荧光原位杂交技术在慢性淋巴细胞白血病检测中的应用评估

本研究探讨与评估应用间期荧光原位杂交技术(FISH)检测慢性淋巴细胞白血病(CLL)遗传学异常的价值。应用间期FISH技术检测32例初诊CLL患者的del(13q14.3)、del(11q22.3)、del(17p13.1)、del(13q14)和12号染色体三体,同时对免疫表型不典型的10例初诊患者检测IGH/CCND1融合基因。结果表明,在32例病例组中FISH检测出26例(81.3%)基因异常,包括D13S25缺失14例,RB1缺失11例,12号染色体三体9例,P53缺失6例,ATM缺失4例;涉及1种基因异常的12例,其中12号染色体三体7例,D13S25缺失3例,P53缺失1例,ATM缺失1例;涉及2种基因异常的11例,其中D13S25/RB1缺失的7例,另4例均包含P53缺失;涉及3种以上基因异常的病例3例;10例免疫表型表达CD5+CD23-的初诊患者中2例IGH/CCND1(+)。结论:应用间期FISH技术检测CLL基因组的异常,可大大提高异常染色体的检出率,各基因异常有其不同的特点;IGH/CCND1融合基因的检测在CLL诊断中有重要意义。     

荧光原位杂交技术检测43例慢性淋巴细胞白血病患者基因异常

目的:探讨荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术对慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)诊断及预后评估的价值。方法:应用常规R显带方法对43例CLL患者进行染色体核型分析,同时应用FISH技术对43例CLL患者的D13S25、RB1、ATM、P53和CEP 12基因进行检测分析。结果:43例CLL患者染色体异常检出率为9.3%(24/43),涉及数目异常和结构异常,异常染色体涉及2号、6号、14号和性染色体。染色体核型正常的患者较多,占79.1%,同时有5例CLL患者未见分裂象。FISH阳性检出率为55.8%,其中D13S25基因缺失阳性率最高,占37.2%;其次依次为RB1基因缺失阳性检出率为20.9%,CEP 12基因扩增阳性检出率为16.3%,ATM基因缺失阳性检出率为9.3%,P53基因缺失阳性检出率为7.0%。在24例FISH阳性的患者中,有20例患者染色体核型正常,3例未见分裂象,只有1例染色体核型异常,但并不涉及FISH检测出的阳性基因。结论:FISH技术能够大大提高CLL患者细胞遗传学异常的检出率,是CLL患者遗传学检测的重要手段,但由于检测的探针数量有限,对于CLL患者仍需使用FISH技术结合染色体核型分析来提高细胞遗传学异常的检出率,为CLL的临床诊断及预后判断提供依据。     

慢性淋巴细胞白血病间期荧光原位杂交检测染色体异常及临床分析

本研究旨在了解慢性淋巴细胞白血病(CLL)常见染色体异常情况及其与临床指标和疗效的关系。以4种序列特异性探针P53、D13S25、ATM、RB1和1种着丝粒探针CSP12,采用间期荧光原位杂交技术(I-FISH)对10例正常对照者骨髓建立各探针的检测阈值,然后对9例染色体核型分析阴性/无分裂相的CLL患者进行检测,检测结果大于阈值为阳性,小于阈值为阴性。结果表明:用p53与D13S25检测7例患者结果均呈阳性,ATM探针检测5例患者结果呈阳性,用RB1与CSP12探针检测4例患者结果呈阳性。9例患者I-FISH检测结果均显示有遗传学异常。检测显示,ATM缺失与患者血红蛋白水平有显著相关性,ATM缺失阳性的患者更易出现全身广泛淋巴结肿大。结论:I-FISH技术适用于CLL患者的细胞遗传学分析,提高了CLL的染色体异常检出率。但I-FISH检测的细胞遗传学异常是否是CLL患者的重要预后因素,尚需扩大样本量的研究和长期随访观察。     

荧光原位杂交技术检测慢性淋巴细胞白血病分子遗传学异常

目的 :探讨荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization, FISH)在慢性淋巴细胞白血病(CLL)诊断和预后评估中的价值。方法 :采用RB1(13q14.1)、D13S25(13q14.3)、p53(17p13.1)、ATM(11q22.3)及CSP12 5组探针对93例初诊CLL患者进行检测,同期进行常规染色体核型(conventional cytogenetics, CC)分析。分析FISH检测出的遗传学异常与患者的临床Binet分期、Rai分期及其他检测指标的相关性。结果 :93例初诊CLL患者分子遗传学异常检出率为79.6%(74/93),其中13q缺失(13q-)阳性率最高,占45.2%;其次为12号染色体三体(+12)占26.9%、p53缺失(17p-)占19.4%、ATM缺失(11p-)占17.2%。同时伴有2种及2种以上染色体异常患者27例(29.0%),其中13q-伴17p-者8例, 13q-伴11q-者5例, 13q-伴+12者4例。CC检测结果相比较, FISH检测结果中患者的阳性率非常显著高于CC检测结果(χ2=32.127, P0.01)。FISH检测结果与Rai分期没有显著相关性(P0.05),伴17p-的CLL患者Binet分期更晚(P=0.012)。各分子遗传学异常与患者年龄、外周血淋巴细胞计数绝对值和CD38表达水平之间均无显著相关性(P0.05)。女性患者13q-的发生率(65.4%)显著高于男性患者(37.3%)(P=0.015);17p-患者IGHV未突变(U-IGHV)的比例显著高于17p-阴性患者(P=0.013);29.0%的患者表达CD38,且与临床分期及U-IGHV呈显著相关(P值分别为0.027及0.006)。结论 :FISH技术能够大大地提高CLL患者分子遗传学异常的检出率,是常规细胞遗传学有力的补充,对CLL患者的临床分期及预后判断均有重要的应用价值。     

274例多发性骨髓瘤间期荧光原位杂交技术检测结果分析

目的探讨间期荧光原位杂交(FISH)技术在多发性骨髓瘤(MM)中的作用和临床意义。方法回顾性分析274例初诊MM患者骨髓单个核细胞(MNC)的组合FISH技术检测结果,使用的FISH技术探针包括RB1、P53、D13S319、IgH及1q21。结果经FISH技术检测,274例MM患者中有149例存在遗传学异常,检出率为54.38%。在MM患者中最常见的细胞遗传学异常是1q21扩增和IgH重排,其次是D13S319及RB1缺失,P53缺失最少见,其检出率依次为32.48%、30.66%、28.46%、29.20%和13.50%。1q21扩增、D13S319缺失、IgH重排与RB1缺失这4组遗传学异常两两之间呈正相关(P0.05),而P53缺失与4种遗传学异常不存在正相关性(P0.05)。结论 FISH技术是检测MM患者细胞遗传学异常的一种重要方法,敏感且快速,对于MM的诊断、治疗及预后有十分重要的意义。     

核形正常的慢性淋巴细胞白血病13q14缺失的研究

目的研究核形正常的慢性淋巴细胞白血病(CLL)13q14缺失的情况。方法运用位于13q14的序列特异性DNA探针RB1、D13S319、D13S25和间期荧光原位杂交(I-FISH)技术对26例初发的CLL患者进行染色体13q14的检测。结果 26例B-CLL中12例(46.1%)有13q14缺失,阳性细胞率为25.0%～90.0%,其中RB1单独缺失0例,D13S319单独缺失3例(11.5%),D13S25单独缺失3例(11.5%);RB1、D13S319、D13S25同时缺失1例(3.9%),D13S319、D13S25同时缺失有5例(19.2%)。结论 CLL患者13q14缺失区域是不恒定的,而I-FISH是研究13q14缺失准确而快速的方法。     

59例慢性淋巴细胞白血病分子遗传学异常的FISH检测

目的探讨间期荧光原位杂交(FISH)技术检测慢性淋巴细胞白血病(CLL)常见分子遗传学异常的意义。方法采用CSF12(12p11.1~12q11.1)、D13S25(13q14.3)、RB1(13q14)、ATM(11q22.3)及p53(17p13.1)等5种探针对59例初诊CLL患者的骨髓细胞进行间期FISH检测,分析上述分子遗传学异常与患者的临床Binet分期、Ria分期及相关实验室检查,包括初诊时外周血淋巴细胞绝对值计数、血红蛋白(Hb)水平、血小板计数(PLT),血清乳酸脱氢酶(LDH)、β2-微球蛋白(β2-MG)、CD38和ZAP70水平的相关性。结果 59例CLL初诊患者中,存在1种及1种以上分子遗传学异常的有49例,占83.1%。其中,del(13q)34例(69.4%),12号染色体三体(+12)和p53基因缺失各11例(22.4%),ATM基因缺失5例(10.2%)。各分子遗传学异常与患者临床分期、外周血淋巴细胞计数绝对值、Hb、PLT、LDH、β2-MG、CD38和ZAP70表达水平之间均无明显相关性(P0.05)。≥60岁患者del(13q)异常率(67.6%)显著高于60岁患者(40.9%),女性患者p53基因缺失的异常率(35.2%)显著高于男性患者(11.9%),差异均有统计学意义(P0.05)。结论 FISH技术是检测CLL患者分子遗传学异常快速、准确、敏感的方法,分子遗传学异常与患者初诊时临床表现之间无明显相关性。     

慢性淋巴细胞白血病13q14缺失的基因检测

目的研究慢性淋巴细胞白血病（CLL）13q14缺失的情况。方法运用位于13q14的序列特异性DNA探针RB1、D13S319、D13S25和间期荧光原位杂交（I-FISH）技术对26例初发的B细胞CLL患者进行染色体13q14的检测。结果26例B．CLL中14例（53．8％）有13q14缺失,阳性细胞率为30．0％～90．0％,其中RB1缺失2例（7．7％）,D13S319缺失11例（42．3％）,D13S25缺失13（50．0％）RB1、D13S319、D13S25同时缺失2例,D13S319、D13S25同时缺失有8例（30．7％）。结论CLL患者13q14缺失区域是不恒定的。     

间期荧光原位杂交技术在慢性淋巴细胞白血病检测中的应用

目的 探讨慢性淋巴细胞白血病（CLL）基因组的异常情况及其临床意义.方法 对17例初诊CLL患者进行常规细胞遗传学（CC）检测,同时应用着丝粒探针CSP12（12p11.1-12q11.1）和序列特异性探针D13s25（13q14.3）、ATM（11q22.3）、RBI（13q14）、p53（17p13.1）进行间期荧光原位杂交（I-FISH）.比较I-FISH与CC敏感性的差异.结果 CC检测18.75%有核型异常（3/16）,1例未见核分裂相;I-FISH检测70.6%患者有基因异常（12/17）,p53缺失11.8%（2/17）、ATM缺失5.6%（1/17）、13q-47.1%（8/17）,其中包括RB1缺失23.5%（4/17）、D13S25缺失29.4%（5/17）,12-三体29.4%（5/17）,复杂基因组异常11.8%（2/17）.核型异常与性别、年龄、乳酸脱氢酶（LDH）、β2微球蛋白（β2-MG）及Binet分期无相关性.结论 I-FISH是检测CLL患者基因组异常的有效手段,与CC方法相比可明显提高CLL基因组异常的检出率.     

RB1和D13S319探针检测慢性淋巴细胞白血病13q14缺失

目的 研究慢性淋巴细胞白血病(CLL)13q14缺失的情况.方法 运用位于13q14的序列特异性DNA探针RB1、D13S319和间期荧光原位杂交(I-FISH)技术对39例初发的CLL患者进行染色体13q14的检测.结果 B-CLL中16例(41.0%)有13q14缺失,阳性细胞率为23.0%～89.0%,其中RB1单独缺失0例,D13S319单独缺失13例(33.3%),RB1、D13S319同时缺失3例(7.7%).结论 CLL患者13q14缺失以D13S319为主,荧光原位杂交技术是研究慢性淋巴细胞白血病13q14缺失快速而可靠的方法.     

核形正常的慢性淋巴细胞白血病13q14缺失的研究

目的研究核形正常的慢性淋巴细胞白血病（CLL）13q14缺失的情况。方法运用位于13q14的序列特异性DNA探针RB1、D13S319、D13S25和间期荧光原位杂交（I-FISH）技术对26例初发的CLL患者进行染色体13q14的检测。结果 26例B-CLL中12例（46.1%）有13q14缺失,阳性细胞率为25.0%～90.0%,其中RB1单独缺失0例,D13S319单独缺失3例（11.5%）,D13S25单独缺失3例（11.5%）;RB1、D13S319、D13S25同时缺失1例（3.9%）,D13S319、D13S25同时缺失有5例（19.2%）。结论 CLL患者13q14缺失区域是不恒定的,而I-FISH是研究13q14缺失准确而快速的方法。     

Multiple fetal anomalies associated with subtle subtelomeric chromosomal rearrangements.

We report two cases of multiple fetal anomalies detected by prenatal ultrasound and associated with subtle subtelomeric chromosomal rearrangements. The first case presented at 25 weeks of gestation with an enlarged cisterna magna and ventriculomegaly. Karyotyping of amniocytes showed a subtle terminal abnormality of chromosome 6q. Thereafter, screening of all unique chromosomal subtelomeric regions using a panel of telomere-specific, fluorescence in situ hybridization (FISH) probes revealed an unbalanced reciprocal translocation between 6q and 17p [46,XX.ish der(6)t(6;17)(q25.3;p13)(TelVysion6q-;TelVysion17p+)]. The second case presented at 25 weeks of gestation with tetralogy of Fallot and at 34 weeks of gestation had additional ultrasound findings of an arachnoid cyst and intrauterine growth restriction. Postnatal karyotyping of peripheral blood was performed and appeared normal. However, a cryptic deletion of the subtelomeric region of the long arm of chromosome 14 was identified when the infant's blood sample was used as a control for an oncology FISH probe. Thereafter, screening of all unique chromosomal subtelomeric regions using a panel of telomere-specific FISH probes revealed an unbalanced reciprocal translocation of chromosomes 14q and 20p [46,XY.ish der(14)t(14;20)(q32.3;p13)(IGH-, D14S308-,TelVysion20p+)mat]. These two cases add to a growing number of reports of cryptic subtelomeric chromosomal rearrangements associated with congenital anomalies. This is the first report of multiple, simultaneous FISH screening of the subtelomeric regions in amniotic fluid and has demonstrated the technical feasibility of this technique in the prenatal period.     

间期荧光原位杂交技术检测慢性淋巴细胞白血病ATM基因缺失

目的探讨慢性淋巴细胞白血病(CLL)中ATM基因缺失及其与其他染色体异常及临床分期的相关性。方法运用间期荧光原位杂交技术(I-FISH)和Spectrum OrangeTM标记的位于11q22.3的序列特异性DNA探针ATM对50例初诊CLL患者的染色体标本进行了ATM缺失的检测,同时检测del(13q14)、del(17p13.1)和免疫球蛋白重链基因重排。临床分期按照Binet分期方法。结果50例患者中有6例(12%)ATM缺失;其中4例伴有其它染色体异常。20例Binet A期患者中,3例(15%)存在异常;10例Binet B期患者中,2例(20%)存在异常;13例Binet C期患者中,1例(7.7%)存在异常。ATM缺失在Binet A、B及C期中无统计学差异(P>0.05)。结论I-FISH与常规染色体分析技术相比是一种快速、准确及敏感的方法,对我国CLL患者的预后预测价值有待进一步的深入研究。     

30例慢性淋巴细胞白血病分子遗传学异常的FISH检测的意义

为探讨间期荧光原位杂交（FISH）在检测慢性淋巴细胞白血病（CLL）＋12、del（13q14）、p53基因缺失、atm基因缺失情况中的意义,采用组合探针（CEP12、LSI D13S319、LSI p53、LSI atm）对30例CLL患者进行FISH检测,分析分子遗传学异常与患者外周血淋巴细胞绝对计数、Binet分期、血清乳酸脱氢酶（LDH）和B：微球蛋白（β2-MG）水平、ZAP-70和CD38表达之间的相关性。结果发现,30例CLL患者中,19例（63．3％）存在1种及1种以上细胞遗传学异常,7例（23．3％）同时检测出2种及2种以上的异常,其中最常见为del（13q14）（43．3％）,其他依次为＋12（23．3％）,atm基因缺失（13．3％）,p53基因缺失（10．0％）。各分子遗传学异常与性别、年龄、Binet分期、外周血淋巴细胞绝对计数、血清LDH和β2-MG水平、ZAP-70表达水平无明显相关性（p〉0．05）,在CD38高表达组中,atm基因缺失的发生率均明显高于CD38低表达组,且差异有统计学意义（p=0．035）。结论：FISH是一种检测CLL患者分子遗传异常快速、准确及敏感的方法,其在CLL患者中的预后预测价值有待进一步的深入研究。