IGFl对兔关节软骨细胞增殖的影响及其形态学观察

目的 :了解胰岛素样生长因子1 (IGF1 )对体外生长的兔关节软骨细胞增殖以及细胞超微结构的影响。方法 :应用兔关节软骨细胞体外单层培养 ,对照组培养液为含 1 0 %小牛血清DMEM ,实验组在培养液DMEM中加入IGFl使其终浓度为 1 0 0 μg·L- 1 ,作用细胞 1周 ,得出细胞生长曲线 ,并分别测得两组DNA含量。同时观察IGFl 作用后 ,软骨细胞超微结构的变化。结果 :结果显示IGFl能明显促进培养软骨细胞增殖。实验组DNA含量 ,与对照组相比 ,有统计学意义 (P<0 .0 1 )。在电镜下 ,细胞主要表现为增殖性改变 ,说明细胞代谢活跃。结论 :IGFl 可刺激软骨细胞增殖 ,细胞超微结构表现代谢活跃状态     

胰岛素样生长因子-Ⅰ对兔关节软骨细胞增殖及代谢的影响

目的　探讨胰岛素样生长因子 - (IGF- )对体外生长的关节软骨细胞分裂增殖及功能代谢的影响。方法　采用体外单层培养的方法 ,应用兔关节软骨细胞 ,对照组培养液为 10 %小牛血清 DMEM,实验组在培养液DMEM中加入 IGF- 使其终浓度分别为 3、10、30、10 0及 30 0 ng/ ml,作用细胞 2、4和 6天 ,检测细胞 DNA含量和基质中糖醛酸的含量。结果　 IGF- 在 3～ 30 0 ng/ ml浓度范围能明显增加培养软骨细胞的 DNA及糖醛酸的含量 ,且以30～ 10 0 ng/ ml作用 4天刺激效果最明显 ,与对照组相比 ,有统计学意义 (P<0 .0 1)。结论　 IGF- 对体外培养软骨细胞有刺激 ,并以剂量时间依赖性方式影响增殖及功能代谢。     

血小板源性生长因子对体外兔关节软骨细胞的生物学行为的影响

目的　了解血小板源性生长因子 (PDGF)对体外生长的兔关节软骨细胞的生物学效应 ,为组织工程构件软骨提供理论基础。方法　取第 3代兔关节软骨细胞体外单层培养 ,培养液DMEM中以终浓度分别为 3、 10、 30、 10 0、 30 0 μg .L 1的PDGF各作用细胞 2 ,4及 6d ,以MTT法检测细胞的增殖情况 ,并在 3μg .L 1PDGF作用下 ,采用流式细胞技术进行细胞周期亚时相分析。同时 ,检测基质中糖醛酸的变化反映蛋白多糖含量的变化。结果　结果显示在较低浓度 (3μg .L 1)PDGF即能明显促进培养软骨细胞的增殖 ,且以第 2d刺激效果最明显 ;增加因子浓度不能进一步促进细胞增殖。在 3～ 30 0 μg .L 1浓度下糖醛酸的含量变化不显著。结论　PDGF对培养软骨细胞以剂量时间依赖性方式刺激其增殖但对细胞的分泌功能代谢无明显影响     

胰岛素样生长因子对体外培养豚鼠肋软骨细胞的影响

目的：了解胰岛素样生长因子(insulin-1ike growthfactor-1，IGF-1)对体外培养豚鼠肋软骨细胞分裂增殖及功能代谢的影响。方法：体外单层培养豚鼠肋软骨细胞，对照组培养液为无血流清DMEM，实验组在培养液DMEM中加入IGF-1使其终浓度分别为10ng／ml、50ng／ml、100ng／ml，作用6天后，检测细胞DNA含量和培养液中糖醛酸的含量。结果：IGF-1在10～100ng／ml浓度范围能明显增加培养软骨细胞的DNA及糖醛酸的含量，且以50ng／ml作用效果最明显，与对照组相比，有统计擘意义(P＜0．01)。结论：IGF-1对体外培养肋软骨细胞有刺激，并以剂量依赖性方式影响细胞的增殖及功能代谢。     

JNK抑制剂对软骨细胞外基质合成的作用研究

目的探索JNK抑制剂(SP600125)对软骨细胞外基质合成的影响。方法获取、培养兔耳软骨细胞,通过CCK-8法测定SP600125对细胞增殖的影响。将兔耳软骨细胞接种于PGA/PLA支架,构建细胞-支架复合物,并随机分为实验组与对照组。实验组将细胞-支架复合物置于含有10%FBS和SP600125的DMEM中培养,对照组在含有10%FBS的DMEM中培养。体外培养8周后,RT-PCR检测IGF、COLⅡ、COLⅨ、TGF-β1等软骨特异性基因的表达,并行HE染色与Safranin-O染色。结果 CCK-8法检测显示,相较对照组,实验组软骨细胞的增殖明显增强;体外培养8周后,实验组软骨特异性基因IGF、COLⅡ、COLⅨ、TGFβ1的表达显著下降(P0.05);组织学观察显示,实验组软骨陷窝的成熟度低,细胞外基质分泌减少。结论 SP600125可降低软骨细胞外基质的合成。     

IGF-Ⅰ对培养兔关节软骨细胞作用的实验研究

目的 了解胰岛素样生长因子I（ICF－I）对培养关节软骨细胞增残及代谢的影响。方法 体外单层培养兔关节软骨细胞,实验组以10,100,200ng/mlICF-I作用细胞2,4,6天,对照组不加IGF－I作用培养细胞。检测细胞DNA及基质中糖醛酸含量,用流式细胞仪分析在100ng/mlIGF-I作用下细胞周期亚时相。结果 IGF－I在10－100mg/ml浓度范围内,对培养软骨细胞增残和代谢有促进作用,以100ng/ml浓度作用效果最佳,细胞周期分析,实验组DNA合成前期（G1期）较对照组缩短。结论 IGF－I促进软骨细胞的增殖与代谢,且通过缩短细胞G1期而缩短的细胞周期。     

培养软骨、关节软骨、生长板和半月板的超微结构研究

目的 探讨离心管培养软骨作为移植材料的可能性。方法 3周龄兔关节软骨细胞经离心管培养2周形成软骨,另取6周龄兔肱骨头关节软骨、肱骨近端生长板和半月板,并对4种软骨进行透射电镜观察,比较其软骨细胞和细胞外基质结构。结果 离心管培养软骨具有独特的超微结构,与关节软骨和生长板有一定的相似性,而与半月板有明显区别。4种软骨都形成了各自不同的细胞和细胞外基质特征,离心管培养软骨呈现典型软骨细胞凋亡,生长板表现“黑暗”软骨细胞,关节软骨和半月板未见细胞凋亡。结论 离心管培养软骨具有独特的超微结构,可作为关节软骨和生长板的移植物。     

IGF-1和bFGF对藻酸盐微球中兔耳弹性软骨细胞增殖活性和基质合成的影响

目的 利用藻酸盐微球体外培养兔耳弹性软骨细胞，观察IGF～1和bFGF对细胞增殖和基质合成的影响及协同作用效果。方法 酶消化法从兔耳获取软骨细胞，与1．2％藻酸钠混合，细胞浓度10^7／mL．经注射器滴入102mM的Cacl2溶液，形成软骨细胞／藻酸钙凝胶微球，用含10％ FBs的DMEM培养液体外培养，对照组不加生长因子，实验A、B和C组分别加入25ng／mL IGF-1、50ng／mL bFGF和25ng／mL IGF-l 50ng／mL bFGF，14d后终止培养，采用生物化学方法分析微球中的细胞DNA和GAG总量结果对照组、IGF-1组、bFGF组和IGF-1 BFGF组单个微球的DNA总量分别为3．5μg、3．6μg、6．6μg和6．2μg，统计分析结果显示IGF-1组的DNA含量与对照组之间、bFGF组和IGF-1 bFGF组之间没有明显差异，而IGF-1 bFGF组与对照组、IGF-1组之间均有明显差异，DNA含量明显增加。GAG含量为15．5μg、23．8μg、29．0μg和38．9μg，各实验组与对照组及各组之间均有显著差异。结论 IGF-1和bFGF对软骨细胞的影响体现在不同方面，IGF-1可以提高细胞的GAG合成总量，但并不促进软骨细胞的增殖，而bFGF的作用主要体现在细胞的增殖方面，IGF-1和bFGF联合应用的协同作用效果明显好于因子的单独应用，细胞增殖明显增加，GAG的含量也明显增加，表明不同生长因子的联合应用可能会产生更为理想的软骨形成条件。     

兔胚胎关节软骨细胞体外培养的研究

目的 探讨兔胚胎软骨细胞体外培养的生物学特性。方法 对孕4周兔胚胎关节软骨用酶消化法分离培养细胞。观察细胞存活率、贴壁率、生长曲线和组织形态学改变。结果 兔胚胎软骨细胞可从胚胎软骨组织中消化分离出来，经鉴定具有软骨细胞的特性。原代兔胚软骨细胞存活率达97％以上，细胞贴壁率达80％以上，从原代到第4代都有高增殖力，到第8代时增殖力降低。到第12代时几乎丧失细胞增殖。结论 体外培养的胚胎软骨细胞前4代适合于作修复关节软骨缺损的组织工程细胞。     

人脐带Wharton胶细胞外基质对软骨种子细胞的作用

目的 观察人脐带Wharton胶细胞外基质（hWJECM）对兔软骨细胞增殖的影响.方法用差速离心法制作hWJECM,制成0.5%浓度浆料分别铺于六孔细胞培养板和96孔细胞培养板上,形成1 mm厚的薄膜,包被有此膜的培养板作为试验组,未铺膜单纯培养液组作为空白对照组,在培养板上培养兔关节软骨细胞.通过倒置显微镜观察,甲苯胺蓝染色观察两个组的兔软骨细胞5,10,15天的生长形态和增殖情况,用CCK8细胞增殖实验比较两组的1、3、5、7 d的增殖情况,来评估软骨种子细胞的增殖和表型维持情况.结果倒置显微镜观察5、10、15 d的细胞增殖情况好于单纯培养液组,5、15 d的甲苯胺蓝染色的结果也证明这个观点,CCK8细胞增殖试验1,3天时试验组和对照组的增殖没有明显的统计学差异（P=0.7142; P=0.0657）,第5,7天显示hWJECM组在细胞增殖方面明显地优于单纯培养液的对照组（P=0.0001;P=0.0006）.结论 hWJECM免疫原性低,无细胞毒性作用,能够很好地促进软骨细胞的增殖.     

胫骨干骨折的手术治疗对策

目的：明确不同固定器械在胫骨干不同骨折类型固定中的特点，以指导临床应用。方法：68例胫骨干骨折，行加压钢板螺钉、交锁髓内钉、单侧外固定架固定后，作临床疗效分析。结果：加压钢板固定组42例，感染5例，骨不连1例，平均愈合时间3．8个月；交锁髓内钉固定组13例，无感染及骨不连，平均愈合时间5．4个月；单侧外固定架组13例，骨不连1例，踝关节背伸受限3例，平均愈合时间4．5个月。结论：胫骨骨折交锁髓内钉固定并发症少，功能恢复好，适用范围广，但要注意及时进行动力加压。加压钢板及外固定架固定应选择各自的最佳适应证，以达到理想的疗效。     

不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效分析

目的：探讨不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效。方法：2008年3月-2013年2月收治指尖离断患者80例,38例吻合指侧方静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1或1：2或2：2,平均1：2;22例吻合指腹静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1;20例未吻合静脉,术中仅吻合1条动脉,行侧切口或甲床放血。观察各组治疗效果。结果：吻合指侧方静脉组手指全部成活,无一例发生回流障碍;吻合指腹静脉组19例发生静脉危象,其中4例手指坏死;未吻合静脉组20例均发生回流障碍,其中6例手指坏死。58例获随访,随访时间6~28个月。吻合指侧方静脉组32例,指尖外形佳、指腹饱满;吻合指腹静脉组14例,指体轻度萎缩,指甲生长不平整;未吻合静脉组12例,指体萎缩明显。吻合指侧方静脉组指甲生长近平整,长度长于其他两组[（14.4±3.2）mm比（12.5±2.3）mm和（12.2±2.2）mm],远侧指间关节活动度大于其他两组[（63±5）°比（48±3）°和（45±7）°],两点分辨觉小于其他两组[（4.6±0.4）mm比（7.1±1.2）mm和（7.3±0.6）mm],感觉级别高于其他两组[S（3.45±0.39）级比S（2.57±0.42）级和S（2.55±0.49）级],差异均具有显著性（P〈0.05）。吻合指腹静脉组和未吻合静脉组在指甲长度、运动和感觉方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：吻合指侧方静脉能有效解决指尖再植静脉回流问题,可避免回流障碍,成活率高,促进指甲生长,可恢复 DIPJ 活动度及感觉。