白塞病患者外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子与其临床特征关系分析

目的检测白塞病(Behcet’’s disease, BD)患者外周血T细胞亚群及细胞因子水平, 并分析BD患者不同临床特征对外周血T细胞亚群及细胞因子水平的影响。方法选取2018年1月至2021年12月在济宁医学院附属医院诊治的BD患者80例作为病例组, 另选取本院健康体检中心40例健康志愿者作为对照组。采用流式细胞术检测外周血辅助性T细胞(helper T cell, Th)1、Th17、调节性T细胞(regulatory T cell, Treg)亚群表达。酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)法测定血清细胞因子干扰素-γ(interferon-γ, IFN-γ)、白细胞介素(interleukin, IL)-4、IL-10、IL-17、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)水平。结果与对照组相比, BD患者总T淋巴亚群、CD8+T及Th1细胞表达水平均显著升高, 差异有统计学意义{%:[68.75(54.23, 80.32)]比[72.10(62.23, 86.45...     

类风湿性关节炎患者外周血Th1/Th2细胞因子与继发骨质疏松症的关系研究

目的探讨类风湿性关节炎患者外周血辅助性T细胞(helper T cell, Th)1/Th2细胞因子与继发骨质疏松症的关系。方法选取2018年9月至2020年8月在北京市石景山医院接受诊治的96例类风湿性关节炎患者作为研究组, 根据患者骨密度降低程度将其分为骨质疏松症继发组(60例)和未继发组(36例), 另外招募同期84例健康志愿者作为对照组。两组均采用酶联免疫吸附试验法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)测定外周血Th1/Th2相关细胞因子干扰素-γ(interferon-γ, INF-γ)、白细胞介素(interleukin, IL)-4水平, 应用双能X线骨密度检查仪检查骨密度。分别对比分析研究组与对照组、继发组与未继发组的INF-γ、IL-4水平及INF-γ/IL-4, 腰椎L1-L4、髋部骨密度表达情况。采用Pearson相关分析研究组外周血Th1/Th2类细胞因子水平与骨密度的相关性;采用Logistic多元回归分析类风湿性关节炎外周血Th1/Th2细胞因子与继发骨质疏松症的关系。结果研究组的外周血INF-γ水平、INF-γ...     

老年抑郁症伴焦虑患者外周血中Th17细胞与细胞因子的改变

探讨老年抑郁症伴焦虑患者(≥60岁)外周血中Th17细胞发挥的作用。选取28例老年抑郁症伴焦虑患者为实验组,另选取老年健康体检者(≥60岁)28例为对照组。采用流式细胞术检测两组人群外周血中CD3~+、CD4~+ T淋巴细胞亚群及Th17细胞(CD4~+IL-17~+)的比例,ELISA检测患者血清中IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-17含量,实时定量PCR检测外周血淋巴细胞中核转录因子IL-17、RORγt表达水平。老年抑郁症伴焦虑患者外周血CD3~+、CD4~+ T淋巴细胞百分率低于对照组(P均0.01),Th17细胞表达比例为(2.05±0.47)%,明显高于对照组(0.69±0.25)%,差异有统计学意义(P0.01);IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-17在老年抑郁症伴焦虑患者组的浓度均高于对照组,差异有统计学意义(均为P0.01),老年抑郁症伴焦虑患者外周血淋巴细胞中IL-17、RORγt基因表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(均为P0.01)。Thl7细胞与老年抑郁症伴焦虑具有相关性,可能通过分泌以IL-17为主的细胞因子造成患者机体免疫功能紊乱,参与老年抑郁症伴焦虑病情发展。     

癫痫患者血清IL-2、IL-6、TNF-α含量和外周血B细胞及T淋巴细胞亚群水平

目的：探讨癫痫患者血清IL-2、IL-6、TNF-α含最和外周血B细胞及T淋巴细胞亚群的水平。方法：分别应用放射免疫分析和单克隆抗体技术对31例癫痫患者进行了血清IL-2、IL-6、TNF-α含量及外周血B细胞及T淋巴细胞亚群水平的测定，并与35例正常人作比较。结果：癫痫患者IL-2、IL-6、 、B细胞水平显著地高于正常人组（P〈0．01），而IL-2、CD3、CD4、CD4／CD8显著地低于正常人组（P〈0．01）。结论：癫痫病是一种自身免疫调节异常的疾病。     

脂多糖诱导小鼠内皮损伤早期T细胞亚群的变化

目的:探讨脂多糖(LPS)诱导内皮损伤早期T细胞亚群的变化。方法:采用扫描电镜观察LPS刺激后内膜的形态学变化,流式细胞术检测外周血中内皮细胞表型CD62P+、CD62P+CD62E+改变,采用胞内外因子染色法检测T细胞亚群的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素17(IL-17)及白细胞介素10(IL-10)的分泌状态。结果:LPS可导致小鼠血管内皮完整性受损,脱落内皮细胞CD62P+、CD62P+CD62E+比例明显高于对照组(P<0.05);内皮损伤的同时,小鼠CD3+CD4+T细胞中,TNF-α、IFN-γ、IL-17分泌细胞比例显著增加(P<0.05),而IL-10的分泌在LPS刺激1小时、4小时时升高较为明显(P<0.05)。结论:炎性CD4+T细胞亚群与脱落内皮细胞CD62P、CD62E的高表达状态是血管内膜损伤早期的重要特征性标志。     

IL-12有助于化疗药物处理后肿瘤患者及小鼠的细胞免疫功能重建

目的探讨白细胞介素12(IL-12)是否能够恢复化疗药物对肿瘤患者和小鼠细胞的免疫抑制作用。方法分离顺铂化疗前后肿瘤患者及正常人外周血单个核细胞(PBMC),在抗CD3抗体和抗CD28抗体共刺激条件下,加或不加IL-12。培养后,ELISA检测上清中γ干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,流式细胞术检测不同亚群T细胞IFN-γ的水平。建立顺铂毒性小鼠模型,采用以上方法检测IFN-γ、TNF-α水平。结果肿瘤患者产生的IFN-γ和TNF-α显著低于正常人;与化疗前患者相比,化疗后患者IFN-γ和TNF-α的产生明显减少,IL-12可以显著增强IFN-γ和TNF-α的产生;T细胞亚群分析的结果表明,IL-12可以恢复化疗后CD4~+T细胞和CD8~+T细胞中IFN-γ的水平。小鼠体内实验证明,化疗药物抑制小鼠T细胞的免疫功能,IL-12能完全恢复T细胞免疫功能。结论化疗药物抑制肿瘤患者和小鼠细胞的免疫应答,而IL-12能够恢复化疗药物对细胞因子的抑制作用,从而对肿瘤化疗患者重建免疫功能起到非常重要的作用。     

结核胸液中ESAT-6多肽特异性多功能CD4+T细胞数量及功能分析

目的:检测ESAT-6多肽刺激后,结核性胸膜炎患者胸液细胞中CD4+T细胞细胞因子产生及多功能CD4+T细胞频率,了解ESAT-6特异性CD4+T细胞在结核局部细胞免疫应答中的作用.方法:分离结核性胸膜炎患者胸液细胞(PFCs),ESAT-6混合多肽刺激后检测CD4+T细胞细胞因子分泌、细胞亚群、多功能性CD4+T细胞频率及细胞因子平均荧光强度.结果:BCG、ESAT-6混合多肽和ESAT-6组蛋白刺激PFCs后,主要是CD4+T细胞分泌Th1细胞因子(IFN-γ、IL-2和TNF-α),而CD8+T细胞几乎不产生细胞因子.进一步分析ESAT-6混合多肽刺激PFCs后Th1细胞的亚群组成,依据细胞因子分泌的类型及数量,该特异性Th1细胞可以分为7个不同亚群,且各亚群所占比例不同,其中多功能性T细胞亚群(同时分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α)比例较高.细胞因子荧光强度分析表明,依据细胞因子分泌类型的增加,单个细胞水平上不同Th1亚群中各细胞因子表达的量也逐渐增加,即3+>2+>1+细胞.结论:ESAT-6混合多肽刺激结核性胸膜炎患者胸液细胞后,主要诱导CD4+T细胞分泌细胞因子,且Th1亚群中包含多功能性CD4+T细胞,该细胞在单细胞水平上分泌细胞因子的类型和数量也显著高于其他亚群.可能在结核局部感染中发挥关键保护性作用.     

巨细胞病毒感染患儿细胞免疫应答反应及临床意义

目的:探讨巨细胞病毒(CMV)感染患儿细胞免疫应答反应及临床意义。方法:选择2015年6月至2019年5月在本院确诊的97例CMV感染患儿,根据其有无临床症状分为症状组和无症状组,选择同期健康体检婴儿48例为对照组。采用RT-PCR反应检测所有患儿尿液标本中CMV DNA载量;采用ELISA法检测所有纳入研究对象IL-6、IL-10、TNF-α水平,流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群;采用Pearson相关性分析外周血T淋巴细胞亚群与IL-6、IL-10、TNF-α水平和CMV DNA载量之间的相关性。结果:与对照组相比,CMV感染患儿有症状组和无症状组外周血CD3+T、CD3+CD4+T和CD4+/CD8+细胞水平均明显降低(P<0.05),血清IL-6、IL-10和TNF-α水平明显升高(P<0.05),有症状组外周血CD3+CD8+T细胞水平明显升高(P<0.05);与无症状组相比,CMV感染患儿有症状组患儿尿液中CMV DNA载量明显升高(P<0.05),外周血CD3+T、CD3+CD4+T和CD4+/CD8+水平均明显降低(P<0.05),IL-6、IL-10和TNF-α、CD3+CD8+T水平均明显升高(P<0.05);Pearson相关性分析显示,CMV感染患儿外周血CD3+T、CD3+CD4+T和CD4+/CD8+细胞水平均与CMV DNA载量、IL-6、IL-10和TNF-α水平呈显著的负相关(P<0.05),CD3+CD8+T细胞水平均与CMV DNA载量、IL-6、IL-10和TNF-α水平呈显著的正相关(P<0.05)。结论:CMV感染患儿的外周血CD3+T、CD3+CD4+T和CD4+/CD8+水平明显下降,且其下降水平与CMV DNA病毒载量显著相关。     

白癜风患者治疗前后血清IL-2、SIL-2R、TNF-α和外周血B细胞及T淋巴细胞亚群检测的临床意义

目的:探讨白癜风患者治疗前后血清IL-2、SIL-2R、TNF-α和外周血B细胞T淋巴细胞亚群水平及临床意义.方法:分别应用放免法、ELISA法和单克隆抗体法检测40例白癜风患者治疗前后血清IL-2、SIL-2R、TNF-α和外周血B细胞、T淋巴细胞亚群水平,并与35名正常健康人作比较.结果:白癜风在治疗前血清SIL-2R、TNF-α和外周血B细胞水平均非常显著地高于正常人组(P＜0.01),而IL-2、CD3、CD4、CD4/CD8比值则显著的低于正常人组(P＜0.01),经治疗后6个月,与正常人比较仍有显著性差异(P＜0.05).结论:白癜风患者存在自身免疫调节异常.     

IL-17、CD11a对再生障碍性贫血免疫抑制疗效的预测价值

目的 研究白细胞介素17(IL-17)、黏附分子(CD11a)对再生障碍性贫血免疫抑制疗效的预测价值。方法 选取2019年5月至2021年8月于我院血液科接受治疗的初诊再生障碍性贫血患者84例，根据Camitta分型标准分为非重型再障组42例，重型再障组42例，同期选取院45例健康体检者作为对照组。采用T淋巴细胞单克隆抗体酶标法(S-P)一步染色法，测定T细胞亚群CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺表达，采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组IL-17、γ-干扰素(INF-γ)水平，采用流式细胞术FCM法检测各组骨髓和外周血单个核细胞黏附分子CD11a的表达水平。分析IL-17、CD11a与再生障碍性贫血的相关性。结果 与对照组相比，非重型再障组、重型再障组CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺细胞比例降低，CD8⁺细胞比例、IL-17、INF-γ水平升高(P<0.05);与非重型...     

T淋巴细胞亚群及其细胞因子在子痫前期患者的表达及意义

目的通过检测T淋巴细胞亚群及其所分泌的细胞因子IL-10、TNF-α在子痫前期患者外周血及胎盘中的变化规律及其相关性,探讨其与子痫前期发病的关系。方法取60例孕妇(正常晚孕组20例;子痫前期组40例,其中轻度20例,重度20例)外周血,分别检测T淋巴细胞亚群比例及其细胞因子IL-10、TNF-α的水平;分娩后检测胎盘组织中的IL-10、TNF-α的表达。结果①轻度子痫前期组胎盘IL-10、TNF-α的表达强度与对照组相比均无显著差异(P>0.05),而重度子痫前期组IL-10表达强度显著降低(P<0.05),且与子痫前期病情呈负相关(rs=-0.342P=0.009);TNF-α表达强度显著升高(P<0.05),且表达强度与子痫前期病情呈正相关(rs=0.349P=0.007)。②子痫前期组IL-10外周血中含量明显低于对照组(P<0.05),其中重度子痫前期组IL-10外周血中的含量比轻度子痫前期者降低(P<0.05),差异有显著性;而TNF-α的含量明显升高(P<0.05)。③子痫前期组血清CD4 、CD8 的细胞百分比与对照组相比无显著差异,但CD4 /CD8 比例上升明显,两者比较有显著性差异(P<0.05)。子痫前期组中重度子痫前期者血清CD4 /CD8 比例比轻度子痫前期者血清CD4 /CD8 比例上升,且差异有显著性(P<0.05)。结论T淋巴细胞亚群及其所分泌的细胞因子的变化可能与子痫前期的发病中起着重要作用,且与病情密切相关。     

小儿隐睾症患者血清TNF-α含量和外周血B细胞及T细胞亚群水平的探讨

目的：探讨了小儿隐睾症患者血清TNF-α含量和外周血B细胞及T细胞弧群的水平。方法：分别应用放射免疫分析和单克隆技术测定31例例小儿隐睾症患者血清TNF-α含量和外周血B细胞及T细胞亚群的水平,并与35名正常健康人作比较。结果：小儿隐睾症患者血清TNF-α含量和外周血B细胞数水平非常显著地高于正常人组水平（P〈0．01）,CD3、CD4、CD4／CD8显著地低于正常人组水平（P〈0．01）。结论：小儿隐睾症是一种自身调节异常的疾病。     

SLE患者外周血T细胞亚群凋亡特点及其相关机制的研究

目的:研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群的凋亡特点及其相关的凋亡机制。方法:采用三色荧光流式细胞术检测高活动性SLE患者、低/非活动性SLE患者以及正常对照者外周血T细胞亚群的百分比例、T细胞亚群膜表面Fas/FasL的表达率、T细胞亚群早期凋亡(AV+PI-)的情况;采用ABC-ELISA法测定各组SLE患者和正常对照者血清IL-10水平;对10例血清IL-10水平异常升高的高活动性SLE患者进行体外PBMCs培养实验,其中分别加入抗FasL抗体和抗IL-10抗体,48小时常规培养后分别检测PBMCs中T细胞亚群百分比例、T细胞亚群膜表面Fas/FasL的表达率、T细胞亚群早期凋亡的变化。结果:SLE患者外周血T细胞凋亡异常增多,其中以高活动性SLE患者CD4+T细胞亚群的凋亡尤为显著(P0.05),CD4+T细胞的异常凋亡与CD4+和CD8+T细胞膜表面表达增高的Fas/FasL密切相关(P0.05);各组SLE患者外周血血清IL-10水平均明显升高(P0.01),高活动性SLE患者更为明显,血清IL-10水平升高不仅与SLE主要临床检验指标相关,而且与CD4+/CD8+比值减少、CD4+T细胞高表达FasL相关(P0.05);随访研究显示,随着SLE病情好转、稳定,血清IL-10水平下降明显、T细胞亚群Fas/FasL的表达率明显减少、T细胞亚群凋亡逐渐减少,以上变化均在CD4+T细胞亚群中体现得最为明显(P0.05)。结论:SLE患者T细胞活动性异常升高,尤其是CD4+T细胞亚群凋亡增加,是SLE疾病发展的重要病理机制,IL-10作为能诱导T细胞高表达Fas/FasL的重要调节因子,参与了SLE患者CD4+T细胞凋亡的免疫调节,SLE患者异常增高的IL-10很可能通过Fas/FasL途径促进了T细胞尤其是CD4+T细胞亚群的凋亡。     

芬戈莫德对卒中后抑郁大鼠的治疗作用

目的:观察芬戈莫德(FTY720)对卒中后抑郁(PSD)大鼠的治疗效果并初步探索其作用机制。方法:50只SD大鼠依照随机对照方法分为5组,分别为假手术组(sham)、卒中组(MCAO)、卒中后抑郁组(PSD)、氟西汀治疗组(PSD+FLU)以及芬戈莫德治疗组(PSD+FTY)。采取大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血模型,联合慢性不可预见的温和性应激(CUMS)及孤养法建立PSD模型。记录大鼠每周体重,运用敞箱实验和糖水偏好实验评估大鼠的行为学表现; HE染色观察大鼠海马组织形态; ELISA检测大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量; Western Blot检测大鼠海马组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平;流式细胞术检测大鼠外周血T细胞亚群水平。结果:与sham组和MCAO组相比,PSD组大鼠体重、敞箱实验得分及糖水偏好比例显著减低(P 0.05),HE染色显示海马组织CA1和CA3区呈现细胞萎缩和数量减少等现象,大鼠血清及海马组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平均显著增高(P 0.05),大鼠外周血CD3~+T细胞和CD3~+CD4~+T细胞的数量升高(P0.05);与PSD组相比,PSD+FTY组大鼠体重、敞箱实验得分及糖水偏好比例显著升高(P 0.05); HE染色显示海马组织CA1和CA3区细胞损伤现象减少;大鼠血清及海马组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平均显著降低(P 0.05);大鼠外周血CD3~+、CD3~+CD4~+和CD3~+CD8~+T细胞的数量均显著减低(P 0.05)。结论:FTY720能够有效改善海马组织损伤进而缓解PSD大鼠的抑郁行为,其机制可能是降低外周血T细胞数量从而进一步降低了血清及海马组织中IL-1β、IL-6与TNF-α水平。     

原发免疫性血小板减少症患者外周血Th22细胞水平的变化及意义

目的:观察Th22细胞在原发免疫性血小板减少症(ITP)患者外周血中的变化.方法:用流式细胞术分别检测ITP初诊组、治疗后完全反应(CR)组及正常对照组外周血中Th22细胞所占比例.用酶联免疫吸附实验(ELISA)分别检测各组外周血中IL-22、TGF-β、TNF-α、IL-6的表达水平.用半定量RT-PCR分别检测各组外周血中IL-22 mRNA的表达水平.并逐层分析比较.结果:ITP初诊组和治疗后组Th22细胞比例、外周血中IL-22、TNF-α、IL-6的表达水平以及IL-22mRNA的表达水平均明显高于正常对照组(P＜0.01),治疗后组Th22细胞比例、IL-22、TNF-α、IL-6、IL-22 mRNA的表达水平均低于初诊组(P＜0.05);ITP初诊组和治疗后组TGF-β水平分别为(3.27±1.02)ng/L、(5.41±1.69)ng/L明显低于正常对照组(9.65±2.78) ng/L(P＜0.01),且初诊组TGF-β的水平低于治疗后组(P＜0.05).结论:ITP患者体内Th22细胞数量增加、TNF-α、IL-6的表达升高、TGF-β的表达减低.     

武汉地区正常人外周血T细胞亚群、NK细胞活性、诱生IFN、IL-2能力和血清IFN-α水平的研究

本文检测了武汉地区70例健康献血员(年龄:30～45岁),男女各35例)外周血T细胞亚群、NK细胞活性、诱生IFN-α、IFN-γ,IL-2能力和血清IFN-α水平。结果表明除女性受试者外周血NK细胞活性显著性地低于男性外,其他各项指标男女性别之间虽有差异,但均无显著性意义。     

活动性结核病患者外周血单个核细胞中结核分枝杆菌抗原特异性多能CD4+和CD8+T淋巴细胞的特征研究

目的 研究活动性结核病患者外周血单个核细胞中结核分枝杆菌抗原特异性多能T淋巴细胞细胞因子的分泌特征.方法 利用γ干扰素释放试验和多色流式细胞术分析了13例活动性结核病患者、11例肺部感染性/肿瘤疾病患者以及14例健康对照者外周血中结核分枝杆菌抗原特异性(ESAT-6和CFP-10)CD4+Th1和CD8+Tc淋巴细胞表达细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2的情况.结果 与肺部感染性/肿瘤疾病组和健康对照组相比:(1)活动性结核病组具有较低比例的分泌TNF-α+的CD4+Th1细胞、较高比例的分泌IFN-γ+和IFN-γ+TNF-α+IL-2+的CD4+Th1细胞;(2)活动性结核病组具有较高比例的分泌IFN-γ+TNF-α+IL-2+的CD8+Tc细胞.结论 实验结果提示活动性结核病患者中表达IFN-γ+TNF-α+IL-2+的多能CD4+Th1及CD8+Tc细胞,可能在区别活动性结核病与肺部感染性/肿瘤疾病方面具有一定的临床参考价值.     

尖锐湿疣患者治疗前后血清IL-2、IL-6、TNF-α和外周血B细胞、T淋巴细胞亚群检测的临床意义

目的:探讨了尖锐湿疣患者治疗前后血清IL-2、IL-6、TNF-α和外周血B细胞、T淋巴细胞亚群水平及临床意义.方法:分别应用放免法、酶联法和单克隆抗体法对42例尖锐湿疣患者进行了血清IL-2、IL-6、TNF-α和外周血B细胞、T淋巴细胞亚群水平测定,并与30名正常健康人作比较.结果:尖锐湿疣患者在治疗前血清TNF-α水平和B细胞数均非常显著地高于正常人组(P＜0.01),而IL-2、IL-6、CD3、CD4、CD4/CD8比值则显著地低于正常人组(P＜0.01),经治疗后6个月,与正常人比较仍有显著性差异(P＜0.05).结论:尖锐湿疣是一种自身免疫调节失常的性传播疾病.     

高血压合并颈动脉粥样硬化患者外周血效应性T细胞亚群的变化及意义

目的:探讨高血压合并颈动脉粥样硬化患者外周血效应性T细胞各亚群Th1、Th2和Th17细胞活性的变化。方法:行颈动脉超声检查选择20例高血压合并颈动脉粥样硬化患者(CA组),颈动脉正常的25例高血压患者(EH组)以及20例性别、年龄匹配的健康体检者作为对照组(Control组)。清晨空腹抽血。以流式细胞术检测外周血中Th1、Th2和Th17细胞比例,实时定量RT-PCR方法检测T-bet、GATA3和RORγt mRNA,ELISA法检测血浆中IFN-γ、IL-4和IL-17水平。结果:与EH组和Control组相比较,CA组Th1、Th17细胞比例显著升高,T-bet和RORγt mRNA表达增加,血浆IFN-γ和IL-17水平显著升高。与Control组相比较,EH组Th1、Th17细胞比例、T-bet和RORγt mRNA、血浆IFN-γ和IL-17水平均无统计学差异。三组间Th2细胞比例、GATA3 mRNA和血浆IL-4水平均无统计学差异。结论:高血压病患者的Th1、Th17细胞活性升高,这种改变可能与颈动脉粥样硬化的发生发展有关。     

1型糖尿病患者外周血IL-35表达及其对Th9细胞的调控作用

目的观察1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus, T1DM)患者外周血IL-35的表达及其对Th9细胞的调控作用。方法入组31例T1DM患者和13例对照者, 分离血浆和外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)。ELISA检测血浆IL-35和IL-9水平, 实时定量PCR法检测PBMCs中IL-35亚基EBI3和IL-12p35亚基以及Th9转录因子PU.1 mRNA相对表达量, 流式细胞术检测PBMCs中Th9细胞比例。使用重组人IL-35刺激T1DM患者和对照者PBMCs, CCK-8法检测细胞增殖, 并检测Th9细胞比例、PU.1 mRNA相对表达量、IL-9分泌水平的变化。分选11例T1DM患者PBMCs中的CD4+CCR4-CCR6-CXCR3-细胞和CD8+T细胞, 使用重组人IL-35刺激CD4+CCR4-CCR6-CXCR3-细胞, 将104个CD4+CCR4-CCR6-CXCR3-细胞与105个CD8+T细胞共培养, ELISA法检测培养上清中IFN-γ和TNF-α水平, 酶联免疫斑点试...