偶发分枝杆菌感染的组织病理学特征

目的 探讨偶发分枝杆菌（ＭＦ）感染的组织病理学特征。方法 对３４例局部就射后发生ＭＦ感染病例（３９处病灶）活检标本进行详细的病理学检查及分析。结果 局部ＭＦ感染的组织学表现可分为三种主要形式,显微镜下至少有七种以上的表现。结论 结节性或弥漫性炎症伴混合性肉芽肿（中央为脓肿围绕着上皮样细胞及巨细胞）以及坏死及肉芽肿样小结节周围出现大量空泡细胞条带或环状结构（脂样结构）为偶发分枝杆菌感染的最典型表现形     

偶发分枝杆菌的感染与实验研究进展

偶发分枝杆菌（M.fortuitum)为非典型分枝杆菌之一,其感染的病例日益增多。本文根据目前国内外所报道的偶发分子枝杆菌感染,对其致病性、感染特点和耐药性,以及分子生物学现状,作一个初步分析和简述。     

肌肉注射引起偶发分枝杆菌局部感染的细菌学鉴定

1998年 8月～ 1999年 3月 ,福建省南平市樟湖镇 ,先后发生了 5 9例患者因肌肉注射引起的局部细菌感染 ,且久治不愈 ,主要表现为感染部位肿痛 ,无发烧 ,局部组织病理学检查表现为脓肿及肉芽肿小结节形成的空泡细胞条带。所有患者感染部位渗出液标本经培养均分离出一种分枝杆菌 ,经鉴定确定为偶发分枝杆菌 (Ｍ .Ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ)。报道如下。一、材料和方法1 标本来源 :5 9例因肌肉注射引起局部感染久治不愈而收治入院的患者。临床根据患者情况不定期抽取炎性渗出液作细菌培养及鉴定 ,先后送检 96份标本 (每个患者先后送检 1～ 3份标本 )。…     

偶发分枝杆菌的感染与实验研究进展

偶发分枝杆菌 (M .fortuitum)为非典型分枝杆菌之一 ,其感染的病例日益增多。本文根据目前国内外所报道的偶发分枝杆菌感染 ,对其致病性、感染特点和耐药性 ,以及分子生物学现状 ,作一个初步分析和简述。     

荧光PCR熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药检测中的临床应用

目的评价荧光PCR熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药检出中的临床应用价值。方法以改良罗氏培养法及绝对浓度法作为对比,利用荧光PCR熔解曲线法检测53例肺结核患者对利福平、异烟肼耐药情况。结果两种方法的单耐药率、耐多药率比较差异无统计学意义(P0.05)。同一标本两种方法检测对比显示,与绝对浓度法相比,熔解曲线法检测利福平、异烟肼耐药的敏感度分别为80.0%和81.0%,特异度分别为100.0%和93.8%,准确度分别为92.2%和86.8%,两种方检测法的一致性分析Kappa值分别为0.754和0.710,表明两者一致性佳。结论相对于传统方法,熔解曲线法敏感度、特异度良好且安全、高效,在耐药肺结核治疗中有良好的应用价值。     

熔解曲线法对石蜡标本中非结核分枝杆菌的检测

<正>非结核分枝杆菌感染性肉芽肿是由非结核分枝杆菌感染引起的疾病,在我国感染率有上升的趋势^[1]。我国历次结核病流行病学调查资料显示,非结核分枝杆菌的分离率从 1990年的4.9%上升至2010年的22.9%^[2]。荧光PCR熔解曲线法是一种简单、快速、有效的菌种鉴定的分子生物学方法,该方法根据不同分枝杆菌基因转录间隔区片段的特异序列设计探针,采用特定的荧光通道和熔点进行分枝杆菌鉴别^[3]。     

浙江省丽水市结核分枝杆菌临床分离株耐药性及基因突变情况

目的 调查浙江省丽水市结核病定点医院患者结核分枝杆菌（MTB）临床分离株耐药特征及耐药基因突变情况,为该地区耐药结核病防控提供依据。方法 采用荧光PCR熔解曲线法对培养自丽水市结核病定点医院结核病患者MTB临床分离株进行抗结核药物耐药性及耐药基因突变位点检测及分析。结果 242株MTB总耐药突变占16.53%(40/242),耐多药率为4.96%(12/242),耐药顺位分别为异烟肼>链霉素>利福平>氟喹诺酮类>乙胺丁醇。链霉素耐药株基因突变位点主要发生在rpsL43位密码子,占比为65.00%(13/20);异烟肼耐药基因突变位点主要发生在katG315密码子,占比为76.19%(14/21);利福平耐药基因突变位点主要发生在rpoB基因529-533位密码子,占比为61.11%(11/18);乙胺丁醇耐药基因突变位点主要发生在embB306位密码子,占77.78%(7/9)。结论 丽水市结核患者总体耐药突变低于全国耐药水平,但耐药模式和耐药基因突变情况仍较为复杂,需进一步加强耐药结核病监测及防控工作。     

结核分枝杆菌对氟喹诺酮类药物敏感性的实验研究

目的 获得四种氟喹诺酮（FQ）对结核分枝杆菌的最小抑菌浓度（MIC）,评价PCR探针熔解曲线法（PMAA）检测结核分枝杆菌对氟喹诺酮药物耐药性的临床价值.方法 124例对氧氟沙星敏感的菌株和78例对氧氟沙星耐药的菌株,在96孔细菌培养板中,用Middlebrook 7H9液体培养基将药物进行连续倍比稀释后,加入5×10^-2 mg/ml菌液100 μl,用刃天青显色法测定MIC;并用PCR探针熔解曲线法（PMAA）检测结核分枝杆菌对氟喹诺酮（FQ）药物的耐药突变.结果 氧氟沙星折点浓度为2 μg/ml,加替沙星和莫西沙星对结核分枝杆菌的MIC90比氧氟沙星和左氧氟沙星要低4-8倍,具有比氧氟沙星和左氧氟沙星更好的抗结核分枝杆菌的活性.以罗氏比例法为金标准,PCR-PMAA检测敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和符合率分别为96.2％,97.6％,96.2％,97.6％和97.0％.结论 利用微量MIC方法较常规药敏方法可以获得更多的耐药信息.用PCR-PMAA法能高效快速的检出耐药突变菌株.两种方法结合应用,对临床肺结核疾病早期用药具有更好的指导价值.     

SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线鉴定鸟分枝杆菌方法的建立及初步应用

目的基于SYBR GreenⅠ荧光染料建立鉴定鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium,MA)的荧光PCR熔解曲线法,为临床鉴定MA提供简单、准确性高的分子生物学检测方法。方法以MA的特异性插入序列IS1311为检测靶标设计引物,在60℃的退火温度下,建立鉴定MA的SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法,并对MA等21种分枝杆菌标准株和金黄色葡萄球菌等5种常见致病菌进行检测,评价方法的特异性、检测限;以hsp65、16S rDNA普通PCR扩增产物测序分析为“金标准”,鉴定200株分枝杆菌临床分离株,评估建立方法鉴定MA的准确性。结果SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法在30个循环内能准确鉴定出21种分枝杆菌标准株和5种致病菌中的MA,检测限为5.6×10-2 ng/μL。200株分枝杆菌临床分离株中,以PCR测序鉴定出16株MA和184株其他分枝杆菌,以SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法鉴定出15株MA和185株非MA;本研究建立的方法和测序方法对MA的鉴定率差异无统计学意义(P>0.05);两法符合率为99.5%(199/200),一致性较高(Kappa值>0.75,P<0.01);建立方法的敏感性为93.8%(15/16),特异性为100.0%(184/184),阳性预测值为100.0%(15/15),阴性预测值为99.5%(184/185)。结论以MA特异性重复序列IS1311为基础建立的SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法,具有较高的灵敏度和特异性,为MA的临床检测提供新的途径。     

骨关节尖端赛多孢菌与偶发分枝杆菌感染实验室诊断和临床治疗

目的　对1例骨关节尖端赛多孢菌与偶发分枝杆菌并发感染病例进行病原学诊断和治疗分析,为临床少见菌感染诊治提供思路。方法　将左大腿及左膝外伤后膝关节红肿骨科住院患者作为研究对象,采集其关节腔积液进行涂片染色、培养及质谱鉴定,根据病原学鉴定结果给予用药指导。结果　患者关节腔引流液外观为脓性乳糜状,涂片抗酸染色见大量白细胞和抗酸阳性呈柴捆状排列菌体;革兰染色见大量白细胞及真菌菌丝;荧光染色见团状菌丝。培养72h后血平板见丝状真菌菌落及细小、干燥的细菌样菌落,质谱仪鉴定为偶发分枝杆菌和尖端赛多孢菌混合感染。给予左氧氟沙星＋伏立康唑＋阿米卡星静脉滴注治疗14天,患者左膝关节肿胀明显减轻,左下肢肌力正常出院。出院医嘱改左氧氟沙星＋多西环素＋伏立康唑口服,因患者经济原因自行停服伏立康唑后复发再次入院,行关节积液培养再次分离出尖端赛多孢菌。临床清创并继续给予左氧氟沙星＋伏立康唑＋阿米卡星静脉滴注治疗,待症状改善后口服左氧氟沙星＋多西环素＋伏立康唑,期间肝功能检测有轻度损害,治疗方案改为口服左氧氟沙星＋复方磺胺甲噁唑＋伏立康唑直至出院,持续治疗6月后患者左膝关节肿胀消失,可自行站立行走,复查血细胞分析、C-反应蛋白、红细胞沉降率及肝肾功能均正常,逐渐停用所有药物。该患者停药后再无复发。结论　骨关节少见菌混合感染应重视实验室涂片检查和病原体鉴定,临床应该结合鉴定结果规范及足疗程治疗是患者治愈的关键。     

荧光PCR熔解曲线法在检测临床标本结核分枝杆菌及其耐药性中的应用

目的 评价荧光PCR熔解曲线法检测临床标本结核分枝杆菌及其对利福平和异烟肼敏感性的性能.方法 收集重庆市公共卫生医疗救治中心2016年7月至2018年7月进行过荧光PCR熔解曲线法结核检测的病例,分别与结核菌培养和Genexpert比较检测结核菌的灵敏度,与比例法药敏比较药敏结果.结果 在结核菌检测上,荧光PCR熔解曲...     

金胺O荧光染色检测石蜡切片中偶发分枝杆菌的体会

非结核分枝杆菌(non-tuberculous mycobacteria,NTM)是指结核分枝杆菌、牛分枝杆菌与麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌,多存在于环境中,为条件致病菌,可引起结核样病变.目前已知100余种致病性非结核分枝杆菌,常见的有20种左右,如胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌、戈登分枝杆菌等.近年来,随着NTM病的增多使其日益受到重视.     

慢性骨筋膜室综合征动物模型的建立及骨骼肌病理变化的实验研究

目的：探讨慢性骨筋膜室综合征所致比目鱼肌（红肌）、伸趾长肌（白肌）的病理变化。方法：90只日本白兔分成15组。他们的右小腿被小儿充气式血压计袖带间断性、重复性的压迫。结果：在40mmHg压力1d和3d压迫组中，骨骼肌细胞呈现炎性水肿和细胞直径增加。在80和120mmHg压力3d压迫组及40mmHg压力7、14和28d压迫组中，可见少量的坏死和有中性核细胞浸润的骨骼肌细胞，表明了早期细胞坏死。然而，在80和120mmHg压力7、14和28d压迫组中，骨骼肌细胞表明了显著的变性改变。这种改变是在压力较高组以及比目鲁肌比伸趾长肌更显著。结论：重复性压迫可引起严重的骨骼肌组织的变情，特别是红肌。     

肛门失禁大动物模型的建立

目的探讨肛门失禁动物模型的造模方式及其临床意义。 方法本文采用两种方法进行肛门失禁巴马小型猪模型的创建,分别为通过外科手术操作对小型猪的肛门括约肌离断致猪肛门失禁动物模型的创建和骶神经麻醉药物注射的方法对小型猪的骶神经损伤所致猪肛门失禁动物模型的创建,对猪肛门失禁动物模型进行肛门静息压测定,并取肛门括约肌组织进行组织形态学检测及可变剪接基因检测。 结果括约肌离断法与骶神经损伤法均诱导巴马小型猪发生肛门失禁,具体表现为大便不能自行控制（括约肌离断组：第1天出现肛门失禁,第2~14天保持肛门失禁。骶神经损伤组：第1天出现不完全大便失禁,第2~6天开始大便失禁情况逐渐加重,至第7天出现完全肛门失禁,第8~14天均保持肛门失禁状态）、肛门静息压显著降低（骶神经损伤组10.29±0.23 mmHg,括约肌离断组7.32±0.53 mmHg均＜对照组26.31±2.58 mmHg）和括约肌组织形态破坏（肛门括约肌组织形态结构异常,括约肌全层变薄,固有层结缔组织变厚,肌纤维数量明显减少、变细、断裂,横纹肌致密程度明显下降）。括约肌离断法较骶神经损伤法诱导肛门失禁速度更快,并且肛门静息压更低。模型组与对照组肛门组织可变剪接基因检测结果显示存在可变剪接差异基因,京都基因和基因组百科全书（KEGG）富集分析表明,差异可变剪接基因富集于Regulation of lipolysis in adipocytes、PPAR signaling pathway、TGF-beta signaling pathway、Spliceosome等信号通路。 结论括约肌离断法和骶神经损伤均可有效的进行猪肛门失禁动物模型的建立,Regulation of lipolysis in adipocytes、PPAR signaling pathway、TGF-beta signaling pathway、Spliceosome等信号通路异常的可变剪接可能参与肛门失禁的发生,具体机制有待深入研究。     

微孔板杂交法检测结核分枝杆菌的初步临床应用

目的：对ＰＣＲ－微孔板杂交法的临床应用进行评价。方法：取临床标本２６８例分别进行抗酸染色、培养、ＰＣＲ扩增产物电泳、ＰＣＲ微孔板杂交四种方法的比较。结果：在２１６份临床高度怀疑有结核分枝杆菌感染的患者标本中,ＰＣＲ－微孔板杂交法检测阳阳性为９８例,其检出率高于ＰＣＲ－电泳法（９１／２１８）、培养法（８１／２１８）和抗酸染色法（５６／２１８）,５０份临床证实无结核分枝杆菌感染的病人标本,四种方法均未     

宫颈癌移植瘤大鼠动物模型的建立

目的:应用瘤细胞悬液移植法和静脉注射方法将人宫颈癌HELA细胞接种于具有正常免疫功能的大鼠体内建立人的宫颈癌移植瘤模型,观察成瘤时间,肿瘤进行性生长情况和其他实质性器官转移情况.方法:实验于2004-10/2005-06在中国医科大学盛京医院实验动物部及超声科进行.①实验动物:成年雌性Wistar大鼠35只,随机分为皮下注射组10只、腹腔注射组10只、静脉注射组10只、阴性对照组5只.②实验方法:取对数生长期的人宫颈癌HELA细胞.皮下注射组接种2.5×1010L1细胞悬液于大鼠右后肢及背部皮下.腹腔注射组接种2.5×109L-1细胞悬液于腹腔内.静脉注射组由大鼠尾静脉注入2.5×108L1的细胞悬液.没有进行免疫抑制的5只大鼠做阴性对照.⑨实验评估:接种后观察成瘤率、肿瘤生长及播散情况及动物生存期,行超声检查观察肿瘤的二维灰阶表现和肿瘤的血供情况.结果:①皮下注射组7只成瘤,腹腔注射组8只成瘤,静脉注射组10只,在肿瘤生长过程中3只死亡,其余7只全部成瘤.总体成瘤率67%.腹腔种植组及静脉注射组的肿瘤较早出现腹腔脏器转移.皮下注射组成瘤时间较晚,约种植后40 d左右.②3组平均生存时间分别为静脉注射组62.5 d,腹腔注射组78.9 d和皮下注射组84.4 d,差异有显著性意义(P<0.01).③超声检查皮下生长的肿瘤组织呈低回声,椭圆形,内部回声均匀,边界清晰,彩色多谱勒扫查未见彩色血流信号显示.转移较明显的腹腔种植组及静脉注射组大鼠超声检查可见,2周后,肝区内结节表现为椭圆形或不规则形的低或略高回声,内部质地欠均匀,边缘尚清晰,但不是很规则.4周左右于肝区内见异常低回声结节或强回声结节,大小约0.4cm×0.5 cm.肿瘤内部未见明显血流信号,外周可见少许滋养血管.结论:人宫颈癌HELA细胞接种于具有正常免疫功能的大鼠体内建立人的宫颈癌移植瘤模型,具有与人宫颈肿瘤的组织学形态及生物学行为相似的特点,且移植瘤的生长状况、回声类型及血供变化大体符合宫颈癌的一般超声表现特点.     

分枝杆菌实验室诊断方法比较

  目的  了解分枝杆菌实验室检测中培养、涂片抗酸染色及PCR-荧光探针法的应用情况与诊断价值。   方法  回顾2013年1月至2015年12月北京协和医院送检分枝杆菌的10 326份培养、25 269份涂片抗酸染色及5949份PCR-荧光探针法检测的标本种类分布及阳性标本检出率, 比较3种检测方法的差异及诊断价值。   结果  培养法以血液标本数量最多(31.4%), 涂片抗酸染色和PCR-荧光探针法均以痰标本数量最多(40.3%和40.4%)。PCR-荧光探针法阳性标本检出率(8.9%)明显高于培养(5.6%)和涂片抗酸染色(1.9%)(P < 0.05)。以培养法为金标准, PCR-荧光探针法的敏感度(42.9%)高于涂片抗酸染色法(31.3%), 特异度(95.2%)低于涂片抗酸染色法(97.4%)(P均 < 0.05)。   结论   3种分枝杆菌实验室检测方法中, PCR-荧光探针法的阳性标本检出率和敏感度均较高, 在实验室分枝杆菌属的检测中具有重要价值。     

兔膝骨关节炎合并骨质疏松症动物模型的建立

背景:临床发现同时患有骨质疏松症和骨关节炎患者占相当大的比例,而且目前对骨质疏松与骨关节炎相互关系的认识不一致。目的:建立骨关节炎合并骨质疏松症的动物模型。方法:将14只新西兰大白兔随机等分为模型组和正常组。模型组新西兰大白兔行双侧卵巢切除,正常组新西兰大白兔不作任何处理。结果与结论:去除卵巢10周后,模型组大白兔关节软骨出现明显的退变,血清雌二醇、股骨骨密度水平较正常组显著下降(P<0.01),而关节软骨Mankin评分比正常组显著增高(P<0.01);且软骨Mankin评分与骨密度和血清雌二醇呈负相关,而骨密度与血清雌二醇水平呈正相关,表明实验成功建立了兔膝骨关节炎合并骨质疏松症动物模型。     

兔膝骨关节炎合并骨质疏松症动物模型的建立

背景：临床发现同时患有骨质疏松症和骨关节炎患者占相当大的比例,而且目前对骨质疏松与骨关节炎相互关系的认识不一致。目的：建立骨关节炎合并骨质疏松症的动物模型。方法：将14只新西兰大白兔随机等分为模型组和正常组。模型组新西兰大白兔行双侧卵巢切除,正常组新西兰大白兔不作任何处理。结果与结论：去除卵巢10周后,模型组大白兔关节软骨出现明显的退变,血清雌二醇、股骨骨密度水平较正常组显著下降（P〈0.01）,而关节软骨Mankin评分比正常组显著增高（P〈0.01）;且软骨Mankin评分与骨密度和血清雌二醇呈负相关,而骨密度与血清雌二醇水平呈正相关,表明实验成功建立了兔膝骨关节炎合并骨质疏松症动物模型。