高脂血症对大鼠脑组织MMP-2表达及新生血管的影响

目的:观察高脂血症对大鼠脑组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达及新生血管的影响。方法:20只大鼠随机分为正常对照组和高脂血症组,每组10只。用高脂饲料喂养大鼠制备高脂血症大鼠模型。用ELISA法检测大鼠血清VEGF的含量;免疫组化法测定脑组织MMP-2、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管内皮生长因子(VEGF)和CD34的表达情况;HE染色后观察大鼠脑组织皮质区病理学改变。结果:高脂血症组大鼠血清中总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白及VEGF含量高于正常对照组(t=12.772、25.705、38.141、15.879,P均<0.001),高密度脂蛋白减低(t=35.959,P<0.001);脑组织中MMP-2、ICAM-1、CD34和VEGF的表达升高(t=25.546、12.954、8.685、11.996,P均<0.001)。结论:高脂血症可诱导脑组织表达MMP-2并生成较多的新生血管。     

糖尿病大鼠缺血再灌注脑组织中MMP-9的表达及其与VEGF的关系

目的研究基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、血管内皮生长因子（VEGF）在糖尿病缺血再灌注脑组织损伤中的作用。 方法120只Wistar大鼠随机分为正常对照组、假手术组、单纯脑梗死组（CI）和糖尿病合并脑梗死组（DM+CI）。采用高脂高糖饮食加腹腔注射小剂量链脲霉素建立糖尿病大鼠模型，线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，免疫组化法检测脑组织中MMP-9、VEGF表达。结果MMP-9和VEGF阳性表达主要分布于梗死灶周围半暗带胶质细胞、神经细胞、血管内皮细胞等处；CI组和DM+CI组大鼠脑组织中MMP-9的表达均较正常对照组明显增加(P<0.05)，DM+CI组较CI组明显增加（P<0.05）；DM+CI组MMP-9于再灌注3h开始升高，24h达到高峰，7d后逐渐下降；DM+CI组和CI组大鼠脑组织中VEGF的表达均较正常对照组明显增加(P<0.01)，DM+CI组较CI组明显减少（P<0.01)；DM+CI组VEGF于再灌注1h开始升高，6h达到高峰，随后逐渐降低。DM+CI组和CI组大鼠脑组织中MMP-9与VEGF的表达呈直线相关，其中DM+CI组于再灌注6～24h时段MMP-9与VEGF表达呈负相关。 结论糖尿病缺血再灌注大鼠脑组织中MMP-9的表达增加与VEGF的下调相关，参与糖尿病合并脑梗死的病理生理过程。     

基质金属蛋白酶在脑白质疏松症血-脑脊液屏障机制中的实验研究

目的 分析基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制物(TIMPs)的mRNA在脑组织的表达,探讨血-脑脊液屏障(BBB)损伤致脑白质疏松症(LA)发生的作用机制。方法 18只5月龄雄性自发性高血压(SH)大鼠为实验组,同龄7只雄性Wistar大鼠为对照组。取大鼠脑组织,应用HE染色及免疫组织化学染色,观察其病理变化及髓鞘碱性蛋白(MBP)、神经中丝(NF)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。取大鼠脑白质组织,使用Real-time PCR技术,检测MMP-9、MMP-2和金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)mRNA的表达水平。结果 HE染色显示,SH大鼠脑白质区神经元和少突胶质细胞数量减少,星形胶质细胞反应性增生。实验组较对照组GFAP表达增加,而MBP和NF表达减少。实验组大鼠脑白质区TIMP-1、MMP-9和MMP-2 mRNA表达水平升高。其中,TIMP-1与MMP-2 mRNA升高显著(P＜0.05),而MMP-9 mRNA表达两组无显著性差异(P＞0.05)。结论 5月龄SH大鼠可作为脑白质疏松症的实验动物模型。MMPs导致的BBB破坏可能是脑白质疏松症的发病机制之一。     

葛根素对脑缺血大鼠脑组织MMP-9表达和脑水肿的影响

目的:观察葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达和脑组织含水率变化的影响,探讨葛根素脑保护的可能机制。方法:54只雄性SD大鼠分为假手术组、对照组和药物组,每组18只。采用线栓法建立右侧大脑中动脉闭塞大鼠模型,时间点为再灌注48h,采用比色法测定脑组织中伊文思蓝(EB)含量反映血脑屏障通透性;干-湿重法检测脑组织含水率;免疫组化法检测脑组织MMP-9表达。结果:脑缺血再灌注后大鼠脑缺血区MMP-9表达明显增加(P<0.05),脑组织含水率明显升高(P<0.05)。与对照组比较,药物组大鼠脑组织MMP-9明显低表达(P<0.05),脑组织含水率明显减少(P<0.05)。结论:葛根素可能通过抑制MMP-9表达来减轻血脑屏障破坏和脑水肿而发挥缺血再灌注损伤时的脑保护作用。     

3日龄大鼠缺氧缺血性脑损伤脑组织VEGF表达变化探讨

目的:探讨3日龄未成熟大鼠缺氧缺血性脑损伤后脑白质中VEGF的表达变化规律,研究VEGF在早产儿脑损伤发病机理中的作用,为干预治疗打下理论基础。方法:92只体重6.5～10.5g新生3日龄SD大鼠,随机分为实验组(缺氧缺血)50只和对照组(假手术)42只,实验组死亡10只,对照组死亡2只,故进入实验的两组均为40只。实验组大鼠右侧颈总动脉结扎,术后予以低氧(6%O2+94%N2)处理4h,以建立动物模型。对照组仅分离右侧颈总动脉,不予以结扎和缺氧处理。术后12、24、48、72h及7d处死8只大鼠,取脑组织,制备光镜石蜡标本。VEGF的表达采用免疫组化方法。采用全自动图像分析系统分析VEGF阳性单位表达的AU值。结果:对照组和实验组大鼠神经元、内皮细胞、软脑膜细胞、胶质细胞等均可见VEGF表达。表达变化以胼胝体和脑室周围白质部位明显。对照组VEGF的表达较弱,且随时间的增加,表达没有明显变化,组间比较差异无统计学意义(P0.05)。实验组于缺氧缺血12h表达开始增加,缺氧缺血24h表达达到高峰,7d时恢复至正常,组间各时间点比较差异均有统计学意义(P0.05)。实验组VEGF的表达在12、24、48、72h与对照组比较差异有统计学意义(P0.05),7d与对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:未成熟大鼠缺氧缺血性脑损伤中,VEGF蛋白的表达于缺氧缺血12h开始增加,于24h达到高峰,7d降至正常,说明VEGF在其发病机制中有一定作用。     

新生鼠缺血脑组织MMP-9、TIMP1表达及其意义

目的:观察新生大鼠缺血脑组织基质金属蛋白酶-9(matrix metallo proteinase system-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP1)表达情况及其作用。方法:75只7 d龄Wistar大鼠随机分为正常对照组、缺氧缺血组(模型组)、假手术组。采用左侧大脑中动脉结扎术建立脑缺氧缺血组模型,24 h后用免疫组化法观察新生大鼠缺血脑组织MMP-9、TIMP1表达水平。结果:MMP-9、TIMP1在三组脑组织中均有表达,但组间差异有统计学意义(P<0.01);模型组缺血脑组织MMP-9、TIMP1表达水平较假手术组及对照组均显著升高(P<0.01)。其中模型组缺血脑组织MMP-9与TIMP1表达水平呈显著正相关(P<0.01);正常对照组和假手术组脑组织MMP-9与TIMP表达水平之间无显著相关性(P>0.05)。结论:MMP-9、TIMP1在新生鼠缺血脑组织表达明显增加,可能参与新生鼠缺血脑组织损伤的发生。     

实验性脑出血大鼠脑组织Toll样受体4的表达及意义

目的:探讨TLB4在脑出血大鼠血肿周围脑组织中的表达变化及其作用.方法:采用自体尾动脉血注入法制作脑出血大鼠模型,将50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组,造模完毕后按不同时间点(术后6,24,48,72 h和7 d)随机分为5个亚组,每组5只.各组于不同时间点取材,采用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠脑组织TLB4 mR-NA的相对表达.结果:各实验组各时间点TLB4 mRNA均表达,假手术组TLR4 mRNA的相对表达在各时间点无显著差异(P>0.05);模型组与假手术组相比TLR4 mRNA相对表达显著升高(P<0.05),且在48 h达高峰,持续到72 h.模型组相同时间点TLR4 mRNA的相对表达与假手术组比较均明显增高,差异有统计学意义(P<0.01).结论:脑出血大鼠模型TLR4表达增高,提示TLR4在脑出血炎症损伤中可能具有一定作用.     

Expression and significance of MMP-9 and TIMP1 in newborn rat brain after ischemia injury

目的:观察新生大鼠缺血脑组织基质金属蛋白酶-9(matrix metallo proteinase system-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制物1 (TIMP1)表达情况及其作用.方法:75只7d龄Wistar大鼠随机分为正常对照组、缺氧缺血组(模型组)、假手术组.采用左侧大脑中动脉结扎术建立脑缺氧缺血组模型,24 h后用免疫组化法观察新生大鼠缺血脑组织MMP-9、TIMP1表达水平.结果:MMP-9、TIMP1在三组脑组织中均有表达,但组间差异有统计学意义(P＜0.01);模型组缺血脑组织MMP-9、TIMP1表达水平较假手术组及对照组均显著升高(P＜0.01).其中模型组缺血脑组织MMP-9与TIMPI表达水平呈显著正相关(P＜0.01);正常对照组和假手术组脑组织MMP-9与TIMP表达水平之间无显著相关性(P＞0.05).结论:MMP-9、TIMP1在新生鼠缺血脑组织表达明显增加,可能参与新生鼠缺血脑组织损伤的发生.     

高血压与外源性MMPs对大鼠脑动脉瘤形成的影响研究

目的探讨高血压与外源性金属基质蛋白酶(MMPs)在大鼠脑动脉瘤形成过程中的影响。方法健康成年雄性SD大鼠32只,随机分为高血压组和MMPs组,每组16只,前者手术造成大鼠肾性高血压,后者应用外源性MMP-2、MMP-9干预,分别于术后1、3和5周采集标本,观察脑动脉瘤形成情况,并应用ELISA、免疫组化法和RT-PCR检测MMPs及其表达水平。结果高血压组在术后3周血压达稳定峰值,病理学观察见5只大鼠的脑底动脉环分叉部有明显动脉瘤形成,MMPs组脑底动脉环结构基本正常。高血压组血浆MMP-2、MMP-9浓度在术后逐渐增高,且在术后3、5周,与MMPs组比较差异均有统计学意义(P0.05)。免疫组化见高血压组在术后3周脑动脉壁胞浆中MMP-2和MMP-9表达明显增加,持续至第5周,而MMPs组仅有弱阳性表达。RT-PCR检测显示高血压组在术后3周脑动脉壁MMP-2和MMP-9基因表达增加,持续至第5周,而MMPs组仅有较弱的基因表达。结论血压持续升高可能是MMPs被异常激活的一个重要启动因素,机制较为复杂;单纯外源性MMPs在脑动脉瘤形成中可能难以有效发挥作用。     

VEGF对新生大鼠细菌性脑膜炎病理进程的影响

目的探讨血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)与新生大鼠细菌性脑膜炎(bacterial meningitis,BM)发病机制的相关关系,为新生儿BM临床治疗提供新思路和实验依据。方法将150只新生大鼠按随机数字表法分为3组:正常对照组(38只)、生理盐水对照组(NS对照组,42只)和实验组(70只)。实验组经小脑延髓池注入B组链球菌Ⅲ(group B streptococcus typeⅢ,GBSⅢ)建立新生大鼠BM动物模型,NS对照组注入10μl无菌生理盐水,正常对照组不做任何处理。各组分别于≤16、>16～≤24、>24～≤48、>48～≤72h从存活新生大鼠抽取8只进行神经行为学评分、脑脊液(CSF)中的WBC计数和RT-PCR法检测脑组织中VEGFmRNA表达水平,抽取4只用免疫组织化学方法检测脑组织中VEGF蛋白表达情况。结果实验组新生大鼠在≤16、>16～≤24、>24～≤48、>48～≤72 h时均出现口唇及四肢末端发绀、呼吸困难、反应迟钝,新生大鼠在≤16 h时出现抽搐15只(Ⅳ级2只,Ⅴ级13只)、>16～≤24 h时出现抽搐41只(Ⅳ级21只,Ⅴ级20只)、>24～≤48 h时出现抽搐20只(Ⅲ级4只,Ⅳ级6只,Ⅴ级10只)、>48～≤72 h未出现抽搐。实验组新生大鼠在≤16、>16～≤24、>24～≤48、>48～≤72 h时神经行为学评分值均明显低于正常对照组、NS对照组,CSF中WBC计数值、脑组织中VEGF mRNA表达水平、脑组织中VEGF蛋白表达水平均明显高于正常对照组、NS对照组(P<0.05或P<0.01)。结论 VEGF表达异常可能与新生鼠BM发病机制相关,且在新生鼠BM的不同时期,VEGF可能起不同的作用。     

丁苯酞对急性缺血性脑卒中大鼠的脑保护作用及其机制

目的：探讨丁苯酞对急性缺血性脑卒中大鼠的脑保护作用,阐明其对急性缺血性脑卒中的治疗机制。方法：48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组（局灶性脑缺血大鼠模型）和丁苯酞组（局灶性脑缺血大鼠模型+丁苯酞治疗）,每组16只。对各组大鼠进行神经症状评分测定,对大鼠脑组织进行HE染色,采用氯化三苯基四氮唑（TTC）测定脑梗死面积百分率,采用Western blotting法和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定大鼠脑组织中肝细胞生长因子（HGF）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、核转录因子κB抑制蛋白α（IκBα）和核转录因子κB（NF-κB）亚单位p65（NF-κB p65）蛋白及mRNA表达水平。结果：假手术组大鼠脑组织无梗死灶形成,无神经功能缺损症状;与模型组比较,丁苯酞组大鼠脑梗死面积百分率和神经功能评分明显降低（P<0.01）。假手术组大鼠脑组织细胞结构完整、分布均匀;模型组大鼠脑组织大部分细胞坏死,胞浆破裂,细胞核破裂、凝缩;丁苯酞组大鼠脑组织少量细胞肿胀和坏死。与假手术组比较,模型组大鼠脑组织中HGF、VEGF、MMP-2、MMP-9和NF-κB p65蛋白及mRNA表达水平均明显降低（P<0.01）,IκBα蛋白及mRNA表达水平明显升高（P<0.01）;与模型组比较,丁苯酞组大鼠脑组织中HGF、VEGF、MMP-2、MMP-9和NF-κB p65蛋白及mRNA表达水平均明显升高（P<0.01）,IκBα蛋白和mRNA表达水平明显降低（P<0.01）。结论：丁苯酞可改善急性缺血性脑卒中大鼠的神经功能,减少脑梗死面积,其机制可能与丁苯酞升高脑组织HGF水平,并通过干扰NF-κB信号通路而促进脑血管形成有关。     

脑出血大鼠相关蛋白表达与脑组织水肿和神经功能缺损关系的研究

探讨脑出血(CH)大鼠脑血肿周围组织中Mip-1、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、凝血酶受体(PAR-1)的表达变化及其意义。选取健康雄性SD大鼠72只,采用随机数字表法分为CH组和对照组各36只。结果显示,与对照组相比,CH组在大鼠尾状核出血造模后3,12,24,72 h的脑组织含水量、血肿周围组织的Mip-1,PAR-1,MMP-9蛋白显著升高,神经功能缺损评分显著降低,且有时间依赖性。结果说明CH大鼠脑血肿周围组织中的Mip-1、PAR-1、MMP-9蛋白表达上调,可能与脑组织水肿、神经功能缺损加重有关。     

辛伐他汀对大鼠牙移动后保持阶段牙周组织中血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的：研究辛伐他汀对大鼠牙移动后保持阶段牙周组织中血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达的影响,探讨辛伐他汀对保持期牙周组织改建的作用及其机制。方法：78只雄性Wistar大鼠随机分成3组,空白对照组不做任何处置;实验对照组以大鼠前牙为支抗,牵引上颌第一磨牙向近中移动,持续21 d后左侧安装保持装置,分别保持1、3、7、...     

脑梗死模型大鼠缺血脑组织中胰岛素样生长因子结合蛋白3表达水平及其与血管新生的关系

目的：探讨脑梗死大鼠缺血脑组织中胰岛素样生长因子结合蛋白3（IGFBP-3）表达水平及其与血管新生的关系,阐明IGFBP-3在脑梗死血管新生中的作用。方法：将SD大鼠随机分为对照组和模型组,模型组大鼠又分为模型1d组、模型3d组和模型7d组3个亚组。采用线栓法建立大脑中动脉栓塞缺血大鼠模型。采用神经行为学评分评估大鼠神经行为,2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色观察脑梗死情况,HE染色观察脑组织病理形态表现,免疫组织化学染色检测大鼠脑组织中IGFBP-3和血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达水平,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测大鼠脑组织中IGFBP-3和VEGF mRNA表达水平,免疫荧光染色检测大鼠脑组织中缺血半暗区微血管密度。结果：对照组大鼠无神经功能缺损和脑梗死灶;模型组大鼠24h神经行为学评分为（1.86±0.73）分,脑梗死体积为（28.34±3.57）%。HE染色,对照组大鼠脑组织正常,模型1d组大鼠脑组织出现水肿,模型3d组大鼠脑组织水肿和坏死明显,模型7d组大鼠脑组织水肿和坏死减轻。与对照组比较,各模型组大鼠脑组织中IGFBP-3和VEGF蛋白及mRNA表达水平和缺血半暗区微血管密度均明显升高（P<0.01）,模型3d组大鼠脑组织上述各指标最高,模型7d组大鼠脑组织中IGFBP-3和VEGF蛋白及mRNA表达水平和缺血半暗区微血管密度降低。大鼠脑组织中IGFBP-3 mRNA表达水平与VEGF mRNA表达水平和微血管密度均呈正相关关系（r=0.563,P<0.05;r=0.612,P<0.05）。结论：脑梗死大鼠缺血脑组织中IGFBP-3表达水平升高可能促进脑梗死缺血后血管新生。     

锌制剂对糖尿病大鼠肾脏和肾脏组织中VEGF、MT及MMP-9表达的影响

目的：通过观察正常及糖尿病大鼠肾脏组织中血管内皮生长因子（VEGF）、金属硫蛋白（MT）及基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达,阐明补充外源性锌(Zn)制剂对糖尿病大鼠肾脏和肾脏组织中VEGF、MT及MMP-9表达的影响。方法： 将48只Wistar大鼠随机分为正常对照组（NC组）、阴性对照组（STZ组）、外源性锌干预糖尿病组（STZ+Zn组）及外源性锌干预正常组（Zn组）,每组12只。其中STZ组及STZ+Zn组腹腔注射链脲菌素(STZ)制成糖尿病模型, STZ+Zn组、Zn组每周2次经口灌胃5 mg?kg-1的锌制剂,共16周。取双肾,计算肾指数;HE染色及免疫组织化学染色观察大鼠肾脏病理学改变及MMP-9、VEGF和MT在肾脏组织中的表达。结果：与NC组比较,STZ组和STZ+Zn组大鼠肾指数升高（P<0.05）;与STZ组比较,STZ+Zn组大鼠肾指数升高（P<0.05）;Zn组肾指数与NC组比较差异无显著性(P>0.05)。大鼠肾脏组织中存在VEGF、 MT 及MMP-9的表达,其中MMP-9和VEGF主要表达在远端肾小管,MT主要表达在近端肾小管;NC组、STZ组、STZ+Zn组及Zn组之间比较肾脏组织中VEGF、MT和MMP-9表达差异无显著性(P＞0.05)。结论：锌制剂可以导致糖尿病大鼠肾指数增大,但不影响健康小鼠的肾指数;肾脏组织中存在VEGF、MT及MMP-9的表达;外源性锌制剂干预后VEGF、MT及MMP-9在糖尿病模型中的表达无明显变化。     

肺间质纤维化大鼠体内明胶酶活性的变化

目的观察肺间质纤维化大鼠体内明胶酶活性的变化情况。方法雄性SD大鼠80只,随机分为假手术组(n=40)和博莱霉素组(BLM组,n=40)。向BLM组大鼠气管内一次性注入BLM复制肺纤维化模型,假手术组大鼠则在气管内注入等量生理盐水。两组动物同步于气管内灌注后第1、3、7、14、28d分别随机处死8只。腹主动脉抽血分离血清,支气管肺泡灌洗收集肺泡灌洗液,冰浴匀浆肺组织制备匀浆液,-80℃冻存。采用明胶酶谱法测定基质金属蛋白酶活性。结果与假手术组相比,BLM组各样品中MMP-9活性均有所增加;血清及肺组织匀浆中MMP-9的活性在BLM注入后1d开始升高,血清MMP-9活性在3d达高峰,肺组织匀浆MMP-9活性在7d达高峰,14及28d已与假手术组无明显差异;肺泡灌洗液中MMP-9活性在BLM注入后1d开始增加,7d达高峰,14d趋向平稳,28d回落。BLM组血清样品中MMP-2活性在各时间点均无明显改变;肺泡灌洗液样品中MMP-2活性从14d起开始升高,持续到第28d始终未见有回落;肺组织匀浆样品中MMP-2的活性升高较早,从3d起开始升高,至28d始终未见回落。结论MMP-2和MMP-9在BLM致大鼠肺纤维化过程中的来源及作用均不同。