抗纤软肝冲剂对肝星状细胞自分泌转化生长因子β1的影响

目的：从细胞分子水平研究抗纤软肝冲剂对肝星状细胞(HSC)表达转化生长因子β1(TGF-β1)的影 响。方法：抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC,以生理盐水和秋水仙碱为对照。免疫细胞化学分析TGF-β1 的 蛋白合成；半定量RT-PCR 法检测TGF-β1 的mRNA 表达量。结果：抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC 的自分泌TGF-β1 及其mRNA 表达(P<0.01)。结论：抗纤软肝冲剂能抑制HSC 的TGF-β1 的基因和蛋白表达,阻断其自分泌放大活化 效应,这可能是该方抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

抗纤复方影响大鼠肝贮脂细胞生成Ⅰ、Ⅲ型胶原的比较研究

用免疫细胞化学染色法观察抗纤复方药物血清对大鼠正常肝传代贮脂细胞和纤维肝原代贮脂细胞Ⅰ,Ⅲ型胶原表达的影响,并对Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达量进行比较分析。结果：传代贮脂细胞Ⅲ型胶原增加显著,而纤维肝贮脂细胞Ⅰ型胶原增加明显,抗纤复方能显著抑制贮脂细胞表达胶原,且对传代贮脂细胞Ⅲ型胶原和纤维肝原代贮脂细胞Ⅰ型胶原抑制作用更明显。     

抗纤软坚冲剂对实验性肝纤维化大鼠TGFβ_1及其受体的影响

既往的临床与动物实验证实了抗纤软坚冲剂有抗肝纤维化作用,为进一步探讨抗纤软坚冲剂抗肝纤维化的机制,本实验从其对促肝纤维化关键细胞因子之一——转化生长因子TGFβ1及其受体含量、mRNA表达的影响这一角度进行观察,以探讨抗纤软坚冲剂对肝纤维化这一环节的作用。选择复合性损伤大鼠为模型,秋水仙碱为对照,应用免疫组织化学、原位杂交技术检测TGFβ1及其受体的阳染面积,并用图像分析系统计算出阳性表达率,结果得出抗纤软坚冲剂可抑制TGFβ1分泌及其传导,与正常组、模型组比较,有显著性差异(P<0.05);与秋水仙碱组比较,无显著差异(P>0.05)。证明抗纤软坚冲剂能抑制肝纤维化大鼠TGFβ1及其受体的表达。其机理可能是通过抑制HSC的活化进而减少了TGFβ1及其受体的表达。     

莪术对肝星状细胞活化的影响

目的:观察莪术对肝星状细胞活化的影响。方法:莪术水煎液(0.3g/ml)按10ml/kg 大鼠体重给正常大鼠灌胃,每天2次,连续3天,第4天1次给予全日剂量,1h 后采血,离心分离血清,56℃灭活,制备药物血清。以正常鼠血清及秋水仙碱药物血清作为对照。将药物血清温育传一代的肝星状细胞,氚标胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入法及噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖;酶联免疫吸附(ELISA)法测定培养上清Ⅰ型胶原含量,改良 Lowrv's 法测定细胞层总蛋白以校正细胞数;貂肺上皮细胞株-Mvllu 抑制 MTT 法测定培养上清转化生长因子β_1(TGF β_1)。结果:莪术药物血清和秋水仙碱药物血清对活化的肝星状细胞增殖均有显著抑制作用(P<0.01)。莪术的抑制作用强于秋水仙碱(P<0.01),二者都能抑制肝星状细胞生成Ⅰ型胶原(P<0.01),并且都能显著抑制肝星状细胞分泌 TGF β_1,两者作用比较,差异无显著性(P>0.05)。结论:莪术能抑制肝星状细胞增殖,减少胶原和 TGF β_1的生成,从而抑制肝星状细胞的活化。     

剔毒护肝方对肝星状细胞表达Ⅰ型胶原及TGFβ1mRNA的影响

目的：探讨剔毒护肝方抗肝纤维化的作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞，并传代培养，用剔毒护肝方给正常大鼠灌胃，制备药物血清，温育培养细胞72h，测定培养上清中Ⅰ型胶原含量及TGF-β1活性，提取细胞总RNA，RT-PCR法分析Ⅰ型胶原，TGF-β1mRNA的表达。结果：剔毒护肝方药物血清能显著降低肝星状细胞培养上清中的Ⅰ型胶原含量及TGFβ1活性，并能抑制Ⅰ型胶原及TGFβ1mRNA的表达。结论：剔毒护肝方抗肝纤维化的机理之一是抑制肝星状细胞自分泌TGFβ1，并通过TGFβ1生成的减少，下调细胞Ⅰ型胶原的基因转录。     

抗纤软肝冲剂药物血清对激活肝星状细胞表达Ⅰ型前胶原及TGF-β_1 mRNA的影响

目的 :探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机理。方法 :分离正常大鼠肝星状细胞 ,并传代培养。用抗纤软肝冲剂给正常大鼠灌胃 ,制备药物血清 ,温育培养细胞 72h ,提取细胞总RNA ,RT PCR法分析Ⅰ型前胶原、TGF β1mRNA的表达。结果 :抗纤软肝冲剂药物血清能显著抑制肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF β1mRNA的表达。结论 :抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的机理之一是调控肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF β1mRNA的表达     

虫草多糖抗免疫损伤性大鼠肝纤维化的作用及其机现研究

采用牛血清白蛋白免疫损伤大鼠肝纤维化模型,以虫草菌丝和秋水仙碱为对照,通过肝组织病理学与Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及TGFβ1、TGFβR1、Dm阳性细胞免疫组化观察,肝Hyp含量与肝胶原酶活性检测,观察虫草多糖抗肝纤维化的作用与机制.结果显示,虫草多糖与虫草菌丝及秋水仙碱均能减轻肝纤维化程度,降低Hyp含量,减少胶原及TGFβ1生成与分泌,降低TGFβR1表达,减少Dm阳性细胞,其中虫草多糖对Ⅳ型胶原与TGFβR1表达的影响更为明显.提示虫草多糖具有良好的抗肝纤维化作用,可能是虫草菌丝抗肝纤维化的主要有效成分之一,其作用机制可能在于抑制肝星状细胞的活化及其TGFβ1的表达.     

抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状细胞增殖的影响

目的从细胞学水平探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机制.方法采用酶消化法、密度梯度离心法,分离正常大鼠肝星状细胞(HSC),培养、鉴定及传代.制备抗纤软肝冲剂药物血清,温育传一代HSC,并设生理盐水组和秋水仙碱组为对照.3H-proline掺入法测定细胞活力;3H-TdR掺入法和MTT比色法测定细胞增殖.结果抗纤软肝冲剂组药物血清对细胞形态无影响,还能明显提高细胞的3H-proline掺入(P＜0.01),明显抑制细胞的3H-TdR掺入量和MTT转化(P＜0.01),且对MTT的抑制作用呈浓度依赖性递增趋势.结论抗纤软肝冲剂能提高细胞活力,无细胞毒性作用;能抑制HSC的增殖,这可能是该方抗肝纤维化的细胞学机制之.     

抗纤软肝中剂药物血清对肝星状细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的从细胞分子学水平探讨抗纤软肝中剂抗肝纤维化的作用机制.方法抗纤软肝中剂药物血清温育传一代HSC,以生理盐水和秋水仙碱为对照.ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原,并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量;半定量法RT-PCR法检测Ⅰ型胶原、间质胶原酶(MMP1)的mRNA表达.结果抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组(P＜0.01);能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达(P＜0.01),且能促进MMP1的mRNA表达(P＜0.01).结论抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达,从而可达到抑制胶原合成,促进胶原降解,这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一.     

抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的 :从细胞分子学水平探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机制。方法 :抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC ,以生理盐水和秋水仙碱为对照。ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原 ,并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量 ;半定量法RT -PCR法检测Ⅰ型胶原、间质胶原酶 (MMP1)的mRNA表达。结果 :抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组 (P <0 .0 1) ;能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达 (P <0 .0 1) ,且能促进MMP1的mRNA表达 (P <0 .0 1)。结论 :抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达 ,从而可达到抑制胶原合成 ,促进胶原降解 ,这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

抗纤软肝冲剂药物血清对激活肝星状细胞表达Ⅰ型前胶原及TGF—β1mRNA的影响

目的：探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞,并传代培养。用抗纤软肝冲剂给正常大鼠灌胃,制备药物血清,温育培养细胞72h,提取细胞总RNA,RT-PCR法分析Ⅰ型前胶原、TGF-β1mRNA的表达。结果：抗纤软肝冲剂药物血清能显著抑制肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF-β1mRNA的表达。结论：抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的机理之一是调控肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF-βmRNA的表达。     

抗纤复方对纤维肝大鼠肝细胞基底膜基质生成的影响

目的 :探讨抗纤复方对体外培养纤维肝大鼠肝细胞基底膜基质生成的影响。方法 :常规培养正常与 DMN纤维肝大鼠肝细胞 ,然后改用抗纤复方原液与抗纤复方药物血清温育肝细胞 48小时后 ,免疫组化 S-P法显色细胞纤维连接蛋白( FN)、层连蛋白 ( LM)和 IV型胶原蛋白 ( IV-C)的变化。结果 :正常肝细胞基底膜基质合成处于抑制状态 ,肝纤维化时肝细胞基底膜基质合成增加。抗纤复方能显著抑制纤维肝肝细胞 F N,L M及 IV-C的表达 ,抗纤复方药物血清效果优于原液。结论 :抗纤复方具有抑制 DMN纤维肝肝细胞基底膜基质的异常合成作用。     

抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状态细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的：从细胞分子学水平探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机制。方法：抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC，以生理盐水和秋水仙碱为对照。ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原，并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量；半定量法RT－PCR法和检测Ⅰ型胶原，间质胶原酶（MMPI）的mRNA表达。结果：抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组（P＜0．01）；能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达（P＜0．01），且能促进MMP1的mRNA表达（P＜0．01）。结论：抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达，从而可达到抑制胶原合成，促进胶原降解，这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠转化生长因子β1表达的影响

目的：观察壮肝逐瘀煎对肝纤维化大鼠血清及肝组织中TGF—β1表达的影响,探讨本方治疗肝纤维化的作用机理。方法：将100只Wistar大鼠随机分为正常对照组20只、观察组80只,参照相关文献复制大鼠肝纤维化模型,造模过程中,于第4周末随机处死正常对照组及观察组大鼠各5只,证实肝纤维化形成后,将观察组其余大鼠随机分为病理模型组、壮肝逐瘀煎大、中、小剂量组及秋水仙碱对照组,分别予生理盐水、壮肝逐瘀煎大、中、小剂量及秋水仙碱灌胃,日1次;12周后处死大鼠,应用ELISA法检测血清TGF—β1含量的改变,同时采用免疫组化观察肝脏组织中TGF—β1的表达水平。结果：壮肝逐瘀煎能降低欠鼠肝纤维化血清中TGF—β1的表达,拮抗肝纤维化大鼠肝组织中TGF—β1的分泌。结论：壮肝逐瘀煎能有效抗大鼠肝纤维化,其作用机制是通过抑制TGF—β1的活性来实现的。     

抗纤复方对硬变肝原代培养肝细胞超微结构的影响

观察抗纤复方对硬变肝原代培养肝细胞超微结构的影响。以 0 5 %二甲基亚硝胺 (DMN)予大鼠腹腔注射造成肝纤维化模型。分为小牛血清对照、正常大鼠血清对照、抗纤复方药物血清和抗纤复方药物原液 4个观察组 ,通过电镜进行细胞超微结构观察。结果 ,抗纤复方两组的纤维肝肝细胞基本完整 ,代谢活跃。抗纤复方有稳定肝细胞膜及促进细胞光面内质网的解毒功能 ,同时有抑制纤维肝肝细胞过量合成胶原的作用。     

保肝宁对HSC-T6细胞增殖及Ⅰ型胶原表达的影响

目的 :探讨复方保肝宁对HSC -T6细胞增殖及Ⅰ型胶原表达的影响。方法 :复方保肝宁给正常大鼠灌胃 ,制备药物血清 ,温育培养HSC -T6细胞 4 8小时。MTT法测定星状细胞增殖 ,ELISA法测定培养上清的Ⅰ型胶原表达量。结果 :复方保肝宁药物血清能明显抑制HSC -T6细胞增殖 ,抑制细胞的Ⅰ型胶原分泌。实验表明 ,在抑制HSC -T6细胞增殖和Ⅰ型胶原蛋白分泌方面 ,高剂量组药物血清无低、中剂量组明显 ,是否为血清药物浓度对细胞的影响 ,尚需进一步研究。结论 :复方保肝宁能明显抑制HSC -T6细胞的活化 ,对HSC -T6细胞Ⅰ型胶原表达的抑制可能是该方抗肝纤维化的主要作用机制之一。     

复方991抗纤方对大鼠实验性肝纤维化的影响

目的观察复方991抗纤方对大鼠肝纤维化模型的生化酶学改变.方法对高脂饮食CCl4造模大鼠进行干预,分为模型组、预防组、秋水仙碱组、991治疗组,检测ALT、AST、ALB、GLB、TP、PCⅢ、HA,观察各组对肝纤维化的影响.结果复方991抗纤方可明显降低血清ALT、AST水平,升高白蛋白,降低球蛋白,预防组PCⅢ和HA水平低于其他组,991治疗组明显低于秋水仙碱组.结论复方991抗纤汤有预防和治疗肝纤维化的作用.     

抗纤软肝冲剂对肝星状细胞胶原降解相关基因表达的影响

目的 从细胞分子水平研究抗纤软肝冲剂对肝星状细胞(HSC)胶原降解的影响。方法 抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC，以生理盐水和秋水仙碱为对照。ELISA法测定细胞上清I型胶原，并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量；半定量RT—PCR法检测间质胶原酶(MMN)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1）的mRNA表达。结果 抗纤软肝冲剂组细胞上清中的I型胶原含量明显低于其他两组(P＜0．05或P＜0．01)；明显促进细胞MMN的mRNA表达(P＜0．05或P＜0.01)，显著抑制细胞TIMP-1的mRNA表达(P＜0．05或P＜0．01)。结论 抗纤软肝冲剂能促进MMN基因表达，抑制TIMP-1基因表达，从而促进胶原降解，这可能是该方抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

保肝宁对HSC—T6细胞增殖及I型胶原表达的影响

目的：探讨复方保肝宁对HSC－T6细胞增殖及I型胶原表达的影响。方法：复方保肝宁给正常大鼠灌胃，制备药物血清，温育培养HSC－T6细胞48小时。MTT法测定星状细胞增殖，ELISA法测定培养上清的I型胶原表达量。结果：复方保肝宁药物血清能明显抑制HSC－T6细胞增殖，抑制细胞的I型胶原分泌。实验表明，在抑制HSC－T6细胞增殖和I型胶原蛋白分泌方面，高剂量组药物血清无低、中剂量组明显，是否为血清药物浓度对细胞的影响，尚需进一步研究。结论：复方保肝宁能明显抑制HSC－T6细胞的活化，对HSC－T6细胞I型胶原表达的抑制可能是该方抗肝纤维化的主要作用机制之一。     

鳖甲煎丸对免疫性肝纤维化大鼠TGF-β1 mRNA表达的影响

目的：观察中药复方鳖甲煎丸对免疫性纤维化模型大鼠肝组织细胞因子TGF—β1 mRNA表达的影响，分析鳖甲煎丸的治疗作用，探讨鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用机理；并与西药秋水仙碱作对照，为临床防治肝纤维化用药提供科学依据。方法：雄性Wistar大鼠90只随机分为6组：正常对照组、模型对照组、秋水仙碱预防组、秋水仙碱治疗组、鳖甲煎丸预防组、鳖甲煎丸治疗组，选用猪血清诱导免疫损伤性肝纤维化模型。各组于10周后取10只大鼠断头处死，取肝组织，用原位杂交法检测肝组织内TGF—β1 mRNA。结果：鳖甲煎丸能够明显减少TGF—β1 mRNA的表达，作用接近或优于秋水仙碱，显示它具有明显的抗纤维化作用。鳖甲煎丸和秋水仙碱的预防效果同治疗效果相比差异均不显著。