败酱草水提物通过调控circ＿0000936/miR-665抑制胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探讨败酱草水提物对胶质瘤细胞生物行为的影响及其可能作用机制。方法:收集2019年2月至2020年1月期间于本院接受手术切除并经病理证实的31例胶质瘤组织,qRT-PCR法检测正常脑组织与胶质瘤组织中circ＿0000936、miR-665的表达量;Pearson法分析胶质瘤组织中circ＿0000936和miR-665表达量的相关性;体外培养人胶质瘤细胞LN229,不同浓度的败酱草(0.5 mg/mL、1.0 mg/mL、2.0 mg/mL)处理LN229细胞,si-NC、si-circ＿0000936分别转染至LN229细胞,pcDNA-circ＿0000936转染至LN229细胞后加入2.0 mg/mL败酱草处理细胞;CCK-8、平板克隆形成实验、Transwell小室实验与流式细胞术分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭及凋亡能力;双荧光素酶报告基因实验检测circ＿0000936与miR-665的靶向关系;Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白表达量。结果:胶质瘤组织中circ＿0000936的表达量高于正常脑组织(P<0.05),而miR-665的表...     

MiR-125b靶向A20/NF-κB信号通路促进胰腺癌细胞增殖机制的研究

[目的]研究miR-125b在胰腺癌组织及细胞系中的表达,探讨其对胰腺癌细胞增殖的影响及作用机制。[方法]QRT-PCR检测miR-125b在60例胰腺癌患者癌组织和癌旁组织中,及3株胰腺癌细胞系和1株正常胰腺导管上皮细胞中的表达;miR-125b敲减慢病毒质粒及阴性对照空载体质粒vector感染SUIT-2细胞,经1.0μg/ml嘌呤霉素筛选稳定敲减miR-125b或vector的SUIT-2细胞,注射到BALB/c裸鼠中,观察抑制miR-125b对胰腺癌细胞体内增殖能力的影响;利用Targetscan 7.2软件及荧光素酶报告基因试验,分析miR-125b对A20基因的靶向作用;SUIT-2细胞转染miR-125b inhibit和scramble后,体外实验检测miR-125b对细胞增殖、肿瘤坏死因子α诱导的蛋白3(tumor necrosis factorα-induced protein 3,TNFAIP3,又称A20)和NF-κB信号通路关键蛋白IKKα/β、IκBα、p65的表达影响。[结果]MiR-125b在胰腺癌的组织中的表达显著高于癌旁组织(0.99±0.21 vs 0.68±0.17,P<0.05);miR-125b在SW1990、SUIT-2、BxPC3胰腺癌细胞系中的表达显著高于在正常胰腺导管上皮细胞HPDE6-C7中的表达(4.81±0.13,8.63±0.27,5.64±0.21 vs1.00±0.05,P均<0.05);SUIT-2_(mi R-125b)的裸鼠成瘤体积显著低于SUIT-2_vector细胞(P<0.05)。TargetScan软件预测和荧光素酶报告基因实验验证A20为miR-125b的靶基因;转染miR-125b inhibit后,A20基因表达显著增加(6.98±0.18 vs 1.00±0.06,P<0.05),细胞增殖能力、NF-κB信号通路关键蛋白IK-Kα/β、IκBα、p65的表达显著下降(P均<0.05)。[结论]MiR-125b可通过靶向调控A20/NF-κB信号通路促进胰腺癌细胞的增殖。     

过表达miR-202对甲状腺癌细胞恶性表型的影响及作用机制

目的探讨过表达miR-202对甲状腺癌细胞恶性表型的影响及作用机制。方法选取2017年1月至2018年12月间深圳大学附属第一医院收治的行手术治疗的甲状腺癌患者的癌组织及癌旁正常组织各32例,用qRT-PCR检测miR-202在甲状腺癌组织中的表达,对甲状腺癌细胞进行miR-202模拟物转染或miR-202模拟物与ROCK1表达载体共转染,采用qRT-PCR检测转染效率,用CCK8实验和Caspase-3实验检测转染后甲状腺癌细胞的增殖和凋亡能力。采用qRT-PCR检测miR-202模拟物转染后ROCK1、E-cadherin、Twist、N-cadherin和MMP2的表达。采用双荧光素酶报告基因法检测ROCK1与miR-202之间的靶向关系。结果 miR-202在甲状腺癌组织中下调,miR-202的上调可抑制甲状腺癌细胞增殖,促进甲状腺癌细胞凋亡。miR-202上调促进E-cadherin表达,抑制N-cadherin、Twist和MMP2的表达。ROCK1是miR-202的靶基因,miR-202通过靶向ROCK1调控甲状腺癌细胞的增殖和凋亡能力及相关基因表达。结论 miR-202通过靶向ROCK1基因调节甲状腺癌细胞的增殖和凋亡。     

miR-124在宫颈癌中的表达及对宫颈癌细胞增殖、迁移的影响

目的:探讨miR-124在宫颈癌中的表达,及其对宫颈癌细胞增殖、迁移的影响。方法:收集宫颈癌组织和癌旁组织各13例,qRT-PCR法检测miR-124的表达,免疫组化检测STAT3的表达。生物信息学技术预测miR-124的靶基因,双荧光素酶报告基因、qRT-PCR、Western blot实验验证。每种宫颈细胞随机分为三组,一组转染miR-124 mimics,一组不转染,一组转染miR-124 inhibitor。CCK-8实验检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果:miR-124在宫颈癌组织和细胞系中表达均降低(P均＜0.05),STAT3在宫颈癌组织中的表达明显增高(P<0.05)。STAT3是miR-124的直接靶基因,miR-124可靶向调节STAT3的mRNA和蛋白表达水平(P均＜0.05)。在Hela及Siha细胞中,miR-124 mimics转染组细胞增殖及迁移能力均降低(P均＜0.05),miR-124 inhibitor转染组细胞增殖及迁移能力均增加（P均＜0.05)。结论:miR-124在宫颈癌中低表达,可能通过靶向调节STAT3表达抑制宫颈癌细胞的增殖及迁移能力。     

microRNA-133b对胶质母细胞瘤细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨microRNA(miR)-133b对胶质母细胞瘤(GBM)细胞的作用,并分析其作用的分子机制。方法应用实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测20例人GBM标本及正常人脑胶质细胞系HEB中miR-133b的表达水平。Transwell侵袭实验评估miR-133b对GBM细胞迁移和侵袭的影响。Western blotting和荧光素酶报告实验来确定miR-133b的靶基因。结果与正常人脑胶质细胞系HEB比较,miR-133b在GBM标本中的相对表达量明显降低(1.0±0.17 vs.2.42±0.69,P<0.05);转染miR-133b mimic后GBM迁移和侵袭跨膜细胞数分别为66±17和60±14,均低于转染NC组(P<0.05);与转染NC组比较,转染miR-133b mimic后MMP-14蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。荧光素酶报告基因分析实验进一步验证mir-133b靶向调节MMP-14。结论 miR-133b通过直接靶向调节MMP-14抑制GBM的迁移和侵袭能力,可作为GBM诊断和治疗的候选靶点。     

miR-423-5p调控PDCD5表达增强神经胶质瘤细胞替莫唑胺耐药性

目的：探讨miR-423-5p在人脑神经胶质瘤组织和细胞中的表达及其调控程序性细胞死亡蛋白5（programmed cell death protein 5,PDCD5）增强胶质瘤细胞对替莫唑胺（temozolomide,TMZ）的耐药性。方法：收集2017年1月至2018年12月北 华大学附属医院神经外科手术切除的20例脑神经胶质瘤患者的瘤及瘤旁组织标本,以及胶质瘤细胞系U251、 U87、SHG-44和人 脑小胶质细胞株HMC-3, 用qPCR法检测胶质瘤组织及细胞系中miR-423-5p和PDCD5的表达水平。用合成的miR-423-5p mimics 和miR-NC分别转染U251和U87细胞,同时用不同浓度（50、100、150和200 μmol/L）的TMZ处理细胞,检测转染细胞对TMZ的 耐药性,用MTT法、克隆形成实验检测转染细胞的增殖活力,用Western blotting检测U251、 U87细胞中c-caspase 3、Bcl-2和 PDCD5蛋白的表达。用双荧光素酶报告基因实验验证 miR-423-5p 与 PDCD5 的靶向关系。结果：miR-423-5p 在脑神经胶质 瘤组织和胶质瘤细胞系中均高表达（均P<0.01）。与miR-NC组比较,miR-423-5p mimics组U251和U87细胞的增殖能力明显增 强（均P<0.01）, 对TMZ的耐药性增强。双荧光素酶报告基因实验证实miR-423-5p可与PDCD5 3'' UTR结合,抑制PDCD5的表 达。结论：miR-423-5p高表达增强胶质瘤细胞对TMZ的耐药能力,其可作为临床胶质瘤治疗的潜在新靶点。     

lncRNA LINC01410通过miR-205-5p调控胶质瘤A172细胞的增殖、凋 亡和替莫唑胺敏感性

目的：探讨长链非编码RNA（lncRNA）LINC01410对胶质瘤A172细胞增殖、凋亡和替莫唑胺（temozolomide, TMZ）敏 感性的影响及其机制。方法: 用qPCR法检测胶质瘤细胞系H4、SHG-44、A172和正常星形胶质细胞HA1800中LINC01410表达 水平。将LINC01410 shRNA、shRNA control和miR-205-5p 抑制剂（inhibitor）、inhibitor control转染至A172细胞,MTT法、流式细 胞术分别检测400 μmol/L TMZ处理后,转染细胞的增殖活性和凋亡水平,WB法检测细胞中Bax、Bcl-2、cyclin D1、p27的表达。 在线生物信息学软件LncBase分析LINC01410的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证LINC01410与miR-205-5p的靶向关系。 结果: LINC01410在3种胶质瘤细胞中的表达水平均显著高于正常星形胶质细胞HA1800（均P<0.01）,以在A172细胞中的表达 水平最高（P<0.01）。转染LINC01410 shRNA和TMZ 处理后 ,A172 细胞的增殖能力下降、G1 期细胞比例和凋亡率均升高 （均 P<0.01）,细胞中 Bax、p27 表达水平升高而 Bcl-2、cyclin D1 表达水平下降（均P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实 LINC01410 靶向结合 miR-205-5p,下调 LINC01410 促进 miR-205-5p 表达。转染 miR-205-5p 抑制剂可逆转下调 LINC01410 和 TMZ处理对A172细胞增殖、周期和凋亡的影响。结论: 下调lncRNA LINC01410可抑制胶质瘤A172细胞增殖、阻滞细胞周期、 诱导细胞凋亡且提高对TMZ敏感性,其发生机制似与LINC01410对miR-205-5p的靶向作用有关。     

miR-145通过下调OCT4基因抑制肺腺癌干细胞增殖

背景与目的 miR-145是通过miRNA芯片及qPCR验证筛选出的一种潜在肺癌"保护性"miRNA。本研究旨在探讨miR-145与肺癌干细胞之间的关系及分子机制。方法 miRNA芯片对肺腺癌患者瘤旁和正常组织进行表达谱分析;生物信息学软件预测miR-145潜在的靶基因;脂质体2000介导转染miR-145模拟物和阻遏物进入A549细胞株;实时定量PCR检测miR-145表达水平;Western blot检测OCT4蛋白水平;双荧光素酶报告基因验证miR-145是否作用于OCT4mRNA的3’UTR区预测靶位;细胞增殖实验检测miR-145对于A549细胞生长的作用;流式细胞术检测干细胞表型CD133+的表达。结果在肺腺癌组织中miR-145表达明显低于瘤旁正常组织;miRanda软件预测OCT4是miR-145潜在靶基因;与对照组相比,miR-145模拟物组和阻遏物组miR-145表达分别明显上调和下调;miR-145对A549细胞的生长有双向调节作用,过表达miR-145抑制细胞生长;过表达miR-145可明显降低OCT4蛋白水平及干细胞表型CD133百分比,而抑制miR-145表达则明显增加OCT4蛋白水平及CD133百分比。双荧光素酶报告基因检测证明miR-145可作用于OCT4mRNA的3’UTR区预测靶位。结论 miR-145可通过下调OCT4基因表达抑制A549肺腺癌细胞株中干细胞的增殖,是一种潜在的肺癌"保护性"miRNA。     

miRNA-26b-3p通过靶向STAT3调控食管鳞状细胞癌细胞的增殖和迁移

目的：观察miR-26b-3p在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织中的表达水平及其对ESCC细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响,并探讨其分子调控机制。方法: 选取河北医科大学第四医院2018年4月1日至2018年12月25日手术切除的ESCC组织及相应癌旁组织各60例,利用qPCR法检测ESCC组织、癌旁组织和ESCC细胞中miR-26b-3p的表达。选取miR-26b-3p表达水平较低的ESCC细胞TE1和KYSE150,转染miR-26b-3p mimic,并设立阴性对照。利用细胞增殖实验、划痕愈合实验和Transwell实验检测过表达miR-26b-3p对TE1和KYSE150细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。荧光素酶报告基因实验检测miR-26b-3p与STAT3的 3''UTR 靶点部位的结合情况。随后同时转染 miR-26b-3p mimic 和 pcDNA3.0-STAT3,利用细胞增殖实验、划痕愈合实验和Transwell实验检测STAT3是否可逆转过表达miR-26b-3p对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。qPCR 和 WB法检测甲基化酶抑制剂5-Aza-DC对ESCC细胞甲基化的影响和miR-26b-3p与STAT3表达的影响。结果: miR-26b-3p在ESCC组织中的表达低于癌旁组织（P<0.01）,其在 ESCC 细胞TE1、KYSE150和LYSE170中表达水平显著低于人正常食管上皮细胞HEEC（均P<0.01）。与miR-26b-3p NC组相比,miR-26b-3p mimic转染可明显上调TE1和KYSE150细胞中miR-26b-3p的表达（均P<0.01）,但可明显抑制两种细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）。荧光素酶报告基因实验结果表明,在TE1和KYSE150细胞中,miR-26b-3p明显抑制了野生型STAT3载体的荧光素酶活性（P<0.05或P<0.01）,而突变型的荧光素酶活性不受影响。同时转染miR-26b-3pmimic和pcDNA3.0-STAT3可部分逆转miR-26b-3p mimic对TE1 和 KYSE150 细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用（P<0.05或P<0.01）。5-Aza-DC 处理后 ,TE1 和 KYSE150 细胞中 miR-26b-3p 表达上调（均 P<0.01）、STAT3 mRNA 和蛋白水平降低（P<0.05）,miR-26b-3p呈现去甲基化状态。结论: miR-26b-3p的启动子高甲基化导致其在ESCC组织和细胞中的表达下调,其作为抑癌因子可通过靶向STAT3而抑制ESCC细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

miR-147靶向MDM2调控卵巢癌细胞Skov3增殖与凋亡的机制研究

目的 探讨微小RNA-147（miR-147）靶向调控鼠双微粒体2蛋白（MDM2）的表达及其对卵巢癌细胞株Skov3增殖与凋亡的影响。方法 采用Lipo2000脂质体法将miR-147 模拟物（mimics）及阴性对照（NC）转染至Skov3细胞并分为miR-147 mimics组和NC组,采用实时荧光定量PCR（QPCR）法检测转染48 h后Skov3细胞的miR-147水平以评价转染效果,分别采用MTT法及流式细胞术检测两组转染后的增殖及细胞凋亡情况,Western blotting检测两组MDM2、p53和caspase-3表达水平,采用双荧光素酶报告实验验证miR-147与靶标MDM2之间的靶向关系及结合位点。结果 QPCR检测显示,miR-147 mimics组miR-147的表达水平高于NC组,差异有统计学意义（P<0.05）,提示在Skov3细胞中过表达miR-147成功。与NC组相比,miR-147 mimics组的增殖率和MDM2水平均降低,但凋亡率及p53和caspase-3水平均升高,差异有统计学意义（P<0.05）;双荧光素酶报告实验检测发现miR-147可显著抑制野生型MDM2-3’端非翻译区（UTR）质粒转染细胞的荧光素酶活性,而对突变型MDM2-3’UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性并无影响。结论 miR-147可靶向MDM2的表达,且过表达miR-147表达可抑制Skov3细胞的增殖并诱导凋亡,在卵巢癌防治上有一定参考价值。     

miR-125a-5p通过靶向STAT3 抑制肾癌细胞增殖和侵袭及其可能机制

目的：探究miR-125a-5p 靶向STAT3 对肾癌细胞增殖和侵袭的影响,并初步分析其作用机制。方法：选取2017 年3月至2018 年2 月于北部战区空军医院泌尿外科接受肾癌手术治疗的癌组织及配对的癌旁组织灶边缘（距癌缘>3 cm）标本各48例,体外培养正常肾细胞HK-2、和肾癌细胞A498、GRC-1、786-O及ACHN,采用qPCR 检测组织和细胞中miR-125a-5p 的表达。分别将miR-125a-5p-NC、miR-125a-5p-mimics、pLV-STAT3 及pLV-STAT3+miR-125a-5p mimics 转染A498 细胞作为NC组（阴性对照组）、miR-125a-5p-mimics 组、pLV-STAT3 组及pLV-STAT3+mimics 组,另外以正常培养A498 细胞作为空白对照组（Control,Ctrl）,采用qPCR检测各组细胞中miR-125a-5p、信号转导和转录激活因子3（STAT3）mRNA的表达。应用生物信息学预测软件和双荧光素酶法分析miR-125a-5p 与STAT3 的靶向关系;采用CCK-8 检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室法检测细胞侵袭能力;WB检测细胞中STAT3、B 细胞淋巴瘤/白血病-2 蛋白(Bcl-2)、B 细胞淋巴瘤/白血病-2 相关X 蛋白(BAX)、活化半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3 蛋白（cl-caspase-3）、抑癌基因p21、神经钙黏素（N-cadherin）、钙黏蛋白（E-cadherin）、血管内皮生长因子（VEGF）及缺氧诱导因子-1（HIF-1）的表达。结果：miR-125a-5p 在肾癌组织和细胞中表达显著低于癌旁组织和正常肾细胞（均P<0.05）;相较于NC组,转染miR-125a-5p-mimics 后A498 细胞中miR-125a-5p 的表达显著上升、STAT3mRNA的表达显著下降（均P<0.01）。实验证实STAT3 为miR-125a-5p 的靶基因。与NC组相比,miR-125a-5pmimics 组细胞增殖活性、侵袭细胞数及Bcl-2、N-cadherin、VEGF、HIF-1、STAT3 及其磷酸化水平均显著下降（均P<0.05）,凋亡率及BAX、p21、cl-caspase-3 及E-cadherin 表达显著上升（均P<0.05）;pLV-STAT3 组细胞增殖活性、侵袭细胞数及Bcl-2、N-cadherin、VEGF、HIF-1、STAT3 及其磷酸化水平显著上升（均P<0.05）,凋亡率及BAX、p21、cl-caspase-3、E-cadherin 表达显著下降（均P<0.05）。与pLVSTAT3组相比,pLV-STAT3 mimics 组细胞增殖活性、侵袭细胞数、Bcl-2、N-cadherin、VEGF、HIF-1、STAT3 及其磷酸化水平显著下降（均P<0.05）,凋亡率、BAX、p21、cl-caspase-3 及E-cadherin 表达显著上升（均P<0.05）。结论：miR-125a-5p 在肾癌组织和细胞中呈低表达,可通过下调其靶基因STAT3 抑制A498 细胞的增殖和侵袭,并促进其凋亡。     

miR-125a-3p靶向负调控PLK4抑制神经母细胞瘤细胞增殖及其机制探讨

目的:研究miR-125a-3p对神经母细胞瘤细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:运用qRT-PCR法检测Hela、SH-SY-5Y、SHEP、SK-N-BE细胞中miR-125a-3p的表达;将miR-125a-3p组（转染miR-125a-3p mimics）、miR-NC组（未转染细胞）、inhibitor-NC组（转染空inhibitor）、miR-125a-3p inhibitor组（转染miR-125a-3p inhibitor）、siPLK4组（转染siPLK4）、miR-125a-3p+Vector组（miR-125a-3p mimics和pcDNA 3.1共转染）、miR-125a-3p+PLK4组（miR-125a-3p mimics和pcDNA 3.1-PLK4共转染）以脂质体法转染至SH-SY-5Y细胞;MTT法检测各组细胞的增殖情况;Western blot检测各组细胞中PLK4、PIK3CA、Akt、p-Akt蛋白的表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与Hela细胞相比,SH-SY-5Y、SHEP、SK-N-BE细胞中miR-125a-3p的表达均显著降低（P<0.05）;与Control组相比,miR-125a-3p组细胞的增殖显著降低,PLK4、PIK3CA、p-Akt蛋白的表达量均显著降低（P<0.05）;PLK4为miR-125a-3p的靶基因。过表达PLK4可逆转miR-125a-3p对SH-SY-5Y细胞增殖及PI3K/Akt信号通路的抑制作用。结论:miR-125a-3p可抑制神经母细胞瘤细胞增殖,其作用机制与靶向负调控PLK4有关,将可为神经母细胞瘤的治疗提供新靶点。     

MicroRNA miR-451 downregulates the PI3K/AKT pathway through CAB39 in human glioma

The microRNA miR-451 is downregulated in gliomas, this has been suggested by several different research groups and is consistent with our data. Our previous study also confirmed that miR-451 has a repressive role in glioma by inhibiting cell growth, proliferation and by inducing cell apoptosis. In the present study, we identified a target gene of miR-451 in human glioma and investigated the mechanism for the glioma suppressive effect of miR-451 functions. Expression of miR-451 in gliomas was identified by quantitative real-time PCR and fluorescence in situ hybridization. Human glioma cell lines (U251, U87, LN229 and A172) were transfected with miR-451 mimics to restore miR-451 expression. The tumor suppressive effects of miR-451 were further verified by subcutaneous assays in nude mice, in addition to our previous in vitro data. A candidate target gene was tested by Western blotting and luciferase reporter assays. Some PI3K/AKT pathway factors were tested by Western blotting. We found that miR-451 expression was downregulated in glioma samples and was inversely correlated with WHO grades of gliomas. In vivo assays confirmed that miR-451 had tumor suppressive traits. CAB39-3'UTR luciferase reporter assay confirmed CAB39 as a direct target gene of miR-451. Significant alterations in the expression of PI3K/AKT pathway factors were observed by Western blot assays. We conclude that miR-451 represses glioma in vitro and in vivo, likely through targeting CAB39 directly and inhibiting the PI3K/AKT pathway indirectly.     

miR-379-5p靶向CTSL调控肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的分子机制

目的:探讨微小RNA-379-5p（miR-379-5p）通过靶向组织蛋白酶L(CTSL)调控肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的作用机制。方法:选择本院收治的肺癌患者57例,取患者肺癌组织与癌旁组织,应用qRT-PCR法检测miR-379-5p与CTSL mRNA的表达水平;免疫组化法检测CTSL蛋白的表达情况。miR-con（miR-con组）、miR-379-5p mimics（miR-379-5p组）分别转染肺癌NC-H446细胞,miR-379-5p mimics与pcDNA（miR-379-5p+pcDNA组）、miR-379-5p mimics与pcDNA-CTSL（miR-379-5p+pcDNA-CTSL组）分别共转染肺癌NC-H446细胞,MTT检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell迁移与侵袭实验检测细胞迁移与侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证miR-379-5p与CTSL之间的靶向关系。Western blot检测CTSL、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、Cleaved caspase-3蛋白的表达。结果:肺癌组织中miR-379-5p的表达水平显著低于癌旁组织（P＜0.05）,而CTSL mRNA及蛋白阳性率均显著高于癌旁组织（P＜0.05）;与miR-con组比较,miR-379-5p组细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著增加（P＜0.05）,明显抑制Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达（P＜0.05）,而促进Cleaved caspase-3蛋白表达（P＜0.05）;双荧光素酶报告实验证明miR-379-5p可负向调控CTSL表达与活性;CTSL过表达可逆转miR-379-5p过表达对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的调控作用。结论:miR-379-5p过表达通过靶向CTSL而减弱肺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,诱导细胞凋亡。     

MicroRNA-106b promotes pituitary tumor cell proliferation and invasion through PI3K/AKT signaling pathway by targeting PTEN

The purpose of this study was to investigate the expression of microRNA-106b (miR-106b) and phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10 (PTEN) in pituitary tumor and to confirm whether miR-106b promotes proliferation and invasion of pituitary tumor cells through the PI3K/AKT signaling pathway by targeted regulation of PTEN expression, and thereby to find new targets for the treatment of pituitary tumor. Fifty-five cases of pituitary tumor tissue samples were collected, including 29 cases of invasive pituitary tumor, non-invasive 26 cases, and 8 normal pituitaries. The expression level of miR-106b in pituitary tumor tissue was detected by quantitative real-time PCR, and the expression of PTEN protein was detected by immunohistochemistry. PTEN 3′-untranslated region (UTR) luciferase vector was constructed, and dual-luciferase reporter gene assay was employed to examine the effect of miR-106b on PTEN 3′-UTR luciferase activity. AtT-20 cells were transfected with miR-106b mimics, miR-106b inhibitor, PTEN expression plasmid, and miR-106b mimics + PTEN expression plasmid respectively, and the changes in cellular proliferation and invasion were observed via MTT method and transwell assay respectively. PTEN messenger RNA (mRNA) expression was determined by quantitative real-time PCR, and western blotting was performed to detect the expression of PTEN, PI3K, AKT, and pAKT. miR-106b showed up-regulation in invasive pituitary tumor tissue: the expression level was significantly up-regulated compared with normal tissues and the non-invasive pituitary tumor tissue (P < 0.05). The positive rate of PTEN protein expression in invasive pituitary tumor tissues was significantly lower than in normal and non-invasive tissues (P < 0.01). Dual-luciferase reporter gene assay showed that miR-106b could bind to the 3ʹ-UTR of PTEN specifically and significantly inhibited the luciferase activity, cutting the 46 % (P < 0.01). Down-regulation of miR-106b or up-regulation of PTEN could suppress cell proliferation and invasion of AtT-20 cells, and PTEN expression plasmid could partially simulate the function of miR-106b. Expression of PTEN mRNA and protein decreased significantly in AtT-20 cells overexpressing miR-106b. The expression levels of PI3K and p-AKT were significantly inhibited by miR-106b inhibitor and increased by miR-106b mimics. The expression of miR-106b showed up-regulation in pituitary tumor tissues, while the protein expression of PTEN presented opposite results. The findings of this study further demonstrated that miR-106b as an oncogene regulated the pituitary tumor cell proliferation and invasion in vitro by directly targeting PTEN through the PI3K/AKT signaling pathway. Our study suggests that miR-106b and PTEN are likely to serve as potential diagnostic biomarkers or therapeutic targets for pituitary tumor treatment in the future.

     

miR-122通过靶向RUNX2诱导胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的 探讨微小RNA122（miR-122）对神经胶质瘤细胞凋亡的影响及可能分子机制。方法 采用荧光定量PCR（QPCR）检测人正常星形胶质细胞系HA1800和胶质瘤细胞系U251、U87、SHG44、MO59K中miR-122的表达情况。双荧光素酶报告实验评价miR-122对RUNX2的靶向调控作用。向U251细胞转染miR-122 mimics（miR-122组）和阴性对照NC（NC组），流式细胞术检测细胞凋亡，Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3的表达。向U251细胞同时转染miR-122 mimics和siRUNX2（miR-122+siRUNX2组），流式细胞术检测细胞凋亡。结果 U251、U87、SHG44、MO59K细胞系中miR-122表达水平分别为0.34±0.052、0.65±0.061、0.59±0.071和0.69±0.098，显著低于正常星形胶质细胞系HA1800的1.17±0.173，差异具有统计学意义（P＜0.05）。miR-122可抑制野生型RUNX2 3’UTR报告基因载体的荧光素酶活性，而对突变型RUNX2 3’UTR-MUT的荧光素酶活性无影响。miR-122组U251细胞凋亡率为（23.77±0.83）％，高于NC组的（6.17±0.12）％，差异具有统计学意义（P＜0.05）；低于miR-122+siRUNX2组的（70.85±0.35）％（P＜0.05）。Western blotting检测结果显示，miR-122组RUNX2蛋白表达量为0.57±0.048，低于NC组的1.21±0.19（P＜0.05）。与NC组比较，miR-122组Bax（3.47±0.077）、 cleaved caspase-3（4.38±0.121）表达均明显上调，而Bcl-2（0.39±0.104）明显下调（P＜0.05）。结论 miR-122可以通过靶向RUNX2促进线粒体凋亡通路的激活，促进神经胶质瘤细胞凋亡。     

替莫唑胺通过调控miR-216a/PRKCA抑制胶质瘤细胞U251增殖和侵袭作用的研究

目的:探讨替莫唑胺抑制胶质瘤细胞U251增殖和侵袭的作用,推测其作用机制是通过微小RNA-216a（microRNA-216a,miR-216a）/蛋白激酶Cα(protein kinase C-alpha,PRKCA)进行调控。方法:体外培养胶质瘤细胞U251,用不同剂量替莫唑胺染毒48 h后,构建野生型PRKCA 3' UTR-荧光素酶报告载体及检测荧光素酶活性,检测替莫唑胺对胶质瘤细胞U251增殖和侵袭的影响及miR-216a和PRKCA表达的影响。结果:miR-216a mimics使野生型PRKCA 3' UTR-荧光素酶报告载体的活性下降了47.52%,差异具有统计学意义（P＜0.05）;miR-216a mimics使突变型PRKCA 3' UTR-荧光素酶报告载体的活性下降不显著,差异无统计学意义（P＞0.05）。与空白对照组比较,低、中、高剂量组胶质瘤细胞U251增殖率、侵袭细胞数、PRKCA mRNA相对表达量和PRKCA蛋白表达量均降低,miR-216a mRNA相对表达量均增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;随着替莫唑胺剂量的增加,胶质瘤细胞U251增殖率、侵袭细胞数、PRKCA mRNA相对表达量和PRKCA蛋白表达量随之降低,miR-216a mRNA相对表达量随之增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:替莫唑胺可以通过促进miR-216a的表达而抑制PRKCA的表达,降低胶质瘤细胞U251增殖和侵袭。