他汀药物治疗对尿毒症患者外周血单个核细胞功能的影响

目的：探讨小剂量他汀治疗对尿毒症患者外周血单个核细胞（PBMC）功能的影响。方法：选择尿毒症患者55例,随机分为他汀治疗组（氟伐他汀胶囊,20mg/d）和对照观察组,采用放射免疫法测定患者血清和PBMC培养上清中白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量。另选择20例健康人作为正常对照组。结果：与正常组比较,尿毒症患者血清炎症细胞因子（IL-1、IL-6、TNF-α）含量显著升高（P〈0.05）,PBMC分泌上述炎症细胞因子的能力也显著增强（P〈0.05）。与尿毒症患者对照组比较,他汀治疗组患者血清炎症细胞因子水平明显下降（P〈0.05）,PBMC基础分泌和血管紧张素Ⅱ刺激分泌炎症细胞因子的能力被显著抑制（P〈0.05）。小剂量他汀治疗对血糖、血脂（总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇）均无影响。结论：小剂量他汀治疗可显著抑制尿毒症患者外周血PBMC的活化。     

尿毒症血清对外周血单个核细胞IL-18表达及分泌水平的影响

目的 :探讨尿毒症血清对正常人和尿毒症患者外周血单个核细胞 (PBMCs)IL - 18表达及分泌水平的影响。方法 :用Ficoll密度梯度离心分离 17例非透析慢性肾衰竭患者 (尿毒症期 )和 16例正常人PBMCs,分别加入尿毒症血清或正常人血清共同培养 72h ,用酶联免疫吸附分析 (ELISA)法检测血清和培养上清IL - 18水平 ,反转录多聚酶链反应 (RT -PCR)检测PBMCsIL - 18mRNA的表达。结果 :(1)尿毒症血清IL - 18水平较正常人血清明显升高 ,分别是 (5 35 .6 2± 2 6 4 .6 9) pg/mL和 (90 .4 1± 96 .6 3)pg/mL ,有统计学差异 (P <0 .0 0 1)。 (2 )与正常人血清相比 ,尿毒症患者及正常人PBMCs经尿毒症血清刺激后其表达和分泌IL - 18的水平均明显增高 ,有统计学差异 (P <0 .0 5 )。(3)在同一种血清中培养 ,尿毒症患者PBMCs表达和分泌IL - 18的水平较正常人PBMCs高 ,但无统计学差异 (P >0 .0 5 )。结论 :尿毒症患者PBMCs是预活化的 ,尿毒症血清可刺激PBMCs使IL - 18产生增加。     

尿毒症患者和肾移植受者外周血调节性T细胞表达的意义

目的探讨尿毒症患者和肾移植受者外周血CD4^＋CD127^-调节性T细胞（CD4^＋CD127^- Treg）的表达水平及意义。方法采用流式细胞术测定13例尿毒症患者（尿毒症组）、13例肾移植受者（肾移植组）和20例健康志愿者（对照组）外周血CD4^＋CD127^- Treg和CD4^＋CD25^＋CD127^- Treg占CD4^＋T细胞的比例。结果尿毒症组和肾移植组CD4^＋细胞中CD4^＋CD127^- Treg的比例明显低于对照组（P〈0．05,P〈0．01）;肾移植组CD4^＋CD25^＋CD127^- Treg的比例明显低于对照组（P〈0．05）。结论尿毒症患者外周血CD4^＋CD127^- Treg数量降低,免疫功能紊乱。肾移植受者外周血CD4^＋CD127^- Treg和CD4^＋CD25^＋CD127^-Treg数量降低,免疫反应性增强。     

尿毒症非透析患者外周血单个核细胞IL-1β、TNF-α与IL-6基因表达的研究

为了弄清尿毒症状态或环境是否激活外周血单个核细胞诱导IL-1β、TNF-α与IL-6基因表达。方法 选择了7名规律性铜仿膜血透患者、11名尿毒症非透析患者及10名正常对照者,采用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)与细胞原位杂交技术对外周血单个核细胞中IL-1β、TNF-α、IL-6的基因表达进行观察。结果 正常对照者外周血单个核细胞中IL-1β、TNF-α、IL-6的基因表达检测不出,尿毒症非透析患者与血透患者均有IL-1β、TNF-α、IL-6的基因表达,但尿毒症非透析患者的基因表达水平与血透患者相比明显的较低。结论 尿毒症状态或环境或其相关因素可激活外周血单个核细胞,这种预激活状态可能与尿毒症患者机体抵抗力下降有关。     

尿毒症非透析患者外周血单个核细胞IL—1β,TNF—α与IL—6基…

目的 为了弄清尿毒症状态或环境是否激活外周血单个核细胞诱导ＩＬ－１β、ＴＮＦ－α与ＩＬ－６基因表达。方法 选择了７名规律性铜仿膜血透患者、１１名尿毒症非透析患者及１０名正常对照者，采用反转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）与细胞原位杂效技术对外周血单个核细胞中ＩＬ－１β、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６的基因表达进行观察。结果 正常对照者外周血单个核中ＩＬ－１β、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６的表达检测不出，尿毒症非透析患     

冠心患者外周血单个核细胞体外诱导分化的研究

内皮祖细胞（EPCs）是干细胞移植疗法最常见的种子细胞之一。EPCs是指外周血、骨髓和脐血中存在的内皮细胞前体细胞，具有定向分化成为成熟内皮细胞的能力，并可参与缺血组织血运重建，有效促进血管新生，增加局部缺血组织血流，是出生后组织血管新生的重要途径。EPCs具有特定的细胞表面标志物CD34抗原，通过免疫磁珠、生物索一抗生物索亲合吸附、流式细胞术及mAb铺展贴壁等细胞分选术，可广泛开展CD34^＋细胞及其亚群的分离纯化。我们应用Ficoll密度梯度离心法获得单个核细胞。同时通过VEGF和bFGF诱导和预涂纤连蛋白促使细胞贴壁而诱导分化成EPCs，从而为冠心病干细胞移植疗法的种子细胞来源探讨新的途径。     

强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞微小RNA的差异表达

目的 探讨强直性脊柱炎患者和健康对照组外周血单个核细胞已知微小RNA(miRNA)差异表达.方法 分别构建10例强直性脊柱炎患者和9例健康对照组外周血单个核细胞小RNA文库,并运用新一代高通量Solexa测序技术,进行外周血单个核细胞已知miRNA的检测;运用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)进一步验证部分差异miRNA表达.结果 在强直性脊柱炎患者与对照组中小RNA文库中,共获得小RNA总量分别是7511 859和10 178 958,比对上基因组部分小RNA分别是6052911 (80.58％)和8 476 243(83.27％);已知miRNA分别是267和231个,通过miRNA差异性分析,129个上调miRNA和28个下调miRNA,其表达水平差异有统计学意义(P＜0.05);FQ-PCR进一步验证了let-7b-3p、miR-146a-5p、miR-155-5p、let-7g-5p和miR-323a-5p差异表达水平与Solexa测序结果相似趋势.结论 强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞miRNA的差异表达,可能与强直性脊柱炎发病密切相关.     

体外循环前后外周血单个核细胞细胞因子的差异表达

目的探讨基因芯片技术在心血管外科临床及科研中的应用价值，应用表达谱基因芯片筛选体外循环（CPB）前后外周血单个核细胞（PBMC）的差异表达基因，为CPB炎性反应的研究提供线索。方法CPB开始、CPB结束即刻抽取患者动脉血，分离PBMC，用BD Atlas^TM cDNA Expression Arrays表达谱基因芯片对比细胞因子的差异表达，应用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）对结果进行验证。结果将基因芯片技术成功应用于CPB研究，并得到CPB前后PBMC细胞因子基因表达谱，其中自细胞介素-6（IL-6）和Wnt5a差异表达较明显，但半定量RT—PCR验证结果未发现差异有统计学意义（P=0．888，0．135）。结论基因芯片技术在CPB后细胞因子变化的研究中有一定应用价值；表达谱基因芯片初步筛选出了CPB后的差异表达基因，这些基因可能参与了CPB引起的炎性反应及其他病理生理反应；PBMC可能不是CPB中细胞因子的主要来源。     

PTEN在脓毒血症患者外周血单个核细胞的表达及其意义

目的检测磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)基因及蛋白在急性梗阻性化脓性胆管炎(acute obstructive suppurative cholangitis,AOSC)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中的表达情况,探讨其在脓毒血症发生过程中的意义。方法分离AOSC患者(n=25)治疗前及治愈后1周时PBMC和血清,以及同期健康自愿者(正常对照组,n=15)外周血PBMC和血清,分别采用蛋白印迹法(Western blot法)和实时荧光定量聚合酶链反应法(real-time quantitative polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测PBMC中PTEN、核因子κB p65(nuclear fatorκB p65,NF-κB p65)和核转录因子κB抑制因子(inhibitor of NF-κB,IκB)蛋白和基因的表达以及磷酸化水平;并用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素10(interleukin 10,IL-10)的含量。结果 AOSC组患者治疗前血清中LPS、TNF-α和IL-10的含量均明显高于正常对照组(P0.05),治愈后1周时,上述指标则明显下降并接近正常水平。AOSC组患者治疗前PBMC中PTEN和IκB的蛋白和基因表达水平明显低于正常对照组(P0.05);治愈后1周时,两者的蛋白和基因的表达水平恢复到正常水平,但是两者治疗前的磷酸化水平均明显高于正常对照组(P0.05),治愈后1周时恢复正常;而NF-κB p65基因及蛋白在AOSC组患者治疗前其表达增高,治愈后1周时下降至正常水平。结论脓毒血症的发生可能与肠道LPS的移位有关,并引起机体促炎因子和抗炎因子的失衡;PTEN在脓毒血症发生过程中可能通过磷酸化降解IκB或直接激活NF-κB,在脓毒血症发生初期可作为治疗靶点之一。     

应用hMeDIP-chip技术分析尿毒症患者基因组5-羟甲基胞嘧啶状态

目的 通过hMeDIP-chip技术,在全基因组范围内分析尿毒症患者的5-羟甲基胞嘧啶(5-hmC)状态.方法 采用hMeDIP-chip技术筛选出5-hmC水平差异显著的目的基因,并用QRT-PCR验证hMeDIP-chip结果可靠性.结果 实验筛选得到3个目的基因:HMGCR、THBD、STAT3,其结果与hMeDIP-chip结果相符,证明hMeDIP-chip结果可靠.结论 尿毒症患者DNA 5-hmC状态有很大变化,这些变化或许可以进一步揭示尿毒症的发病机制,5-hmC或可作为尿毒症的潜在生物标志物和治疗靶点.     

狼疮肾炎患者白细胞介素13的血浆水平和基因表达

目的探讨狼疮肾炎(LN)患者外周血单个核细胞(PBMC)中白细胞介素13(IL-13)mRNA表达及IL-13血浆水平变化及其意义.方法选择10名正常对照者和16名LN患者.采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术,对LN患者PBMCIL-13mRNA表达量进行分析.同时应用IL-13特异的酶联免疫吸附法(ELISA)测定IL-13血浆水平.结果LN患者PBMC中IL-13mRNA表达量及IL-13血浆水平均较正常对照组增高(IL-13mRNA表达量为1.99±0.29比0.68±0.15,P＜0.001IL-13血浆水平为68.8±14.65比25.92±7.60,P＜0.001).IL-13血浆水平与抗-dsDNA抗体滴度、血清C3浓度、血浆γ球蛋白水平、肾小球活动性指数(GAI)及肾小管间质活动性指数(IAI)均呈一定的等级相关关系(rs分别为0.757、-0.809、0.652、0.854和0.846,P均＜0.01).结论IL-13可能参与LN发病机制.IL-13基因表达及蛋白质分泌水平增高在LN活动性病变中起一定的作用.     

二期梅毒患者外周血单个核细胞基因表达谱研究

目的:分析二期梅毒患者外周血单个核细胞基因表达谱特征,探索机体抗梅毒免疫的分子机制。方法:采用全基因组高通量的Illumina测序技术,对4例二期梅毒患者和4例健康对照者外周血单个核细胞行数字基因转录组分析。后行实时PCR对其结果进行验证。结果:与健康对照者相比较,二期梅毒患者外周血单个核细胞共发现差异表达基因78个,其中有16个免疫应答相关基因。肿瘤坏死因子超家族成员17(TNFRSF17)、IL-17C、IL-21、IL-31受体A(IL-31RA)、C-X-C配体10(CXCL10)、趋化因子配体1(CCL1)等炎症因子和相关受体、CD4+T细胞激活标志CD38、Fc类吞噬性受体(FcγR1A、FcγR3B)以及补体(C2、SERPING1)等均显著上调。结论:二期梅毒患者多种天然免疫和适应性免疫分子参与机体系统性抗梅毒应答。     

基因芯片筛选颅内动脉瘤炎性相关基因的研究

目的采用基因芯片技术探讨颅内动脉瘤患者血液单核细胞中炎性相关基因的表达情况。方法采集50例颅内动脉瘤患者外周血，10名正常成人作为对照组，分离血液单核细胞，提取总RNA，与含22215个人类基因的寡核苷酸基因芯片杂交、洗脱、染色和扫描，分析检测的数据。荧光定量RT-PCR验证芯片结果。结果检测的22215个基因中，颅内动脉瘤共差异表达的基因有325个，差异水平均达2倍以上的基因有35个，生物信息学分析发现有16个基因与炎症反应和免疫应答有关，其中上调10个基因，下调6个。结论血液单核细胞基因表达谱是研究颅内动脉瘤发病机制的新策略，炎症反应和免疫应答可能是颅内动脉瘤形成和发展的重要机制。     

从体外培养的外周血单个核细胞克隆人白细胞介素-10 cDNA

目的从体外培养的外周血单个核细胞克隆人白细胞介素(hlL)-10cDNA。方法淋巴细胞分离液自静脉血中分离出外周血单个核细胞(PBMCs)，含ConA的RPMI1640培养24h，提取总RNA，逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)扩增hIL-10cDNA，克隆入pUCm—T载体，转化感受态细胞DH5α，蓝白筛选，PCR及PvuⅠ、NotⅠ双酶切鉴定，重组DNA测序。结果RT—PCR扩增产物560bp，与预期片段大小一致，随机挑取白色菌落，小量提取的质粒经PCR、限制性内切酶酶切鉴定，目的条带与预期片段的大小均一致，测序结果与Genebank公布的hIL-10cDNA序列完全一致。结论从PBMC中扩增hIL-10cDNA，克隆至pUCm—T载体，方法较为简便，为进一步进行亚克隆及表达研究提供了可靠的前提条件。     

Proto-oncogene expression in peripheral blood mononuclear cells in IgA nephropathy.

We have investigated the expression of proto-oncogenes in mononuclear cells obtained from patients with IgA nephropathy using a RNA hybridization technique. Patients with IgA nephropathy expressed more c-myc, c-raf, c-fos, and c-jun proto-oncogene RNA than did normal controls. However, no significant expression of c-N-ras, c-mos or c-myb genes was found in the mononuclear cells of these patients. When the amount of urinary protein excretion was used as an indicator of disease activity (greater than 1 g/day), a positive correlation was found between c-myc, c-raf, c-fos, and c-jun expression and urinary protein excretion (P less than 0.01). The expression of these genes correlated also with the serum IgA concentration (P less than 0.01), IgA immune complex (P less than 0.01), and histopathological changes in renal tissues obtained from patients with IgA nephropathy (P less than 0.01). The results of this survey suggest that abnormally regulated proto-oncogene expression in mononuclear cells may play an important role in the progression of IgA nephropathy and may be useful as an indicator of disease activity and/or prognosis.     

Decreased interleukin-18 expression in BAL cells and peripheral blood mononuclear cells in adult cystic fibrosis patients.

Lymphocytes from cystic fibrosis (CF) patients secrete less interferon-gamma (IFN-gamma) upon stimulation compared to controls. Expression of interleukin (IL)-18 as an IFN-gamma inducing factor and of IL-10 as an IL-18 inhibiting factor were determined in bronchoalveolar lavage (BAL) cells from CF patients (n=5) and from normal control subjects (n=9) as well as in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from patients (n=12) and from control subjects (n=9) with RT-PCR. IL-18 and IL-10 serum protein levels were measured using ELISA. BAL cells and PBMC of CF patients expressed significantly less IL-18 compared to controls (p<0.05). There was no significant difference for IL-10 in BAL cells. However, PBMC from patients expressed significantly more IL-10 mRNA (p<0.05). IL-18 serum protein levels were decreased in the patient group, whereas IL-10 serum concentrations were elevated. Stimulation with rhIL-10 reduced IL-18 expression in PBMC from CF patients. Decreased IL-18 expression in CF patients may contribute to decreased IFN-gamma production. IL-10 may contribute to inhibit IL-18 expression in PBMC in CF.