槲皮素对人乳腺癌裸鼠移植瘤抑制作用的研究

目的 :研究槲皮素对人乳腺癌细胞株MCF 7裸鼠移植瘤的抑制作用及其对细胞增殖的影响。方法 :复制MCF 7裸鼠移植瘤动物模型 :2 4只移植成功的裸鼠分为对照组、槲皮素组、多柔比星组及联合用药组 4组 ,每组 6只。观察比较移植瘤的生长情况、移植瘤质量、光镜及电镜观察移植瘤结构的变化 ,Ki 67免疫组化分析对细胞增殖的影响。结果 :对照组移植瘤生长速度明显快于槲皮素组、多柔比星组及联合用药组。移植瘤质量对照组明显大于槲皮素组、多柔比星组及联合用药组 ,P <0 0 1。槲皮素组及联合用药组抑瘤率分别为 3 6 46%和 41 49%。Ki 67标记指数为对照组最高 ( 83 5 3 % ) ,槲皮素组次之( 66 95 % ) ,均高于联合用药组 ( 5 8 80 % ) ,P <0 0 1。结论 :槲皮素可抑制MCF 7裸鼠移植瘤生长及增殖 ,并可与多柔比星协同抑制移植瘤的增殖作用     

槲皮素对人乳腺癌裸鼠移植瘤p21WAF1/CIP1的影响

目的　研究槲皮素对人乳腺癌细胞株 MCF-7裸鼠移植瘤 p2 1W AF1/CIP1的影响。方法　采用 MCF-7细胞株移植成功的 2 4只裸鼠分为对照组、槲皮素组、阿霉素组及联合用药组 (槲皮素 +阿霉素 ) ,每组 6只。用原位杂交及免疫组化测定 p2 1W AF1/CIP1基因及蛋白的表达水平。结果　 p2 1W AF1/CIP1m RNA表达水平槲皮素组及联合用药组高于对照组 (P<0 .0 5) ,p2 1W AF1/CIP1蛋白表达水平槲皮素组及联合用药组明显高于对照组 (P<0 .0 1)。结论　槲皮素可上调 MCF-7裸鼠移植瘤细胞的 p2 1W AF1/CIP1基因及蛋白的表达水平 ,减缓肿瘤生长     

阿霉素联合他莫昔芬对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的：分别研究阿霉素、他莫昔芬及两者联合用药对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及相应机制;方法：建立裸鼠活体二次移植肿瘤的动物模型,并随机分为4组,每组5只.分别为阿霉素用药组、他莫昔芬用药组、阿霉素他莫昔芬联合用药组及对照组;用药处理裸鼠移植瘤模型3周.对照组予以注射生理盐水3周.计算各组移植瘤体积、抑瘤率及裸鼠体重情况,肿瘤组织标本进行免疫组化检测Ki67蛋白的表达,并用TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果：联合用药组与单独用药组及对照组的瘤体积比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;用药前各组裸鼠体重差异无统计学意义（P＞0.05）,用药后对照组与单独用药组及联合用药组的体重比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;联合用药组与单独用药组及对照组的抑瘤率比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;用药组的Ki67表达阳性率明显低于对照组,联合用药组Ki67表达最低;TUNEL法检测联合用药组肿瘤细胞凋亡率为（32.33 ±3.68）％,明显高于阿霉素组（17.40±2.58）％、他莫昔芬（15.40±6.05）％和对照组（3.50±1.50）％,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：阿霉素、他莫昔芬均可抑制人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的生长,两者联合应用较两药单独应用对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的抑制作用更为显著.     

^125Ⅰ粒子对人结肠腺癌裸鼠皮下移植瘤的敏感性研究

目的探讨125Ⅰ粒子组织间植入对裸鼠皮下低分化结肠腺癌移植瘤的敏感性。方法应用人结肠癌HCT116细胞株及雄性BALB/c-nu裸鼠,建立人低分化结肠腺癌裸小鼠皮下移植瘤模型。荷瘤鼠随机分为125Ⅰ粒子治疗组（n=24）和对照组（n=24）。每3天观测裸鼠肿瘤生长情况,测量肿瘤长短径,计算肿瘤体积。每7天各处死治疗组及对照组一批裸小鼠,共4批。采用相对定量荧光RT-PCR检测HIF-1αmRNA表达,应用流式细胞术（FCM）PI单染法检测肿瘤细胞周期的再分布。结果 125Ⅰ粒子治疗组肿瘤体积明显缩小,瘤重减轻（P〈0.05）。第7、14、21、28天4个时间点治疗组HIF-1αmRNA的表达水平逐渐降低（P〈0.05）,对照组HIF-1αmRNA表达无明显改变（P≥0.05）,治疗组与对照组HIF-1αmRNA表达比较,差异有统计学意义（P〉0.05）。随着放射时间的延长,治疗组出现G2/M期细胞阻滞（P〈0.05）,G0/G1期、S期无明显改变（P〉0.05）。结论 125Ⅰ粒子近距离照射能够抑制HCT-116肿瘤细胞的生长,可能与125Ⅰ粒子近距离照射改变HCT116细胞周期分布并抑制肿瘤血管的新生有关。     

米非司酮对子宫内膜癌裸鼠移植瘤细胞凋亡调控的研究

目的探讨抗孕激素米非司酮对人子宫内膜癌HHUA细胞裸鼠移植瘤细胞凋亡的调控作用。方法体外培养人子宫内膜癌HHUA细胞,裸鼠皮下接种HHUA细胞建立裸鼠移植瘤动物模型,随机分为2组,分别应用米非司酮、精制花生油治疗4周,应用流式细胞术(FCM)检测各组裸鼠移植瘤细胞周期时相和凋亡率;免疫组化技术检测凋亡基因bcl2、Fas和FasL蛋白的表达情况。结果米非司酮治疗组裸鼠移植瘤细胞G0/G1期比例升高,S期细胞比例(SPF)降低(P<0.05),移植瘤细胞凋亡率为15.03%±2.19%,明显高于对照组(3.06%±1.13%)(P<0.01);移植瘤细胞bcl2蛋白表达水平明显下降,而Fas蛋白表达水平升高,与对照组比较,均有显著性差异(P<0.05)。结论抗孕激素米非司酮通过调节移植瘤细胞周期分布和凋亡基因,抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

shRNA靶向沉默Eag 1钾通道对骨肉瘤细胞增殖、细胞周期及cyclin D1／E表达的影响

目的 探讨短发夹RNA（shRNA）靶向沉默Ether-go-go 1（Eag1）钾通道对骨肉瘤MG-63细胞增殖、细胞周期及cyclin D1／E表达的影响。 方法 使用成功构建的Ad5-Eag1-shRNA表达载体转染MG-63细胞（抑制组）,同时设转染无义序列（Ad5-Control-shRNA）的空转染组及不进行任何处理的对照组。采用逆转录聚合酶链式反应和Western blotting检测Ad5-Eag1-shRNA转染骨肉瘤MG-63细胞后的Eag1 mRNA和蛋白水平,分别采用CCK-8法和克隆形成实验检测各组的细胞增殖情况,流式细胞仪和Western blotting分别检测各组的细胞周期变化和细胞周期蛋白（cyclin D1和cyclin E）的蛋白水平。建立裸鼠骨肉瘤异种移植模型并测量各组裸鼠肿瘤体积的变化情况。结果 抑制组的Eag1 mRNA和蛋白水平均低于空转染组和对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;与其余两组相比,抑制组的细胞增殖、克隆形成数、S期细胞比例及细胞周期蛋白水平均降低,而G0／G1期细胞比例升高,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）。抑制组裸鼠的瘤体积小于空转染组和对照组（P＜0.05）。结论 通过shRNA抑制Eag1基因表达可抑制MG-63细胞的增殖并诱导G0／G1期阻滞,可能与调控cyclin D1／E通路有关,有望成为骨肉瘤治疗和诊断的新靶点。     

IFN—α仪对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的 :研究IFN α对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法 :2 8只人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型随机分为 4组 :对照组 (皮下注射生理盐水 )、顺铂对照组 (腹腔注射 )、IFN α低剂量组 (1 5× 10 7u/kg ,皮下注射 )、IFN α高剂量组 (3 0× 10 7u/kg ,皮下注射 ) ,观察各组移植瘤生长情况 ,裸鼠体重变化 ,计算抑瘤率 ,FCM检测各组移植瘤细胞周期S +G2 M所占比例。结果 :DDP组抑瘤率 92 8% ,IFN α低剂量组抑瘤率为 73 8% ,IFN α高剂量组抑瘤率为 93 1% ,三组分别与对照组 (抑瘤率为 0 % )相比 ,差异均有极显著性 (P <0 0 1) ;IFN α低剂量组与IFN α高剂量组比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 1)。FCM检测发现DDP组S +G2 M (31 91%± 4 14 % )低于对照组 (37 76 %± 3 86 % ) ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,而IFN α低剂量组 (35 4 3%± 7 76 % )和IFN α高剂量组(35 79%± 3 95 % )分别与对照组比较 ,差异无显著性。结论 :IFN α对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤有明显抑制作用 ;剂量效果与抑瘤有关 ;对移植瘤的增殖无明显抑制作用 ,其抑瘤作用可能是通过其他机制。     

α-奈黄酮对人类卵巢癌紫杉醇耐药细胞裸鼠移植瘤CYP1B1基因表达的影响

目的研究黄酮类化合物α-奈黄酮（α-NF）对人类卵巢癌耐药细胞株A2780TS裸鼠移植瘤CYP1B1基因的影响。方法采用A2780TS细胞移植成功的24只裸鼠分为对照组、ANF组、紫杉醇组及联合用药组（α-NF＋紫杉醇）。RT—PCR及Western blotting方法测定CYP1B1 mRNA及蛋白表达水平。结果CYP1B1 mRNA表达水平α-NF组及联合用药组与对照组差异无统计学意义（P〉0．05）,但CYP1B1蛋白表达水平α-NF组及联合用药组较对照组明显降低（P〈0．01）。结论α-NF在mRNA水平对CYP1B1基因无调节作用,在蛋白水平可下调A2780TS裸鼠移植瘤细胞CYP1B1的表达,发挥逆转A2780TS细胞紫杉醇耐药的作用。     

重组人血管内皮抑素联合重组人P53腺病毒对裸鼠乳腺癌移植瘤的抑制

摘 要 目的: 探讨重组人血管内皮抑素（recombinant human endostatin,ES）联合重组人P53腺病毒（rAd/P53）对乳腺癌细胞MCF7裸鼠移植瘤的抑制作用。方法：建立裸鼠荷人乳腺癌模型，随机分为对照组、ES组、rAd/P53组和两药联合组,分别给予相应治疗；观察肿瘤生长，免疫组化法检测肿瘤组织微血管密度（microvessel density，MVD）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）的表达。结果：各治疗组均可明显抑制移植瘤生长， ES组、rAd/P53组和联合用药组的抑瘤率分别为51.67％、48.74％和75.54％，联合用药组抑瘤作用最为显著（P<0.05）。对照组、ES组、rAd/P53组与联合用药组的移植瘤组织MVD分别为31.17±2.48、20.33±4.84、22.33±3.88及12.50±2.74，VEGF 表达H评分分别为45.33±589、35.83±546、33.67±4.80及22.33±4.41，联合用药组的MVD和VEGF表达显著低于其余各组（P<0.01）。 结论：重组人ES联合rAd/P53治疗可显著抑制裸鼠乳腺癌移植瘤的生长及微血管生成。     

鼻咽癌相关基因NAG7对鼻咽癌细胞周期及凋亡的影响

背景与目的NAG7基因是我室克隆的鼻咽癌相关的肿瘤抑制候选基因,其功能与作用机制目前尚不清楚.研究鼻咽癌相关的潜在抑瘤基因NAG7对鼻咽癌细胞系(HNE1)细胞周期和细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法采用脂质体转染技术将NAG7基因导入HNE1细胞,建立稳定表达NAG7的细胞株,Northernblot分析转染细胞NAG7基因的表达,并采用流式细胞技术检测细胞周期、细胞周期素及细胞凋亡的改变,并用westernblot验证.结果NAG7基因重表达的HNE1细胞与空载体转染的HNE1和HNE1细胞相比G0/G1期细胞数增加(P<0.05),S期细胞数减少;细胞凋亡数目增加(P<0.05);细胞周期素A、D1、E表达明显降低(P<0.05),细胞周期素B1表达降低,Westernblot检测亦证实cyclinD1和cyclinE表达明显下调.结论NAG7的重表达导致细胞周期素表达下调,从而延缓细胞经G1期进入S周期及诱导细胞凋亡增加进而抑制NPC细胞的过度增殖.     

二烯丙基二硫对裸鼠体内人结肠癌细胞增殖的影响

背景与目的:二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)在体外可抑制多种肿瘤细胞增殖,但在体内抗肿瘤作用的研究报道较少.本实验旨在研究DADS对裸鼠体内人结肠癌SW480细胞增殖的影响.方法:建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型,实验动物分为DADS组及对照组.观察DADS作用后移植瘤体积和重量的变化,通过光镜和电镜观察移植瘤细胞形态学变化,通过免疫组织化学和形态定量图像分析系统检测瘤组织内增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白表达变化,用流式细胞术检测移植瘤细胞周期分布.结果:DADS在体内能明显抑制移植瘤的生长,相对肿瘤增殖率为49.85%;组织学分析显示DADS组瘤细胞异型性降低,核质比下降,胞浆内细胞器丰富,部分胞核呈退行性变,可见凋亡小体;免疫组化示两组移植瘤组织PCNA蛋白均有阳性表达,DADS组(149.02±4.26)与对照组(178.86±7.69)比较,裸鼠移植瘤组织内PCNA蛋白表达明显减弱(P＜0.05);流式细胞术分析显示,对照组移植瘤细胞中G2/M期细胞为18.8%,与对照组比较,DADS组G2/M期细胞(38.6%)显著增多.结论:DADS可体内抑制人结肠癌SW480细胞增殖,使癌细胞阻滞于G2/M期.     

隔蛋白7逆转裸鼠移植胶质瘤的恶性表型

目的探讨隔蛋白（SEPT）7对胶质瘤恶性表型的影响。方法建立SEPT7表达缺失的人胶质瘤TJ905细胞的裸鼠皮下移植瘤模型，将荷瘤鼠分为治疗组（SEVIT／pcDNA3）、空载体组（pcDNA3）和对照组（PBS），观察各组肿瘤的大小及生长速度；采用免疫组化法检测各组肿瘤组织标本中SEPT7、增殖细胞核抗原（PCNA）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、侵袭相关因子[基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9]、细胞周期因子（CDK2、CDK4、cyclinD1、cyclinE、p21、p16）以及凋亡相关因子（bcl-2、caspase-3）的表达；原位末端标记（TUNEL）法检测肿瘤细胞的凋亡。结果治疗组肿瘤的生长速度明显减慢，6d后肿瘤体积明显小于对照组和空载体组（P〈0．05）；治疗组肿瘤标本中SEV17、p21、p16和caspase-3的表达上调，PCNA、MMP-2、MMP-9、CDK2、CDK4、cyclinD1、cyclinE和bcl-2的表达下降，且GFAP呈阳性表达；TUNEL法检测治疗组肿瘤细胞凋亡增加。结论SEPT7可抑制肿瘤生长、增殖和侵袭，并诱导肿瘤细胞凋亡，对胶质瘤的恶性表型具有逆转作用。     

ILK-ASODN对人卵巢上皮癌裸鼠皮下移植瘤形成的抑制作用

目的 探讨ILK-ASODN对人卵巢上皮癌裸鼠皮下移植瘤形成的抑制作用。方法 研究分为对照组和实验组。在转染后72 h采用RT-PCR和Western blot法检测细胞ILK mRNA及蛋白表达量;运用流式细胞术评价ILK-ASODN转染对肿瘤细胞周期的影响;同时将转染后的HO-8910细胞接种于裸鼠皮下,观察裸鼠体重变化、体内成瘤率、肿瘤出现的时间、肿瘤体积及重量的变化,并计算抑瘤率。结果 实验组与对照组比较,细胞的ILK mRNA及蛋白表达量显著下降、G₀/G₁期细胞明显增多,差异具有统计学意义(P＜0.01);实验组裸鼠肿瘤出现时间明显晚于对照组,肿瘤体积及重量增长速度显著减缓,差异有显著统计学意义(P＜0.01)。结论 ASODN可以阻断人卵巢癌细胞ILK基因表达,抑制细胞生长;而 ILK基因的表达沉默对裸鼠皮下移植瘤的形成具有明显抑制作用。     

流式细胞术分析胃泌素对人结肠癌SW480裸鼠移植瘤的影响

目的：探讨胃泌素对人结肠癌裸鼠移植瘤的影响。方法：建立人结肠癌SW480裸鼠移植瘤模型,实验动物分为5肽胃泌素（PG）组及对照组,观察PG对移植瘤体积、重量的影响并进行流式细胞术分析。结果：移植瘤的体积重量、细胞内DNA、蛋白质含量、S期、G2M期细胞数、增殖指数PG组显著高于对照组,而G0／G1期细胞数则显著低于对照组。结论：胃泌素在体内具有促进人结肠癌SW480细胞分和增殖的作用,为结肠癌患者施行内分泌治疗提供了实验依据。     

周期蛋白D1在鼻咽癌细胞系中功能及意义的深入研究

目的 深入研究周期蛋白D1在鼻咽癌细胞中的表达特征及生物学功能。以Western blot方法确定D型周期蛋白在鼻咽癌细胞系中的表达谱及表达水平；利用流式细胞术双参数法，确定cyclin D1在鼻咽癌细胞中的表达分布模式；结合反义硫代磷酸化寡聚脱氧核苷酸和抗体剔除实验，分别从mRNA及蛋白质水平抑制、中和cyclinD1的表达，探讨其在鼻咽癌细胞中的生物学功能。结果 在鼻咽癌细胞中，D型周期蛋白的表达谱为D1、D2、D3均表达型，cyclinD1在两株鼻咽癌细胞均有过表达。cyclinD1在鼻咽癌细胞系中的表达呈细胞周期依赖性，在G0／G1期表达最高，S期及G2／M期下降，但仍可检测到。反义cyclinD1硫代磷酸化寡聚脱氧核苷酸和抗体剔除实验可以有效抑制蛋白质表达，抑制细胞进入S期。结论 鼻咽癌细胞系中，D型周期蛋白的表达谱为D1、D2、D3均表达型,cyclinD1在鼻咽癌细胞中有过表达，且表达呈细胞周期依赖性，cyclinD1可能是鼻咽癌细胞G1／S期进行中必不可少的细胞周期调节因子。     

细胞周期蛋白E小干扰RNA靶向调控乳腺癌细胞的生长

目的 研究乳腺癌细胞中细胞周期蛋白E(cyelin E)对乳腺癌细胞肿瘤生物学特征的影响.方法 用带有cyclin E小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体pEGFP/CCNE2转染乳腺痛细胞系MCF-7.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法分别在RNA水平和蛋白水平检测siRNA对细胞内cyclin E表达水平的影响,CCK-8方法检测转染后细胞株生长增殖能力以及对化疗药物的敏感性,流式细胞仪检测细胞周期的变化,裸鼠移植瘤成瘤实验检测转染后细胞成瘤能力的变化.结果 pEGFP/CCNE2转染后,MCF-7细胞内cyclin E的表达受到抑制,cyclin E mRNA相对表达水平为0.23±0.05,蛋白相对表达水平为0.24±0.05;细胞的生长增殖能力下降,抑制率为68.56%±0.08%,对化疗药物的敏感性增加;细胞被大量阻滞在G1期,G1期细胞占77.38%.细胞的成瘤能力降低,移植瘤体积缩小.结论 抑制乳腺癌细胞中cyclin E的表达能够抑制乳腺癌细胞的生长、分化和增殖,提高肿瘤对化疗药物的敏感性.