微小RNA-5688在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义

目的　分析miRNA-5688在鼻咽癌组织中的表达及其临床意义。方法　采用实时定量PCR方法检测鼻咽癌患者组织及癌旁组织中miRNA-5688的表达水平,分析其与病理特征及预后的关系。结果　鼻咽癌患者癌组织中miRNA-5688表达（2.34±0.61）明显低于癌旁组织（7.53±1.18）（P <0.05）。不同性别、年龄的鼻咽癌患者癌组织中miRNA-5688表达比较差异均无统计学意义（P 均＞0.05）,但不同分化程度、T分级、N分级、TNM分期及是否发生淋巴结转移的患者癌组织中miRNA-5688表达差异均有统计学意义（P 均<0.05）。生存曲线结果显示,miRNA-5688低表达组的平均生存时间明显短于miRNA-5688高表达组（P <0.05）,平均生存时间分别为28.5个月和36.3个月。结论　miRNA-5688与鼻咽癌的发生、发展及预后有密切关系,是鼻咽癌潜在的治疗靶点及生物标志物。     

血清microRNA-329水平与鼻咽癌发生发展的相关性分析

目的　探究血清microRNA-329水平与鼻咽癌发生发展的相关性进行研究。方法　对2009~2011年200例鼻咽癌患者的血清进行采集,并收集患者的相关临床资料,作为研究组;200例正常人的血清,作为正常对照组。采用microRNA芯片技术对两组的血清microRNA水平进行检测。通过单因素分析及多因素logistic非条件性分析的方式对microRNA-329与患者的各项临床指标进行检验。本研究同时对组织中的microRNA-329的表达进行检测,与血清microRNA-329水平进行对比。结果　相比于正常体检人群,鼻咽癌患者的血清microRNA-329水平相对表达率为（18.01±2.25）%,表达水平明显低于健康对照者,呈现明显的低表达。鼻咽癌患者血清microRNA-329水平与肿瘤分化程度、是否发生转移、肿瘤分期及5年内复发与否具有明显的相关性,且结果具有统计学差异,低血清microRNA-329水平、是否发生转移、5年内复发均为鼻咽癌患者较差预后水平的独立危险因素,OR值大于1。在鼻咽癌患者的鼻咽癌组织中microRNA-329水平显著低于癌旁组织 中的microRNA-329水平,且结果具有统计学差异。结论  血清microRNA-329的低表达水平与鼻咽癌患者不良预后密切相关血清microRNA-329可以作为一种预测鼻咽癌患者预后效果的标记物。     

外泌体miRNAs在鼻咽癌放射抵抗中的作用

目的　探讨外泌体microRNA在鼻咽癌放疗抵抗中的作用。方法　利用射线照射获得放疗抵抗性鼻咽癌CNE2细胞（R-CNE2）,比较R-CNE2和CNE2细胞外泌体 中miRNA23-a和miRNA21表达水平。将R-CNE2细胞外泌体与CNE2细胞共培养,检测其对CNE2放疗抵抗的影响。结果　R-CNE2细胞外泌体产量为（11.97±1.8）μg/106细胞,高于CNE2细胞[（2.45±0.87）μg/106细胞,t =4.25,P =0.000]。R-CNE2细胞外泌体中miRNA23-a和miRNA21表达水平高于CNE2细胞外泌体（t miRNA23-a=3.47,P =0.000;t miRNA21=4.38,P =0.007）。抑制外泌体miRNA23-a后,CNE2细胞经射线照射后活力为56.75%±10.43%;而 抑制miRNA21后,CNE2细胞经射线照射后活力为24.25%±5.67%,明显低于外泌体+射线处理组（F =3.54,P =0.000）。miRNA-21模拟物组细胞活力为60.5%±5.92%大于单纯射线处理组（17%±2.55%,F =4.24,P =0.000）;而miRNA23 - a 模拟物组与单纯射线组无明显差异（26.25%±11.32%,F =2.28,P =0.27）。结论　外泌体miRNA21可能在CNE2细胞放疗抵抗中起主要作用。     

血清微小RNA-222-3p在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的　探讨血清微小RNA-222-3p（miR-222-3p）在甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC）中的表达及其临床意义。方法　提取121例PTC及甲状腺良性疾 病患者血清中的总RNA,采用qRT-PCR方法检测miR-222-3p的表达情况,分析其与PTC临床病理特征的关系,并探讨其对PTC的临床诊断价值。结果　血清miR-222-3p在PTC患者中的中位表达水平显著高于良性对照组（2.2188 vs0.7022,P <0.05）。血清miR-222-3p的表达水平与PTC的肿瘤最大径、双侧累及、病灶数量及淋巴结转移状况等密切相关（P 均<0.05）,但与性别、年龄、被膜侵犯及TNM分期等无关（P 均>0.05）。ROC曲线分析显示,miR-222-3p诊断PTC的AUC为0.717,灵敏度为79.75%,特异性为61.90%。结论血清miR-222-3p在PTC患者中高表达,其表达水平能反映PTC的进展情况,并对PTC的临床诊断具有一定价值。     

miR-30c对鼻咽癌CNE-1细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的 观察miR-30c对鼻咽癌CNE-1细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法 过表达miR-30c质粒载体转染CNE-1细胞,同时设立空质粒载体转染阴性对照组和无处理的空白对照组。荧光定量PCR检测miR-30c表达水平,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。结果 鼻咽癌组织中miR-30c的表达量为0.23±0.05,显著低于癌旁非肿瘤鼻咽组织的0.37±0.08（P <0.01）。过表达miR-30c组表达量（0.46±0.12）显著高于空白对照组（0.17±0.03）和阴性对照组（0.18±0.04）（P 均<0.01）。在24、48、72小时过表达miR-30c组OD值显著低于空白对照组和阴性对照组（P 均<0.01）。过表达miR-30c组G1期细胞比例（90.36±10.23）% 显著高于空白对照组（74.46±9.14）%和阴性对照组（75.25±9.23）%（P <0.01）。过表达miR-30c组凋亡细胞比例（31.06±5.12）%显著高于空白对照组（3.18±0.72）%和阴性对照组（3.56±0.78）%（P <0.01）。结论 过表达miR-30可以现在抑制鼻咽癌细胞增殖、细胞周期以及诱导细胞凋亡。     

鼻咽癌细胞中增强型表达载体调控TK基因与端粒酶活性关系的研究

目的:探讨人端粒酶催化亚单位(hTERT)基因核心启动子和原核增强子CMV联合调控单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/更昔洛韦系统对TK基因的活性改变及与鼻咽癌细胞中端粒酶活性的关系。方法:将改良构建后的增强型载体pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp-CMV enhancer及单启动子载体pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp(作为对照组)分别转染端粒酶阳性的人鼻咽癌5-8F细胞株及对照组细胞人乳腺癌MCF-7细胞(端粒酶阳性)及正常人血管内皮ECV细胞(端粒酶阴性),采用荧光显微镜下观察其TK基因绿色荧光蛋白表达,实时荧光定量PCR方法检测转染细胞中TK基因mRNA定量表达差异,TRAP银染法检测肿瘤细胞转染前后端粒酶活性改变并分析TK基因表达与端粒酶活性之间的关系。结果:①增强型表达载体转染鼻咽癌5-8F细胞及乳腺癌MCF-7细胞均有很强的荧光表达及TK基因的mRNA表达,比单启动子pGL3-basic-EGFP-TK-hTRETp及ECV细胞绿色荧光要强。实时荧光定量PCR显示,增强型载体组A值亦较对照组明显增高。②转染增强型载体(加GCV)后TRAP银染法检测鼻咽癌5-8F细胞端粒酶活...     

微小RNA-548c-3p通过靶向调控PCNA基因表达对喉癌细胞增殖及凋亡影响的研究[论著]

目的　探讨微小RNA-548c-3p（miR-548c-3p）对喉癌细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。方法　用miR-548c-3p mimic、增殖细胞核抗原（PCNA）-siRNA及其阴性对照分别或同时转染喉癌TU686和M4e细胞,用qRT-PCR与Western blot法检测miR-548c-3p和PCNA的表达;MTT法和流式细胞术分别检测转染细胞的增殖和凋亡;双荧光素酶报告基因实验观察miR-548c-3p和PCNA的靶向关系。Western blot法检测PCNA、细胞周期蛋白1（CyclinD1）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）的表达。结果　miR-548c-3p的表达量在癌旁组织（0.74±0.10）、喉癌组织（1.94±0.16）,TU686细胞（0.35±0.07）和M4e细胞（0.41±0.03）中均呈低表达,而PCNA mRNA和蛋白均呈高表达,差异有统计学意义（P 均＜0.05）。证实PCNA上存在miR-548c-3p的结合位点。上调miR-548c-3p可抑制细胞增殖及CyclinD1、Bcl-2的表达,并可促进细胞凋亡及Bax的表达,差异有统计学意义（P 均＜0.05）;上调miR-548c-3与抑制PCNA对细胞增殖及凋亡的作用相似。pcDNA-PCNA显著减弱miR-548c-3p mimic对细胞增殖和凋亡的作用。结论　miR-548c-3p通过抑制PCNA表达而降低喉癌细胞增殖能力并诱导细胞凋亡。     

鼻咽癌患者血清中活性氧、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性测定

目的 :测定鼻咽癌患者血清中活性氧 (ROS)、超氧化物歧化酶 (SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH PX)的活性水平 ,以探讨鼻咽癌患者体内自由基代谢状态及其在鼻咽癌发生、发展中的作用。方法 :分别采用Fenton反应显色法 ,黄嘌呤氧化酶法和二硫代二硝基苯甲酸法对 4 0例鼻咽癌患者 (鼻咽癌组 )和 2 0例健康体检者 (对照组 )血清中ROS、SOD和GSH PX水平进行检测。结果 :鼻咽癌组血清中ROS活性 [(11 32 7.835±4 83.777) /(U·ml-1) ]显著高于对照组 [(10 2 6 2 .712± 5 2 5 .2 87) /(U·ml-1) ](P <0 .0 5 ) ,SOD和GSH PX活性[(76 .6 19± 2 2 .2 83) /(NU·ml-1) ,(98.6 5 3± 4 6 .374 ) /AU ]显著低于对照组 [(15 4 .6 0 3± 2 7.2 4 1) /(NU·ml-1) ,(30 7.872± 116 .2 75 ) /AU](P <0 .0 5 ) ;不同病理类型鼻咽癌患者血清中ROS、SOD和GSH PX活性间的差异均无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论 :鼻咽癌患者体内自由基代谢紊乱 ,抗氧化损伤能力显著下降 ,给予抗氧化治疗有利于抑制鼻咽癌的发展     

SHCBP1高表达促进鼻咽癌细胞上皮间质转化过程的分析

目的 探究SHC SH2结构域结合蛋白1(SHCBP1)在鼻咽癌组织及鼻咽癌细胞系中的表达情况,分析其对鼻咽癌细胞系的增殖、侵袭能力及上皮间质转化(EMT)过程的影响。方法 利用TCGA数据库分析SHCBP1在头颈鳞状细胞癌(HNSC)中的表达情况,分析SHCBP1表达程度与肿瘤免疫细胞浸润程度的关系。同时收集2019年9月—2021年9月于贵州医科大学附属医院及贵州医科大学附属肿瘤医院经病理确诊的31例鼻咽癌初诊患者临床组织样本,所有患者就诊前均未接受任何放化疗,并收集同期就诊的31例疑似鼻咽癌但病检示慢性鼻咽炎组织作为对照组。利用逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测临床样本及鼻咽癌细胞系5-8F中SHCBP1的表达情况。细胞实验以鼻咽癌细胞系5-8F、正常鼻咽部永生化上皮细胞系NP69作为研究对象。采用利用慢病毒载体shRNA-SHCBP1干扰技术沉默5-8F细胞中SHCBP1表达,并分为NC组(空载慢病毒LV-Zs-Green-PURO-NC感染5-8F)、SHCBP1-shRNA组(LV-SHCBP1-shRNA-Zs-Green-PURO沉默5-8F细胞SHCBP1表达)。CCK-8法、克隆形成实验检测SHCBP1对鼻咽癌细胞增殖的影响;划痕实验、Transwell迁移、侵袭实验检测SHCBP1对鼻咽癌细胞的转移、侵袭能力的影响。Western blot检测NC组、SHCBP1-shRNA组中E-cadherin、N-cadherin、基质金属蛋白9(MMP9)、Vimentin的表达情况。结果 在HNSC中SHCBP1高表达,表达量与Th2细胞浸润程度相关。与慢性鼻咽炎组织相比,鼻咽癌组织中SHCBP1明显高表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。与NC组相比,SHCBP1-shRNA组鼻咽癌细胞增殖、迁移、侵袭能力均减弱,差异具有统计学意义(P<0.05)。SHCBP1-shRNA组E-cadherin表达较NC组升高,N-cadherin、MMP9、Vimentin表达较NC组降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 SHCBP1在鼻咽癌中高表达,并可促进鼻咽癌细胞增殖、侵袭、迁移及激活EMT过程。     

bcl-x_s促进三氧化二砷诱导鼻咽癌细胞凋亡的研究

目的　利用促进凋亡基因bcl-xs 降低肿瘤细胞凋亡阈值 ,增强三氧化二砷诱导的鼻咽癌细胞凋亡 ,以探索提高鼻咽癌化疗敏感性的新途径。方法　将含有人bcl -xs 基因的重组真核表达质粒导入人鼻咽癌低分化上皮细胞株 (CNE - 2Z) ,以不含有bcl-xs 基因的质粒转染CNE - 2Z作为对照细胞。用三氧化二砷处理两组细胞后 ,台盼蓝计数法求得各自的IC50 ,流式细胞仪检测凋亡细胞百分比。结果　导入bcl-xs 的细胞与对照细胞相比 ,其对三氧化二砷的IC50 值明显降低 ,流式细胞仪及荧光染色检测结果表明其凋亡细胞百分比明显高于对照细胞。结论　bcl-xs 能显著提高鼻咽癌CNE - 2Z细胞株对三氧化二砷诱导凋亡的敏感性     

连接蛋白43在鼻咽癌组织细胞中的表达

目的 :探讨连接蛋白 4 3(Connextion ,Cx4 3)的表达与鼻咽癌组织细胞的相关性。方法 :采用激光扫描共聚焦显微镜和荧光技术 ,对 18例鼻咽癌和 10例鼻咽慢性炎症组织细胞中 ,Cx4 3的表达进行形态观察和定量分析。结果 :Cx4 3在鼻咽癌组织细胞膜中的表达显著低于鼻咽慢性炎症组织 ,两组细胞膜的Cx4 3荧光值之间差异具有非常显著性意义 (P <0 .0 1)。结论 :Cx4 3的表达水平与鼻咽癌的发生和发展有关 ,细胞间隙连接通讯减弱或缺失是鼻咽癌形成及恶性转变的重要因素之一。     

环状RNA在鼻咽癌中的作用及其研究进展

鼻咽癌是一种鼻咽部的上皮细胞恶性肿瘤,目前主要的治疗方式为放射性治疗(放疗),其死亡率的下降与诊疗技术的提高密切相关。复发和转移仍是影响鼻咽癌预后的主要因素,患者对放疗的抵抗性往往导致预后较差。近年来鼻咽癌的发病机制研究取得了许多进展,除了编码基因可以调控蛋白质翻译,非编码RNA的作用也被证明,他们可以在RNA水平上调节多种病理生理过程。环状RNA(circRNA)主要通过充当竞争性内源RNA或微小RNA(miRNA)海绵分子,竞争性结合miRNA,调节miRNA活性,调控基因在RNA水平的表达,促进或抑制相关反应,影响疾病的发生发展。circRNA的生物学特性及表达特异性使其有望成为鼻咽癌诊断和治疗决策的潜在生物标记物,基因敲除也可能成为鼻咽癌新的治疗途径。本文重点聚焦circRNA在鼻咽癌中的作用及近期研究进展进行综述。     

增殖细胞核抗原在鼻咽癌中表达的定量研究

为了增加鼻咽癌的诊断和预后判定指标，应用抗增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｎｅｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ，ＰＣＮＡ）单克隆抗体，采用免疫组化染色ＬＡＳ－ＳＰ法及图象分析技术，对８２例鼻咽鳞状细胞癌和２５例鼻咽粘膜炎症组织标本进行了定量研究，并对鼻咽癌患者５年生存率与ＰＣＮＡ表达情况进行了相关性分析。结果：①根据ＰＣＮＡ阳性细胞计算的鼻咽癌细胞增殖指数与鼻咽癌的病理分级呈明显的正相关，与患者５年生存率呈明显负相关。②图像处理检测的ＰＣＮＡ表达量与鼻咽癌的病理分级也呈明显的正相关，与５年生存率呈负相关，但泡状核细胞癌虽属低分化鳞癌却不符合上述规律。结论：ＰＣＮＡ能很好地反映鼻咽癌的增殖活性，在临床病理上具有应用前景，可作为对鼻咽癌预后判定及指导临床治疗的指标     

鼻咽癌组织细胞凋亡的检测

目的 :探讨鼻咽癌组织放疗后病理改变及其临床意义。方法 :采用TdT酶介导的生物素化dutp缺口末端标记技术和HE染色 ,检测 30例鼻咽癌组织放疗前后的细胞凋亡率 ,并比较放疗前后的组织病理改变。结果 :鼻咽癌组织放疗后的细胞凋亡率明显高于放疗前 ;放疗后的癌细胞分化趋好 ,但到放疗中期时凋亡率有所下降。结论 :鼻咽癌放疗一方面可加速癌细胞的凋亡 ,另一方面可能促使增殖的癌细胞朝分化好的方向发展 ,从而达到治疗目的     

咽拭子检测潜伏膜蛋白1在鼻咽癌诊断中的应用

目的：验证咽拭子法检测EB病毒（EBV）潜伏膜蛋白1（LMP1）在鼻咽癌诊断中应用的可行性;检测LMP1野生型及30bp缺失变异型在鼻咽癌中的分布情况。方法：用咽拭子法收集鼻咽癌组及对照组鼻咽部脱落细胞,微量提取DNA,经PCR扩增人β珠蛋白基因序列验证咽拭子法的可行性,用特异性引物扩增出特异的LMP1序列,验证其在鼻咽癌诊断中的意义。测序分析LMP1变异情况。结果：咽拭子合格率为96．4％,LMP1基因作为鼻咽癌的检测指标,灵敏度为91．7％,特异性为95．6％,其中变异型LMP1在鼻咽癌中的表达频率为80．6％,野生型为11．1％。结论：咽拭子法可作为一种基因检测手段,LMP1基因的检测可以协同EB病毒壳抗原（EBVCA）-IgA作为鼻咽癌诊断的辅助指标,在LMP1（＋）的鼻咽癌患者中LMP1—30bp缺失突变普遍存在。