加味四妙散对急性痛风性关节炎患者NLRP3 炎症信号通路的影响

〔摘 要〕 目的：观察加味四妙散治疗急性痛风性关节炎（AGA）的临床疗效,并探讨其对 NOD 样受体蛋白 3（NLRP3）炎症信号通路的影响。方法：选取深圳市罗湖区中医院（上海中医药大学深圳医院）2019 年 10 月至 2021 年 5 月期间收治的 80 例 AGA 湿热蕴结证患者,随机分为 A 组与Ｂ组,各 40 例。其中 A 组给予秋水仙碱片、布洛芬缓释胶囊治疗,B 组给予秋水仙碱片、布洛芬缓释胶囊联合加味四妙散治疗。连续治疗 1 周,观察两组治疗前后血尿酸、红细胞沉降率、C 反应蛋白（CRP）、白细胞介素 –1β（IL–1β）和 IL–18、外周血单核细胞（PBMCs）中 NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、半胱天冬酶 –1（Caspase–1）基因表达水平及中医证候疗效情况。结果：B 组在血尿酸、红细胞沉降率、CRP、IL–1β 和IL–18、PBMCs 中 NLRP3、ACS、Caspase–1 基因表达水平上改善均优于 A 组（P ＜ 0.05 或 P ＜ 0.01）;A 组总有效率87.50 %,B 组总有效率 95.00 %,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。结论：在西药常规治疗的基础上加服加味四妙散能更有效的改善 AGA 湿热蕴结证患者的症状,其作用机制可能与抑制 PBMCs 中 NLRP3、ACS、Caspase–1 基因表达,减少IL–1β 和 IL–18 炎症因子释放相关。     

加味四妙散对急性痛风性关节炎大鼠miR-223-3p与NLRP3/IL-1β信号通路的影响

目的 通过研究加味四妙散对急性痛风性关节炎（AGA）大鼠模型miR-223-3p与NOD样受体蛋白3（NLRP3）/白细胞介素-1β（IL-1β）信号通路的影响,探讨加味四妙散对AGA的抗炎机制。方法 选取8周龄雄性SD大鼠72只,按随机数字表法分空白组、模型组、秋水仙碱组（0.3 mg·kg^-1）、加味四妙散高剂量组（31.75 g·kg^-1）、加味四妙散中剂量组（15.75 g·kg^-1）、加味四妙散低剂量组（7.875 g·kg^-1）,每组12只,除空白组外,其余各组采用Coderre法于大鼠右侧踝关节注射单钠尿酸盐（MSU）晶体混悬液,复制急性痛风性关节炎大鼠模型,给药组分别给予相应药液灌胃,模型组和空白组给予等体积的无菌生理盐水溶液灌胃,连续1周。测量大鼠踝关节周径并计算踝关节肿胀度,苏木素-伊红（HE）染色法检测大鼠踝关节滑膜组织病理形态的变化,采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠血清中IL-1β、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠滑膜组织中NLRP3、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）的蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠滑膜组织中NLRP3、Caspase-1、ASC mRNA的表达和miR-223-3p的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠踝关节肿胀度显著升高（P<0.01）,滑膜组织结构紊乱,滑膜细胞增生明显,有大量炎症细胞浸润,大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著上升（P<0.01）,NLRP3、Caspase-1、ASC的蛋白与mRNA表达增加,miR-223-3p的表达下降;与模型组比较,秋水仙碱组、加味四妙散高、中剂量组关节肿胀度明显降低（P<0.05）,秋水仙碱组、加味四妙散高、中、低剂量组滑膜细胞增生及炎性细胞浸润较模型组均有不同程度减轻,其中秋水仙碱组和加味四妙散高剂量组改善最为明显,加味四妙散各剂量组和秋水仙碱组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著下降（P<0.01）,NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白与mRNA表达增加（P<0.01）,加味四妙散中、高剂量组和秋水仙碱组大鼠滑膜组织中miR-223-3p的表达显著升高（P<0.01）;与秋水仙碱组比较,加味四妙散低剂量组IL-1β、IL-6、TNF-α显著升高（P<0.01）,加味四妙散中剂量组NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白表达升高、miR-223-3p表达下降（P<0.05）,低剂量组IL-1β、IL-6、TNF-α水平明显升高（P<0.01）,NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白表达与mRNA表达升高、miR-223-3p表达下降（P<0.01）。结论 加味四妙散方可能通过调控miR-223-3p干预NLRP3/IL-1β信号通路发挥抑制炎症的作用。     

加味四妙散对湿热痹阻型慢性痛风性关节炎炎症因子的影响及相关性分析

目的：通过分析慢性痛风与白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与中医症状及临床指标间存在的关联性,探究加味四妙散治疗慢性痛风的作用机制。方法：60例符合纳入标准的湿热痹阻型慢性痛风性关节炎患者,依据随机数字表随机分为观察组和对照组各30例,同时设健康组30例。对照组给予口服非布司他治疗;观察组在对照组的基础上联合加味四妙散治疗,治疗周期为4周。观察患者一般临床资料、中医症状积分、生化学指标,同时采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定IL-1β、TNF-α和IL-6水平,分析IL-1β、IL-6、TNF-α与中医证候积分及生化学指标的相关性。结果：与健康组相比,慢性痛风患者IL-1β、TNF-α、IL-6水平显著升高（P <0.01）;慢性痛风患者关节疼痛、关节肿胀、大便黏滞及舌象与IL-1β、TNF-α和IL-6呈正相关,关节压痛、关节发热及身体倦怠与IL-1β、TNF-α呈正相关;黏腻、口苦及小便与TNF-α呈正相关,脉象与IL-1β呈正相关,IL-1β与FPG、TC、ESR、VAS评分呈正相关,TNF-α与BMI、UA、HDL...     

四黄膏外敷结合清热利湿通络法治疗急性痛风性关节炎（湿热蕴结证）的疗效观察

目的观察四黄膏外敷结合清热利湿通络法治疗急性痛风性关节炎(湿热蕴结证)的临床疗效并探讨其作用机制。方法 71例门诊患者按随机数字表法分为治疗组35例与对照组36例,对照组给予口服依托考昔片,治疗组予以口服清热利湿通络中药,同时在发病部位贴敷四黄膏,两组均治疗14 d,观察两组患者在治疗后第3日、第7日、第14日的11点疼痛程度数字等级量表(NRS-11)积分、关节肿胀及活动受限情况,观察患者在治疗前后(2周)的血尿酸(BUA)、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)的变化情况,同时分析两组患者的并发症发生情况。结果治疗组总有效率为91.43%,显著高于对照组的72.22%(P <0.05)。与治疗前相比较,两组患者治疗后第3日、第7日以及两周后的NRS-11、关节肿胀、关节活动受限3项主要临床症状指标均明显改善(P <0.05),实验室指标BUA和CRP均有明显下降(P <0.05)。1个疗程治疗后两组患者在关节肿胀及CRP两项指标上表现出明显的差异(P <0.05),两组患者在NRS-11、关节活动受限、ESR方面,没有明显差异(P> 0.05)。在不良反应方面,治疗组患者明显较少。结论四黄膏外敷结合清热利湿通络法治疗急性痛风性关节炎(湿热蕴结证)可以有效缓解疼痛,改善关节肿胀,较好地减轻机体炎症反应,安全性较好。     

清热通络方对痛风性关节炎大鼠P2X7R/NALP3/IL-1β信号通路的影响

目的：研究清热通络方通过P2X7R/NALP3/IL-1β炎症信号通路干预痛风性关节炎(GA)大鼠的作用机制。方法：60只雄性SD大鼠随机分为空白对照组,模型组,秋水仙碱组,清热通络方低、中、高剂量组(1.63、8.14、16.3 g·kg^-1·d^-1)。除空白对照组、模型组外,各组大鼠预灌胃给药4 d。除空白对照组外,第4天灌胃后复制GA模型,造模后各时间段(4、6、12、24、48、72 h)检测大鼠踝关节肿胀率和热痛阈。给药7 d后取材,HE染色观察踝关节滑膜病理情况,生化法检测血清ATP水平,ELISA法测血清白细胞介素(IL)-8、IL-37、IL-1β水平,免疫组化法测滑膜组织P2X7R、NF-κB(P50、P65)、NALP3、IL-1β蛋白表达,RT-qPCR检测PBMCs P2X7R、IL-1β mRNA表达,Western Blot检测PBMCs P2X7R、IL-1β蛋白表达。结果：造模后4 h,各组大鼠踝关节肿胀率升高,24 h达高峰后下降;热痛阈下降,24 h达最低后上升。造模72 h后,与模型组比较,秋水仙碱组和清...     

中药内服、外敷治疗急性痛风性关节炎疗效及对IL-1β、NALP3的影响

目的探讨中药痛风消内服联合双柏散外敷治疗急性痛风性关节炎(AGA)的临床疗效。方法选择深圳市龙华区人民医院2017年1月—2019年1月治疗的110例AGA患者,按照随机数字表法分为治疗组和对照组,每组55例,对照组给予基础治疗和中药双柏散外敷,治疗组在对照组治疗基础上给予中药痛风消内服,2组均治疗7 d。比较2组治疗前后主要症状评分及血尿酸(UA)、C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、白细胞介素-1(IL-1β)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NALP3)水平变化,并比较2组治疗总有效率。结果2组治疗后关节红肿、疼痛和活动受限评分,UA、CRP、ESR及IL-1β、NALP3水平均较治疗前明显下降(P均<0.05);治疗后治疗组关节红肿、疼痛和活动受限评分,UA、CRP、ESR、IL-1β、NALP3水平均明显低于对照组(P均<0.05),治疗总有效率明显高于对照组(P<0.05)。结论中药痛风消内服联合双柏散外敷可有效缓解AGA患者症状,降低UA、CRP、ESR水平,抑制IL-1β、NALP3释放,治疗效果显著。     

加味不忘散对AD模型大鼠海马区NLRP3炎症通路中相关因子表达的影响

目的:通过观察加味不忘散对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力及海马区NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)炎症通路中相关分子NLRP3,天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)和白细胞介素-1β(IL^-1β)表达的影响,探讨其作用机制。方法:通过Morris水迷宫筛选出合格SD大鼠52只,随机均分为假手术组,AD模型组,加味不忘散低剂量组(1.5 g·kg^-1),加味不忘散高剂量组(3 g·kg^-1)。采用双侧海马注射β-淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)5μL(2 g·L^-1)建立AD模型大鼠。造模后分别予低、高剂量加味不忘散灌胃,每日1次,连续4周。灌胃结束后通过Morris水迷宫法检测大鼠学习记忆能力,判断造模是否成功;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠海马组织中NLRP3,Caspase-1,IL^-1βmRNA和蛋白的表达水平。结果:与假手术组比较,AD模型组大鼠学习记忆能力明显下降(P<0.05);与AD模型组比较,加味不忘散低剂量组大鼠学习记忆能力无改善,NLRP3,Caspase-1,IL^-1βmRNA和蛋白的表达水平均无统计学差异,加味不忘散高剂量组大鼠学习记忆能力明显改善,NLRP3,Caspase-1,IL^-1βmRNA和蛋白的表达均明显下降(P<0.05)。结论:高剂量加味不忘散可改善大鼠学习记忆能力,其机制可能与下调NLRP3炎症通路中NLRP3及下游Caspase-1,IL^-1β的表达,抑制海马组织内的炎症反应有关。     

基于NLRP3/IL-1β通路探讨筋骨止痛凝胶治疗膝骨性关节炎的作用机制

目的 基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NOD-like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3)/白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)通路探讨筋骨止痛凝胶改善膝骨性关节炎大鼠膝关节炎症、疼痛的作用和机制。方法70只雄性SD大鼠随机分为对照组,模型组,筋骨止痛凝胶高、中、低剂量(1.24、0.62、0.31 g/kg)组,扶他林(0.105 g/kg)组和青鹏膏(0.105 g/kg)组,每组10只。对照组大鼠左膝关节腔注射50μL无菌生理盐水,其余各组注射40 mg/mL单碘乙酸钠建立膝骨性关节炎大鼠模型,造模后1 d开始给药,持续14 d。测定各组大鼠机械痛阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWT)、热刺激缩足反射潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL)及足负重;采用苏木素-伊红(HE)染色观察膝关节滑膜组织病理情况;采用ELISA检测血清中IL-1β、前列腺素E₂(prostaglandin...     

基于NLRP3/ASC/Caspase-1信号通路探讨独活醇提物对MSU诱导的痛风性关节炎的治疗作用

目的：通过体内和体外实验探讨独活醇提物(DH50)对尿酸钠(MSU)晶体诱导的痛风性关节炎的治疗作用及作用机制。方法：体内实验：将50只雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、地塞米松组(DXMS,0.07 mg·kg^-1)、DH50低剂量组(DH50-D,9 mg·kg^-1)、高剂量组(DH50-G,18 mg·kg^-1)5组(n=10)。连续灌胃给药7 d,正常组和模型组给予等体积纯水,第5天向大鼠右侧踝关节注射MSU建立痛风性关节炎模型。测量造模后4、8、24、48 h的大鼠足跖容积并对关节炎症评分,苏木素-伊红(HE)染色检测大鼠滑膜组织病理形态的改变,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠滑膜组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的含量变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测滑膜组织中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、IL-1β、环氧化酶-2(COX-2)的蛋白表达情况。...     

豨莶草醇提物调控TLRs/NF-κB通路及NLRP3炎症小体干预痛风性关节炎的机制研究

目的探讨豨莶草醇提物通过Toll样受体(TLRs)/核因子κB(NF-κB)信号通路及NOD样受体蛋白3(NLRP3)干预痛风性关节炎(GA)的作用机制。方法采用脂多糖(LPS)联合尿酸钠结晶(MSU)刺激急性单核细胞白血病细胞(THP-1)源性巨噬细胞,建立GA炎症细胞模型;以豨莶草醇提物300、200、100μg·mL^-1不同浓度进行干预。采用CCK-8法检测细胞活力;ELISA法检测细胞上清中白细胞介素-1β(IL-1β)的水平;qRT-PCR法检测TLRs/NF-κB信号通路相关基因(TLR2、TLR4、MYD88、IRAK-1、TRAF-6、TAK-1、NF-κB、IL-1β)及NLRP3 m RNA的表达;Western Blot法检测NF-κB、NLRP3、IL-1β蛋白的表达。结果与对照组比较,豨莶草醇提物300、200、100μg·mL^-1浓度对THP-1巨噬细胞活力均无明显影响(P>0.05);模型组的IL-1β水平明显升高(P<0.05),TLRs/NF-κB信号通路相关基因及NLRP3 mRNA表达水平均明显上调(P<0.05),NF-κB、NLRP3、IL-1β蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。与模型组比较,豨莶草醇提物300、200、100μg·mL^-1浓度组的细胞IL-1β水平明显降低(P<0.05),TLRs/NF-κB信号通路相关基因及NLRP3 mRNA表达水平均不同程度下调(P<0.05),NF-κB、NLRP3及IL-1β蛋白表达水平亦不同程度下调(P<0.05)。结论豨莶草醇提物可能通过调控TLRs/NF-κB信号通路及抑制NLRP3炎症小体活化,减少炎症因子的产生与释放,进而减轻痛风性炎症反应。     

平喘颗粒对哮喘小鼠NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路的影响

目的 观察平喘颗粒对哮喘小鼠NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)通路的影响,探讨平喘颗粒治疗哮喘的作用机制。方法 将40只健康雌性小鼠随机分为空白组、模型组、布地奈德组及平喘颗粒组,每组10只。除空白组外,其余组建立哮喘模型。于致敏的前1 d开始,布地奈德组给予布地奈德混悬液0.5 mg/mL雾化吸入30 min,平喘颗粒组给予平喘颗粒药液31.2 g/kg灌胃,空白组和模型组给予等体积的0.9%氯化钠注射液灌胃,均连续干预4周。末次干预结束后,HE染色观察各组小鼠肺组织病理改变,ELISA检测肺泡灌洗液中白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-18(IL-18)水平,RT-qPCR检测肺组织中NLRP3、Caspase-1和IL-1βmRNA表达情况。结果 与空白组比较,模型组小鼠气道大量炎性细胞浸润,肺泡灌洗液中IL-6、IL-18水平和肺组织中NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA相对表达量均明显升高(P均<0.05)。与模型组比较,平喘颗粒组和布地奈德组小鼠气道炎症浸润明显减轻,肺泡...     

柴胡清肝汤干预NLRP3/IL-1β通路治疗肉芽肿性小叶性乳腺炎模型大鼠的作用机制

目的 探讨柴胡清肝汤（CHQGT）治疗肉芽肿性小叶性乳腺炎（GLM）模型大鼠的作用机制。方法 将60只雌性大鼠分为正常组、模型组、醋酸泼尼松龙组（0.001 8 g·kg^-1）、柴胡清肝汤低、中、高剂量组（4.5、8.9、17.8 g·kg^-1）,采用GLM病变组织与弗氏佐剂混合后的组织匀浆进行造模,造模成功后药物干预组均给予相应的处理因素,正常组、模型组给予等量生理盐水。14 d后肉眼观察小鼠乳腺变化;苏木素-伊红（HE）染色观察取材的乳腺组织病理学改变;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、白细胞介素-1β（IL-1β） mRNA表达;蛋白免疫印迹法（Western bolt）检测NLRP3、Caspase-1、IL-1β、白细胞介素-18（IL-18）的蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠肉眼可见乳房明显红肿,且乳腺炎症指数显著升高（P<0.01）,病理学改变包括形成以乳腺小叶为中心的肉芽肿,伴见大量淋巴细胞、浆细胞等炎性细胞浸润,模型组大鼠乳腺组织中的NLRP3、Caspase-1及IL-1β mRNA相对表达量显著增加（P<0.01）,NLRP3、Caspase1、IL-1β和IL-18蛋白的表达显著增加（P<0.01）;与模型组比较,各治疗组大鼠乳房红肿均有改善,柴胡清肝汤中、高剂量组及泼尼松龙组经治后炎症指数均有不同程度下降（P<0.05,P<0.01）,乳腺的炎症程度明显改善,病理学方面巨噬细胞、淋巴细胞、浆细胞等炎性细胞均有不同程度减少,柴胡清肝汤高剂量组、泼尼松龙组均能够明显下调NLRP3、Caspase-1及IL-1β mRNA的表达（P<0.05,P<0.01）,降低NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白的表达（P<0.05,P<0.01）。结论 柴胡清肝汤能够抑制炎症,治疗大鼠GLM,其可能机制与抑制NLRP3/IL-1β信号通路有关,这为“清消法”防治GLM提供了新的靶点。     

二陈汤加味通过抑制NLRP3通路对慢性阻塞性肺疾病的防治作用

目的:观测二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)中Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体相关基因表达的影响,探讨二陈汤加味对COPD抗炎的分子机制。方法:采用脂多糖(LPS)联合香烟烟雾方法制备COPD大鼠模型。40只大鼠随机平均分为正常组,模型组,二陈汤加味组,MCC950(NLRP3抑制剂)组。造模期间(从实验第1～30天),MCC950组于实验第1天单次腹腔注射60 mg·kg~(-1);二陈汤加味组以10 g·kg~(-1)剂量灌胃,1次/2 d。造模成功后,从实验第31～45天,MCC950组腹腔注射3 mg·kg~(-1),1次/2 d;二陈汤加味组以10 g·kg~(-1)剂量灌胃,2次/d;正常组、模型组灌胃生理盐水10 g·kg~(-1)。酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定大鼠肺组织匀浆中白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-18(IL-18)和趋化因子8(CXCL8)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠外周血PBMCs中NLRP3,凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PBMCs中NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达;光镜观察肺组织结构变化,免疫组化检测NLRP3,ASC和Caspase-1在肺组织中的定位表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肺组织匀浆中IL-1β,IL-18和CXCL8含量均明显升高(P0.05,P0.01);PBMCs中NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA及蛋白表达水平均明显增高(P0.01);与模型组比较,二陈汤加味组PBMCs中NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P0.05,P0.01),肺匀浆中IL-1β,IL-18和CXCL8含量均明显下降(P0.05,P0.01),肺组织结构明显改善。结论:二陈汤加味对COPD有抗炎作用。其机制可能与抑制PBMCs中NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA表达,减少IL-1β,IL-18和CXCL8的释放有关。     

基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路探讨补阳还五汤调控巨噬细胞极化的作用机制

目的：基于Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)通路探讨补阳还五汤调控巨噬细胞极化的作用机制。方法：本实验通过采用不同浓度(0、1.25、2.5、5、10、20、40、80 mg·L^-1)脂多糖(LPS)对RAW264.7巨噬细胞干预24 h,细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测RAW264.7巨噬细胞存活率,筛选最适浓度建立体外LPS诱导RAW246.7巨噬细胞炎症模型。将实验分为空白组(20%空白血清),模型组(20%空白血清+10 mg·L^-1LPS),模型对照组(20%FBS+10mg·L^-1LPS),低、中、高(5%、10%、20%)补阳还五汤含药血清组及NLRP3抑制剂MCC950(50μmol·L^-1)、活性氧(ROS)抑制剂NAC(10μmol·L^-1)、NF-κB抑制剂PDTC(10μmol·L^-1)联合补阳还五汤高剂量(20%)组。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测...     

基于NLRP3炎性小体和TLR4/NF-κB信号通路探讨黄连解毒汤治疗急性痛风性关节炎的作用机制

目的 观察黄连解毒汤对急性痛风性关节炎（AGA）模型小鼠炎性损伤的影响,探讨黄连解毒汤治疗AGA的作用机制。方法 40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组和黄连解毒汤组。采用踝关节注射单钠尿酸盐（MSU）晶体混悬液建立小鼠AGA模型,给药组分别给予黄连解毒汤水煎液（5 g·kg^-1）和秋水仙碱（0.83 mg·kg^-1）,每天测量小鼠右踝关节肿胀程度,7 d后苏木素-伊红（HE）染色检测踝关节组织病理改变。另外40只C57BL/6J小鼠同样分组处理,造模18 h后,取右踝关节,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测关节炎症因子白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL-6和NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎性小体NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）mRNA的表达;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6含量;蛋白免疫印迹法（Western bolt）检测NLRP3炎性小体和Toll样受体4/核转录因子-κB（TLR4/NF-κB）信号通路蛋白的表达。结果 与正常组比较,模型组小鼠右踝关节显著肿胀（P<0.01）,HE染色观察到踝关节明显异物肉芽肿,其间有炎症细胞浸润,黄连解毒汤干预后可以缓解踝关节肿胀（P<0.05,P<0.01）,异物肉芽肿减小。与正常组比较,模型组踝关节组织中炎症因子IL-1β含量和IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA表达显著升高（P<0.01）,NLRP3炎性小体、Caspase-1 mRNA表达明显升高（P<0.05,P<0.01）,NLRP3、Caspase-1、TLR4和NF-κB蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,黄连解毒汤干预明显降低炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6和NLRP3炎性小体、Caspase-1 mRNA表达（P<0.05,P<0.01）,显著降低关节组织中炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6含量（P<0.01）,下调NLRP3、Caspase-1、TLR4、NF-κB蛋白的表达（P<0.05,P<0.01）。结论 注射MSU晶体导致AGA小鼠关节局部炎性免疫损伤,黄连解毒汤干预减轻炎性免疫损伤,可能与其调控NLRP3炎性小体和TLR4/NF-κB信号通路相关。     

基于HIF-1α/NF-κB/NLRP3信号通路探讨黄芪百合颗粒对高原低氧模型大鼠急性脑损伤的保护作用

目的：观察黄芪百合颗粒对高原低氧模型大鼠缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/核转录因子-κB(NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路的影响。方法：60只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组（5 mg·kg-1）、黄芪百合颗粒高、中、低剂量组（4.1、2.05、1.025 g·kg-1）。其中各中药组连续灌胃给药14 d,1次/d,连续3 d腹腔注射地塞米松作为阳性药物组;第15天将模型组、地塞米松组、黄芪百合颗粒高、中、低剂量组至动物低压模拟舱中模拟高海拔低压低氧环境进行暴露,持续暴露3 d,腹主动脉采血并分离血清,处死后摘取脑组织;苏木素-伊红（HE）染色法观察脑组织病理变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠HIF-1α、NLRP3、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、NF-κB、消皮素D(GSDMD)和胱天蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白的表达水平;实时荧光定量聚合...     

旋覆代赭汤对RE模型大鼠NLRP3/Caspase-1的影响

目的:通过观察旋覆代赭汤对反流性食管炎(RE)模型大鼠炎症小体组成成分及相关炎症因子表达的影响,探究NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-1信号通路与食管炎症的相关性,阐明旋覆代赭汤治疗RE的作用机制。方法:将60只健康雄性Wistar大鼠,随机分为4组,分别为正常组,模型组,旋覆代赭汤组(9. 89 g·kg~(-1)),阳性药组(奥美拉唑镁肠溶片+枸橼酸莫沙必利片,2. 58 mg·kg~(-1)),每组15只。除正常组外,其余各组大鼠行"4. 2 mm幽门夹+2/3胃底结扎术"方法造模。从术后第8天开始,给予相应的药物进行灌胃干预,每日2次,共14 d,第15天处死取动脉血及食管组织。肉眼及光镜下观察食管组织病理学形态,应用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中Caspase-1,白细胞介素-1β(IL-1β)的分泌情况,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测食管组织中NLRP3,Caspase-1,IL-1β的蛋白表达情况。结果:食管黏膜肉眼及镜下观察,与正常组比较,模型组损伤最为严重,积分最高。与正常组比较,模型组大鼠血清中Caspase-1,IL-1β的含量和食管组织中NLRP3,Caspase-1,IL-1β的蛋白表达明显升高(P 0. 05,P 0. 01);与模型组比较,旋覆代赭汤可明显降低大鼠血清中Caspase-1,IL-1β的含量,下调食管组织中NLRP3,Caspase-1,IL-1β的蛋白表达水平(P 0. 05,P 0. 01)。结论:旋覆代赭汤可以下调炎症小体蛋白组分NLRP3,Caspase-1的表达,降低炎症因子IL-1β的含量,表明此方可能通过抑制NLRP3/Caspase-1信号通路的激活,拮抗食管炎症反应,减少食管炎症损伤,治疗RE。     

痛风宁对急性痛风性关节炎模型大鼠IL-1β,TNF-α及NALP3炎性体的影响

目的:从核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NALP3)炎性体角度探讨痛风宁的抗炎作用机制。方法:将48只SD大鼠随机分为造模大鼠36只、正常大鼠12只。造模大鼠采用踝关节局部注射0.2 mL尿酸钠(monosodium urate,MSU)混悬液建立急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)模型,正常大鼠予相同部位注射生理盐水。造模成功后,随机分为模型组、痛风宁组、秋水仙碱组,分别用生理盐水、痛风宁药液、秋水仙碱混悬液灌胃,每天2次,共3 d。正常大鼠为正常组,同时予等量生理盐水灌胃。造模成功后72 h,行腹腔注射麻醉后取踝关节液及滑膜组织。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠踝关节液白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测滑膜组织NALP3炎性体相关蛋白与mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠踝关节液IL-1β,TNF-α含量显著升高,滑膜组织NALP3,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1),凋亡相关斑点样蛋白(ASC)蛋白及mRNA表达均显著增加(P0.01);与模型组比较,痛风宁组与秋水仙碱组大鼠踝关节液IL-1β,TNF-α含量显著下降,且滑膜组织中NALP3,Caspase-1,ASC蛋白及mRNA表达均显著降低(P0.01);与秋水仙碱组比较,痛风宁组大鼠踝关节液IL-1β,TNF-α含量仍较高(P0.05),但滑膜组织中NALP3,Caspase-1,ASC蛋白及mRNA表达均较低(P0.05,P0.01)。结论:痛风宁对AGA的抗炎作用机制可能是通过抑制NALP3炎性体相关蛋白及mRNA表达,从而减少IL-1β,TNF-α的生成,减轻关节炎症反应。     

基于TLR2/MyD88/NF-κB和NALP3信号通路探讨藏族药短穗兔耳草提取物抗慢性酒精性肝损伤大鼠的作用机制

目的:通过酒精灌胃8周建立大鼠慢性酒精性肝损伤模型,研究藏族药短穗兔耳草提取物对Toll样受体(TLR2/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子-κB(NF-κB)和NOD样受体蛋白3(NALP3)信号通路的影响,探讨其提取物抗慢性酒精性肝损伤的作用机制。方法:60只SD雄性大鼠随机分成正常组、模型组、联苯双酯组(0.1 g·kg^-1)及短穗兔耳草低、中、高剂量组(0.5,1,2 g·kg^-1),每日上午各给药组按10 m L·kg^-1给予相应的药物,下午梯度乙醇灌胃法给予56度白酒灌胃,连续8周后,取血,测定各组大鼠血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST),丙氨酸氨基转移酶(ALT),甘油三酯(TC),总胆固醇(TG)及肝脏谷胱甘肽(GSH)水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏中TLR2,MyD88,NF-κB和NALP3蛋白的表达;苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏病理学形态改变。结果:与正常组比较,模型组血清中AST,ALT,TC,TG,IL-1β水平均明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,藏族药短穗兔耳草各剂量组能降低血清AST,ALT,TC,TG,IL-1β水平,其中高剂量组的效果尤为显著(P<0.05,P<0.01)。与正常组比较,模型组肝匀浆中GSH水平下降;模型组肝组织中TLR2,MyD88,NF-κB和NALP3蛋白水平明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,藏族药短穗兔耳草各剂量组能降低肝脏中GSH水平以及TLR2,MyD88,NF-κB和NALP3的蛋白表达(P<0.05,P<0.01);肝脏病理切片表明,藏族药短穗兔耳草能改善大鼠肝组织病理变化。结论:藏族药短穗兔耳草对酒精诱导的慢性酒精性肝损伤大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与TLR/MyD88/NF-κB和NALP3信号通路有关。     

解毒通络调肝方干预TGR5/cAMP信号通路靶向NLRP3炎症小体保护胰岛β细胞的作用机制

目的 探讨解毒通络调肝方通过胆汁酸G蛋白偶联受体5（TGR5）/环状磷酸腺苷（cAMP）信号通路靶向NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体保护胰岛β细胞的干预作用。方法 选用32只SPF级雄性db/db小鼠随机分为模型组、解毒通络调肝方低、高剂量组（3.6、7.2 g·kg^-1）、二甲双胍组（0.2 g·kg^-1）,8只db/m小鼠作为空白组,药物干预8周,每2周检测各组小鼠空腹血糖（FBG）,并在末次给药后,进行口服糖耐量实验（OGTT）,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测空腹胰岛素（FINS）并计算β细胞功能稳态指数（HOMA-β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-1β水平。苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠胰腺组织病理学改变,免疫荧光测定小鼠胰腺组织胰岛素（Insulin）的表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测TGR5/cAMP信号通路和NLRP3炎症小体关键靶点的蛋白、mRNA的表达。结果 与空白组比较,模型组小鼠FBG、OGTT、FINS、IL-6、TNF-α和IL-1β显著升高（P<0.01）;与模型组比较,药物治疗6周后,解毒通络调肝方组和二甲双胍组的FBG水平显著下降（P<0.01）;OGTT实验结果表明,与模型组比较,各给药小组小鼠各时间点的血糖均有降低（P<0.05,P<0.01）,解毒通络调肝方各剂量组和二甲双胍组FINS、TNF-α和IL-6水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组IL-1β水平显著降低（P<0.01）。胰腺病理显示模型组小鼠的胰岛形状不规则,分布不均匀,有萎缩的征象,解毒通络调肝方干预后,其细胞计数增加,边界更清晰;免疫荧光结果表示,空白组小鼠的胰岛细胞排列有序,形态饱满,伴有适当的胰岛素分泌,而模型组胰岛细胞形态扭曲,结构萎缩,胰岛素分泌变少,解毒通络调肝方各剂量组和二甲双胍组小鼠的胰岛素含量显著增加。与空白组比较,模型组小鼠胰腺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、胱天蛋白酶-1（Caspase-1） mRNA表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组促进了TGR5和cAMP mRNA的上调,并下调了NLRP3、ASC和Caspase-1的mRNA表达（P<0.05,P<0.01）。与空白组比较,模型组小鼠TGR5蛋白表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组TGR5蛋白显著升高（P<0.01）。与空白组比较,模型组NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白表达显著增高（P<0.01）;与模型组比较,解毒通络调肝方各剂量组、二甲双胍组Caspase-1、ASC蛋白表达显著降低（P<0.01）,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组NLRP3蛋白表达显著降低（P<0.01）。与空白组比较,模型组小鼠胰腺组织中cAMP含量显著降低（P<0.01）;与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组小鼠cAMP含量明显升高（P<0.05,P<0.01）。结论 解毒通络调肝方保护db/db小鼠的胰岛β细胞,其作用机制可能与调节TGR5/cAMP信号通路抑制NLRP3炎症小体有关。