大剂量甲基强的松龙对大鼠急性损伤脊髓Nogo-A表达量影响的研究

目的：研究大剂量甲基强的松龙对急性脊髓损伤大鼠脊髓Nogo-A蛋白表达量的影响。方法：采用allen’s打击方法，将大鼠分为正常组、急性脊髓损伤组（对照组）和急性脊髓损伤＋大剂量MP组，损伤大鼠Tg-T10节段，分别于术后3、7、14d取受损节段大鼠脊髓，运用Western-blot方法测定各时相点Nogo-A表达量及其变化，并以HE染色和免疫组化染色对受损脊髓进行形态学观察。结果：Nogo-A蛋白在各组大鼠脊髓组织中均呈阳性表达，损伤后对照组与MP组各个时相点Nogo-A表达均显著高于正常组（P〈0.05），7d时最高，后逐渐下降，但14d的表达量仍高于正常组。其中大剂量MP组与对照组在各个时间点的表达量具有显著差异（P〈0．05），MP组在各个时间点的表达量显著低于对照组。结论：Nogo-A是SCI后脊髓神经纤维再生的主要抑制因子，大剂量MP对Nogo-A的表达具有明显的抑制作用。     

大鼠自体嗅成鞘细胞移植治疗脊髓损伤的实验研究

目的探讨自体外周嗅成鞘细胞对脊髓损伤修复的可能作用和促进受损轴突再生的能力,为临床应用自体OECs修复脊髓损伤进行可行性研究.方法以改良的Allen法建立脊髓（T9～10节段）损伤模型后,将动物分为自体OECs悬液组和Hanks液对照组,分别移植含自体OECs的细胞悬液和Hanks液,以神经丝蛋白（NF）和神经生长因子受体蛋白（NGFR p75）免疫荧光双标染色,激光共聚焦显微镜检测移植效果;通过BBB行为学评分记录两组动物后肢恢复功能.结果镜下观察可见自体OECs悬液组动物脊髓损伤处的空洞较对照组明显缩小.而自体OECs悬液组免疫荧光标记纤维中夹有NGFRp75标记的OECs,且随标记的NF纤维走行方向排列.行为学观察可见自体OECs悬液组的大鼠后肢运动功能较对照组有显著恢复.结论自体OECs悬液多点注射有助于脊髓损伤部位神经纤维的再生.     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的研究现状

脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）是一种严重威胁人类健康的疾病,由于损伤后可导致损伤平面以下的感觉、运动及植物神经功能障碍,给患者、家庭和社会带来沉重的负担。目前对脊髓损伤的实验研究主要集中在改善SCI的生长环境、组织移植、细胞移植等。     

嗅鞘细胞与氯化锂联合修复成年大鼠急性脊髓损伤的实验研究

为观察联合应用氯化锂(LiCl)后,嗅鞘细胞(OECs)移植对大鼠急性脊髓损伤修复效果,并探讨二者之间可能的相互作用,本研究利用多中心急性脊髓损伤打击器(MASCIS impactor)制作大鼠脊髓打击伤模型,然后随机分为OECs组、LiCl组、OECs+LiCl组及空白对照组。分期用实验性脊髓损伤运动功能BBB评分法对后肢运动功能评分,并进行组织学检查,评价及比较各组修复效果。结果显示:OECs组与OECs+LiCl组BBB评分较LiCl组与对照组在2周后各时段有显著性差异(P<0.01);OECs+LiCl组BBB评分在4周后显著高于OECs组(P<0.01);组织学检查观察到OECs组与OECs+LiCl组的组织学改变与LiCl组和对照组有显著性差异,而且OECs+LiCl组相对于OECs组表现出更明显的促神经纤维再生。以上结果提示OECs对脊髓损伤的修复作用在联合LiCl后更加显著,表明二者具有良好的协同作用关系。     

嗅鞘细胞移植对脊髓半横断损伤大鼠后肢运动功能的影响

目的观察嗅鞘细胞移植物对脊髓半横断损伤大鼠后肢运动功能的影响。方法30只雌性成年SD大鼠制成脊髓半横断损伤模型,并随机分成5组立即进行移植,A组移植纯化的嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)悬液,B组移植纯化的OECs培养上清液,C组移植未纯化的OECs,D组移植未纯化的OECs培养上清液,E组移植DMEM/F12培养液,术后6 w内进行BBB评分和IP实验,用单因素方差分析进行统计学分析。结果A组的BBB评分在3w后较其它组高,差异有统计学意义(P<0.05),A组的IP实验结果在4 w后较其它组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论纯化培养嗅鞘细胞移植能促进脊髓半横断损伤大鼠后肢运动功能恢复。     

人骨髓间质干细胞和嗅鞘细胞移植对大鼠急性脊髓损伤功能修复的比较研究

目的对比人骨髓基质细胞(BMSCs)与人胚嗅鞘细胞(OECs)移植对大鼠脊髓损伤功能修复的影响。方法将45只SD大鼠分成脊髓损伤后BMSCs移植组(BMSCs组)、OECs移植组(OECs组)和PBS对照组(PBS组),通过BBB评分、运动诱发电位(MEP)评估脊髓传导功能的改善状况,免疫组织化学方法检测移植细胞存活和分化情况,病理形态学方法观察组织结构修复情况。结果BMSCs组BBB评分高于OECs组(P<0.05);两细胞治疗组MEP潜伏期明显缩短(P<0.05);BMSCs组嗜银染色可见脊髓损伤近端有较多再生纤维向远端延伸,形成神经纤维束,而OECs组再生纤维较少;两种移植细胞均可在损伤处部分存活,BMSCs组可见BMSCs来源的细胞Nestin、NF、GFAP的阳性表达。结论BMSCs移植比OECs移植能更有效促进大鼠急性脊髓损伤修复。     

自体嗅黏膜移植修复大鼠脊髓损伤的实验研究

目的　观察自体嗅黏膜植入大鼠脊髓后的变化及其对轴突再生的修复作用。探索临床自体嗅黏膜移植修复脊髓损伤的可能性。　方法　成年雄性Wistar大鼠随机分为嗅黏膜移植组和对照组各 2 0只。嗅黏膜移植组取鼻中隔后部的嗅黏膜组织 (1mm2 )植入自体大鼠脊髓颈 1节段后索内的皮质脊髓束缺损处 (2mm× 1 5mm) ;对照组取鼻腔呼吸区黏膜植入脊髓同样的损伤处。 4～ 6周处死动物 ,移植区冰冻水平切面 ,免疫荧光双标神经丝蛋白 (NF)和神经生长因子受体蛋白 (NGFRp75 ) ,Confocal显微镜下观察 ,另行免疫组织化学染色观察移植嗅黏膜与周围组织的生长情况。　结果　对照组大鼠的损伤处有明显空洞 ,呼吸区黏膜内未见p75染色 ;嗅黏膜移植组可见p75标记的植入的嗅黏膜与周围组织愈合良好 ,空洞明显减少 ,被标记的嗅成鞘细胞向神经组织浸润生长 ,在移植物内有大量被标记的纤细的不分叉的NF纤维穿过。　结论　自体嗅黏膜有可能成为临床嗅成鞘细胞修复脊髓损伤的供体     

嗅球和嗅黏膜来源的嗅鞘细胞对脊髓损伤小鼠的治疗效果比较

目的体外分离、培养不同来源的嗅鞘细胞,并鉴定其生物学特性,比较不同来源的嗅鞘细胞生物活性,评价其对脊髓损伤模型小鼠的疗效的差异。方法差速贴壁法分别培养嗅球和嗅黏膜来源的嗅鞘细胞,免疫荧光染色检测该细胞特异性蛋白S100、P75的表达,并对二者生长曲线及在不同代次、不同浓度梯度条件下神经营养因子分泌情况进行检测,实时定量PCR(qRT-PCR)鉴定二者脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)、神经营养因子3(NT-3)、神经营养因子4(NT-4)、轴突膜蛋白生长相关蛋白43(GAP-43)、微管相关蛋白(MAP-2)基因表达,并分别将两种细胞移植入脊髓横断小鼠模型中,以小鼠神经功能评分及脊髓内移植细胞分布情况进行评估。结果所获得不同来源的嗅鞘细胞呈双极、三极样形态生长,且S100、P75蛋白表达均为阳性,嗅黏膜来源细胞不表达MAP-2,高表达GAP-43,嗅球来源的细胞低表达MAP-2和GAP-43,嗅球来源细胞生长活性大于嗅黏膜来源的细胞,其中嗅黏膜细胞来源分泌营养因子高于嗅球来源的细胞,小鼠神经功能评分显示嗅黏膜来源细胞治疗脊髓损伤模型效果明显高于嗅球来源的嗅鞘细胞。结论两种来源的嗅鞘细胞存在生物学差异,嗅黏膜来源细胞治疗脊髓损伤效果高于嗅球来源的嗅鞘细胞,可以作为临床应用的种子细胞。     

嗅球成鞘细胞移植对脊髓半横断后脊髓灰质内Ca2+荧光强度的影响

目的：研究嗅球成鞘细胞(OECs)的移植对脊髓半横断后脊髓灰质细胞内游离钙离子浓度([Ca^2 ]i)的影响,探索OECs促进脊髓再生的机制。方法：将体外培养的OECs制成细胞悬浮液移植到上颈段脊髓半横断的动物模型中,用激光扫描共聚焦显微镜观察颈段脊髓厚片[Ca^2 ]i荧光强度的变化。结果：移植组与损伤组比较,损伤组损伤侧与非损伤侧[Ca^2 ]i荧光强度差异非常显著;而移植组损伤侧与非损伤侧[Ca^2 ]i荧光强度无显著差异。结论：(1)OECs对脊髓的再生有良好的促进作用;(2)OECs能够抑制[Ca^2 ]i的升高,改善损伤部位的微环境。     

嗅鞘细胞静脉移植治疗脊髓损伤

背景：嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤在众多疗法中效果较佳,成为最有前景的治疗方法之一。目前移植方法为局部移植,存在操作复杂、创伤大、重复移植治疗困难等缺点。寻找一种简单易行且疗效好的移植方法成为各国学者研究的热点。 目的：分析嗅鞘细胞静脉移植治疗脊髓损伤的可行性和疗效。 方法：制备Wistar大鼠脊髓半切模型,随机分4组：嗅鞘细胞髓内局部移植组、嗅鞘细胞静脉移植组、D/F12静脉移植组和空白对照组。定期行CBS功能评分及组织学检查,评价脊髓修复情况。 结果与结论：嗅鞘细胞髓内局部移植组、嗅鞘细胞静脉移植组的功能恢复和组织学改变优于D/F12静脉移植组和空白对照组,嗅鞘细胞髓内局部移植组、嗅鞘细胞静脉移植组间无显著差别。说明嗅鞘细胞静脉移植可向脊髓损伤部位迁移并修复脊髓损伤,其疗效与嗅鞘细胞髓内局部移植相当。     

嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓半横断损伤后轴突再生及后肢功能恢复的作用

为了对嗅鞘细胞移植治疗大鼠脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)后轴突再生及后肢功能恢复进行综合性的评价,本实验采用22只雌性成年SD大鼠,并随机分成A、B、C、D 4组。其中A、B、D组行左侧T11 ～T12节段脊髓半横断手术,然后A组移植嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)悬液;B组移植DMEM/F12培养液;D组移植核荧光试剂(Hoechst33342)标记的嗅鞘细胞,用于鉴定嗅鞘细胞在体内的存活情况;C组作为正常对照组。术后6周内,对大鼠进行BBB评分、IP斜板试验并观察皮质体感诱发电位(cortical somatosensory evoked potential, CSEP)、运动诱发电位(motor evoked potential, MEP)的潜伏期。将辣根过氧化物酶(HRP)注射到横断面尾段脊髓,逆行追踪观察横断面头段脊髓及对侧中脑红核内HRP逆标细胞数,并观察左侧后肢小腿三头肌肌细胞横截面积及直径的变化。结果显示:(1)移植后的OECs数量未见明显减少,细胞核形态较好,细胞未向头、尾侧迁移;(2)移植3周后BBB评分及IP斜板,试验A、B组较C组明显低(P<0.05),但A组明显高于B组(P<0.05);(3)A、B组的CSEP及MEP潜伏期较C组明显延长(P<0.05),但A组要比B组明显缩短(P<0.05);(4)HRP逆行追踪观察到对侧中脑红核大细胞区及脊髓T9 ～T11节段逆标细胞的数量,A组明显多于B组,但A、B组均少于C组;(5)左侧后肢小腿三头肌肌细胞的横截面积及直径,A、B组均较C组减少,但A组减小的幅度明显小于B组。以上结果表明OECs移植能促进半横断脊髓轴突的再生及后肢功能的恢复。     

微囊化异种嗅鞘细胞移植联合中药修复大鼠脊髓损伤

目的:旨在探讨基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在异种嗅鞘细胞移植联合中药干预下脊髓损伤中的作用。方法:将188只SD大鼠随机分为正常对照组、单纯损伤组、异种嗅鞘细胞移植组、异种嗅鞘细胞移植联合中药治疗组,损伤组又设1、3、7、14、28 d 5个时相点,免疫组织化学技术检测MMP-9的表达,同时电镜观察血脊髓屏障的变化。结果:脊髓损伤后血脊髓屏障的超微结构不同程度损害、MMP-9表达上调,经干预治疗后出现一定程度的恢复,MMP-9表达下调。结论:脊髓损伤后MMP-9表达水平增加与伤后血脊髓屏障损害的发生、发展密切相关,MMP-9在脊髓损伤后血脊髓屏障损害的病理生理过程中起重要作用。异种嗅鞘细胞移植联合中药对脊髓损伤有较好的修复作用。     

纯化的大鼠嗅鞘细胞在大鼠脊髓损伤中的修复作用

目的探讨纯化的大鼠嗅鞘细胞对损伤的脊髓的修复作用,评价其作为脊髓损伤治疗的可行性。方法用新生Wistar大鼠嗅球做嗅鞘细胞的培养,大量繁殖并利用免疫吸附进行纯化;制造大鼠脊髓横断伤模型;将纯化的细胞以不同的浓度进行细胞移植,连续观察损伤脊髓的变化、神经功能评定(BBB评分)及其组织化学变化。结果免疫吸附是纯化嗅鞘细胞的可靠方法,在细胞浓度为3×105mol/L时细胞移植效果较好,术后连续观察,试验组较对照组有明显的运动功能的恢复,组织化学观察,移植区神经纤维数量增多。结论嗅鞘细胞移植可在一定程度上促进脊髓损伤神经纤维再生和功能恢复。     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展

脊髓损伤是一种严重威胁人类健康的疾病，可致损伤平面以下的运动、感觉及植物神经功能障碍，其治疗一直是神经科学领域研究的难点与热点。众多研究表明，脊髓内细胞移植是具有里程碑意义的治疗策略，为严重脊髓损伤的治疗提供了新方法。其中，可用于移植的细胞主要有神经干细胞、雪旺细胞、少突胶质细胞、嗅鞘细胞等。所有这些细胞中嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells，OECs）的治疗效果最佳，它是一种特殊的大型神经胶质细胞，兼具中枢神经系统星形胶质细胞和外周雪旺细胞的双重特性，具有促进轴突再生和髓鞘化的能力，被许多学者认为是最理想的移植细胞，有可能在脊髓损伤的治疗上取得突破。本文就OECs移植治疗脊髓损伤的研究进展作综述如下。     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤：问题与瞻望

背景：嗅鞘细胞兼具有许旺细胞和星形胶质细胞的特性,能分泌多种神经生长因子和营养因子,改善脊髓损伤局部的微环境、诱导轴突的再生及髓鞘化、促进脊髓损伤后的功能恢复。 目的：总结当前嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的最新研究成果,将研究思路和最新研究进展相结合进行综述。 方法：以“olfactory ensheathing cell,transplantation,spinal cord injury”为检索词,检索PubMed数据库(1990-01/2012-01),以“嗅鞘细胞,移植,脊髓损伤”为检索词,检索CNKI数据库(2000-01/2012-01),文献检索语种为英文和中文。纳入与嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤相关的文献,排除重复文献。 结果与结论：计算机初检得到372篇文献,根据纳入排除标准,对其中23篇文献进行分析。大量动物及临床实验研究表明,嗅鞘细胞移植能有效促进脊髓损伤局部形态及功能的恢复,为临床治疗脊髓损伤患者提供了新途径。但是如何解决嗅鞘细胞的来源问题、如何避免异体移植免疫排斥反应的发生、以及异种移植中的生物安全问题是限制嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤临床应用的重要因素。因此,自体嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤能够较好地解决上述问题,将有可能成为后续研究的热点。     

成鼠自体鼻腔嗅粘膜组织和嗅粘膜成鞘细胞系修复脊髓锥体束损伤的实验研究

继Ｒａｍｏｎ ＣｕｅｔｏＡ(195 5年 )和ＬｉＹ(1997年 )报道取自嗅球的成鞘细胞有助于脊髓锥体束修复的实验研究之后 ,有关成鞘细胞修复脊髓的实验成为近年来研究的焦点。尽管成鞘细胞有助于中枢神经再生的现象为临床脊髓损伤患者带来希望 ,但几乎所有实验所采用的成鞘细胞都是取自异体的嗅球组织 ,使临床应用的可能性大为降低。本研究的目的是探索同样含有成鞘细胞的鼻腔嗅粘膜是否可作为组织和细胞移植的供体 ,修复同体脊髓损伤的可能性。本研究分为两部分 ,第一部分用Ｗｉｓｔａｒ大鼠 40只 ,将取自大鼠左侧鼻中隔后部嗅粘膜组织作为脊…     

嗅鞘细胞移植治疗慢性脊髓损伤的临床研究进展

背景：虽然迄今为止大量的体外和动物实验都证实了嗅鞘细胞对脊髓损伤的修复作用,但是利用嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的临床试验尚处于起步阶段。 目的：观察嗅鞘细胞移植治疗慢性脊髓损伤的临床安全性、有效性及实用性。 方法：由第一作者检索至2012年5月为止 PubMed数据及CNKI中国期刊全文数据库有关嗅鞘细胞移植治疗慢性脊髓损伤的临床试验研究及安全性、疗效方面相关的报道,以“olfactory ensheathing cells, spinal cord injury, clinical research”为英文检索词,“嗅鞘细胞移植,脊髓损伤”为中文检索词。 结果与结论：计算机初检得到133篇文献,阅读标题和摘要进行初筛,排除重复性研究,共34篇文献符合纳入标准。结果显示,利用嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤,在体外试验和动物模型中获得了良好的效果。在临床试验方面,到目前为止,嗅鞘细胞病灶直接移植治疗慢性脊髓损伤按嗅鞘细胞来源分主要集中在以下几个方面：①胚胎嗅鞘细胞移植。②嗅黏膜移植。③嗅黏膜源性嗅鞘细胞移植。3种嗅鞘细胞移植方法的总体安全性(96.4%)和有效性(23.4%)较高,但是其移植方法均存在明显的不足。提示嗅鞘细胞移植治疗慢性脊髓损伤的安全性和有效性还需要进一步验证,转化为临床应用还有很长的路要走。     

不同时间点静脉移植嗅鞘细胞修复脊髓损伤

背景:嗅鞘细胞具有促进轴突再生、为受伤的宿主细胞提供营养支持以及调节炎症反应的能力,是修复脊髓损伤具有潜力的细胞。目的:探讨通过静脉移植嗅鞘细胞治疗脊髓损伤的最佳移植时间窗。方法:SPF雄性SD大鼠30只,采用脊髓半横断建立大鼠脊髓损伤模型,并随机分为5组:脊髓损伤后注射嗅鞘细胞1 d移植组、3 d移植组、7 d移植组、10 d移植组及PBS对照组。应用荧光量子点标记嗅鞘细胞;分别于1,3,7,10 d时间点通过尾静脉移植应用量子点标记的嗅鞘细胞;PBS对照组脊髓损伤后注射PBS。注射后1 d取损伤处的脊髓;应用小动物成像仪测定不同时间点转移到损伤处荧光的数值,通过荧光的强度衡量转移到损伤处细胞的量;应用嗅鞘细胞Anti-p75 NGF Receptor抗体做损伤处脊髓的免疫组织化学。实验方案经宁夏医科大学动物实验伦理委员会批准(编号:2017-073)。结果与结论:①荧光量子点可以标记嗅鞘细胞;②荧光测定结果与免疫组织化学染色结果:1,3,7,10 d时间点通过尾静脉移植的嗅鞘细胞均有细胞转移到损伤处,7 d移植的嗅鞘细胞转移到损伤处的最多;③结果说明,脊髓损伤不同时间点注射的嗅鞘细胞均可以转移到脊髓损伤处,损伤后7 d移植的嗅鞘细胞转移到损伤处的细胞数量最多,可以作为移植的最佳时间窗。     

嗅鞘细胞移植脊髓损伤大鼠Sema3A及其受体NP-1基因的表达

背景：嗅鞘细胞移植促进脊髓损伤修复机制中对神经生长抑制导向因子的研究较少。 目的：观察嗅鞘细胞移植对脊髓半横断损伤后神经生长抑制导向因子Sema3A及其受体NP-1在RNA水平表达的变化。 方法：17只SD大鼠随机分为嗅鞘细胞移植组、DMEM/F12 培养液移植组和正常对照组。制作T11~T12水平大鼠脊髓左侧半横断损伤模型,立刻分别注射嗅鞘细胞悬液或等量的DMEM/F12 培养液。 结果与结论：6周后取横断水平前后两个脊髓节段,用RT-PCR的方法对Sema3A、NP-1的mRNA进行半定量分析。①嗅鞘细胞在大鼠脊髓内仍有大量存活。②Sema3A及NP-1 mRNA的量,DMEM/F12 培养液移植组明显多于正常对照组(P < 0.05),嗅鞘细胞移植组与培养液移植组比较明显下调,且与正常对照组比较差异无显著性意义(P > 0.05)。③提示嗅鞘细胞移植有效减少了神经生长抑制导向因子Sema3A及其受体NP-1 mRNA的表达。     

嗅鞘细胞移植修复脊髓损伤

背景：脊髓损伤后导致损伤平面以下的运动、感觉及自主神经功能障碍,其修复一直是神经科学研究领域的一大难题。 目的：对嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的可能机制及在实验研究、临床应用等方面进行分析,探讨其对脊髓神经功能恢复的作用。 方法：回顾性分析以往嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的实验基础研究和临床研究的状况,分析嗅鞘细胞移植后的存活数量和时间与损伤脊髓结构和功能的恢复关系,明确限定临床研究入选病例及排除病例的标准,明确移植细胞的来源、类型及植入方法,建立客观有效的评估标准。 结果与结论：嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤动物实验已经取得了满意的效果,脊髓功能评分及感觉与运动功能均较移植前明显提高(P < 0.001),动物实验中成功的经验为临床试验和应用提供了依据,部分临床试验最长患者随访5年,但因临床研究病例数较少,随访期短,到目前还不能判断其大宗病例的最终恢复程度,还需要进一步观察和研究。但这一研究结果的重要意义有助于找到合理的策略,使嗅鞘细胞发挥最大的修复效果。