高效液相色谱法测定氨碘肽滴眼液中5种氨基酸的含量

目的采用HPLC法测定氨碘肽滴眼液中丝氨酸(Ser)、甘氨酸(Gly)、组氨酸(His)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)的含量。方法采用Ocean-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相A:乙腈-水(4∶1),流动相B:0.1 mol·L-1乙酸钠-乙腈(97:3);流速为1.0 mL·min-1;柱温:25℃;检测波长:254 nm;用异硫氰酸苯酯(PITC)作为柱前衍生化试剂,采用柱前衍生HPLC法进行分析。结果各种氨基酸能良好地分离,衍生化试剂对氨基酸分析无干扰;平均回收率在98%¹02%,RSD均<3%。结论该方法简便、准确、可靠,可用于氨碘肽滴眼液中氨基酸含量的检测。     

HPLC—ELSD法测定疏血通注射液中17种未衍生氨基酸含量

目的:建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD),直接测定疏血通注射液中17种未衍生氨基酸含量的方法。方法:以异亮氨酸等氨基酸为标准品;色谱柱:Prevail~(TM) C_(18)(4.6mm×250mm,5μm);流动相A:乙腈,流动相B:5.0mmol·L~(-1)七氟丁酸的0.7%三氟醋酸溶液,流动相A与B比例:0min为0∶100,5min为0∶100,8min为15∶85,25min为35∶65;漂移管温度:115℃;气体流量:2.5L·min~(-1);流速:0.8mL·min~(-1);柱温:35℃;进样量:10μL。结果:在25min内即可完成对疏血通注射液中17种氨基酸的分离测定,氨基酸质量浓度0.071～2.285g·L~(-1)时,其对数值与峰面积对数值线性关系良好,17种氨基酸的加样回收率为92.9%～105.1%,信噪比为3时,异亮氨酸检出限为20mg·L~(-1)。结论:该法不需要专门的氨基酸分析仪和衍生化氨基酸,操作简便,有足够的灵敏度,结果准确可靠。     

雷丸中16种氨基酸的柱前衍生化RP-HPLC法含量测定

目的:测定雷丸中16种氨基酸的含量。方法:样品以6 mol.L-1盐酸于150℃水解1 h,以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂衍生后进行HPLC分析。采用Phenomenex Luna C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温为43℃;流动相A为0.1mol.L-1醋酸钠缓冲液(以醋酸调pH 6.5)-乙腈(93∶7),流动相B为乙腈-水(4∶1),梯度洗脱,流速为1.0 mL.min-1;检测波长为254 nm。结果:16种氨基酸浓度在1.16～47.32μg.mL-1范围内呈良好的线性关系(r=0.9998～1.000);平均回收率在93.3%～107.2%之间;RSD均小于3.0%。结论:本方法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,可用于雷丸中氨基酸的检测。     

异硫氰酸苯酯柱前衍生法测定复方氨基酸注射液(3AA)中氨基酸含量

目的:建立采用异硫氰酸苯酯柱前衍生化高效液相色谱法测定复方氨基酸注射液(3AA)的含量。方法:色谱柱:Diamonsil C18(2)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:A为0.1 mol/L醋酸钠溶液(pH 6.5)-乙腈(93∶7);B为乙腈-水(80∶20)梯度洗脱,流速:1.0 ml/min;柱温:40℃;检测波长:254 nm。结果:各个氨基酸的浓度与其相应色谱峰面积的线性相关系数均达到0.999以上;各个氨基酸的浓度与其相应色谱峰面积呈良好的线性关系,回收率在98.5%～99.6%。结论:该方法适用于测定复方氨基酸注射液(3AA)的含量,具有准确、快速和灵敏度高等优点。     

柱前衍生化HPLC-荧光检测法测定高血压患者尿液中22种游离氨基酸的浓度

目的:建立以柱前衍生化高效液相色谱-荧光检测法测定高血压患者尿液中22种氨基酸浓度的方法。方法:衍生化试剂为洗丹脱磺,流酰速氯为,色1.0谱m柱L·为mKinr-o1m,发asi射lC波18,长流为动5相08为nm甲,醇激与发3波0长mm为o3l·3L0-n1m醋,酸柱钠温缓为冲室溶温液,(进p样H量7.2为)-5甲0μ醇L-。四结氢果呋:2喃2(种84氨:1基5酸:1)检,测进浓行度梯度分别在5～200μmol·L-1范围内线性关系良好(r>0.9900);平均回收率为86.1%～109.0%;进样精密度RSD为0.84%～3.1%(n=6)。结论:本方法可同时测定22种氨基酸的浓度。     

柱前衍生高效液相色谱法测定胎盘多肽注射液中的氨基酸

目的建立柱前衍生-高效液相色谱法测定胎盘多肽注射液中游离氨基酸和水解后总氨基酸的方法。方法以α-氨基丁酸为内标,以6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)为柱前衍生化试剂,采用KromasilC18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,140 mmol/L醋酸铵缓冲液(pH 5.10)和57%乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为248 nm,同时测定胎盘多肽注射液中21种游离氨基酸和水解后氨基酸含量。结果该方法重现性好,精密度高,各氨基酸浓度在0.005～0.50 mmol/L范围内线性关系良好;各氨基酸检出限≤1.57 ng。结论建立的AQC柱前衍生-高效液相色谱法可用于检测胎盘多肽注射液中氨基酸的含量,测定的结果为胎盘多肽注射液的质量研究和评价提供了依据。     

DNFB柱前衍生化RP-HPLC法测定氨肽素的氨基酸含量

目的用二硝基氟苯 (DNFB)柱前衍生化RP HPLC法测定氨肽素中氨基酸的含量。方法采用二硝基氟苯为衍生试剂进行衍生 ,ODS(KromasilC18,4 6mm× 2 5 0mm ,5 μm)色谱柱分离 ,以乙腈 0 0 5mol·L-1乙酸钠水溶液为流动相 ,梯度洗脱 ,3 60nm检测 ,在 3 0min内 ,测定氨肽素的氨基酸组成与含量。结果线性范围 (总氨基酸 1 4种 )为 0 1 5～ 0 75 g·L-1;回收率为 94 8%～ 1 0 3 5 % ;RSD为0 2 6%～ 1 47% (n =5 )。结论DNFB柱前衍生化RP HPLC法可有效控制产品质量     

柱前衍生UPLC法测定甜瓜籽中13种游离氨基酸的含量

目的测定黑龙江产地甜瓜籽中13种氨基酸的含量。方法采用异硫氰酸苯酯(phenyl isothiocyanate,PITC)为衍生试剂进行衍生。色谱柱为Shim-pack XR-ODSⅢC18(75mm×2.0mm,1.6μm);流动相A为乙腈-水(体积比为4∶1),流动相B为30mmol·L-1乙酸钠-乙腈(体积比为97∶3),梯度洗脱;流速为0.3mL·min-1;柱温为25℃;检测波长为254nm。结果 13种氨基酸线性关系良好(r=0.999 1~0.999 8);平均回收率在97.0%~104.0%内,回收率的RSD均小于3.0%。结论本方法可用于甜瓜籽中游离氨基酸的检测。     

柱前衍生化-HPLC测定田参氨基酸胶囊中10种氨基酸的含量

目的　建立田参氨基酸胶囊中1 0种氨基酸的含量测定方法。方法　以2 ,4 -二硝基氟苯(FDNB)为衍生化试剂,将胶囊中的氨基酸定量衍生化,用RP -HPLC测定其含量。衍生化条件为在碱性溶液中6 0℃反应1h。色谱条件为ODS柱,甲醇-醋酸盐缓冲液梯度洗脱,36 0nm处检测。结果　5 0min内氨基酸均可较好地分离。衍生化产物性质稳定;1 0种氨基酸在各自浓度范围内线性关系良好(r≥0 . 9998) ,平均空白加样回收率均为1 0 0 .1 %～1 0 1 . 1 %,RSD =0 . 70 %～1 . 0 8%;日内及日间精密度均小于1 .9%。结论　方法准确,简便,费用低,可用于田参氨基酸胶囊的质量控制。     

RP-HPLC法测定18种氨基酸中有关物质

目的:建立 RP-HPLC 测定18种氨基酸中有关物质的方法。方法:采用 Zorbax SB-C_(18)色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相 A,乙腈-水(1:1);B,醋酸盐缓冲液(pH 6.1),流速为1.0 mL·min~(-1),检测波长为360 nm,采用校正面积归一化法测定氨基酸中其他氨基酸的含量。结果:本色谱条件下各种氨基酸和杂质均能良好地分离,衍生化试剂对氨基酸分析无干扰,最低检测限为1ng·mL~(-1)。结论:该方法专属性强,操作方便,结果准确,重现性好。     

柱前衍生-液质联用法测定过氧化物还原酶2模拟肽中Asp外消旋化研究

目的建立了一种柱前衍生-液质联用测定过氧化物还原酶2(Prx2)模拟肽中天冬氨酸(Asp)外消旋化的方法,测定不同p H条件下,天冬氨酸外消旋化速率常数。方法采用6.0 mol·L~(-1)盐酸水解八肽,水解液减压干燥至干,加水溶解,以L-2-氨基丁酸为内标物,GITC为柱前衍生试剂,在p H 11.0碳酸氢钠溶液中衍生化。色谱条件:分离柱为YMC-PACK ODS-AQ(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为5%冰醋酸溶液(A)和乙腈-甲醇(90∶10)(B),梯度洗脱(0～22 min,20%～27.5%B;22～22.01 min,27.5%～95%B;22.01～27 min,95%B;27～27.01 min,95%～20%B;27.01～30 min,20%B),流速为1 mL·min~(-1);质谱条件:采用电喷雾离子源及正离子单离子监测模式(SIM)定量,天冬氨酸GITC衍生化物m/z 523,内标GITC衍生化物m/z 493。结果 D/L-Asp质量浓度在1.010～200.2μg·m L~(-1)时,其峰面积与内标物峰面积的比值和氨基酸的质量浓度之间的线性关系良好(r> 0.999),最低定量限(LLOQ)为1.010μg·m L~(-1);LLOQ、低、中和高浓度(LQC、MQC和HQC)日内和日间精密度RSD分别为0.98%～9.7%、3.3%～10.9%,加样回收率为100.2%～108.1%。在p H 3.0～10.0,天冬氨酸外消旋化的速率常数为0～6.24×10~(-4)·d~(-1)。结论该方法准确、快速,可用于Prx2中D/L-Asp检测。     

AQC柱前衍生高效液相色谱法测定胃乐宁片中游离氨基酸

目的:建立柱前衍生高效液相色谱法测定胃乐宁片中各种游离氨基酸的方法.方法:以α-氨基丁酸为内标,以6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)为柱前衍生化试荆,采用Kromasil C(18)(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,醋酸铵缓冲液(pH5.10)和57%乙腈水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为2...     

高效液相色谱法测定L-缬氨酸甲酯盐酸盐中L-异亮氨酸甲酯盐酸盐

目的:采用衍生化为辅助手段,建立高效液相色谱法测定缬沙坦起始物料L-缬氨酸甲酯盐酸盐中杂质L-异亮氨酸甲酯盐酸盐含量的方法。方法:采用岛津VP-ODS C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm);以乙酸钠缓冲液(pH 7.2)-甲醇-乙腈(20∶45∶30)为流动相,流速为1.0 mL.min-1;检测波长为262 nm;柱温为40℃。采用9-芴基甲酰氯为衍生化试剂,考察衍生化试剂浓度,反应静置时间,超声时间等衍生化条件,确定衍生化的方法并进行方法学验证。结果:衍生化反应条件为:衍生化试剂浓度10 mg.mL-1,反应静置时间20 min,超声10 s。经方法学验证,L-异亮氨酸甲酯盐酸盐在15～75μg.mL-1范围内线性良好,其平均回收率为92.943%,RSD为4.965%,溶液在5 h内稳定性。结论:该方法简便、快速、耐受性好,符合有关物质方法学验证要求,可用于杂质L-异亮氨酸甲酯盐酸盐的含量测定。     

柱前衍生化RP-HPLC法测定肌肽的含量

目的建立简单、快速测定肌肽含量的方法。方法采用2,4-二硝基氯苯柱前衍生化RP-HPLC法。衍生化试剂:2,4-二硝基氯苯;色谱柱:DiamonsilTM C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.15 mol.L-1乙酸钠缓冲溶液(体积比1∶5);流速:1.0 mL.min-1;检测波长:360 nm。结果肌肽质量浓度在2.0~20.0 mg.L-1(r=0.999 4)内与其衍生化物峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为96.8%,RSD为0.8%(n=9)。结论2,4-二硝基氯苯柱前衍生化RP-HPLC法可用于测定肌肽含量。     

柱前衍生化高效液相色谱法测定全蝎中游离牛磺酸的含量

目的:建立全蝎中游离牛磺酸的含量测定方法。方法:采用50%乙醇超声提取全蝎中的游离氨基酸,异硫氰酸苯酯柱前衍生化后进行反相高效液相色谱分析。色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(150mm×4.6 mm,5μm),以0.07 mol·L-1醋酸-醋酸钠缓冲液-2.5%乙腈(pH=6.5)为流动相A,乙腈-甲醇-水(40∶15∶45)为流动相B,流速1.0 mL·min-1,检测波长254 nm。结果:牛磺酸在0.008 3～0.414 8μg范围呈良好的线性关系(R2=0.999 9);平均回收率为102.1%,RSD为1.6%(n=6);全蝎中游离牛磺酸含量在0.026 9%～1.27%之间。结论:该方法灵敏度高,重复性好,结果准确可靠,可用于全蝎的质量控制。     

HPLC法直接测定复方氨基酸注射液中的6种氨基酸

目的:建立HPLC法直接测定复方氨基酸注射液中6种氨基酸的含量。方法:KromasilC18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为50mmol/L磷酸二氢钾(用磷酸调节pH值至2.4)-乙腈(94∶6),流速为1.5ml/min,检测波长为200nm,进样量10μl。结果:6种氨基酸线性回归方程的相关系数均在0.9997以上;平均回收率为100.3～101.4%,RSD均不超过0.7%。结论:本法操作简便、结果准确,可作为衍生化法的补充方法。     

柱前衍生化HPLC法测定不同产地胡芦巴中4-羟基异亮氨酸的含量

目的柱前衍生化法测定4-羟基异亮氨酸含量。方法采用异硫氰酸苯酯作为衍生化试剂,色谱柱(Zorbax Eclipse XDBC18,150mm×4.6mm,5μm,Agile);流动相A:乙腈,流动相B:1mL·L~(-1)磷酸水,梯度洗脱(A相∶B相):(0~20min,20∶80;20min,60∶40);流速:1.5mL·min~(-1);进样体积:20μL;检测波长:254nm;柱温:30℃。结果 4-羟基异亮氨酸在质量浓度4.2~20.9μg·mL~(-1)范围内线性关系良好(r=0.999 3),平均回收率为96.8%,RSD为1.7%。结论该方法简便、稳定,结果准确,可作为4-羟基异亮氨酸的含量测定方法。     

柱前衍生-高效液相色谱法测定肠内营养剂中18种氨基酸的含量

目的建立柱前衍生-高效液相色谱法测定肠内营养剂中18种氨基酸的含量。方法以邻苯二甲醛为衍生化试剂,Agilent C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5.0μm),流动相为甲醇-50 mmol.L-1醋酸钠缓冲液(pH 5.6),采用梯度洗脱,流速为1.0 mL.min-1,柱温30℃;FLD荧光检测,激发波长340 nm,发射波长460 nm。待测肠内营养剂样品经超声提取后,与衍生化试剂反应,取20μL进样分析。结果本法线性关系良好,18种氨基酸的线性回归系数范围在0.998 8～0.999 9;平均回收率在94.12%～113.73%,日间、日内精密度RSD均<10%;样品溶液在24 h内稳定。结论该法简便、灵敏、专属性强,能准确对肠内营养剂中18种氨基酸进行定量分析,适用于该类制剂的质量控制和评价。     

柱前衍生化高效液相色谱法测定2-去氧葡萄糖的含量

目的建立柱前衍生化高效液相色谱法测定2-去氧葡萄糖(2-DG)含量的方法。方法采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑酮(PMP)为柱前衍生化试剂,将2-DG在碱性条件下衍生化后直接进样测定。分离柱为HypersilODS2色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为100 mmol·L-1醋酸铵缓冲液(pH 5.5)-乙腈(78∶22),流速1.0 mL·min-1,波长249 nm。结果 2-DG在19.68~393.6μg·mL-1浓度范围内与峰面积具有良好的线性关系(r=0.9997);其定量限(S/N=10)和最低检出限(S/N=3)分别为7.8和3.1 ng;平均回收率为101.21%,RSD 0.63%。结论该方法简便实用、检测灵敏度高、测定结果准确,适用于2-DG的质量控制。     

柱前衍生化RP-HPLC测定米格列奈钙光学纯度

目的 建立柱前衍生化-反相高效液相色谱法测定S-米格列奈钙的光学纯度。方法 采用手性衍生化试剂S-萘乙胺(S-NEA),以1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)和1-羟基苯并三唑(HOBt)为偶联剂对样品S-米格列奈钙进行衍生化。衍生产物以乙腈- 0.01 mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液(pH 2.5)(50∶50)为流动相,在Agilent Zorbax C18(250 mm × 4.6 mm,5 μm)色谱柱上进行分离,流速为1.5 mL·min-1,检测波长为225 nm,柱温为30 ℃。结果 R-米格列奈在0.3~3.0 μg·mL-1内线性关系良好,检测限和最低定量下限分别0.1和0.3 μg·mL-1,平均回收率为102.4%,日内日间精密度考察中RSD均小于5%。结论 该方法灵敏度高,衍生化产物稳定,重复性好,可用于S-米格列奈钙光学杂质的检测。