HPLC测定天山花楸叶提取物中6种黄酮成分

目的：建立抱茎獐牙菜质量标准中合适的含量测定方法。方法：采用HPLC同时测定抱茎獐牙菜中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、芒果苷、獐牙菜苷、齐墩果酸的含量。以甲醇-0.02%磷酸为流动相,梯度洗脱,资生堂 UG120 C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,柱温25 ℃,流速1.0 mL·min^-1,检测波长243 nm。结果：獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、芒果苷分别在1.50~18.04,0.37~4.49,0.06~0.70 μg线性关系良好,r均为1.000 0。平均加样回收率分别为96.3%,99.0%,101.0%。结论：獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、芒果苷3种成分在抱茎獐牙菜中的分离度良好,检出量合适。选定的方法重复好,结果准确,可作为抱茎獐牙菜质量标准中含量测定的方法,并为区别其他獐牙菜,合理利用开发抱茎獐牙菜资源提供重要参考。     

藏药材印度獐牙菜质量标准研究

 目的 建立印度獐牙菜药材的质量标准。方法 采用薄层色谱法鉴别印度獐牙菜药材中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和芒果苷成分;以高效液相色谱法测定该3种成分的含量。色谱柱为Zorbax Eclipse XDB-C₁₈（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相为甲醇-水（0.1%冰醋酸）线性梯度洗脱,甲醇体积分数从22%经18 min至32% 并保持5 min,流速为1.0 mL·min-1,柱温为25 ℃,检测波长为243 nm。结果 印度獐牙菜药材中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和芒果苷的薄层色谱鉴别特征明显,专属性强;药材中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和芒果苷的含量测定线性范围分别为0.06~2.00 μg(r=0.999 7),0.09~2.90 μg(r=0.999 7)和0.05~1.65 μg(r=0.999 8),平均回收率（n=9）分别为103.76 % (RSD=1.34 %),99.43 % (RSD=1.60%)和96.22% (RSD=1.30%)。结论 所建立的印度獐牙菜定性定量测定方法简单准确,能够为印度獐牙菜药材的质量控制提供有效数据。     

RP-HPLC测定不同海拔新疆假龙胆中3种有效成分的含量

目的： 建立不同海拔蒙药新疆假龙胆中3种有效成分的RP-HPLC测定方法。方法： 采用ZORBAX SB-C₁₈柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱,流速1.0 mL·min^-1,獐牙菜苦苷、龙胆苦苷的流动相为甲醇-水（20:80）,芒果苷的流动相为甲醇-0.5%乙酸（25:75）,检测波长分别为獐牙菜苦苷238 nm,龙胆苦苷270 nm,芒果苷254 nm,柱温25℃。结果： 实验所建立的测定方法简便准确,在1 900~3 035 m的不同海拔的新疆假龙胆中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、芒果苷的含量变化范围分别是1.30%~2.48%,0.377%~0.508%,0.041%~0.071%。结论： 不同海拔的新疆假龙胆中3种有效成分含量随海拔高度增高均呈增加趋势。     

基于UPLC-MS/MS和分子对接技术考察聚乙二醇400对黄芩苷药代动力学、抗炎作用的影响

目的 考察药用辅料聚乙二醇400（PEG400）对黄芩苷药代动力学及抗炎作用的影响,利用分子对接技术初步探讨黄芩苷及其主要代谢物黄芩素6-O-β-D-葡萄糖醛酸苷（B6G）的抗炎作用。方法 大鼠随机分为2组,分别以水和PEG400为溶解基质,给大鼠灌胃相等剂量的黄芩苷水溶液（黄芩苷+水组）与黄芩苷PEG400溶液（黄芩苷+PEG400组）,不同时间段血浆样品经处理后,利用超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）测定大鼠血浆中黄芩苷及其主要代谢物B6G的浓度,运用DAS 3.2.2软件处理药代动力学参数;将小鼠随机分为空白组（生理盐水,20 mL·kg^-1）,阿司匹林组（0.2 g·kg^-1）,黄芩苷/黄芩苷+PEG400高、低剂量（3.0,1.5 g·kg^-1）组,连续给药7 d,建立小鼠耳肿胀及足肿胀模型,计算肿胀度及肿胀抑制率。结果 药代动力学研究结果显示,与黄芩苷+水组相比,大鼠灌胃黄芩苷PEG400溶液后黄芩苷及B6G的血药浓度增加,药时曲线下面积（AUC_0-t）分别提高了2.36,1.97倍,药峰浓度（C_max）分别提高了2.12,1.65倍;小鼠耳肿胀和足肿胀炎症模型结果表明,小鼠灌胃黄芩苷PEG400溶液后抗炎效果增强。此外,分子对接结果表明黄芩苷与B6G可以与多靶点蛋白［肿瘤坏死因子（TNF）-α,白细胞介素（IL）-6,IL-1β,前列腺素E₂（PGE₂）,核转录因子-κB（NF-κB）］位点结合,具有较高亲和力,且优于阳性药阿司匹林。结论 PEG400可提高黄芩苷及其主要代谢物B6G的血药浓度,且抗炎效果增强,黄芩苷与B6G可以与多种炎症因子及核转录因子靶点蛋白形成较强的氢键,推测黄芩苷及B6G共同发挥了抗炎作用。     

基于TLR4/NF-κB通路探讨蛤蚧提取物对利血平诱导抑郁大鼠神经炎症的影响

目的 观察蛤蚧提取物的抗抑郁作用,并探讨其作用机制。方法 腹腔注射利血平（0.5 mg·kg^-1）诱导大鼠抑郁模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组,氟西汀组（1.8 mg·kg^-1）,蛤蚧提取物高、低剂量组（12,6 g·kg^-1）,分别给予相应剂量药物,1次/d,连续给药10 d。给药结束后,通过酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测大鼠血清和前额皮层中神经递质及炎症因子的水平;通过苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠海马组织中细胞的变化情况;通过实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠海马组织中白细胞介素-6（IL-6）,核转录因子-κB（NF-κB）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA的水平;通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠海马组织中Toll样受体4（TLR4）,NF-κB蛋白水平。结果 与正常组比较,蛤蚧提取物能明显缩短大鼠的悬尾不动时间和游泳不动时间;与模型组比较,蛤蚧提取物能明显减少大鼠眼睑下垂现象和圈内保留时间（P<0.05）;升高血清中5-羟色胺（5-HT）,多巴胺（DA）的水平（P<0.05）,降低血清和前额皮层中MAO,IL-6,TNF-α的水平（P<0.05）;降低大鼠海马组织中炎症因子IL-6,NF-κB,TNF-α mRNA的水平以及TLR4,NF-κB蛋白的表达（P<0.05,P<0.01）;改善大鼠海马组织的病理症状。结论 蛤蚧提取物通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低大鼠海马组织中NF-κB,IL-6等炎症因子的表达,减轻抑郁病理损伤,从而减轻抑郁症状。     

痰瘀同治调控TLR4/NF-κB/IκB通路对糖尿病大鼠心肌炎症反应的影响

目的 观察痰瘀同治对糖尿病大鼠心肌Toll样受体4（TLR4）/核转录因子-κB（NF-κB）/核转录因子-κB抑制蛋白（IκB）信号通路的干预作用,探讨其改善糖尿病大鼠心肌炎症病变的相关机制。方法 选取清洁级雄性SD大鼠45只,随机分为正常组、化痰组、化瘀组、痰瘀同治组、阿拉氯胺组、模型组。除正常组外,其余各大鼠单次腹腔注射链脲佐菌素（STZ）55 mg·kg^-1建立糖尿病模型,正常喂养3周后,化痰组、化瘀组、痰瘀同治组每日分别给予小陷胸汤（4.05 g·kg^-1）,血府逐瘀汤（7.02 g·kg^-1）,抵当陷胸汤（8.10 g·kg^-1）灌胃,阿拉氯胺组每日予阿拉氯胺（3 mg·kg^-1）灌胃,连续给药8周后麻醉取材。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测心肌组织TLR4蛋白及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平;免疫组化法检测NF-κB p65和NF-κB抑制蛋白α（IκBα）表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠心肌TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α的mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各用药组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平均有不同程度下降（P<0.01）;组间比较发现,痰瘀同治组TLR4,NF-κB p65,IκBα及TNF-α蛋白和mRNA表达水平比化瘀组和化痰组下降更明显（P<0.05,P<0.01）。结论 痰瘀同治法能够改善糖尿病大鼠心肌炎症病变,且效果优于单独使用化痰法或化瘀法,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB/IκB信号通路的激活有关。     

蔓性千斤拔素D通过TLR2/MyD88/NF-κB信号通路调控CIA大鼠炎症反应的相关机制

目的 观察蔓性千斤拔素D对大鼠胶原诱导型关节炎（CIA）的作用并探讨其作用机制。方法 将40只大鼠随机分为正常组、CIA组、甲氨蝶呤（MTX）组（1.35 mg·kg^-1）、蔓性千斤拔素D低剂量组（1.5 mg·kg^-1）及蔓性千斤拔素D高剂量组（3.0 mg·kg^-1）,每组8只,除正常组外,其余均采用Ⅱ型胶原诱导CIA模型。给药组通过灌胃给予相应药液,正常组给予相应体积生理盐水,MTX组每周1次,蔓性千斤拔素D各组每天1次,共给药28 d。实验中记录各组大鼠关节炎评分和关节肿胀度,苏木素-伊红（HE）染色观察各组大鼠踝关节病理学变化,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清炎症因子白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子（TNF）-α水平,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测Toll样受体2（TLR2）、髓样分化因子88（MyD88）、核转录因子-κB（NF-κB） p65 mRNA的表达量,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测TLR2、MyD88、NF-κB p65蛋白的表达量。结果 与正常组比较,CIA组大鼠踝关节明显肿胀,关节炎临床评分及关节肿胀度显著升高（P<0.01）,踝关节组织结构明显破坏,血清炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量显著升高（P<0.01）,TLR2、MyD88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与CIA组比较,各给药组大鼠关节炎临床评分及关节肿胀度均明显降低（P<0.05,P<0.01）,踝关节组织结构病理变化明显改善,血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量均明显降低（P<0.05,P<0.01）,踝关节TLR2、MyD88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平均明显下降（P<0.05,P<0.01）。结论 蔓性千斤拔素D在一定程度上可降低类风湿关节炎大鼠炎性因子的表达,能起到良好的治疗作用,其作用机制可能是通过抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路的活化而发挥抗炎作用。     

丽江獐牙菜化学成分及抗乙肝病毒活性研究

利用各种色谱方法对丽江獐牙菜Swertia delavayi全草的化学成分进行提取、分离和纯化,得到15个单体化合物,通过波谱数据分析(MS,¹H,¹³C-NMR) 对其结构进行鉴定,分别为红白金花内酯(erythrocentaurin, 1)、红白金花内酯缩二甲醇(erythrocentaurin dimethylacetal, 2)、獐牙菜苷(sweroside, 3)、獐牙菜苦苷(swertiamarin, 4)、龙胆苦苷(gentiopicroside, 5)、贵州獐牙菜苷A(swertiakoside A, 6)、2'-O-乙酰基獐牙菜(2'-O-acetylswertiamarin, 7)、4'-O-[(Z)-对香豆酰基]獐牙菜苦苷(4'-O-[(Z)-coumaroyl]- swertiamarin, 8)、1,5,8-三羟基-3-甲氧基 NFDE8 酮(1,5,8-trihydroxy-3-methoxyxanthone, 9)、8-O-β-D-吡喃葡萄糖-1-羟基-2,3,5-三甲基 NFDE8 酮(8-O-β-D-glucopyranosyl-1- hydroxy-2,3,5-trimethoxyxanthone, 10)、8-O-[β-D-吡喃木糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖]-1羟基-2,3,5-三甲氧基 NFDE8 酮(8-O-[β-D-xylopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranosyl]-1-hydroxy-2,3,5-methoxyxant-hone, 11)、异牡荆素(isovitexin, 12)、齐墩果酸(oleanolic acid, 13)、β-谷甾醇(β-sitosterol, 14) 和胡萝卜苷(daucosterol, 15),其中化合物 1~4, 7~11, 13 是首次从丽江獐牙菜中分离得到。在体外利用HepG 2.2.15细胞系对得到的单体化合物进行了抗乙肝病毒活性测试,其中化合物 1,2,6,7,9和12 具有明显的抑制HBV DNV的复制活性,其IC₅₀值为0.05~ 1.46 mmol·L^-1。     

赤雹果总有机酸解热作用及其机制

目的：观察赤雹果总有机酸（TOATDF）的解热作用,并探讨其机制。方法：SD大鼠ip 内毒素（LPS）100 μg·kg^-1制备大鼠发热模型。将模型大鼠随机分为 TOATDF 300,150,75 mg·kg^-1剂量组,阿司匹林150 mg·kg^-1对照组及模型组,另取10只大鼠作为正常对照。药后每1 h测量体温1次,连续6次。采用酶联免疫测定法（ELISA）法测定血清中前列腺素E₂（PGE₂）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素（IL）-1β及脑脊液中PGE₂表达水平。结果：TOATDF 300,150 mg·kg^-1剂量组大鼠各时间点的平均体温均低于模型组（P<0.05或 P<0.01）;75 mg·kg^-1组大鼠药后2~5 h体温明显低于模型组（P<0.05）;阿司匹林组药后1~5 h体温明显低于模型组。各给药组血清中TNF-α,PGE₂,IL-β及脑脊液中PGE₂的表达水平均显著低于模型模型组（P<0.05或P<0.01）,但高于正常对照组（P<0.05）。结论：TOATRF有明显的解热作用,并有一定的剂量-效应关系。其解热作用与抑制致热原诱发的PGE₂,TNF-α和IL-β等致热因子的产生或释放有关。     

HPLC法测定西藏秦艽花与川西秦艽花中7种成分的量

目的 建立测定西藏秦艽花和川西秦艽花中落干酸、6'-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、异荭草苷、异牡荆黄素7种成分的HPLC方法.方法 采用Agilent Zorbax ODS(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.4%醋酸水溶液梯度洗脱,体积流量0.4 mL/min,检测波长254 nm,柱温30 ℃.结果 落干酸、6'-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、异荭草苷和异牡荆黄素分别在0.228～2.280、0.680～6.800、0.220～2.200、1.476～14.760、0.200～2.000、0.436～4.360、0.276～2.760 μg进样量与峰面积积分值线性关系良好(R²≥0.999 2),落干酸、6'-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、异荭草苷及异牡荆黄素的平均回收率(n＝9)分别为100.9%、99.4%、101.0%、105.7%、103.1%、98.4%、104.2%.结论 该法简便、准确、专属性强,可用于西藏秦艽花和川西秦艽花中7种成分的测定.     

加味四物四藤汤不同提取方法对大鼠急性痛风性关节炎的作用研究

目的：研究加味四物四藤汤不同工艺提取物（TFT-I,TFT-Ⅱ）对尿酸钠晶体诱导的大鼠急性痛风性关节炎的影响。方法：选用SD大鼠,分为空白组、模型组、双氯芬酸钠组（0.007 g·kg^-1）、TFT-I低、高剂量组（1.24,2.48 g·kg^-1）、TFT-Ⅱ低、高剂量组（1.48,2.96 g·kg^-1）,各组均连续灌胃给药7 d,于第5天用尿酸钠晶体法造模。观察造模24 h后大鼠步态;用纸带法测定不同时相大鼠踝关节肿胀度;用酶联免疫吸附法测定大鼠踝关节组织中炎性因子白介素-1β（IL-1β）和环氧化酶-2（COX-2）的水平,采用同分异构体原理测定大鼠关节组织中前列腺素-2（PGE₂）的水平。结果：与正常组大鼠8 h关节肿胀（0.07±0.01）cm相比,模型组大鼠关节肿胀于8 h达到高峰（0.52±0.02）cm（P<0.05）,踝关节组织中IL-1β,COX-2和PGE₂水平均升高,分别为（4.79±0.34）,（14.94±1.50）μg·L^-1和（1.57±0.16）×10^-2（A）（P<0.05）。与模型组相比,TFT-I组对急性痛风性关节炎模型大鼠步态改善有显著性差异（P<0.05）;TFT-I显著降低模型大鼠踝关节肿胀程度及关节组织中IL-1β,COX-2和PGE₂水平,分别为（3.57±0.40）,（11.72±1.17）μg·L^-1和（1.20±0.11）×10^-2A（P<0.01）;TFT-Ⅱ对急性痛风性关节炎模型大鼠步态、降低踝关节肿胀度及上述炎性因子无显著影响。结论：TFT-I对尿酸钠晶体诱导的大鼠急性痛风性关节炎关节肿胀有显著的改善作用,其机制与抑制炎性因子IL-1β,COX-2和PGE₂的水平有关;在治疗痛风性关节炎时,加味四物四藤汤中来自“黄芪和四物汤”的醇溶性成分可能是本方剂的有效部位。     

RP-HPLC测定青海地区野生藏药线叶龙胆中4种主要活性成分的含量

目的：建立反相高效液相色谱法同时测定青海地区野生线叶龙胆中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷、异荭草苷的含量。方法：Kromasil C₁₈柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B),梯度洗脱,洗脱条件0.00～27.00 min,10%～17%A;27.00～45.00 min,17%～33%A;45.00～45.01 min,33%～100%A;45.01～55.00 min,100%～100%A;体积流量1.0 mL·min^-1,检测波长240 nm,柱温25 ℃。结果：獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐芽菜苷和异荭草苷均达到基线分离,分别在2.12～10.6,2.46～12.3,2.47～12.4,0.309～1.54 g·L^-1线性良好,r分别为0.999 4,0.999 7,0.999 2,0.999 5。结论：该方法快速、准确、重复性好,为该类药材的质量控制提供了理论依据。     

基于NF-κB/NLRP3通路探究十大功劳叶提取物对抑郁症大鼠炎症的影响及机制

目的 研究十大功劳叶提取物的抗抑郁作用及其潜在机制。方法 经HPLC-MS/MS手段鉴定分离十大功劳叶提取物主要化学成分。通过小鼠行为绝望实验初步探究十大功劳叶提取物的潜在抗抑郁作用,将小鼠随机分为空白组、氟西汀组（10 mg·kg^-1）、十大功劳叶提取物组（10、2.5 g·kg^-1）,连续灌胃给药12 d,于末次给药1 h后,测定小鼠游泳不动时间和悬尾不动时间。进而采用利血平（0.5 mg·kg^-1）腹腔注射诱导大鼠抑郁模型探究其抗抑郁作用机制,分组如下,分别为正常组、模型组、氟西汀组（1.8 mg·kg^-1）、十大功劳叶提取物组（10、2.5 g·kg^-1）,每天灌胃给药1次,连续10 d,末次给药1 h后,做行为学检查;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）的水平;免疫组化法测定大鼠脑组织中IL-6和IL-1β蛋白的表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠海马组织中核转录因子-κB（NF-κB）和NOD样受体蛋白3（NLRP3）蛋白的表达。结果 从十大功劳叶提取物中分离鉴定得到7种化学成分,主要为生物碱。小鼠行为绝望实验结果显示,与空白组比较,十大功劳叶提取物高剂量组小鼠游泳不动时间和悬尾不动时间明显缩短（P<0.05,P<0.01）。大鼠抑郁实验结果显示,与正常组比较,模型组中大鼠上睑下垂现象明显增加（P<0.05）,圈内保留时间显著延长（P<0.01）;大鼠血清中IL-6、TNF-α水平明显升高（P<0.05）;大鼠脑组织中IL-6、IL-1β免疫组织化学染色阳性表达率显著升高（P<0.01）;大鼠海马组织中NF-κB、NLRP3蛋白表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较,十大功劳叶提取物高剂量明显缩短大鼠在圈内保留时间（P<0.05）,降低大鼠血清中IL-6、TNF-α水平（P<0.05,P<0.01）,降低大鼠脑组织中IL-6、IL-1β免疫组织化学染色阳性表达率（P<0.01）;降低大鼠海马组织中NF-κB、NLRP3蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。结论 十大功劳叶提取物具有明显的抗抑郁作用,且能改善利血平诱导的抑郁大鼠炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB/NLRP3信号通路有关。     

龙胆苦苷通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路减轻小鼠急性肝损伤的作用

目的 探究龙胆苦苷（GPS）对四氯化碳（CCl₄）诱导的急性肝损伤小鼠模型是否有保肝疗效及其对Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的影响。方法 将60只小鼠随机分为6组,每组10只,分别为正常组、模型组、水飞蓟素（150 mg·kg^-1）组及GPS高、中、低剂量组（200,100,50 mg·kg^-1）。给药组的小鼠按10 mL·kg^-1灌胃处理,正常组和模型组灌胃相同量的蒸馏水,每天1次,连续灌胃给药10 d后,除正常组腹腔注射花生油（10 mL·kg^-1）,其余各组腹腔注射0.12% CCl₄花生油（10 mL·kg^-1）溶液建立小鼠急性肝损伤模型。腹腔注射后禁食16 h,摘除小鼠眼球取血,收集肝脏组织。苏木素-伊红（HE）染色观察肝组织病理学改变。生化法检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）,天门冬氨酸氨基转移酶（AST）,总胆红素（TBIL）,碱性磷酸酶（ALP）,总超氧化物歧化酶（T-SOD）,γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）的水平,肝组织中丙二醛（MDA）,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的水平;酶联免疫吸附法（ELISA）检测小鼠肝脏组织中的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,白细胞介素-1β（IL-1β）,白细胞介素-6（IL-6）含量。蛋白免疫印迹法（Western blot）测定肝脏组织中TLR4,MyD88,NF-κB蛋白表达情况;免疫组化检测磷酸化NF-κB（p-NF-κB）的表达。结果 与正常组比较,模型组小鼠的ALT,AST,ALP,TBIL,γ-GT及MDA水平显著升高（P<0.01）,T-SOD,GSH-Px活性显著降低（P<0.01）;与模型组比较,GPS中、高剂量组小鼠的ALT,AST,ALP,TBIL,γ-GT及MDA水平降低（P<0.05,P<0.01）,T-SOD、GSH-Px活性明显上升（P<0.05,P<0.01）;与正常组比较,模型组小鼠肝组织中TNF-α,IL-1β,IL-6含量显著升高（P<0.01）,TLR4,MyD88,p-NF-κB蛋白表达显著上升（P<0.01）;与模型组比较,GPS中、高剂量组小鼠肝组织中TNF-α,IL-1β,IL-6含量明显降低（P<0.05,P<0.01）,TLR4,MyD88,p-NF-κB蛋白表达明显下调（P<0.05,P<0.01）。结论 GPS对CCl₄引起的急性肝损伤小鼠具有一定的保肝效果,其作用机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及减弱氧化应激反应相关。     

不同产地麻花秦艽中5种环烯醚萜苷成分的含量比较

目的: 建立HPLC同时测定麻花秦艽中马钱苷酸、龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷、山栀苷甲酯含量的方法。方法: 采用Diamonsil C₁₈色谱柱(4.6 mm× 250 mm,5 μm),流动相乙腈-0.05%磷酸水梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温30 ℃, 检测波长240 nm。结果: 以上5种环烯醚萜类成分的线性范围分别为0.042 1~8.420 0(r=0.999 7),0.094 2~18.830 0(r=1.000 0),0.012 4~2.471 2(r=0.999 9),0.009 9~1.971 2(r=1.000 0),0.011 3~2.260 0 μg (r=0.999 0),平均回收率均在95.39%~103.75%,RSD≤2.6%。结论: 该法简便、快速、准确,可以用来同时测定麻花秦艽中5种环烯醚萜苷成分的含量。     

护卵汤对早发性卵巢功能不全模型小鼠SIRT1/NF-κB/p53/p21通路的影响

目的 观察护卵汤对雷公藤多苷诱导早发性卵巢功能不全模型小鼠卵巢组织中凋亡相关蛋白沉默信息调节子1（SIRT1），肿瘤抑制基因p53，乙酰化p53（Ac-p53），细胞周期蛋白依赖性抑制剂p21，核转录因子-κB （NF-κB） p65表达情况及组织结构变化。方法 50只雌性C57BL/6J小鼠随机分正常组、模型组、护卵汤低、高剂量组、戊酸雌二醇组，采用雷公藤多苷80 mg·kg^-1·d^-1连续灌胃，第15天给予护卵汤低、高剂量组1.6，6.2 g·kg^-1·d^-1灌胃，戊酸雌二醇组给予戊酸雌二醇0.13 mg·kg^-1·d^-1，连续21 d，正常组予等量蒸馏水。末次给药后取血和卵巢，苏木素-伊红（HE）染色观察组织形态学变化，ELISA检测血清中抗苗勒激素（AMH），促卵泡激素（FSH），黄体生成素（LH）水平含量，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）法检测p53，p21 mRNA表达水平，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测SIRT1，p53，p21，Ac-p53，NF-κB蛋白表达水平。结果 与正常组比较，模型组小鼠动情周期紊乱，卵巢体积减小，各级卵泡数明显减少，AMH含量降低，FSH，LH含量升高，p53，p21 mRNA表达显著升高，p53，p21，Ac-p53，NF-κB蛋白表达显著升高，SIRT1蛋白表达显著降低（P<0.01）；与模型组比较，护卵汤高剂量组卵泡增多，AMH升高，FSH，LH降低，SIRT1蛋白表达升高（P<0.01），p53，p21 mRNA表达水平显著下调（P<0.01），p53，p21，Ac-p53，NF-κB蛋白表达明显降低（P<0.01）。结论 护卵汤的治疗可明显扭转衰老进程，其改善卵巢功能的机制可能与提高了卵巢细胞中 SIRT1/NF-κB/p53/p21通路活性，改变细胞凋亡状态相关，从而增加了生长卵泡及成熟卵泡含量，降低了闭锁卵泡的含量。     

RP-HPLC测定当药中环烯醚萜和三萜类成分含量

目的：建立应用RP-HPLC测定当药及不同部位中獐牙菜苦苷、当药苷、龙胆苦苷和齐墩果酸的含量测定方法。方法：采用ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,流动相分别为乙腈-水(10∶90)和甲醇-水(86∶14),流速1.0 mL·min^-1,检测波长分别为獐牙菜苦苷238 nm、当药苷246 nm、龙胆苦苷274 nm和齐墩果酸207 nm,柱温25 ℃。结果：獐牙菜苦苷、当药苷、龙胆苦苷和齐墩果酸分别在0.034 2～0.427 5,0.001 1～0.014 0,0.000 7～0.008 8,0.001 1～0.008 8 mg·mL^-1线性关系良好,R2分别为0.999 2,0.999 8,0.999 9,0.999 6。结论：本法方便、准确,可用于当药药材的质量控制。     

基于TNF/NF-κB信号通路探讨枳实薤白桂枝汤减轻心肌梗死大鼠心肌损伤的作用机制

目的 从肿瘤坏死因子/核转录因子-κB（TNF/NF-κB）信号通路探讨枳实薤白桂枝汤（ZXGT）对异丙肾上腺素（ISO）诱导的大鼠心肌梗死（MI）的影响。方法 将48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、培哚普利组（4 mg·kg^-1）、ZXGT组（24.4 g·kg^-1）、ZXGT+抑制剂组（ZXGT,24.4 g·kg^-1;TNF-α受体抑制剂R7050,5 mg·kg^-1）、抑制剂组（R7050,5 mg·kg^-1）,每组8只;各组大鼠预防性灌胃给药7 d,且ZXGT+抑制剂组、抑制剂组在第6、第7天给予腹腔注射抑制剂R7050 5 mg·kg^-1,除空白组外其余各组腹腔注射ISO,连续2 d,诱导大鼠MI模型;于实验第7天注射ISO 30 min后麻醉大鼠,检测心电图（ECG）观察ST段抬高值;采用小动物超声心动图检测大鼠心脏整体轴向应变（GLS）和心脏同步性;腹主动脉取血测定血清心肌肌钙蛋白T（cTnT）、肌酸激酶MB同工酶（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）水平及炎症因子TNF-α、白细胞介素-1β（IL-1β）水平;苏木素-伊红（HE）染色观察心肌组织病理变化;免疫组化（IHC）法检测心脏组织TNF-α、NF-κB p65、磷酸化（p）-NF-κB p65蛋白表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测心脏组织肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）、肿瘤坏死因子受体相关因子2（TRAF2）、转化生长因子激酶1（TAK1）、NF-κB抑制蛋白α（IκBα）、p-IκBα、NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠ECG ST段显著抬高（P<0.01）,超声心动图中GLS增大及同步性显著降低（P<0.01）,病理组织学显示心肌大面积坏死,血清cTnT、CK-MB、LDH、TNF-α、IL-1β水平显著升高（P<0.01）,心肌组织中的TNF-α、TNFR1、TRAF2、TAK1、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达水平显著升高（P<0.01）,IκBα蛋白表达水平显著降低（P<0.01）;与模型组比较,培哚普利组、ZXGT组、ZXGT+抑制剂组和抑制剂组大鼠的ECG ST段抬高值明显降低（P<0.05,P<0.01）,GLS和心脏同步性改善（P<0.05,P<0.01）,心肌坏死面积减小,血清cTnT、CK-MB、LDH、TNF-α、IL-1β水平均下调（P<0.01）,且ZXGT组、ZXGT+抑制剂组和抑制剂组均下调模型大鼠升高的TNF-α、TNFR1、TRAF2、TAK1、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达水平和上调IκBα的表达水平（P<0.05,P<0.01）;与ZXGT组比较,ZXGT+抑制剂组和抑制剂组差异无统计学意义。结论 ZXGT能保护ISO诱导的大鼠MI损伤,改善心脏功能,其作用机制可能与调控TNF/NF-κB信号通路有关。     

川芎嗪联合大黄素抑制腹水癌细胞HIF-1α通路相关因子表达的作用研究

目的 从抑制癌细胞缺氧诱导因子（HIF）信号通路中核转录因子-κB（NF-κB），HIF-1α及血管内皮生长因子-C（VEGF-C）的角度探讨川芎嗪和大黄素合用抑制腹水癌细胞新生血管的作用。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、川芎嗪组、大黄素组、川芎嗪+大黄素组，各实验组采用原位注射法对正常大鼠肝脏注射大鼠腹水癌细胞（Walker-256细胞），假手术组注射同等体积生理盐水，并分组灌胃给药川芎嗪（10 mg·kg^-1），大黄素（10 mg·kg^-1），川芎嗪+大黄素（川芎嗪10 mg·kg^-1+大黄素10 mg·kg^-1），给药7 d后取实验组肝脏肿瘤接种组织样本制作病理切片，观察肿瘤细胞存留状态和VEGF的表达情况。分别构建Walker-256细胞体外氧糖剥夺模型（缺氧缺糖模型）、单缺氧模型和单缺糖模型。川芎嗪组、大黄素组及川芎嗪+大黄素组均选择不影响Walker-256增殖的3个连续浓度作为考察浓度，造模前给药，模型处理时间4 h，检测各组细胞培养上清液中HIF-1α，VEGF-C，NF-κB的水平。结果 大鼠肝脏在接种Walker-256细胞后，肝脏总质量明显升高（P<0.05），川芎嗪组，大黄素组和川芎嗪+大黄素组肝脏总质量较模型组明显降低（P<0.05），组织病理学检测显示，各给药组肝脏组织中的VEGF表达响应均低于模型组；在细胞水平，川芎嗪组和川芎嗪+大黄素组缺氧缺糖模型的HIF-1α，VEGF-C，NF-κB水平均明显降低（P<0.05），呈一定的剂量依赖性，对单缺氧模型作用有一定降低作用；大黄素1×10^-2，1×10^-3 mol·L^-1组和川芎嗪+大黄素1×10^-2，1×10^-3 mol·L^-1组明显降低缺氧缺糖和单缺糖模型中HIF-1α，NF-κB的水平（P<0.05），而所有给药组对单缺糖模型中VEGF-C作用不显著，差异无统计学意义。结论 川芎嗪和大黄素单用和川芎嗪+大黄素联合使用均可抑制大鼠肝脏在接种Walker-256细胞后重量的异常升高，并抑制肝脏组织的VEGF表达；川芎嗪和大黄素可以抑制NF-κB，HIF-1α的蛋白表达，从而减少了HIF-1α转录激活的转移相关靶基因蛋白VEGF的表达、限制肿瘤细胞新生血管的生成以达到抑制腹水癌细胞侵袭和扩散。其中川芎嗪对缺氧的作用最显著，葡萄糖对川芎嗪的作用有干预，与大黄素合用时葡萄糖的干预作用降低，合用对肿瘤细胞的作用更稳定。     

玉郎伞提取物对大鼠急性肺损伤的影响

目的：探讨玉郎伞（YLS）提取物对大鼠急性肺损伤（ALI）的影响。方法：将Wistar大鼠随机分为7组,分别为正常组,模型组,阳性对照组（地塞米松,3 mg·kg^-1）,玉郎伞水提物（TYLS）高、低剂量组（按生药量计60,30 g·kg^-1）,YLS总黄酮（FYLS）高、低剂量组（0.1,0.05 g·kg^-1）,每组动物连续灌胃给药7 d,于末次给药后30 min,采用腹腔注射20%酵母混悬液5 mL·kg^-1 2次诱发大鼠急性肺损伤模型。最后测定肺组织的湿干比重（W/D）和肺组织髓过氧化物酶（MPO）的活性,免疫组化法测定大鼠肺组织中核因子-κB p65（NF-κB p65）的表达、ELISA法测定肺组织白介素-1β（IL-1β）的含量,并HE染色观察肺组织病理形态改变。结果：与正常组比较,模型组肺W/D和MPO活性增大、肺组织IL-1β含量增加、NF-κB p65表达升高（均P<0.01）,肺组织有炎性病理改变。与模型组比较,TYLS高、低剂量组（4.31±0.15）,（4.72±0.35）及FYLS高剂量组（4.74±0.23）肺W/D低于模型组（5.01±0.33）（P<0.05,P<0.01）;TYLS高剂量组及FYLS高剂量组的肺MPO活性为（1.000±0.304）,（0.956±0.139）U·g湿片^-1,肺IL-1β含量为（265.58±47.05）,（222.31±53.99）ng·L^-1,肺组织细胞NF-κB p65阳性率为（51.00±8.62）%,（48.88±11.80）%,均比模型组明显降低（P<0.05,P<0.01）;另外,从组织病理学角度上看,TYLS及FYLS组肺损伤程度也有所减轻,以高剂量组较为明显。结论：预先给予TYLS或FYLS可明显减轻ALI大鼠肺组织炎症反应及肺水肿程度,其机制可能是通过干扰NF-κB途径从而抑制IL-1β生成。