哺乳动物RNA干扰中的小干扰RNA表达载体

载体表达小干扰RNA的方法因便宜，稳定，操作方便的优点，在哺乳动物RNA干扰研究中有非常大的潜力和优势。本文对当前哺乳动物RNA干扰研究中的小干扰RNA表达用载体作一综述。小干扰RNA载体表达方法的广泛应用，将对功能基因组研究以及抗病毒和肿瘤的基因治疗产生深远的影响。     

哺乳动物RNA干扰中小干扰RNA载体表达策略及其表达盒

RNA干扰是一种典型的转录后基因调控方法 ,也是体内抵御外在感染的保护机制之一。在哺乳动物功能基因组学及病毒感染性疾病和肿瘤治疗研究中具有很大的应用前景。构建在细胞内稳定表达小干扰RNA的载体因价廉、稳定、操作方便 ,被认为是一种较理想的产生RNA干扰的方法 ,目前广泛应用于哺乳动物RNA干扰研究中。本文对小干扰RNA载体的表达策略及其表达盒作一阐述。     

哺乳动物RNA干扰中小干扰RNA载体表达策略及其表达盒

RNA干扰是一种典型的转录后基因调控方法，也是体内抵御外在感染的保护机制之一。在哺乳动物功能基因组学及病毒感染性疾病和肿瘤治疗研究中具有很大的应用前景。构建在细胞内稳定表达小干扰RNA的载体因价廉、稳定、操作方便，被认为是一种较理想的产生RNA干扰的方法，目前广泛应用于哺乳动物RNA干扰研究中。本文对小干扰RNA载体的表达策略及其表达盒作一阐述。     

RNA干扰在哺乳动物病毒感染中的作用

RNA干扰(RNAi)作为高效的基因阻断技术在抗病毒研究中已取得很大成果,内源性RNAi机制在低等生物中的病毒免疫作用已经明确,但在哺乳动物病毒感染中的研究仍处于探讨阶段,病毒编码小干扰RNA(siRNA)是否存在仍有争议,而由微小RNA(miRNA)介导的RNAi在调节病毒和宿主细胞相互关系中则发挥着重要作用.     

新靶点CyclinE干扰RNA对人脑胶质瘤增殖的影响

目的构建人CyclinE建新靶点的干扰RNA真核表达载体,转染人脑胶质细胞瘤U251细胞,观察CyclinE表达受抑制后的人脑胶质瘤细胞的增殖能力的变化,为进一步研究CyclinE表达受抑制后对人脑胶质瘤细胞质和细胞核蛋白组学的影响及人脑胶质瘤发生、发展、诊断与治疗提供有价值的资料。方法①构建4个新靶点Cyclin E干扰RNA的真核表达载体后,用双酶切和碱基序列测定的方法鉴定载体构建成功与否。②用Lipofectamine 2000转染4个成功构建的载体到胶质瘤U251细胞株,通过RT-PCR的结果检测转染后CyclinEmRNA表达量,选出干扰效果最好的1个。③用塞唑蓝（MTT）法检测CyclinE沉默后细胞增殖能力的变化。结果①成功构建了4个新靶点的CyclinE干扰RNA真核表达载体,即PCyclinE-1、PCyclinE-2、PCyclinE-3、PCyclinE-4。②CyclinE mRNA表达明显受到抑制,并获得效果最好的CyclinE干扰RNA真核表达载体。③PCyclinE-1-U251组细胞与两对照组相比增殖能力减弱。结论成功构建了新靶点CyclinE干扰RNA真核表达载体,与对照组比增殖能力削弱。     

CyclinE干扰RNA对大鼠PC12细胞增值的影响

目的利用脂质体法转染CyclinE的干扰RNA真核表达载体,然后检测细胞的增值速率,探讨CyclinE在神经细胞中的作用,为帕金森病的研究提供有价值的资料。方法 1.利用脂质体法转染CyclinE的干扰RNA真核表达载体,用倒置荧光显微镜观察荧光蛋白表达量。2.利用MTT法检测转染后细胞的增值速率。结果 1.倒置荧光显微镜观察显示,成功的转染了CyclinE的干扰RNA真核表达载体。2.MTT法检测显示,转染组细胞的增值速率明显低于未转染组和阴性对照组。结论 RNA干扰CyclinE后使得PC12细胞的增值速率减慢。     

RNA干扰的基础研究和临床应用前景

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是在mRNA水平关闭相应序列基因表达或使其沉默的过程.在哺乳动物中发现的21-23核苷酸的双链RNA(小干扰RNA)开启了siRNA的治疗应用可能.目前RNA干扰对于病毒感染、癌症和基因病等表现出广阔的应用前景.就RNA干扰的作用机制、临床应用及应用中存在的障碍等方面综述该领域的研究进展.     

RNA干扰的基础研究和临床应用前景

RNA干扰（RNA interference，RNAi）是在mRNA水平关闭相应序列基因表达或使其沉默的过程。在哺乳动物中发现的21—23核苷酸的双链RNA（小干扰RNA）开肩了siRNA的治疗应用可能。目前RNA干扰对于病毒感染、癌症和基因病等表现出广阔的应用前景。就RNA干扰的作用机制、临床应用及应用中存在的障碍等方面综述该领域的研究进展。     

RNA干扰抑制乙型肝炎病毒复制的应用研究

RNA干扰原理的发现及深入研究为治疗慢性乙型肝炎开辟了一条新的途径.该文就RNA干扰技术在治疗慢性乙型肝炎领域中,针对靶序列和载体的选择、小干扰RNA抑制病毒量效关系及该技术在拉米夫定耐药毒株中的作用等方面的研究现状进行综述,并对其应用前景进行展望.     

干扰性小RNA对HCV RNA复制的干扰作用

丙型肝炎因其较高的发病率和极其严重的后果日益受到人们的关注,但针对性治疗又相当有限。近年的研究表明,干扰性小RNA(siRNA)可以通过降解双链RNA起到抗病毒作用,从而为丙型肝炎的治疗提供了一种新的思路和方法。本文对RNA的干扰作用及siRNA干扰HCV RNA复制的研究状况作了综述。     

Recognition of the ribosomal RNA structures by purified nucleolar RNA methyltransferase

Previously we have isolated the specific RNA methyltransferase from the nucleoli of Ehrlich ascites tumor cells. The purified enzyme was found to be specific for methylation of C5 position of cytosine residue in ribosomal RNA in vitro (Obara, 1982b). In the present study, we have investigated the recognition mechanisms of RNA structure by this enzyme from the points of view of both primary and secondary structures. Analysis of in vitro methylation product by ribonuclease T1 digestion indicated the methylation-site(s) was limited to a certain number of nonanucleotide. The next experiments with either Sl nuclease or actinomycin D and ethidium bromide suggested that the enzyme modified only cytidine residue in or located close to the double stranded part of RNA. On the other hand, the characterization of analogues of cytidine residue in the RNA at molecular level showed that the methylation of rRNA was inhibited by either cytidine, CDP or CTP, but little inhibition was observed in the presence of cytosine, 5-methylcytidine and CMP.     

SARS冠状病毒RNA依赖的RNA聚合酶的原核和真核表达

目的:在大肠杆菌中表达和纯化重组RDRP蛋白,观察RDRP蛋白在293细胞中的表达及亚细胞定位.方法:构建原核表达质粒pGEX-4T-1-RDRP,实现插入基因的融合表达,经GST亲合层析纯化蛋白.构建真核表达载体pCMV-myc-RDRP瞬时转染293细胞,转染48 h后免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察蛋白表达及定位以及Western Blotting检测.结果:成功构建了表达RDRP融合蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌内高效表达,纯化后得到分子量约为121 kDa的融合蛋白.RDRP蛋白在293细胞中高效表达,主要分布在细胞质.结论:获得了重组GST-RDRP融合蛋白,为进一步探讨RDRP的功能奠定基础,在真核细胞中过表达的RDRP蛋白主要定位在细胞质.     

微小RNA和生殖

微小RNA（microRNA,miRNA）是一种长度约19～25个核苷酸的非编码RNA,通过碱基互补配对与mRNA的3’非翻译区结合降解靶基因或抑制其翻译,进行转录后负调控。迄今,上千种miRNA得到成功鉴定。miRNA不但在细胞的增殖、分化、凋亡、组织更新和干细胞分化过程中发挥作用,且参与生殖细胞发育、成熟和胚胎早期发育、激素分泌等生殖调节。     

微小RNA和生殖

微小RNA(microRNA,miRNA)是一种长度约19～25个核苷酸的非编码RNA,通过碱基互补配对与mRNA的3’非翻译区结合降解靶基因或抑制其翻译,进行转录后负调控。迄今,上千种miRNA得到成功鉴定。miRNA不但在细胞的增殖、分化、凋亡、组织更新和干细胞分化过程中发挥作用,且参与生殖细胞发育、成熟和胚胎早期发育、激素分泌等生殖调节。     

微小RNA和生殖

微小RNA(microRNA,miRNA)是一种长度约19～25个核苷酸的非编码RNA,通过碱基互补配对与mRNA的3’非翻译区结合降解靶基因或抑制其翻译,进行转录后负调控。迄今,上千种miRNA得到成功鉴定。miRNA不但在细胞的增殖、分化、凋亡、组织更新和干细胞分化过程中发挥作用,且参与生殖细胞发育、成熟和胚胎早期发育、激素分泌等生殖调节。     

IMPAIRED SYNTHESIS OF MESSENGER RNA AND RIBOSOMAL RNA IN TISSUES OF PYRIDOXINE DEFICIENT RATS

Pyridoxine deficiency reduced synthesis of r-RNA and m-RNA of rat tissues, and this may reduce antibody synthesis.     

长链非编码RNA与子宫内膜异位症关系的研究进展

长链非编码RNA（lncRNAs）是一类长度超过200个核苷酸,编码蛋白潜力较低的RNA。作为非编码RNA（ncRNAs）家族的重要成员,lncRNAs在许多重要的疾病中发挥着调控功能。子宫内膜异位症（EMs）是一种严重危害育龄期女性健康的妇科疾病,与lncRNAs关系密切。目前的研究发现,多种lncRNAs在EMs组织中存在着差异表达。进一步研究发现,lncRNAs与EMs发病的危险因素有关,也可以促进EMs的上皮间充质转化过程。同时,lncRNAs还参与对EMs细胞的增殖、迁移及细胞周期的调控,并影响EMs患者的生育能力。通过对患者血清及组织样本的筛选,学者们发现lncRNAs可以成为诊断EMs的分子标志物。现就lncRNAs与EMs关系的研究进展进行综述,以期为EMs的诊疗提供新的思路。     

RNA vaccines for anti-tumor therapy

The immune system is able to recognize tumor antigens and this has been the basis for the development of cancer immunotherapies. The immune system can be instructed to recognize and attack tumor cells by means of vaccination strategies. One such strategy involves the delivery of tumor antigen as genetic material. Herewith we describe the use of RNA encoding tumor antigens for vaccination purposes in tumor settings. RNA has features that are interesting for vaccination. Upon transfection, the RNA has no possibility of integration into the genome, and the tumor translated proteins enter the intrinsic antigen processing pathway thus enabling presentation by MHC-I molecules. This can specifically activate cytotoxic CD8 T cells that can attack and kill tumor cells. RNA can be delivered as a naked molecule for vaccination purposes or can be used to transfect dendritic cells. The combination of RNA technology with dendritic cell vaccination provides a powerful tool for cancer immunotherapies.