论左旋肉碱对氧化应激所致的肾小管上皮细胞损伤具有保护作用,其机制可能与增强细胞抗氧化能力、减少自由基生成、抑制脂质过氧化反应及细胞凋亡有关。     

戊地昔布对高糖培养的肾小管上皮细胞增殖的影响及其调控机制

目的 探讨戊地昔布对高糖培养的肾小管上皮细胞增殖、核因子(NF)-κΒ、环氧合酶(COX)-2表达的影响.方法 将常规培养的人肾小管上皮细胞分为正常糖、高糖和高糖加200 μmol/L戊地昔布组,72 h后收集细胞,采用流式细胞术检测细胞的增殖指数(PI);免疫细胞化学检测肾小管上皮细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和NF-κB蛋白的表达变化,流式细胞术检测肾小管上皮细胞中NF-κB和COX-2蛋白的表达情况.结果 (1)与正常糖组比较,高糖组肾小管上皮细胞PCNA表达增强和PI升高(P＜0.01或P＜0.05);而戊地昔布能够降低高糖培养的肾小管上皮细胞PCNA的表达和PI(P＜0.01).(2)正常糖组,NF-κB主要表达在肾小管上皮细胞的细胞浆内,而高糖组NF-κB表达增强,阳性表达主要定位于肾小管上皮细胞的细胞核内;高糖能够上调肾小管上皮细胞NF-κB活化和COX-2蛋白的表达(P＜0.01);高糖加戊地昔布组NF-κB及COX-2表达均降低(P＜0.01).(3)NF-κB和COX-2呈显著正相关;同时COX-2蛋白表达与PI呈显著正相关(P＜0.01).结论 降低NF-κB活化、下调COX-2蛋白表达从而降低肾小管上皮细胞增殖可能是戊地昔布保护糖尿病时肾脏损伤的机制之一.     

高糖环境对乏氧损伤大鼠海马神经元凋亡的影响及脑神康胶囊的干预作用

目的 研究高糖环境对体外培养的大鼠海马神经元乏氧损伤时凋亡的影响以及脑神康胶囊对损伤神经元的保护作用.方法 原代培养大鼠海马神经元,将细胞随机分成8组:对照组、高糖组、黄嘌呤(X)/黄嘌呤氧化酶(XO)组、川芎嗪组、生理盐水组、脑神康低、中、高剂量组.干预后测细胞存活率及凋亡率,采用Real-time PCR法检测各组海马神经元HIF-1α mRNA、Bcl-2 mRNA和Bax mRNA的表达及Bc-2/Bax比值.结果 与对照组相比,高糖组及X/XO组神经元存活率、Bcl-2 mRNA表达水平和Bcl-2/Bax的水平均显著下降,神经元凋亡率、HIF-1α mRNA和Bax mRNA表达水平均显著升高(均P<0.01);与X/XO组比较,川芎嗪组及脑神康各浓度组神经元存活率、Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2/Bax的水平均明显上升,而神经元凋亡率、HIF-1α mRNA和Bax mRNA表达均明显下降.结论 脑神康胶囊能够明显抑制高糖环境下大鼠海马神经元的凋亡,对高糖环境下海马神经元的乏氧损伤有保护作用,其作用机制之一是下调HIF-1α mRNA表达、上调Bcl-2 mRNA表达、改善乏氧环境及抗细胞凋亡.     

血糖波动对糖尿病大鼠肾脏氧化应激与凋亡的影响

目的 观察血糖波动对肾小管上皮细胞凋亡的影响及氧化应激的作用.方法 体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2),给予稳定高糖或波动高糖干预,四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞增殖.以SD大鼠建立链脲佐菌素糖尿病模型,并错时腹腔注射胰岛素及葡萄糖,造成血糖波动模型.12周后,测24h尿蛋白、血尿素氮、肌酐、超氧化物岐化酶(SOD)及丙二醛,免疫组化测肾组织NOX-4、Bcl2和Bax蛋白,TUNEL法测肾小管上皮细胞凋亡,观察超微结构改变.结果 与稳定高糖比较,波动高糖更加明显抑制体外肾小管上皮细胞增殖;与稳定高血糖比较,血糖波动大鼠血尿素氮、肌酐、24h尿蛋白、丙二醛升高而SOD下降[(21.50±1.72对12.50± 1.85)mmol/L,(97.51±7.84对82.12± 11.48)μmol/L,(1.57±0.09对1.04±0.12)mg/24 h,(23.50±1.87对14.82±2.96)nmoL/ml,(17.22± 1.12对21.11±1.80)U/ml,均P＜0.05],Bc12蛋白表达减少而Bax、NOX-4增加,凋亡细胞数增加,病理损伤加重.结论 与稳定高糖比较,波动高糖明显抑制肾小管上皮细胞增殖,加速肾小管上皮细胞凋亡,其机制可能与氧化应激水平增高有关.     

阿托伐他汀对血管紧张素Ⅱ诱导的人肠系膜动脉平滑肌细胞增殖和细胞内NADPH氧化酶-活性氧通路的影响

目的观察阿托伐他汀钙对血管紧张素Ⅱ的促人肠系膜动脉平滑肌细胞增殖和其诱导的平滑肌细胞内NADPH氧化酶-活性氧通路的干预作用。方法用组织贴块法培养的第2～4代人肠系膜动脉平滑肌细胞作为实验标本;以四甲基偶氮唑盐(MTF)法比色测定各组平滑肌细胞增殖率;流式细胞仪检测被双氢乙酰乙酸-二氯荧光黄(DCFH-DA)标记的细胞内活性氧;反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测细胞内p22phox蛋白mRNA的表达变化。结果 (1)与空白对照组比较,加入血管紧张素Ⅱ药物组的细胞增殖率、细胞内活性氧物质生成量、细胞内p22phox mRNA的表达均明显增高(P0.01)。(2)与浓度为10~(-6)mol/L血管紧张素Ⅱ孵育组比较,血管紧张素Ⅱ和阿托伐他汀钙共孵育组的细胞增殖率[阿托伐他汀组(0.242±0.018)比血管紧张素Ⅱ组(0.359±0.024),P0.01]、细胞内活性氧[阿托伐他汀组(130±29)比血管紧张素Ⅱ组(180±34),P0.01]、细胞内p22phox蛋白mRNA的表达[阿托伐他汀组(0.47±0.07)比血管紧张素Ⅱ组(0.71±0.05),P0.01]均降低。结论阿托伐他汀钙可以部分抑制血管紧张素Ⅱ的促人肠系膜动脉平滑肌细胞增殖和其诱导的细胞内NADPH氧化酶-活性氧通路的作用。     

1，25-二羟维生素D3对高糖环境下人肾小管上皮细胞维生素D受体及血管紧张素Ⅱ表达的影响

目的观察1,25-二羟维生素D,[1,25-（OH）2D3]对高糖状态下人近端肾小管上皮细胞（HK-2）维生素D受体（VDR）以及血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）表达的影响。方法体外培养HK-2细胞,实验分为对照组（糖浓度5．5mmol／L）、甘露醇组（19．5mmol／L）、高糖组（糖浓度25．0mmoL／L）、高糖＋1,25-（OH）,D,组（浓度1．0×10^-6、1．0×10^-7、1．0×10^-8mol／L）和高糖＋1,25-（OH）2D3＋siRNAVDR干扰组,实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测VDRmRNA表达,Westernblotting检测VDR蛋白表达,双荧光素酶报告基因系统检测VDR基因转录活性,放射免疫法检测AngⅡ含量。多个样本间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用g检验。结果与对照组相比,高糖组HK-2细胞中VDRmRNA、蛋白的表达及基因转录活性均明显降低（分别为1．34±0．22比2．47±0．31、0．51±0．06比1．14±0．13、0．51±0．21比1．42±0．28,均P〈0．05）。1,25-（OH）2D3上调高糖条件下HK-2细胞中VDRmRNA、蛋白的表达及基因转录活性,且呈浓度依赖性（分别为1．964-0．31比1．34±0．22、0．934-0．08比0．51±0．06、1．12±0．23比0．51±0．21,均P〈0．05）。与对照组相比,高糖使HK-2细胞分泌AngⅡ增加[（88±10）比（17±2）ng／L,P〈0．05]。1,25-（OH）2D3浓度依赖性下调高糖诱导的AngII高表达[（44±5）比（884-10）ng／L,P〈0．05]。利用RNA干扰诱导VDR基因沉默后,1,25-（OH）2D3不能下调高糖诱导的AngⅡ高表达[（87±12）比（88±10）ng／L,P〉0．05]。结论1,25-（OH）2D,可能通过VDR介导的方式负性调节高糖环境下人肾小管上皮细胞AnglI表达,从而对糖尿病肾脏疾病的进展起到延缓作用。     

高浓度尿酸对人近端肾小管上皮细胞氧化应激的影响

目的观察高浓度尿酸对人近端肾小管上皮细胞氧化应激的影响,探讨其可能的作用途径。方法体外培养人近端肾小管上皮HK-2细胞,以720μmol/L的尿酸干预0、12、24、48 h后收集细胞;DCHF-DA染色检测细胞内活性氧（ROS）含量,分光光度计检测细胞上清液中的丙二醛（MDA）、总超氧化物岐化酶（T-SOD）,MitoSOXTM染色观察活细胞线粒体中ROS的生成情况。结果尿酸干预12 h时细胞内总ROS含量较未干预时无明显变化,细胞上清中MDA含量、T-SOD活性亦较未干预时无明显差异（P均〉0.05）;干预24 h时总ROS含量有所升高,MDA含量上升,T-SOD活性降低,48 h时上述变化更为明显（P均〈0.05）;线粒体内ROS也在尿酸干预24 h时合成上调,48 h时升高更为显著（P〈0.05）。结论高浓度尿酸可诱导HK-2细胞氧化应激反应,线粒体ROS合成增多可能是其作用基础。     

顺铂对胃癌细胞Bax和Bcl-2表达的影响

目的通过研究顺铂对人胃癌BGC-823细胞Bax和Bcl-2的影响,探讨顺铂对人胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法用化疗药物顺铂以不同浓度、不同时间处理对数期生长的人胃癌BGC-823细胞,采用MTT法检测顺铂对BGC-823细胞增殖抑制率的影响,采用免疫印迹和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测Bax及Bcl-2蛋白和mRNA的表达。结果顺铂对人胃癌细胞BGC-823生长增殖具有明显抑制作用,其效应成浓度和时间依赖性（P〈0．05）。不同浓度的顺铂处理BGC-823细胞24小时后,Bax蛋白和mRNA水平成浓度依赖性增加（P〈0．05）,而Bcl-2蛋白和mRNA水平成浓度依赖性减少。结论经顺铂处理的人胃癌BGC一823细胞,不论是在转录水平还是在翻译水平均上调了Bax的表达,同时使Bcl-2表达下调,此途径可能为顺铂所诱导肿瘤细胞凋亡的机制之一。     

硼替佐米对胰腺癌细胞BxPC3、SW1990生长抑制作用的体外研究

目的 观察硼替佐米对胰腺癌细胞BxPC3、SW1990增殖、凋亡的影响,探讨硼替佐米杀伤癌细胞的可能机制.方法 应用1、10、50、100、500 nmol/L及1、10 μmol/L的硼替佐米干预BxPC3、SW1990细胞,以硼替佐米未干预的细胞作为对照组.采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;RT-PCR法检测Bak、Bax、Bcl-2、Bcl-xl、survivin mRNA表达;蛋白质印迹法检测pro-caspase-3、cleaved-caspase-3、Bax、Bcl-2、surviving蛋白表达.结果 大于50 nmol/L的硼替佐米干预胰腺癌BxPC3、SW1990细胞时,呈浓度及时间依赖性抑制细胞的增殖,其中硼替佐米对BxPC3细胞的生长抑制作用显著大于对SW1990细胞的作用,两者差异有统计学意义（P值均＜0.05）.100 nmol/L硼替佐米干预组BxPC3和SW1990细胞凋亡率分别为（22.56±4.23）％和（（12.71±2.23）％,显著高于对照组的（2.15±0.47）％和（2.32±0.54）％（P值均＜0.05）,且BxPC3细胞的凋亡率显著高于SW1990细胞（P＜0.05）.100 nmol/L硼替佐米干预48 h后BxPC3和SW1990细胞的Bak mRNA表达无显著变化,Bax mRNA及蛋白表达显著增加（P值均＜0.05）,Bcl-2 mRNA和蛋白表达及Bcl-xl mRNA表达均减少（P值均＜0.05）.survivin mRNA和蛋白表达在BxPC3细胞中均减少,而在SW1990细胞中均增加（P值均＜0.05）.2株细胞的pro-caspase-3蛋白表达减少,而cleaved-caspase-3蛋白表达增加（P值均＜0.05）.结论 硼替佐米可抑制胰腺癌细胞BxPC3、SW1990的增殖、诱导凋亡,对BxPC3细胞的作用高于对SW1990细胞,其机制可能与激活线粒体内源性凋亡途径及survivin参与的肿瘤耐药相关.     

60%氧暴露对早产鼠AECⅡ增殖的影响及CGRP的干预作用

目的探讨降钙素基因相关肽（CGRP）对60%氧暴露早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ）生长增殖的影响。方法原代分离培养孕19d早产鼠AECⅡ,随机分为4组：空气组、高氧组、高氧CGRP组、高氧CGRP拮抗剂组。空气组和高氧组分别在氧体积分数为21%的空气和60%的氧气中暴露24h;高氧CGRP组在暴露前加入CGRP,高氧CGRP拮抗剂组在暴露前同时加入CGRP和CGRP受体拮抗剂,再置于氧体积分数为60%的氧气中培养24h。采用MTT比色法和流式细胞术测定细胞增殖能力和细胞周期,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫荧光技术测定表面活性蛋白C（SPC）的mRNA及蛋白表达。结果与空气组比较,高氧组细胞存活率下降,G0/G1期细胞比例增高,G2/M及S期细胞比例降低,SPC mRNA及SPC蛋白表达低下（P均〈0.01）。而CGRP干预可促进高氧暴露AECⅡ的增殖能力,使S及G2/M期细胞增多,并提高AECⅡ的SPC mRNA及SPC蛋白表达水平。结论60%氧暴露24h可抑制早产鼠AECⅡ增殖,而CGRP可促进AECⅡ增殖,部分解除高氧对AECⅡ的抑制作用。     

BMP-7对油酸诱导肾小管上皮细胞转分化的影响

目的观察骨形态发生蛋白（BMP）-7对油酸（OA）诱导的人肾小管上皮细胞转分化的拮抗作用。方法应用体外细胞培养技术培养人肾小管上皮细胞株HK-2。分别用不同浓度BMP-7（0、1、5、10、50ng／ml）和一定浓度的OA（400μmol／L）共刺激体外培养的HK-2 48h,收集细胞,采用ELISA法和RT-PCR法检测转化生长因子（TGF）-β1蛋白、mRNA的水平和表达变化,采用RT-PCR法检测α-平滑肌动蛋白（SMA）mRNA的表达变化。结果BMP-7可以显著减少OA诱导的HK-2中TGF-β1和α—SMA mRNA的表达（P〈0．01）。结论BMP-7可以拮抗OA诱导的肾小管上皮细胞转分化。     

银杏叶提取物对窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞损伤的影响

目的研究银杏叶提取物（EGb）对新生儿窒息后血清攻击人近曲肾小管上皮细胞（HK-2）损伤模型的影响。方法以人近曲肾小管上皮细胞（HK-2）为研究对象,200ml／L窒息血清作为攻击因素。实验共分为两阶段,均设对照组、模型组和EGb干预组（EGb预处理24h）。第一阶段EGb干预组设立5个质量浓度亚组。观察三组细胞形态学,乳酸脱氢酶（LDH）漏出率和细胞存活（MTT法）变化。第二阶段以第一阶段选出的EGb最适质量浓度预处理细胞,观察三组NF-κB p65蛋白（免疫组化）和抑制亚基I-κBα（western blot）的变化。结果与对照组相比,模型组细胞形态发生改变,LDH漏出率增加,细胞活力降低（P〈0．05）;与模型组比较,EGb预处理组细胞形态明显得到改善,LDH漏出率降低,细胞活力增加（P〈0．05）,在5—50mg／L保护效应逐渐增加,50mg／L时保护效果最强,而〉50mg／L时保护效应反而下降。与对照组相比,模型组细胞NF-κB p65蛋白表达明显增加,I-κBα量减少（P〈0．05）;与模型组比较,EGb干预组细胞NF-κB p65蛋白表达明显减少,I-κBα量增加（P〈0．05）。结论EGb具有减轻窒息血清所致HK-2细胞损伤的作用,其作用可能与抑制窒息血清所致NF—κB激活有关。     

4′,5,7-三羟基异黄酮抗骨髓瘤细胞增殖机制的研究

目的：为了研究4′,5,7-三羟基异黄酮（genistein,Gen）是否能抑制人多发性骨髓瘤（multipule myeloma,MM）细胞株XG1的增殖,研究Gen处理骨髓瘤细胞后B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（bcl-2）、bcl-xl、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、细胞间黏附因子1（ICMA-1）基因表达变化及骨髓瘤细胞中核转录因子κB（NF-κB）表达的变化。方法：利用体外培养人MM细胞株XG1,依据剂量梯度分别给予Gen,用噻唑蓝染色法（MTT）观察不同药物浓度的Gen对MM细胞的增殖影响;5、10、15μg/mLGen与溶剂对照组分别作用XG1细胞48h后,半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测XG1细胞bcl-2、bcl-xl、细胞周期蛋白D1、ICMA-1基因表达;应用5μg/mLGen处理XG1细胞,用免疫组织化学法观察Gen处理前后细胞内NF-κB的表达情况。结果：Gen作用XG1细胞48h,随浓度增加,细胞增殖逐渐下降;5、10、15μg/mLGen处理组mRNA的表达均低于溶剂对照组（P〈0.05）,伴随Gen处理浓度逐渐增加,bcl-2、bcl-xl、细胞周期蛋白D1、ICMA-1基因mRNA的表达逐渐下降;Gen能够使NF-κB在XG1细胞内重新分布,胞浆内出现NF-κB表达,胞核内NF-κB表达下降。结论：Gen可能通过下调骨髓瘤细胞核中NF-κB的表达来抑制bcl-2、bcl-xl、细胞周期蛋白D1、ICMA-1基因mRNA的表达,进而抑制骨髓瘤细胞的增殖、黏附、转移。