细菌内构建复制缺陷型人肝细胞生长因子重组腺病毒及其对胎肝细胞细胞周期的影响

利用ＡｄＥａｓｙ系统的细菌内同源重组机制构建以ＣＭＶ驱动并同时表达绿色荧光蛋白 (ＧＦＰ)的人肝细胞生长因子 (ＨＧＦ)复制缺陷型重组腺病毒 (ＡｄＨＧＦ) ,体外感染胎肝细胞 ,初步研究其对肝细胞细胞周期的影响 ,为基因治疗技术和肝细胞移植联合应用于肝纤维化治疗研究提供新的途径。将质粒 ｐＵＣＨＧＦ扩增、酶切获得ＨＧＦｃＤＮＡ片段后插入腺病毒穿梭载体质粒 ｐＡｄＴｒａｃｋ ＣＭＶ的ＣＭＶ启动子的下游 ,构建重组穿梭载体ｐＡｄＴｒａｃｋ ＣＭＶ ＨＧＦ ,ＰｍｅⅠ酶切线性化后与骨架载体ＡｄＥａｓｙ 1在细菌ＢＪ5 183内同…     

慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞Fas和FasL的表达及临床意义

我们应用逆转录 ＰＣＲ(ＲＴ ＰＣＲ)方法 ,对 37例慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞Ｆａｓ和ＦａｓＬ的表达进行检测 ,初步探讨其在活化诱导慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞凋亡中的作用。对象与方法一、病例收集我院 1998～ 1999年间收住的 37例慢性乙型肝炎患者 ,男 2 6例 ,女 11例。年龄 16～ 6 0岁 ,平均 ( 35± 12 )岁。诊断按 1995年第五次全国传染病与寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎标准。ＡＬＴ >10 0Ｕ/Ｌ ,ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗 ＨＢｃ和ＨＢＶＤＮＡ均阳性。排除ＨＡＶ、ＨＣＶ、ＨＤＶ和ＨＥＶ感染 ,以及近 3个月应…     

ELECTROGASTROGRAPHY IN CHILDHOOD．

ＥＬＥＣＴＲＯＧＡＳＴＲＯＧＲＡＰＨＹＩＮＣＨＩＬＤＨＯＯＤ．ＡｌｂｅｒｔｏＭ．Ｒａｖｅｌｉ，ＭＤ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｅｄｉａｔｒｉｃｓ，ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＢｒｅｓｃｉａ，ＩｔａｌｙＣｕｒｒｅｎｔｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｏｆｔｈｅｐ...     

佛山地区存在经输血传播病毒(TTV)感染

我们应用Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ法检测了４５例甲到戊型标志物均阴性的肝炎患者和４４例献血员血清中的ＴＴＶＤＮＡ。资料与方法：４５例肝炎患者均为我院传染科或门诊病人,血清经ＥＬＩＳＡ法检测抗－ＨＡＶ,ＨＢｓＡｇ,ＨＢｃＡｂ,抗－ＨＣＶ,抗－ＨＥＶ均阴性,ＰＣＲ检测ＨＢＶＤＮＡ,ＨＣＶＲＮＡ均阴性。４４例某院献血员检测抗－ＨＡＶ,ＨＢｓＡｇ,ＨＢｃＡｇ,ＨＢｃＡｂ,抗－ＨＣＶ,抗－ＨＥＶ为阴性,肝功能正常。抽提标本血清ＤＮＡ进行Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ：以ＲＤ０３７和ＲＤ０３８为引物进行第一次ＰＣＲ,再以Ｒ…     

HBsAg阴性/抗-HBc阳性供血员抗-HBc IgM和HBV DNA血清流行病学调查

了解ＨＢｓＡｇ阴性、抗 ＨＢｃ阳性供血员ＨＢＶ感染状况 ,探讨改进供血员ＨＢＶ筛检标志。ＥＬＩＳＡ法检测 4 31名ＨＢｓＡｇ阴性供血员抗 ＨＢｃ ,阳性者检测抗 ＨＢｃＩｇＭ (ＥＬＩＳＡ法 ,Ｓ/Ｎ≥ 2 .1为阳性 )和ＨＢＶＤＮＡ(ＰＣＲ法 )。结果表明 ,196名 ( 4 5.5% )供血员抗 ＨＢｃ阳性 ,抗 ＨＢｃＩｇＭ和ＨＢＶＤＮＡ的检出率分别为 32 .1% ( 63/ 196)和 14.8% ( 2 9/ 196) ,抗 ＨＢｃＩｇＭ阳性和阴性者ＨＢＶＤＮＡ检出率分别为 39.7% ( 2 5/ 63)和3.0 % ( 4 / 133) (Ｐ <0 .0 0 1) ,抗 ＨＢｃＩｇＭ和ＨＢＶＤＮＡ的阴阳…     

HBV反义全基因真核细胞表达载体的构建及在肝癌细胞内的表达

１．材料与方法：乳哺动物细胞表达载体ｐＢＫ－ＣＭＶ,长约４．５ｋｂ,带有Ｔ_７公用序列。ｐＣＰ１０是ｐＢＲ３２２ＥｃｏＲＩ位点中插入双拷贝头尾相接的ＨＢＶａｙｗ亚型全基因ＨＢＶＤＮＡ重组质粒。ＰＣＲ引物ＸＩ１：１４２８－１４４８ｎｔ５'ＣＧＴ　ＣＣＣＧＴＣ　ＧＧＣＧＣＴＧＡＡＴＣＣ３',ＸＩ_２：１６７２－１６５３ｎｔ５'ＡＧＴＣＣＡＡＧＡＧＴＣＣＴＣＴＴＡＡＧ３'。人肝癌细胞系ＳＭＭＣ－７７２１,出上海细胞所提供。将ＥｃｏＲＩ酶切后回收的全基因ＨＢＶ片段。在Ｔ_４ＤＮＡ连接酶作用下,与ＥｃｏＲＩ酶切…     

乙型肝炎免疫的供者的骨髓用作移植以清除乙型肝炎病毒

乙型肝炎病毒(ＨＢＶ)初期感染可以通过体液和细胞免疫反应使ＨＢＶ得以清除,但ＨＢＶ也可以持续存在,导致慢性乙型肝炎或乙型肝炎表面抗原(ＨＢｓＡｇ)阳性无症状携带状态。应用同种骨髓移植(ＢＭＴ)法使病人ＨＢｓＡｇ得以清除尚无报告。本文报告1例男性,29岁,因患急性髓性白血病于第2次完全缓解期行ＢＭＴ,骨髓供者是与其ＨＬＡ匹配的妹妹。ＢＭＴ前病人系无症状ＨＢＶ携带者(ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｃ和抗ＨＢｅ阳性,抗ＨＢｓ和ＨＢｅＡｇ阴性),巢式ＰＣＲ法检出其正常肝组织中有ＨＢＶＤＮＡ,但血清ＨＢＶＤＮＡ阴性。其妹妹为ＨＢｓＡｇ、…     

表达幽门螺杆菌UreA和KatA双价抗原的鼠伤寒菌疫苗株的初 …

目的 构建表达幽门螺杆菌（Ｈｐ）尿素酶Ａ亚单位（ＵｒｅＡ）和过氧化氢酶（ＫａｔＡ）的减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,对研制抗Ｈｐ感染重组疫苗的可行性进行探讨。方法 ＰＣＲ方法从Ｈｐ基因组中扩增出ｕｒｅＡ和ｋａｔＡ片段,将其插入ｐＧＳＴａｇ表达载体中,重组质粒再转入减毒鼠伤寒沙门氏菌,结果 对重组质粒进行限制酶切分析和ＰＣＲ检测,证实两种基因已被克隆入ｐＧＳＴａｇ,并转入减毒鼠伤寒沙门氏菌。结论 本研究成     

应重视对隐匿性乙型肝炎的诊断

ＨＢｓＡｇ阴性不能排除ＨＢＶ感染已经成为共识 ,尤其在ＨＢＶ感染的高发地区。自 1978年Ｈｏｏｆｎａｇｌｅ等首次报告抗 ＨＢｃ阳性的供血者可导致受者ＨＢＶ感染以来[1] ,大量文献报道证明这种现象确实存在 ,是临床不明原因慢性肝炎的常见病因。ＨＢｓＡｇ阴性的ＨＢＶ感染文献常称为隐匿性 (ｏｃｃｕｌｔ)、沉默性 (ｓｉｌｅｎｔ)或潜在性 (ｌａｔｅｎｔ)ＨＢＶ感染 ,是指血清ＨＢｓＡｇ阴性 ,而应用ＰＣＲ技术检测血清和 (或 )肝组织中ＨＢＶＤＮＡ阳性。可以分为两类 ,一是可检出血清ＨＢＶ标志 ,包括抗 ＨＢｓ(+ )、抗 ＨＢｃ(+ …     

感染乙型肝炎病毒MT2淋巴细胞表达Fas

目的：观测Ｔ淋巴细胞－ＭＴ２细胞对乙型肝炎病毒感染的敏感性，了解病毒感染对淋巴细胞表达Ｆａｓ的影响。方法：体外培养ＭＴ２细胞，用ＨＢＶ ＤＮＡ阳性血清直接感染，用酶联免疫和斑点杂交，ＰＣＲ法检测感染后的细胞病毒复制与表达状况，用酶联免疫法检测了Ｆａｓ抗原表达。结果：ＭＴ２细胞于阳性血清感染后第八天可测到ＨＢｅＡｇ，ＨＢｓＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ同时出现Ｆａｓ表达信号，结论：ＭＴ２细胞对ＨＢＶ易感，ＨＢＶ     

拉米夫定使长期AFP低水平波动患者正常一例

患者男 ,38岁。 1997年 7月 14日因间歇乏力、纳差 1个月 ,加重伴恶心、呕吐、尿黄 1周、ＨＢｓＡｇ阳性 3年 ,ＡＬＴ 2 75Ｕ /Ｌ、ＴＢｉｌ 6 5 .4μｍｏｌ/Ｌ ,ＩｇＭ抗 ＨＡＶ ( -) ,第 1次入我院。拟诊为病毒性肝炎、乙型、慢性中度。给予肝泰乐、肌苷、强力宁、茵栀黄和丹参等药物治疗 43ｄ ,肝功能各项指标正常后出院。院外服中药治疗 3个月 ,具体方剂不详。 1997年 12月 2 5日查ＡＬＴ5 8Ｕ/Ｌ、ＡＳＴ 70Ｕ /Ｌ、ＡＦＰ 15 5ｎｇ/ｄｌ(放免法 ) ,ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗 ＨＢｃ和ＨＢＶＤＮＡ均阳性 (ＰＣＲ法 )。门诊继续给…     

人尿激酶型纤溶酶原激活剂重组腺病毒的构建及其在肝星状细胞中的表达

抑制ＨＳＣ激活和ＥＣＭ合成 ,促进ＥＣＭ降解已成为抗肝纤维化治疗的重要途径。基质金属蛋白酶 (ＭＭＰｓ)是抑制ＥＣＭ在肝脏内沉积的主要蛋白酶。研究证实 ,纤溶酶原由尿激酶型纤溶酶原激活剂 (ｕＰＡ)激活形成纤溶酶后 ,可将以酶原形式分泌的ＭＭＰｓ裂解而激活。此外 ,纤溶酶也可直接降解ＥＣＭ。本实验利用细菌内的同源重组机制构建以ＣＭＶ驱动并同时表达绿色荧光蛋白 (ＧＦＰ)的非分泌型ｕＰＡ复制缺陷型重组腺病毒 (ＡｄｕＰＡ) ,并研究其在ＨＳＣ中的表达和降解胶原的作用 ,为肝纤维化基因治疗研究提供新的手段。设计引物 ,ＰＣＲ获取氨基端以ＲＲ固定信号序列修饰和羧基端经ＫＤＥＬ信号修饰的ｕＰＡｃＤＮＡ片段 ,同时加入ＫｐｎⅠ和ＨｉｎｄⅢ的限制性酶切位点。通过体外连接构建 ｐＡｄＴｒａｃｋ ＣＭＶ ｕＰＡ穿梭载体 ;酶切线性化后与骨架载体ｐＡｄＥａｓｙ 1电穿孔共转化ＢＪ5 183感受态细菌 ,经同源重组得到重组腺病毒质粒ｐＡｄｕＰＡ ,然后在 2 93细胞内包装得到非分泌型重组腺病毒ＡｄｕＰＡ ;以一定滴度的ＡｄｕＰＡ感染ＨＳＣ ,ＲＴ ＰＣＲ法测定其在ＨＳＣ中的表达 ;同时检测ＭＭＰｓ活性并利用免疫细胞化学技术测定...     

幽门螺杆菌感染对胃黏膜上皮细胞增殖的影响

空泡毒素 (ＶａｃＡ)是幽门螺杆菌 (Ｈｐ)的重要致病因素。根据其编码基因ｖａｃＡ信号序列的不同可分为ｓ1ａ ,ｓ1ｂ ,ｓ1ｃ和ｓ2型。ｖａｃＡｓ1ａ型菌株与胃十二指肠疾病的关系更为密切 ,可能是致胃十二指肠疾病的高毒力菌株。不同ｖａｃＡ类型的菌株对于上皮细胞增殖的影响存在差异[1] 。因此 ,我们主要观察感染ｖａｃＡｓ1ａ阳性Ｈｐ菌株 ,ｖａｃＡｓ1ａ阴性Ｈｐ菌株及Ｈｐ阴性的慢性胃炎和十二指肠球部溃疡 (ＤＵ)患者胃黏膜上皮细胞增殖情况 ,以探讨Ｈｐ及其不同菌株感染对细胞增殖的影响以及其可能的作用机制。材料与方法一、标本中…     

聚合酶链反应检测HBV－DNA的临床意义

本文采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和ＥＬＩＳＡ法对２７３７例乙肝患者血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ和乙肝病毒标志物进行检测，结果发现各组ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出率：①ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）和抗ＨＢｃ（＋）组为９９．２７％；②ＨＢｓＡｇ（＋）、抗ＨＢｅ（＋）和抗ＨＢｃ（＋）组为４４．７７％；③ＨＢｓＡｇ（＋）和抗ＨＢｃ（＋）组为４２．８６％；④ＨＢＶ标志物均阴性为１５．９２％。结果表明ＨＢＶ－ＤＮＡＰＣＲ检出先于其它乙肝病毒标志物，可早期发现乙肝。ＰＣＲ法直接检测ＨＢＶ－ＤＮＡ更有利于临床对乙肝的诊断和治疗。     

乙型肝炎病毒囊膜中蛋白与白细胞介素18联合基因免疫的实验研究

构建ＨＢＶ囊膜中蛋白核酸疫苗表达载体并免疫小鼠 ,观察白细胞介素 18对基因免疫的辅助作用。构建质粒ｐＶＲ10 12 Ｍ、ｐｃＤＮＡ3.1 ＩＬ 18,肌注法免疫 2 5只Ｂａｌｂ/ｃ小鼠 ,3组小鼠分别注射 10 0 μｇｐＶＲ10 12 ,ｐＶＲ10 12 Ｍ ,ｐＶＲ10 12 Ｍ ,ｐＶＲ10 12 Ｍ和ｐｃＤＮＡ3.1 ＩＬ 18质粒 ,每 2周 1次 ,共 3次。每次免疫 2周后眼眶采血 ,检测血清抗 ＨＢｓ ,第 3次免疫后 2周应用乳酸脱氢酶检测法验证特异性细胞杀伤率。结果表明 ,经注射上述质粒后 ,可观察到注射ｐＶＲ10 12 Ｍ组的小鼠随免疫次数的增加 ,抗 ＨＢｓ阳性…     

慢性乙型肝炎患者血清及肝组织中乙型肝炎病毒核心基因的研究

３６例肝穿刺诊断为慢性乙型肝炎患者的肝组织及血清，用ＨＢＶ全基因核酸杂交法及聚合酶链反应（ＰＣＲ）法扩增了病毒的ＰｒｅＣ／Ｃ区基因片段。发现ＰＣＲ法扩增后再经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ吸印转移及核酸杂交（ＰＣＲ－ＳＢＨ）可显著提高检出ＨＢＶ基因的敏感性。对５例无任何血清ＨＢＶ标记者证实在其肝内存在ＨＢＶ基因。用ＡｖａⅡ，ｓａｕ３ＡＩ，ＸｍｎＩ，ＢｓｔＮＩ及ＴａｑＩ酶切图谱分析上述病例的ｃ基因，与ｐＡＤＲ－１Ｃ基因比较，有４例（５份标本）有Ｓａｕ３ＡＩ的异常酶切位点，提示ＨＢＶ不仅ＰｒｅＣ区存在变异株，Ｃ基因中亦可有变异。     

干扰素与联合阿昔洛韦治疗慢性乙型肝炎

资料与方法：１对象：１９９６年２月一１９９７年８月本院住院患者。年龄在１８－６０岁,平均３９岁,男２８例,女７例,均为慢性乙型肝炎,ＨＢｅＡｅ和ＨＢＶＤＮＡ均阳性,且ＡＬＴ异常。部分患者经肝穿活检证实为慢性肝炎。２．检测方法：患者治疗前均测血常规,ＡＬＴ,ＨＢＶＤＮＡ,ＰＣＲ定量＜１０为阴性（美国Ａｃｕｊｅｎ试剂盒）ＨＢｅ－ｓｇ（德国宝林曼试剂盒）。治疗后每月复查一次上述指标及Ｂ超、心电图、胸片等。３．治疗方法：患者随机分为两组,Ａ组１８例为ａ－ｌｂ干扰素３ＭＵ肌注,每日一次２周后改为３ＭＵ隔日…     

REGULATION OF GI MOTOR FUNCTION：ROLEOFBRAINPEPTIDES．

ＲＥＧＵＬＡＴＩＯＮＯＦＧＩＭＯＴＯＲＦＵＮＣＴＩＯＮ：ＲＯＬＥＯＦＢＲＡＩＮＰＥＰＴＩＤＥＳ．Ｖ．ＭａｒｔｉｎｅｚａｎｄＹ．Ｔａｃｈｅ，ＣＵＲＥ：ＤｉｓｅａｅｓＲｅｓｅｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，ＷｅｓｔＬｏｓＡｎｇｅｌｅｓＶＡＭｅｄｉｃａｌＣｅｎｔｅｒ．...     

荧光定量PCR检测血清HBV DNA910例临床分析

探讨ＨＢＶ标志与ＨＢＶ复制及ＨＢＶＤＮＡ的关系。选择单一ＨＢＶ感染者 867例及ＨＢＶ标志阴性者 4 3例为研究对象 ,采用荧光定量ＰＣＲ法检测患者血清中ＨＢＶＤＮＡ ,并比较ＨＢＶ标志不同模式与ＨＢＶＤＮＡ定量值之间的关系。结果表明 ,ＨＢＶＤＮＡ定量阳性者只出现于以下 3种ＨＢＶ标志模式中 :ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ及抗 ＨＢｃ阳性 ,ＨＢｓＡｇ、抗 ＨＢｅ阳性及抗 ＨＢｃ阳性和ＨＢｓＡｇ及抗 ＨＢｃ阳性 ,3种ＨＢＶ标志模式中ＨＢＶＤＮＡ阳性率分别是 98.8% ( 32 3/ 32 7) ,16.2 % ( 57/ 351)和 39% ( 4 1/10 5) ,且这 3种…     

同步检测HCV RNA与HGV RNA的RT-PCR技术的建立与应用

我们建立了一种同步检测ＨＣＶＲＮＡ与ＨＧＶＲＮＡ的逆转录一桌式聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），适用于临床诊断与分子流行病学调查。一、材料与方法１．主要试剂：ＴａｇＤＮＡ聚合酶由华美公司提供，ｄＮＴＰｓ、ＡＭＶ-ＲＴ、ＲＮａ－ｓｉｎ均为Ｐｒｏｍｅｇｓ公司产品。２．引物台成：分别在ＨＣＶ与ＨＧＶＳＪ端非编码区（５'ＵＴＲ）设计两对套式引物，委托上海Ｓａｎｇｏｎ生物公司合成。３．同步检测ＨＣＶＲＮＡ与ＨＧＶＲＮＡ的ＲＴ一ＰＣＲ反应：采用异硫氰酸肌一步法提取血清中ＨＣＶＲＮＡ与ＨＧＶＲＮＡ。以ＨＣＶ与ＨＧＶ…