固定化啤酒酵母细胞合成5’-三磷酸腺苷

用K-卡拉胶包埋啤酒酵母制成固定化细胞,在0.05mol/L葡萄糖,0.022mol/L腺苷酸,0.012mol/LMgSO_4·7H_2O,0.2mol/L氯化钾,0.2mol/L磷酸钾缓冲溶液(pH7.0)中,35℃反应4小时,5′-三磷酸腺苷转化率可达42%,在50ml三角烧瓶中分批反应,连续使用5次,5′-三磷酸腺苷转化率仍维持在37%以上。     

固定化酵母细胞生产1，6－二磷酸果糖的动力学研究

筛选获得一株１,６－二磷酸果糖（ＦＤＰ）的高产酵母菌株,改变通透性后的酵母细胞,在发酵及固定化生产ＦＤＰ过程中发现Ｆｅ２＋和甘油能大量提高ＦＤＰ的积累。将戊二醛交联后的酵母细胞,用卡拉胶固定化后,装入酶反应柱,连续生产ＦＰＤ,柱反应可稳定在１０天以上,转化率维持在２０％以上。     

固定化酵母细胞生产1,6—二磷酸果糖的动力学研究

筛选获得一株１，６－二磷酸果糖（ＦＤＰ）的高产酵母菌株，改变通透性后的酵母细胞，在发酵及固定化生产ＦＤＰ过程中发现Ｆｅ＾２＋和甘油能大量提高ＦＤＰ的积累。将戊二醛交联后的酵母细胞，用卡拉胶固定化后，装入酶反应柱，连续生产ＦＰＤ，柱反应可稳定在１０天以上，转化率维持在２０％以上。     

用大肠杆菌游离细胞酶法合成核苷药物

研究了采用大肠杆菌游离细胞核苷磷酸化酶合成核苷药物过程中反应平衡常数和底物转化率的计算方法及其变化规律，阐明了游离细胞内核苷磷酸化酶的活力与细胞的培养、菌体的预处理方式密切相关。实验结果表明，大肠杆菌湿菌体经４℃干燥处理２￣３ｄ后，胞内核苷磷酸化酶不易失活，并能有效地降低胞内抑制物对酶反应的抑制作用。与湿菌体相比，干燥菌体用于酶反应时底物的转化率可提高３３．５％。     

5-氮杂胞嘧啶核苷联合hepaCAM腺病毒通过抑制p-AKT诱导膀胱癌细胞T24凋亡

目的：研究5-氮杂胞嘧啶核苷（5-azacytidine,azac）联合肝细胞黏附分子（hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM）腺病毒对膀胱癌细胞T24凋亡的影响及可能机制的探讨。方法：7种不同因素分别处理培养的膀胱癌细胞T24,hoechst 33258染色检测各处理组细胞凋亡率,流式细胞仪（flow cytometry,FCM）检测细胞早期凋亡率,RT-PCR检测hepaCAM及B细胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/lewkmia-2,bcl-2）mRNA的表达,Western blot检测hepaCAM、p-AKT、total-AKT、bcl-2蛋白的表达。结果：hoechst 33258显示,azac联合hepaCAM腺病毒组细胞凋亡率为（45.21±0.06）%,明显高于hepaCAM腺病毒组（15.6０±0.02）%和azac组（26.30±0.02）%,差异有统计学意义（P=0.003,P=0.008）;FCM显示,azac联合hepaCAM腺病毒组细胞早期凋亡率为（16.05±0.06）%,明显高于hepaCAM腺病毒组（3.90±0.02）%和azac组（9.67±0.02）%,差异有统计学意义（P=0.002,P=0.043）;RT-PCR显示,与单独hepaCAM腺病毒组和azac组相比,azac与hepaCAM腺病毒联用可以上调hepaCAM mRNA的表达（P=0.004,P=0.000）,下调bcl-2 mRNA的表达,差异有统计学意义（P=0.026,P=0.030）;Western blot显示,与单独hepaCAM腺病毒组和azac组相比,azac联合hepaCAM腺病毒组可上调hepaCAM蛋白的表达（P=0.003,P=0.003）,同时下调p-AKT（P=0.001,P=0.005）和bcl-2（P=0.000,P=0.002）蛋白的表达,差异有统计学意义。结论：azac联合hepaCAM腺病毒可能通过抑制p-AKT的磷酸化水平加速诱导T24细胞凋亡,可为膀胱癌的治疗提供新的思路。     

固定化E.coliBL21（pTc—gsh）细胞催化合成谷胱甘肽

分别以卡拉胶、明胶、海藻酸钠包埋E.coliBL21（pTrc-gsh)细胞催化合成谷胱甘肽（GSH）。从酶活收率及机械强度方面进行比较，选择卡拉胶为包埋载体，其最适PH为7.0，最适温度为40℃。相关物质对GSH的合成均有影响：半胱氨酸、甘氨酸的最达浓度为20mmol/L，谷氨酸的最适浓度为60mmol/L；Mg^2 /ATP为1-5（V/V）较合适；腺苷二磷酸（ADP）浓度为5mmol/L时对酶活的抑制为20%。优化条件下罐式反应器中GSH的产量为0.84g/L，操作稳定性较好；延迟加入甘氨酸时GSH产量可提高17.5%；与酵母生产ATP体系相耦联的共固定化体系在填充床中反应，GSH合成量达1.24g/L，收率比直接加入ATP提高24.2%。     

表达芳香族氨基酸转氨酶基因工程菌的细胞固定化初步研究

表达芳香族氨基酸转氨酶基因工程菌的细胞固定化初步研究史燕东,吴梧桐,张玉彬,周艳,黄晓风（中国药科大学生物技术中心,南京２１０００９）关键词卡拉胶;聚丙烯酰胺凝胶;明胶－戊二醛;固定化细胞;芳香族氨基酸转氨酶;ＣＴＢ２ｐＫＢ７重组质粒由大肠杆菌ｔｙｒ...     

利用固定化酵母细胞生产ATP

利用明胶戊二醛制备的固定化啤酒酵母细胞,由腺苷酸(AMP)生产腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)。在含有15 mmol/L AMP,75 mmol/L葡萄糖,5mmol/L硫酸镁(MgSO_4·7 H_2O)的0.2 mol/L磷酸缓冲液(pH 7.0)中,在34℃振荡反应1h,ATP转化率可达100%,分批连续反应10次,ATP转化率保持在90%以上。     

固定化酵母细胞生物合成谷胱甘肽的研究

利用酵母细胞自身ＧＳＨ合成酶和糖酵解途径再生的ＡＴＰ能够合成ＧＳＨ，在含葡萄糖０．７ｍｏｌ／Ｌ，硫酸镁１０ｍｍｏｌ／Ｌ，０．３ｍｏｌ／Ｌ磷酸钾缓冲液和谷氨酸、半胱氨酸、甘氨酸各２０ｍｍｏｌ／Ｌ的１０ｍＬ反应液中，加入１０ｇ（湿重）固定化酵母细胞，３０℃振荡反应８ｈ产生０．９１ｇ／Ｌ的ＧＳＨ。加入腺苷会降低ＧＳＨ的产量；当腺苷开始转化生成ＡＴＰ时加入前体，可明显提高ＧＳＨ的产量。实验结果初步表明：Ａ     

胞苷二磷酸胆碱酶促合成的研究

研究了胞苷三磷酸和磷酸胆碱在啤酒酵母磷酸胆碱胞苷酰转移酶催化作用下,直接合成胞苷二磷酸胆碱的反应条件,包括最适pH,底物浓度、镁离子浓度及反应时间的选择。在最适反应条件下转化率可达58%。此外,还测得了胞苷三磷酸的表观米氏常数K_M2×10~(-2)M,对酶的分离也作了初步的探索。     

固定化诺卡氏菌批次连续转化生产L(+)酒石酸

采用卡拉胶包埋具有环氧琥珀酸水解酶活性的诺卡氏菌用于生产L( )酒石酸。为了提高细胞固定化的效率,采用自制的固定化装置,将固定化细胞制成细条状,可以加快固定化细胞的制备,获得具有高活性和强度的固定化细胞颗粒,固定化细胞的最佳菌体浓度为100 g(湿细胞)/L。将固定化细胞用于填充床反应器进行反复批式反应,可以反复利用48次以上,将0.85 mol/L的环氧琥珀酸溶液转化为L( )酒石酸,酒石酸的得率不低于96%。     

固定化细胞制备头孢氨苄的研究

采用卡拉胶固定柑桔黄单胞菌 X0 34进行头孢氨苄的生产 ,控制 p H6.2左右 ,2 5℃ ,底物 7- ADCA的浓度为 2 .0 % ,侧链与底物配比 ( PGME/7- ADCA)为 3.0时可得到较高的转化率。用戊二醛硬化 ,可连续反应32次。细胞载量 [菌体重量 ( g) /固定化介质重量 ( g) ]控制在 15%左右 ,可使固定化细胞有较好的机械强度及较高的酶活性     

固定化酵母生产L－间羟基苯基乙酰基甲醇的研究

报道间羟基苯基乙酰基甲醇的高产酵母菌株筛选,并将其固定化,海藻酸钙包埋法比聚乙烯醇（ＰＶＡ）－海藻酸钙包埋法效果好,其浓度为１％,包埋量为３ｇ／１０ｍｌ。固定化细胞的最佳底物浓度、糖浓度和最佳反应时间与游离细胞一致,分别为１０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ和６ｈ;但最适反应温度比游离细胞高５℃,为３０℃;最佳ｐＨ比游离细胞高１～２个ｐＨ单位,为ｐＨ６。固定化细胞能反复用于羟基苯基乙酰基甲醇生产５次。但在柱式反应器中,转化效率大大下降。固定化细胞在４℃时贮存３０ｄ活性基本上无损失。     

固定化E.coli BL21(pTrc-gsh)细胞催化合成谷胱甘肽

分别以卡拉胶、明胶、海藻酸钠包埋E.coli BL21 (pTrc-gsh)细胞催化合成谷胱甘肽(GSH).从酶活收率及机械强度方面进行比较,选择卡拉胶为包埋载体,其最适pH为7.0,最适温度为40°C.相关物质对GSH的合成均有影响半胱氨酸、甘氨酸的最适浓度为20mmol/L,谷氨酸的最适浓度为60mmol/L;Mg2+/ATP为1～5(V/V)较合适;腺苷二磷酸(ADP)浓度为5mmol/L时对酶活的抑制为20%.优化条件下罐式反应器中GSH的产量为0.84g/L,操作稳定性较好;延迟加入甘氨酸时GSH产量可提高17.5%;与酵母生产ATP体系相耦联的共固定化体系在填充床中反应,GSH合成量达1.24g/L,收率比直接加入ATP提高24.2%.     

有机氯化物的固定化酶处理技术研究

研究了Ｆｅ３Ｏ４固定辣根过氧化物酶的吸附特性、贮存稳定性,考察了固定化酶浓度、ｐＨ值、Ｈ２Ｏ２浓度对催化氧化反应的影响。对均相与非均相酶处理氯酚的效果进行比较,显示固定化酶处理有机氯化物具有很大的优越性。