三七二醇皂苷预处理诱导脑缺血耐受及对热休克蛋白70表达的影响

目的 观察三七二醇皂苷诱导脑缺血耐受及对大鼠脑内热休克蛋白70(HSP70)表达水平的影响.方法 80只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为四组:大脑中动脉缺血组给予一次假手术,3d后大脑中动脉缺血2h,再灌注22h;预缺血组二次线栓法建立脑缺血再灌注模型,预缺血10min,3d后大脑中动脉缺血2h,再灌注22h;三七二醇皂苷预处理组提前3d给予三七二醇皂苷,3d后大脑中动脉缺血2h,再灌注22h;假手术组给予两次假手术,仅暴露动脉结构,不插线阻断大脑中动脉.比较各组梗死体积、组织病理变化及HSP70的表达.结果 三七二醇皂苷预处理组梗死体积较预缺血组及梗死组减小,神经元损伤、坏死轻于后者,HSP70表达高于大脑中动脉缺血组及假手术组.结论 三七二醇皂苷预处理可有效诱导缺血耐受,减小梗死体积,减轻缺血性神经损伤,HSP70表达上调可能是脑缺血耐受的分子机制之一.     

参元丹晚期药理预适应对大鼠缺血再灌注心肌PKC及HSP70的影响

目的应用免疫组化法观察蛋白激酶C（PKC）及热休克蛋白（HSP70）表达,探讨参元丹（SYD）的晚期药理性预适应作用及其机制。方法选取清洁级健康成年Wistar大鼠60只。随机分为6组,分别为对照组、再灌注组、晚期假性缺血预处理组、晚期缺血预处理组、晚期药物预处理加缺血预处理组、晚期药物预处理组。每组10只。分别造模,取血、心肌组织。应用HE染色方法对组织切片进行染色,彩色病理图像分析心肌梗死面积。20倍镜下观察PKC及HSP70表达情况。结果彩色病理图像分析,SYD能够代替心绞痛缺血、缺氧刺激,减小心肌梗死面积,具有晚期药理性预适应的心脏保护作用。晚期假性缺血预处理组、晚期药物预处理加缺血预处理组、晚期药物预处理组无PKC的表达,提示PKC未参与晚期缺血预适应的细胞内信号转导。晚期缺血预处理组、晚期药物预处理加缺血预处理组均有HSP70大量表达,晚期药物预处理组亦有HSP70表达,提示晚期缺血预处理的心肌保护作用机制与HSP70有关,SYD具有独立的晚期药理预适应作用,晚期药物预处理组＋缺血预处理组的HSP70表达有SYD作用存在;SYD的心肌保护作用机制与HSP70有关。结论SYD具有晚期药理预适应样心肌保护作用;SYD晚期预适应心肌保护作用的机制可能与HSP70的介导有关;SYD晚期预适应可能与缺血预适应协同发挥心肌保护作用。     

三七二醇皂甙预处理诱导脑缺血耐受及对白细胞介素-1β（IL-1β）mRNA表达的影响

目的通过观察三七二醇皂甙（PDS）预处理对局灶性脑缺血脑组织中白细胞介素-1β（IL-1β）mRNA表达水平的影响,探讨其能否诱导缺血耐受及可能的作用机制。方法将120只SD大鼠随机分为空白组、模型组、预缺血＋模型组、PDS预处理组、PDS治疗组、假手术组6组,各20只。空白组不给予任何干预;模型组连续3 d腹腔注射0.9%氯化钠注射液后,给予2 h大脑中动脉闭塞（MCAO）,再灌注22 h后处死;预缺血＋模型组给予预缺血10 min,连续腹腔注射0.9%氯化钠注射液3 d后再给予2 h MCAO,再灌注22 h后处死;假手术组给予10 min假手术,3 d后给予2 h假手术,24 h后处死动物;PDS预处理组给予3 d PDS后给予2 h MCAO,造模后24 h处死;PDS治疗组予2 h MCAO,再予PDS治疗3 d后处死。造模后HE染色观察病理改变、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测IL-1βmRNA表达水平。结果预缺血＋模型组、PDS预处理组的IL-1βmRNA表达水平与模型组比较降低,比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论PDS预处理诱导了脑缺血耐受,对将要发生的严重脑缺血具有保护作用,抑制炎性反应可能是PDS预处理诱导脑缺血耐受重要机制。     

甘草总黄酮对大鼠局灶性脑缺血后热休克蛋白的影响

目的探讨甘草总黄酮对大鼠局灶性脑缺血后热休克蛋白的影响。方法用线拴法建立大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型。40只大鼠随机分为5组,每组8只：假手术组、缺血组、甘草总黄酮小剂量组、甘草总黄酮大剂量组、尼莫地平组,缺血前30 min舌下静脉给药,缺血2h,再灌注24h后处死动物,测定脑梗死体积及脑组织热休克蛋白（HSP70）的表达。结果甘草总黄酮治疗组与缺血组相比脑梗死体积缩小,脑组织HSP70的表达增加。结论甘草总黄酮对大鼠局灶性脑缺血具有防治作用,其作用机制可能与上调HSP70的表达有关。     

参元丹药理预适应对大鼠缺血再灌注心肌梗死面积、蛋白激酶C及热休克蛋白70的影响

目的:应用免疫组化法观察蛋白激酶C(PKC)及热休克蛋白70(HSP70)表达,探讨参元丹的药理性预适应作用及其机制。方法:选取Wistar大鼠60只,随机分为6组,分别造模、取血、取心肌组织。应用HE染色方法对组织切片进行染色,4倍镜下采用彩色病理图像分析系统分析心肌梗死面积。应用免疫组化试剂盒对组织切片进行处理。20倍镜下观察PKC及HSP70表达情况。结果:彩色病理图像分析参元丹能够代替心绞痛的缺血、缺氧的刺激,减小心肌梗死面积,具有药理性预适应的心脏保护作用。PKC的表达情况:假性缺血预处理组的心肌组织中偶见微弱的一处表达。缺血预处理组和药物预处理+缺血预处理组的大鼠心肌组织中PKC大量的表达,药物预处理组大鼠心肌组织的PKC表达充分,提示PKC在参元丹的药理性预适应样心肌保护过程中起作用。HSP70的表达情况:对照组、再灌注组、假性缺血预处理组、缺血预处理组HSP70没有表达,药物预处理组HSP70有表达,药物预处理+缺血预处理组HSP70表达明显,提示HSP70的表达与参元丹的作用相关。结论:参元丹具有药理预适应样作用;参元丹预适应心肌保护作用的机制可能与PKC和HSP70的介导有关。     

HO-1蛋白介导艾灸预处理改善大鼠脑缺血再灌注损伤机制的初步研究

目的:观察艾灸预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及部分机制研究。方法:将实验按随机数字表法分为假手术组、脑缺血再灌注损伤组(MCAO组)、艾灸预处理每日1次组、艾灸预处理每日2次组4组,TTC染色及图像软件分析大鼠脑梗死体积,western-blot法检测脑组织中血红素氧合酶-1(HO-1)表达的变化。结果:MCAO组出现明显的神经功能缺失,各预处理组症状明显改善,且预处理组每日2次组优于每日1次组;假手术组脑组织均匀红色无梗死灶,MCAO组明显梗死苍白区;艾灸预处理较MCAO梗死体积均减小,且预处理每日2次组最为明显;MCAO组血浆CO浓度显著升高,各预处理组CO浓度降低,且每日2次组最显著;MCAO组HO-1蛋白表达均显著增加,各预处理组HO-1蛋白表达显著降低。结论:艾灸预处理能保护脑组织缺血再灌注损伤,其机制可能与通过下调HO-1蛋白表达,减少CO的合成和释放有关。     

三七总皂苷对脑缺血再灌注大鼠BDNF表达的影响

目的：三七总皂苷对大鼠大脑中动脉脑缺血/再灌注（MCA-CI/RP）保护作用及机制。方法：参考Longa线栓法建立大鼠MCA-CI/RP动物模型。根据Longa 5分法进行神经功能评分,应用TTC染色法测定脑梗死体积,TUNEL技术原位标记凋亡细胞,免疫组化法检测脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor BDNF）的表达。结果：三七总皂苷可以缩小MCA-CI/RP大鼠脑梗死体积、神经细胞凋亡及梗死后神经功能缺损程度,并可促进神经功能恢复和增加缺血脑组织内源性BDNF的表达。结论：三七总皂苷可能通过增加缺血脑组织内源性BDNF的表达而产生神经保护作用,大剂量三七总皂苷组优于小剂量组。     

丁苯酞预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后HSP70与TLR4表达的影响

目的观察热休克蛋白（HSP70）与Toll样受体4（TLR4）在局灶性脑缺血再灌注中的表达规律及丁苯酞（NBP）预处理对其表达规律的影响,探讨NBP预处理防治脑缺血的作用。方法 72只成年雄性Wistar大鼠随机分为假手术对照组、NBP预处理组（缺血再灌注组）,根据再灌注时间不同分为再灌注6 h、12 h、24 h4、8 h亚组。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉局灶缺血再灌注模型,HE染色观察脑组织形态病理学变化;采用DNA原位末端缺口标记法（TUNEL）检测神经元凋亡;免疫组化法测定大鼠脑缺血再灌注不同时间HSP70与TLR4的平均灰度值。结果与假手术组比较,缺血再灌注组HSP70在缺血再灌注6 h明显升高,于24 h达到峰值（P〈0.05）,TLR4在缺血再灌注6 h时表达较高,随灌注时间延长表达逐渐增高（P〈0.05）;NBP预处理组HSP70与TLR4阳性表达在各时间点明显增加但低于手术组（P〈0.05）。结论 NBP预处理可降低脑缺血再灌注损伤大鼠TLR4及其内源性配体HSP70的表达,有效防治脑缺血再灌注损伤。     

肾脑复元汤对脑缺血大鼠BDNF及bFGF表达的影响

目的探究肾脑复元汤的脑保护作用及其机制。方法 72只大鼠随机分为假手术组、大脑中动脉梗死模型组(MCAO)、肾脑复元汤组(MCAO+肾脑复元汤灌胃),各组再根据处死时间随机分为7、14、21 d三个时相组;观察各组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积、缺血海马区坏死细胞数、神经营养因子BDNF及b FGF表达。结果与模型组相比,肾脑复元汤组大鼠神经功能缺损评分明显降低(P0.01),脑梗死体积明显缩小(P0.01),坏死细胞数明显减少(P0.01),BDNF(第7、14天)及b FGF(第7天)表达明显增加(P0.01)。结论肾脑复元汤可以明显改善脑缺血再灌注大鼠神经功能,并促进脑梗死组织修复,其机制可能是通过促进内源性神经营养因子BDNF及b FGF的表达。     

通心络胶囊对大脑中动脉栓塞模型大鼠Caspase-3、P53、HSP70表达的影响

目的:观察通心络胶囊对大脑中动脉栓塞(Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO)模型大鼠Caspase-3、P53、HSP70表达的影响,探讨通心络胶囊在缺血脑保护中的作用及可能机制。方法:MCAO模型雄性SD大鼠随机分3组:MCAO模型组、MK-801组、通心络胶囊组。各组大鼠在缺血24h后冰冻切片机切各组大鼠大脑,分别行Caspase-3、P53、HSP70免疫组化染色,于高倍物镜下选择标记阳性细胞表达明显的区域,对其相邻5个视野区采用HP1000高清晰度彩色病理图像分析系统计算免疫阳性细胞。结果:缺血24h后,Caspase-3、P53值在通心络组、MK-801组的表达较模型组明显减少(P<0.05),且通心络组较MK-801组表达更少(P<0.05);HSP70在通心络组和MK-801组的表达较模型组明显增多(P<0.05),且通心络组较MK-801组表达更多(P<0.05)。结论:通心络胶囊能够明显抑制Caspase-3、P53的表达,促进HSP70的表达。     

三七二醇预处理诱导脑缺血耐受及对GFAP表达的影响

目的:观察三七二醇皂甙(PDS)预处理诱导脑缺血耐受及对胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达水平的影响。方法:SD雄性健康大鼠120只,随机分为6组。空白组未行任何干预;模型组(MCAO组)采用longa氏二次线栓法;预缺血 模型组(IPC MCAO组)先预缺血10 min,3 d后行MCAO术2 h;三七二醇预处理组(PDS MCAO组)予腹腔注射PDS 50 mg/kg.d,3 d后行MCAO术2 h;三七二醇治疗组(MCAO PDS组)予MCAO术后2 h腹腔注射PDS 50 mg/kg.d,3 d后处死;假手术组(SS SS组)间隔3 d分别施以10 min和2 h假手术。比较各组神经功能缺损评分、脑梗死体积及GFAP的表达水平。结果:IPC MCAO组、PDS MCAO组脑梗死体积较MCAO组缩小,GFAP表达水平较MCAO组升高,有统计学差异(P<0.05)。结论:PDS预处理诱导了脑缺血耐受,对将要发生的严重脑缺血具有保护作用。星形胶质细胞的活化可能是三七二醇预处理诱导脑缺血耐受的重要机制。     

清热化瘀方对脑缺血预处理大鼠GADD34表达的影响

目的观察清热化瘀方对脑缺血预处理大鼠缺血再灌注后生长停滞与DNA损害可诱导基因34(GADD34)mRNA及其蛋白表达的影响。方法 SD大鼠160只,随机分为假手术组、脑缺血再灌注组、脑缺血预处理组、清热化瘀方组,每组按照再缺血后12 h、1 d、2 d、3 d 4个时间点分为4个亚组。采用二次线栓法制备大鼠局灶性脑缺血预处理模型,用原位杂交法和Western blot法观察再缺血后各个时间点GADD34 mRNA及其蛋白的表达变化。结果脑缺血再灌注组12 h GADD34 mRNA及其蛋白表达均达高峰,随再灌注时间延长其表达逐渐下降(P0.05,P0.01);缺血预处理组GADD34mRNA及其蛋白表达较缺血再灌注组均明显升高(P0.05,P0.01);清热化瘀方组较脑缺血预处理组进一步升高其表达(P0.05,P0.01)。结论脑缺血预处理可能通过诱导GADD34表达发挥其神经的保护作用,清热化瘀方可进一步促进其神经保护作用。     

沙棘籽油对大鼠急性缺血性脑梗死的保护作用

目的 :旨在探讨沙棘籽油对大鼠急性缺血性脑梗死的保护作用。方法 :采用大脑中动脉 (MCA)阻断术制作大鼠缺血性脑梗死模型 ,观察药物对脑梗死大鼠脑梗死体积和行为障碍的影响。结果 :沙棘籽油大剂量 (0 .7g·kg^-1)和小剂量 (0.35g·kg^-1)均能明显改善MCA阻断大鼠的行为障碍 ,并能减少脑梗死范围。结论 :沙棘籽油对大鼠急性缺血性脑梗死具有明显的保护作用。     

冠元颗粒增强局灶性脑缺血耐受的作用机制研究

目的探讨冠元颗粒对局灶性脑缺血耐受的影响及其作用机制。方法30只SD大鼠随机分为3组,模型组10只予单纯预缺血+缺血(IPC+MCAO),给药组10只予预缺血+冠元颗粒+缺血(IPC+GY+MCAO)处理,假手术组以假手术代替预缺血,余同模型组。利用线栓法建立局灶性脑缺血耐受的动物模型。比较各组神经功能评分、组织病理改变及脑源性神经营养因子(BDNF)表达的变化。结果局灶性缺血预处理能够有效促进大鼠的神经行为功能的恢复,减轻组织学的损伤,增加BDNF表达,其中给药组病理改变最轻,其BDNF水平较模型组有显著性差异(P<0.05)。结论局灶性缺血预处理对随后的脑梗死有明显的保护作用,能够诱导缺血耐受的产生,其可能的机制之一是上调BDNF的表达;冠元颗粒能够进一步诱导其表达的上调,增强其对神经元的保护作用,减轻再次缺血的损伤。     

Effect of Ginkgo biloba leaf extract on cerebral cortex amino acid levels in cerebral ischemia model rats

OBJECTIVE: To investigate the effect of Ginkgo biloba leaf extract on amino acid levels in the cerebral cortex of cerebral ischemia model rats induced by middle cerebral artery occlusion(MCAO).METHODS: A rat model of cerebral ischemia was established by MCAO. Male rats were divided into a negative control group(Control), a sham-operated group(Sham), an ischemic group(MCAO), and an ischemic group treated with Ginkgo biloba leaf extract(MCAO_D). All groups were divided into two subgroups with occlusion times of 12 and 24 h, respectively. The levels of 18 endogenous amino acids in the cerebral cortex were quantified by triple quadrupole-liquid chromatography-mass spectrometry.RESULTS: Compared with the MCAO group, behavioral performance, neurological deficit score, and cerebral infarct volume were significantly improved in the MCAO_D group(P 0.05, P 0.01). Compared with the sham group, the levels of 17 amino acids in the cerebral cortex were markedly changed in the MCAO group. The levels of Alanine(Ala), Isoleucine(Ile), Glutamic acid(Glu), Serine(Ser), Valine(Val), Phenylalanine(Phe), Proline(Pro),Threonine(Thr), Lysine(Lys), Tyrosine(Tyr), Hydroxyproline(Hyp), Arginine(Arg), Leucine(Leu),Tryptophan(Trp), and Glycine(Gly) were increased(P 0.001, P 0.05), while levels of Gln and Tau were decreased(P 0.001, P 0.05). Compared with the MCAO group, Ginkgo biloba extract treatment in the MCAO_D group significantly down-regulated the levels of 11 amino acids, especially those of Arg, Thr, and Ser in 12 or 24 h.CONCLUSION: Injection of Ginkgo biloba leaf extract has a therapeutic effect on model rats with MCAO-induced cerebral ischemia by acting on amino acids in the cerebral cortex. This effect might be associated with the regulation of amino acid metabolism in the cerebral cortex.     

原花青素对大鼠脑缺血再灌注损伤Caspase-3和Caspase-9活性的影响

目的 探讨原花青素(procyanidin,PC)对脑缺血再灌注损伤大鼠Caspase-3和Caspase-9活性的影响.方法 将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、PC低剂量治疗组和PC高剂量治疗组,线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型.采用四肽酶底物法检测脑缺血90 min再灌注24 h大鼠Caspase-3和Caspase-9活性,进行神经症状评分,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色和HE染色观察脑梗塞体积及病理形态学变化.结果 脑缺血再灌注24 h,缺血再灌注组Caspase-3和Caspase-9活性增加,与假手术组比较,差异具有显著性(均P<0.05);与缺血再灌注组比较,PC高、低剂量治疗组均显著减少Caspase-3和Caspase-9活性,高、低剂量组之间差异亦具有显著性(P<0.05).PC高、低剂量治疗组神经功能缺失评分较缺血再灌注组降低(P<0.05).PC高、低剂量治疗组脑梗死体积较缺血再灌注组减小,高、低剂量组之间差异具有显著性(P<0.05).PC高、低剂量治疗组脑组织缺血损伤病理学改变明显轻于缺血再灌注组,PC高剂量治疗组缺血改变亦轻于低剂量治疗组.结论 PC对缺血再灌注脑损伤具有保护作用,其机制可能与减少Caspase-3和Caspase-9活性,抗凋亡有关.     

葛根黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨葛根黄酮对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:采用大鼠大脑中动脉栓塞模型,研究葛根黄酮对脑缺血再灌注脑组织含水量和脑梗死体积,脑组织中SOD,MDA的影响。结果:葛根黄酮能明显降低大脑中动脉大鼠脑含水量,缩小脑梗死体积,提高SOD的活性,减少缺血再灌大鼠MDA的含量。结论:葛根黄酮具有抗自由基损伤和保护缺血脑组织的作用。     

清热化淤方对脑缺血预处理大鼠ATF4、Caspase-12表达的影响

目的 观察清热化淤方对脑缺血预处理大鼠缺血再灌注后ATF4、Caspase-12 mRNA及其蛋白表达的影响.方法 SD大鼠160只,随机分为假手术组(SO)、脑缺血再灌注组(MCAO)、脑缺血预处理组(BIP)、清热化淤方干预组(QRHY)四组,每组按照再缺血后12h、1d、2d、3d四个时间点分为4个亚组.采用二次线栓法制备大鼠局灶性脑缺血预处理模型,用原位杂交法和Western blot法观察再缺血后各个时间点ATF4、Caspase-12 mRNA及其蛋白的表达变化.结果 ①MCAO组12h ATF4mRNA及其蛋白表达均达高峰(P＜0.01),随再灌注时间延长其表达逐渐下降;BIP组较MCAO组ATF4mRNA及其蛋白表达均明显降低(P＜0.05,P＜0.01);QRHY组较BIP组进一步降低其表达(P ＜0.05,P＜0.01).②MCAO组12 h Caspase-12 mRNA及其蛋白表达均达高峰,随再灌注时间延长其表达逐渐下降(P ＜0.01);BIP组较MCAO组Caspase-12mRNA及其蛋白表达均明显降低(P＜0.05,P＜0.01);QRHY组较BIP组进一步降低其表达(P＜0.05,P＜0.01).结论 清热化淤方可通过下调大鼠脑缺血预处理后ATF4、Caspase-12表达发挥其神经保护作用.     

化浊行血汤对局灶性脑缺血再灌注大鼠的脑梗死体积和细胞死亡的影响

目的：研究化浊行血汤对局灶性脑缺血再灌注大鼠行为学、脑梗死体积和细胞坏死、凋亡的影响。方法：用大脑中动脉线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,检测脑梗死体积,并比较其神经功能行为积分;应用流式细胞仪和Annexin-V试剂盒检测缺血中心区和缺血半暗带区的细胞坏死率和凋亡率。结果：与模型组比较,治疗组脑梗死体积明显缩小（P〈0.01）,治疗组大鼠神经功能行为积分明显下降（P〈0.01）,缺血半暗带区的细胞坏死率和凋亡率明显降低（P〈0.05）。结论：化浊行血汤可减少局灶性脑缺血再灌注大鼠脑梗死体积,改善脑缺血后神经行为症状,降低缺血半暗带区的细胞坏死率和凋亡率。