CD147在唾液腺腺样囊性癌中的表达及临床意义

目的：研究CD147在唾液腺腺样囊性癌（adenoid cystic carcinoma,ACC）中的表达及与腺样囊性癌临床病理特征、患者预后的关系。方法：采用免疫组化Envision^TM法检测72例唾液腺腺样囊性癌组织和20例正常唾液腺组织CD147的表达,应用SPSS16．0软件包对实验数据进行统计学分析。结果：CD147在腺样囊性癌中表达阳性率为62．5％,显著高于正常唾液腺组（25．0％）,P〈0．01。CD147表达与腺样囊性癌大小、病理分型、临床分期、神经侵袭、血管侵袭及肿瘤转移显著相关（P〈0．05）,与患者性别、年龄及肿瘤复发无显著性相关忪0．05）。单因素分析显示．CD147表达强阳性组累积生存率显著低于弱阳性及阴性表达组（P〈0.0001）。多因素分析显示,CD147表达及肿瘤病理分型、血管侵袭、肿瘤转移是影响腺样囊性癌患者总生存期的独立预后因素（P〈0．05）。结论：CD147的表达与腺样囊性癌临床病理特征密切相关,对腺样囊性癌诊断和预后评估有重要参考价值。     

酸敏感离子通道在唾液腺腺样囊性癌中的表达

目的：检测酸敏感离子通道（acid—sensing ion channels，ASICs）在唾液腺腺样囊性癌（ACC）中的表达情况，并探讨ASICs与ACC侵袭转移的关系。方法：采用免疫印迹和免疫组织化学方法，检测ASICs在培养的ACC-2细胞及腺样囊性癌组织中的表达。采用方差分析，利用OfiginPro7．0软件进行统计学分析。结果：ACC-2细胞和腺样囊性癌组织中有ASICs蛋白的表达．而在正常组织中未见ASIC2a的表达；ASICs蛋白表达量经灰度值分析，正常腮腺组织为0．00012±0．00044，多形性腺瘤组织为0．00023±0．00049，腺样囊性癌组织为0．57±0．00045，差异有显著性意义，P〈0．001。结论：腺样囊性癌中ASICs表达增多，可能是腺样囊性癌侵袭转移的组织病理学基础。     

GDNF对唾液腺腺样囊性癌嗜神经侵袭中基质降解和黏附能力的影响

目的:探讨GDNF对唾液腺腺样囊性癌(adenoma cystic carcinoma,ACC)嗜神经侵袭(perineural invasion,PNI)中基质降解和黏附能力变化的影响.方法:应用免疫组织化学染色SP法对42例ACC和5例正常唾液腺组织中GDNF、MMP-9、NF-κB、整合素β1的表达进行检测.采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析.结果:GDNF在ACC肿瘤细胞的细胞质和肿瘤周围的神经纤维中呈阳性表达.NF-κB、MMP-9、整合素β1在ACC肿瘤细胞的细胞质均呈阳性表达,且可见NF-κB表达于细胞核,整合素β1表达于细胞膜,阳性表达率分别为69.05％(29/42)、66.67％(28/42)和61.90％(26/42).NF-κB、MMP-9、整合素β1的表达在PNI组和非PNI组间差异显著,P值分别为0.005、0.011、0.001.GDNF与NF-κB、MMP-9、整合素β1表达呈正相关,r=0.443,P=0.003;r=0.401,P=0.009;r=0.535,P=0.000.MMP-9、整合素β1与NF-κB表达呈正相关,r=0.501,P=0.001;r=0.429,P=0.005.MMP-9的表达与整合素β1表达呈正相关,r=0.381,P=0.013.结论:GDNF在ACC嗜神经侵袭中促进基质降解和黏附能力改变.NF-κB、MMP-9、整合素β1的表达与GDNF关系密切,共同促使ACC神经侵袭的发生与进展.     

口腔癌中骨桥蛋白及相关因子的表达

目的探讨骨桥蛋白（OPN）相关基因在口腔癌侵袭转移中的作用。方法采用免疫组织化学SP法,检测OPN、核因子-κB p65（NF-κB p65）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在58例口腔癌和10例正常口腔粘膜中的表达。结果在10例正常口腔粘膜组织中,OPN、NF-κB p65和MMP-9均无阳性表达。在32例无颈淋巴结转移的口腔癌组中OPN、NF-κB p65和MMP-9的表达率依次为40.6%、34.4%和37.5%,在26例伴有颈淋巴结转移的口腔癌组中其阳性率依次为69.2%、65.4%和84.6%,其阳性表达率在有转移的口腔癌组中高于无转移的口腔癌组,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）,而与患者性别、年龄、肿瘤大小、组织学分级均无相关性（P〉0.05）。OPN和NF-κB p65的表达与NF-κB p65和MMP-9的表达均呈正相关（r1=0.57,r2=0.52,P〈0.05）。结论 OPN可能通过活化NF-κB,上调转移相关分子MMP-9的表达,从而促进口腔癌细胞的侵袭转移。     

NDRG2对唾液腺腺样囊性癌增殖、侵袭的影响

目的:探讨NDRG2基因在唾液腺腺样囊性癌组织中的表达及其对SACC-LM细胞增殖、侵袭的影响。方法:采用蛋白质免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析唾液腺腺样囊性癌组织及癌旁组织样本中NDRG2的表达,采用RNA干扰技术降低腺样囊性癌细胞SACC-LM中NDRG2基因的表达,利用CCK-8实验及集落形成实验检测细胞增殖能力的变化,利用划痕实验及Transwell实验分别检测细胞迁移及侵袭能力的变化,利用Western 免疫印迹实验检测侵袭标志蛋白以及上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白的表达。采用SPSS 17.0软件包进行数据处理。结果:NDRG2基因在唾液腺腺样囊性癌组织中的表达低于癌旁组织（P=0.017）。在降低NDRG2基因的表达后,SACC-LM细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著增强（P<0.05）,侵袭标志蛋白MMP2表达量显著升高（P=0.0004）,上皮标志物E-Caherin表达量显著降低（P=0.0229）,间充质标志物N-Cadherin表达量显著升高（P=0.0009）。结论:NDRG2基因在腺样囊性癌中低表达,降低NDRG2的表达可增强SACC-LM的增殖、迁移及侵袭能力。     

血管内皮生长因子和微血管密度在唾液腺腺样囊性癌中的表达

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）和微血管密度（MVD）在腺样囊性癌（ACC）中表达的相关性及两者与腺样囊性癌的临床病理类型的关系。方法应用免疫组织化学方法．检测35例唾液腺腺样囊性癌、13例多形性腺瘤和10例正常唾液腺组织中VEGF的表达和微血管密度与形态。结果VEGF的阳性表达率和MVD计数在正常唾液腺组织、多形性腺瘤、ACC中依次增加,组间差异具有统计学意义（P〈0．05）;ACC中MVD计数随着VEGF表达的增强而升高（P〈0．05）;ACC中VEGF的阳性表达率和MVD计数依次增加．转移组高于非转移组．神经侵犯组高于非侵犯组（JD〈0．05）;微血管形态在正常唾液腺组织、多形性腺瘤以窦状扩张型为主,ACC中多表现为芽状和细索状及球状血管丛。结论VEGF的表达和微血管密度形态与ACC的临床类型密切相关。     

NGF及其受体Trk-A与唾液腺腺样囊性癌相关性研究

目的:通过检测神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及其受体Trk-A在唾液腺腺样囊性癌(adenoid cysticcarcinoma,ACC)中的表达,研究NGF及其受体Trk-A在腺样囊性癌嗜神经性侵袭中的相互关系。方法:采用Envision免疫组织化学二步法,完成病理切片,作半定量病理分析。结果:NGF及其受体Trk-A在腺样囊性癌不同病理类型中阳性表达率有高度统计学差异(P≤0.01),在神经侵袭组明显高于无侵袭组,但在腺样囊性癌对周围组织的浸润和转移方面没有统计学差异(P>0.05)。结论:NGF与其受体Trk-A可能对腺样囊性癌分化起调节功能,二者相互作用可能是ACC强浸润性的生物学机制。     

莱菔硫烷与5-氟尿嘧啶对人涎腺腺样囊性癌细胞生长的协同作用研究

目的:研究莱菔硫烷(SFN)与5-氟尿嘧啶(5-FU)对人涎腺腺样囊性癌细胞(ACC-2)生长的抑制作用,并初步探讨其与细胞核核因子κB p65(NF-κB p65)表达的关系.方法:应用中位效应原理和联合作用指数法来评价药物的联合作用;应用Western 印迹法分析NF-κB p65的表达.结果:SFN和5-FU半数生长抑制率(IC50)分别为56.73 ±6.59 μmol/L和89.88±7.56 μmol/L,联合使用时对ACC-2细胞生长具有协同抑制作用,同时可观察到细胞核NF-κB p65表达显著下降.结论:SFN可以增强5-FU的化学治疗效果,二者联合使用的协同抑癌作用对于涎腺腺样囊性癌的临床治疗可能具有实际意义.     

Livin、caspase-3在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义

目的：探讨凋亡蛋白抑制因子livin和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶caspase-3在人唾液腺腺样囊性癌组织中的表达和意义,并分析livin与caspase-3介导的细胞凋亡的关系。方法：利用免疫组织化学SP法检测livin与caspase-3在35例唾液腺腺样囊性癌组织和10例正常唾液腺组织中的表达情况。采用HMIAS-2000高清晰度彩色医学图文分析系统测定其平均光密度值。应用SPSS11.5软件包对结果进行统计学分析。结果：Livin在腺样囊性癌中的表达显著高于正常唾液腺组织,而caspase-3在正常唾液腺组织的表达显著高于腺样囊性癌（P〈0.01）;其表达与肿瘤的病理学类型、临床分期和转移显著相关（P〈0.05）,与患者的性别、发病年龄、肿瘤的部位和大小无关（P〈0.05）;Livin和caspase-3在腺样囊性癌中的表达呈显著负相关。结论：Livin和caspase-3的异常表达,可能在唾液腺腺样囊性癌的发生、发展及转移中发挥重要作用。     

NF-κB信号通路在放射线诱导的腺样囊性癌细胞凋亡中的实验研究

目的:探讨NF-κB信号转导通路在放射线诱导的人唾液腺腺样囊性癌(ACC)-2细胞凋亡中的变化规律。方法:采用脂质体2000将pBabe-SR-IκBa质粒瞬时转染入ACC-2细胞,Western blot法检测转染后IκBa蛋白表达的变化,将转染后的ACC-2细胞进行6种剂量(0、2、4、6、8、10 Gy)的高能X线照射,在照射后不同时间点(1、3、6、10、24、48 h)应用免疫细胞化学检测ACC-2细胞NF-κB p65的表达情况,应用Image Pro-Plus图像分析软件测其细胞核平均灰度值,并用SPSS 16.0软件对数据进行方差分析。结果:与转染pBabe空白质粒组和未转染质粒组比较,转染pBabe-SR-IκBa质粒ACC-2细胞不仅表达内源性IκBa,同时也表达SR-IκBa;接受相同放射线剂量照射后3 h细胞核平均灰度值升高(P<0.05)。SR-IκBa质粒组中,不同剂量组的细胞核平均灰度值均低于0 Gy组;约在接受照射后6～10 h,细胞核平均灰度值达到最低值;相同时间点上,3 h组细胞细胞核平均灰度值随放射剂量增加而降低(P<0.05)。结论:转染突变的IκBa基因可特异性抑制NF-κB信号通路,经放射线照射诱导凋亡后,NF-κB p65蛋白的表达量具有一定的时间-剂量效应规律。     

细胞外基质金属蛋白酶诱导因子表达与唾液腺肿瘤侵袭性的关系

目的:检测唾液腺肿瘤组织中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)的表达和定位,探讨其与唾液腺肿瘤侵袭性生物学行为的关系。方法:采用免疫组织化学方法,检测9例唾液腺正常组织、28例多形性腺瘤(PA)、25例黏液表皮样癌(MC)、33例腺样囊性癌(ACC)中EMMPRIN的表达和定位。采用SPSS10.0软件包进行多个样本率间的χ2检验或确切概率分析。结果:EMMPRIN在正常唾液腺组织、多形性腺瘤、黏液表皮样癌、腺样囊性癌的表达阳性率分别为11.11%、53.71%、84.00%和90.91%(P<0.05)。在正常唾液腺组织的表达主要见于导管上皮细胞的细胞膜;EMMPRIN蛋白在多形性腺瘤、黏液表皮样癌、腺样囊性癌的表达见于肿瘤细胞的胞膜或胞质。腺样囊性癌嗜神经现象组中,EMMPRIN表达的阳性率高于无嗜神经现象组,但差异无统计学意义。结论:EMMPRIN的表达与唾液腺肿瘤侵袭性生物学行为密切相关。     

趋化因子受体5在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义

目的探讨趋化因子受体5(CCR5)在唾液腺腺样囊性癌的表达及其与临床病理分型和嗜神经性的关系。方法运用免疫组织化学的方法(SP法)检测CCR5在人唾液腺腺样囊性癌标本及正常唾液腺标本中的表达。结果 CCR5在唾液腺腺样囊性癌标本中的阳性表达率为93.8%(30/32),与在正常唾液腺组织的表达有显著性差异(P<0.05)。CCR5在唾液腺腺样囊性癌不同的临床病理分型中的表达差异无统计学意义(P>0.05)。在30例阳性表达的腺样囊性癌标本中,可见嗜神经现象组与未见嗜神经现象组中CCR5的表达有统计学差异(P<0.05)。结论 CCR5可能与唾液腺腺样囊性癌的发生相关,其表达水平与腺样囊性癌的临床病理类型无相关性,与侵袭神经有相关性。     

Survivin在腺样囊性癌细胞ACC-2以及ACC-M中的表达

目的：探讨Survivin在腺样囊性癌（ACC）细胞系中的表达情况及其表达与ACC远处转移的相关性。方法：培养人涎腺腺样囊性癌（ACC-2）和肺转移腺样囊性癌（ACC-M）细胞,观察其形态学特征,采用MTr法检测细胞的生长活性,并采用SP法检测细胞中Survivin的表达。结果：ACC-2和ACC-M细胞均表现有明显的上皮样和腺样细胞的特征。ACC-M细胞的生长活性高于ACC-2细胞,且Survivin在ACC-M细胞中的表达也强于ACC-2细胞。结论：Survivin与涎腺ACC肺部转移的发生具有高度相关性。     

许旺细胞标记物GFAP与肌上皮细胞标记物α-SMA在涎腺腺样囊性癌中共表达

目的 检测许旺细胞标记物胶原原纤维酸性蛋白（GFAP）与肌上皮细胞标记物α-平滑肌肌动蛋白（d-SMA）在涎腺腺样囊性癌（ACC）中的表达情况，并探讨GFAP、α-SMA与ACC嗜神经侵袭的关系。方法 用免疫组织化学、免疫荧光双标记及激光共聚焦显微镜技术检测GFAP蛋白与α-SMA蛋白在ACC组织中的表达。结果 在ACC组织中，GFAP蛋白与α-SMA蛋白均有表达，二者在同一肿瘤性肌上皮样细胞胞质中共表达。结论 ACC中肿瘤性肌上皮样细胞发生许旺细胞分化并侵袭神经可能是ACC嗜神经侵袭的组织病理学基础。     

纤维粘连蛋白对人涎腺腺样囊性癌细胞株侵袭和转移的影响

为了研究纤维粘连蛋白（FN）与人涎腺腺样囊性癌（Acc）转移的关系，本研究应用免疫组织化学染色，Boyden小室体外移动试验和体外粘附试验，对人涎腺腺样囊性癌细胞系ACC—2和从其克隆出的高转移细胞株ACC—M细胞进行比较研究。结果发现FN在ACC—M表达明显高于ACC—2。在加入外源性FN后，ACC—2体外移动性、粘附率均明显提高，已接近ACC—M，而ACC—M无明显变化。结果表明FN在Acc侵袭和转移中起重要的调节作用。     

GFAP与α-SMA在涎腺腺样囊性癌中共表达的免疫电镜研究

目的：研究雪旺氏细胞标志物胶原原纤维酸性蛋白（GFAP）和肌上皮细胞标记物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在涎腺腺样囊性癌（ACC）中的共表达情况,探讨GFAP、α-SMA与ACC嗜神经侵袭的关系。方法：利用双重胶体金标记的免疫电镜技术从超微结构水平研究GFAP和α-SMA在腺样囊性癌中的共表达。结果：在ACC组织中,GFAP蛋白与α-SMA蛋白均有表达,GFAP和α-SMA共表达的细胞符合肌上皮细胞的超微结构特点。结论：ACC中肿瘤性肌上皮细胞样发生雪旺氏细胞分化可能是ACC嗜神经侵袭的组织病理学基础。     

Dermo-1在涎腺腺样囊性癌中的表达及其临床意义

目的探讨转录因子Dermo-1在涎腺腺样囊性癌中的表达水平及其与各临床病理因素的关系。方法采用免疫组化方法检测40例涎腺腺样囊性癌组织中Dermo-1蛋白的表达情况,分析Dermo-1表达与腺样囊性癌临床病理因素的关系,以20例正常涎腺组织作对照。结果 Dermo-1在涎腺腺样囊性癌组织中的表达水平明显高于正常涎腺组织（P〈0.05）。Dermo-1表达与腺样囊性癌的病理分型、嗜神经侵袭、术后复发及远位转移有关（P〈0.05）。结论 Dermo-1蛋白表达可能与涎腺腺样囊性癌的分化调节、嗜神经侵袭及远位转移有关系,检测Dermo-1的表达水平对判断腺样囊性癌患者的预后有一定的参考价值。     

沉默法尼基转移酶对人涎腺腺样囊性癌细胞迁移、侵袭及上皮间充质转化的作用

目的　通过体外实验探讨法尼基转移酶（FTase）对涎腺腺样囊性癌SACC-LM和SACC-83细胞迁移侵袭及上皮间充质转化（EMT）的作用及其机制。方法　针对人FTase基因序列设计构建3条小干扰RNA（si-RNA）,采用处于对数生长期的SACC-LM及SACC-83细胞,经脂质体瞬时转染技术抑制细胞FTase表达,分别命名为FTase-siRNA-1组、FTase-siRNA-2组、FTase-siRNA-3组,同时设置阴性对照组（NC-siRNA）,空白对照组（仅加入转染试剂）。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测FTase、HRAS的mRNA表达,选择沉默效率最高的FTase-siRNA进行后续实验;蛋白质免疫印迹法检测FTase、HRAS、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化AKT、p65、磷酸化p65（Ser563）、上皮钙依赖黏附蛋白、波形蛋白、基质金属蛋白酶9（MMP-9）的蛋白表达以及HRAS膜蛋白表达;Transwell小室及细胞划痕实验检测细胞的侵袭和迁移能力。结果　与空白对照组及阴性对照组相比,FTase-siRNA-1组mRNA及蛋白相对表达量均降低（P<0.05）,HRAS mRNA和总蛋白表达的差异无统计学意义（P>0.05）,HRAS膜蛋白相对表达量降低（P<0.05）,上皮钙依赖黏附蛋白相对表达量升高（P<0.05）,波形蛋白相对表达量降低（P<0.05）,MMP-9蛋白相对表达量降低（P<0.05）,RAS/PI3K/AKT/核因子-κB信号通路相关蛋白AKT、p65相对表达量的差异无统计学意义（P>0.05）,但磷酸化AKT、磷酸化p65蛋白相对表达量降低;与空白及阴性对照组相比,FTase-siRNA-1组细胞侵袭及迁移能力显著下降（P<0.05）。结论　体外沉默FTase可有效抑制人涎腺腺样囊性癌细胞SACC-LM和SACC-83的侵袭、迁移能力,其作用可能是通过干扰HRAS膜蛋白的定位,调控RAS/PI3K/AKT/核因子-κB信号通路,介导EMT而实现。     

XAGE-1b基因在唾液腺腺样囊性癌转移中的作用

目的：探讨肿瘤睾丸抗原家族中XAGE—1b基因在唾液腺腺样囊性癌高转移细胞ACC—M中的高表达是否与其转移相关。方法：采用RNA干扰方法抑制腺样囊性癌低、高转移细胞ACC-2、ACC—M中XAGE—1b基因的表达，检测该基因表达改变对肿瘤细胞体外迁移能力以及裸鼠体内肿瘤细胞肺转移能力的影响。实验结果采用SPSS11．5软件包进行单因素方差分析。结果：XAGE—1b基因干扰质粒转染腺样囊性癌细胞后，RT—PCR验证干扰效率显示．XAGE—1b基因表达量显著下降；Boyden小室检测肿瘤细胞体外迁移能力明显下降；在裸鼠体内检测基因干扰后的肿瘤细胞肺转移能力与ACC—M相比也显著下降（P〈0．01）。结论：RNA干扰作用抑制了XAGE—1b基因的表达，体外实验和体内检测中显著影响了肿瘤细胞的迁移黏附以及肺转移能力，初步证实了XAGE—1b基因在唾液腺腺样囊性癌转移方面有重要作用。