创伤小鼠脾细胞核因子—kB的表达变化

目的：探讨创伤后不同时间点脾细胞核因子-kappa B(NF-kB)的DNA结合蛋白和NF－kB p65蛋白亚型表达的动态变化。方法：采用小鼠双后肢闭合性砸伤＋骨折模型,于创伤后1、4、7日处死动物,分离、纯化脾细胞,提取细胞核蛋白。用电泳迁率改变试验（EMSA）检测NT－kB的DNA的结合活性,用免疫蛋白印迹法（Western blot)检测NF－kB p65蛋白亚型表达。结果：脾细胞NF－kB的DNA结合活性在创伤后1、4、7日表达明显增高。NF－kB p65蛋白亚型在创伤后1、4、7日表达明显增加。结论：创伤可明显增强脾细胞NF－kB的DNA结合活性和p65蛋白亚型的表达。在创伤后淋巴细胞活化及全身炎症反应综合征（SIRS）发生、发展过程中可能起重要作用。     

对白细胞介素-1β激活核转录因子-κB介导A549细胞分泌细胞间黏附分子-1作用的研究

目的 研究白细胞介素-1β(IL-1β)对A549细胞表达细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的诱导作用及相关细胞内信号通路的激活和转导机制.方法 以1 μg/L终浓度的IL-1β刺激经SC-514[核转录因子-κB(NF-κB)的IKK-2复合物抑制物]预处理的A549细胞,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测IL-1β刺激5、10、30、60 min时细胞内磷酸化NF-κB抑制蛋白(pIκBα)和IκBα蛋白表达水平;激光扫描共焦显微镜(LSCM)显像检测NF-κB p65的核转移过程;按试剂盒说明测定NF-κB DNA结合活性;p65抗体染色质免疫沉淀结合聚合酶链反应(ChIP-PCR)技术检测乙酰化组蛋白H4和p65与ICAM-1基因启动子的结合;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测4 h后的ICAM-1 mRNA表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测24 h后细胞表面的ICAM-1蛋白表达.结果 IL-1β刺激后细胞内pIκBα蛋白表达水平明显升高,IκBα蛋白表达水平明显下降;LSCM检测显示激活的p65蛋白从胞质向胞核转移,p65与DNA结合活性明显升高(P<0.01).ChIP-PCR扩增发现,IL-1β促使乙酰化组蛋白H4和p65与ICAM-1基因启动子区域的DNA片断结合.IL-1β刺激4 h后ICAM-1 mRNA表达明显升高,刺激24 h后A549细胞表面ICAM-1蛋白表达亦明显升高(P均<0.01).SC-514阻断了pIκBα蛋白的升高和IκBα蛋白的下降;减少了p65蛋白的核转移和DNA结合活性;降低了ICAM-1的mRNA及蛋白表达水平(P均<0.01).结论 IL-1β通过激活NF-κB 介导了A549细胞表达ICAM-1.     

氢醌对体外培养骨髓基质细胞核转录因子表达的影响

为了研究氢醌（hydroquinone，HQ）对细胞激活剂佛波酯（PMA）导致的骨髓基质细胞（BMSC）核转录因子表达的影响，并初步探讨其与苯的血液学毒性的关系。用体外培养法获得骨髓基质细胞，观察其形态学变化；分别用NF—κB P65免疫组织化学方法和TransAM P65试剂盒测定了用不同浓度的氢醌加激活剂PMA刺激后的骨髓基质细胞NF—κB蛋白表达和活性的动态变化。结果表明：各组细胞加入HQ后，与对照组相比，P65蛋白由细胞核转回至胞核周围的细胞浆，染色呈弱阳性；不同浓度的HQ作用不同时间后NF—κB活性测定结果与对照组间具有明显差异；各组之间相比，100μmol／L的HQ作用72小时对NF—κB的抑制作用最明显；而0．1μmol／L的HQ几乎无抑制作用。结论：HQ可抑制体外培养骨髓基质细胞核转录因子的激活，并且随HQ浓度和作用时间而增强，推测可能与苯的造血微环境毒性有关。     

急性炎症反应中真核细胞转录因子-κB的信号转导作用

真核细胞转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)是一种普遍存在于真核细胞中具有序列特异性二聚体结构的转录因子,是所有Rel家族DNA结合蛋白的总称,在调节免疫应答、炎症反应及细胞增殖、分化及凋亡等方面起关键作用[1] .NFκB转录复合体包括一系列由p50、p52、Rel A(p65)、Rel B和c-Rel等亚基构成的同型或异型二聚体,这些复合体结合到DNA的调控区域(称为κB位点)后,激活特异靶基因的表达活性[2].通常情况下,NF-κB存在于细胞浆中,并与其抑制蛋白(inhibitory-κB,I-κB)家族相结合,后者遮蔽了NF-κB的细胞核定位信号位点,并阻止了细胞核摄取NF-κB.     

p62参与人恶性黑色素瘤细胞NF-κB活性调控

目的探讨多功能蛋白p62参与调控人恶性黑色素瘤细胞NF-κB活性的机制。方法选取人恶性黑色素瘤标本20例,免疫组化方法检测p50、p65、p62表达。人黑色素瘤A375细胞,转染p62-siRNA特异性表达载体。MTT法检测细胞生存率,western blot检测p62蛋白表达,NF-κB荧光素酶报告基因分析检测NF-κB活性。结果 Spearman等级相关性分析p50与p65、p65与p62表达呈正相关均有统计学意义（P〈0.05）。与对照组相比,A375细胞转染p62-siRNA特异性表达载体24h、48h和72h,p62蛋白表达、细胞生存率和NF-κB活性均明显降低（P〈0.05）。结论人恶性黑色素瘤中p62表达与NF-κB高表达呈正相关,降低p62表达能通过抑制NF-κB活性降低A375细胞存活率,表明p62参与NF-κB活性调控。     

急性炎症反应中真核细胞转录因子—кB的信号转导作用

真核细胞转录因子 κB(nuclearfactorκB,NFκB)是一种普遍存在于真核细胞中具有序列特异性二聚体结构的转录因子 ,是所有 Rel家族 DNA结合蛋白的总称 ,在调节免疫应答、炎症反应及细胞增殖、分化及凋亡等方面起关键作用 〔1〕。NFκB转录复合体包括一系列由 p5 0、p5 2、Rel A(p6 5 )、Rel B和 c Rel等亚基构成的同型或异型二聚体 ,这些复合体结合到 DNA的调控区域 (称为κB位点 )后 ,激活特异靶基因的表达活性〔2〕。通常情况下 ,NFκB存在于细胞浆中 ,并与其抑制蛋白 (inhibitoryκB,IκB)家族相结合 ,后者遮蔽了 NFκB的细…     

亚硒酸钠在诱导NB4细胞凋亡的过程中抑制了转录因子NFκB的激活

本实验研究亚硒酸钠在诱导NB4细胞凋亡过程中对转录因子NFκB活性的影响。用Western印迹法检测细胞核提取物中NFκB亚基P65的含量；用形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡；用MTT法观察对细胞的生长抑制。结果显示：亚硒酸钠(≥5μmol／L)可抑制NB4细胞生长和诱导细胞凋亡，同时亚硒酸钠作用时间和浓度相关性地抑制了转录因子NFκB的激活。结论：抑制NFκB激活可能是亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡的途径之一。     

重组腺病毒IκBαM在血管内皮细胞ECV-304中的表达及对NF-κB活性的抑制

目的　检测重组腺病毒IκBαM(AdIκBαM)在血管内皮细胞ECV - 30 4中的表达及肿瘤坏死因子 (TNF -α)诱导下IκBαM的变化与对NF -κB活性的抑制作用。方法　用携有NF -κB抑制物IκBα突变体的AdIκBαM感染ECV - 30 4细胞 ,用West ernblot及EMSA法检测IκBαM的表达及NF -κB活性的变化情况。结果　AdIκBαM在ECV - 30 4细胞中表达且不被TNF -α诱导降解 ,感染IκBαM的ECV - 30 4 /IκBαM细胞在TNF -α刺激下NF -κB无激活 ,而未感染IκBαM的ECV - 30 4细胞经TNF -α刺激后可有NF -κB的过度活化。结论　AdIκBαM能高效扩增并有效感染ECV - 30 4血管内皮细胞 ,且不会被TNF -α诱导而降解 ,能有效抑制血管内皮细胞NF -κB的过度活化 ,抑制NF -κB活性可能保护血管内皮细胞免于TNF -α介导的细胞损害     

糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白与炎症反应关系的研究

目的探讨糖皮质激素诱导的亮氨酸拉链蛋白（GILZ）在炎症反应过程中的作用机制。方法采用无血清RPMI1640培养基分两组培养人单核细胞株THP-1细胞，其中刺激组加入地塞米松（DEX）刺激，而对照组仅加无血清RPMI1640培养基。12h后提取两组细胞总RNA和总蛋白；用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法在转录水平半定量检测GILZ基因；用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）在翻译水平检测核转录因子κB（NF-κB）p65与激活蛋白-1（AP-1）的蛋白表达。收集10例临床创伤患者[创伤严重度评分（ISS）≥16分]伤后24h内的外周血，提取白细胞后分为刺激组和对照组，对照组给予无血清RPMI1640培养基。刺激组在对照组的基础上加入DEX刺激，培养12h后提取白细胞总RNA和总蛋白；用RT-PCR方法在转录水平半定量检测GILZ基因；用Western blotting方法在翻译水平检测NF-κB p65与AP-1的蛋白表达。结果在DEX刺激下，DEX刺激组THP-1细胞和创伤患者外周血白细胞GILZ mRNA表达水平均较对照组升高（P均＜0．01）；DEX刺激组NF-κB p65与AP-1蛋白在THP-1细胞和创伤患者外周血白细胞的表达水平均低于对照组（P均＜0．01）。结论糖皮质激素可上调GILZ基因表达；GILZ的高表达可以抑制NF-κB与AP-1的活性，具有抗炎症反应的作用。     

危重病患者外周血单个核细胞核因子-κB的活性与SOFA评分的关系

目的　观察危重病患者外周血单个核细胞核因子 -κB(NF -κB)的活性和序贯器官衰竭估计 (SOFA)评分的变化 ,探讨NF -κB对危重病患者病情和预后的预测作用。方法　将入住ICU的 4 0例危重病患者分成多器官功能障碍综合征(MODS)组和非MODS组 ,存活组和死亡组 ;选择健康体检者 2 0例作为对照组。检测他们外周血单个核细胞NF -κB的活性 ,并进行SOFA评分。结果　危重病患者的NF -κB活性明显高于对照组 (P <0 0 1) ;NF -κB的活性和SOFA评分在MODS组和死亡组分别明显高于非MODS组和存活组 (P <0 0 1) ;NF -κB的活性和SOFA评分呈明显正相关 (r =0 90 2 ,P <0 0 1)。结论　外周血单个核细胞NF -κB的活性是判断危重病患者病情和预后的敏感指标。