多西他赛联合恩度对前列腺癌PC-3细胞的体外作用

目的探讨多西他赛联合恩度对前列腺癌PC-3细胞的作用及其可能机制。方法将体外培养的PC-3细胞随机分为恩度组、多西他赛组、恩度与多西他赛联合组、无药物干预对照组,分别采用MTT法、流式细胞术、RT—PCR和Western—Blot方法,检测各组细胞的增殖、凋亡及MMP-9、MRP、Bcl-2、BaxmRNA和Bcl-2、Bax蛋白表达。结果多西他赛与恩度对PC-3细胞增殖有呈时间依赖性的抑制作用,两药联合的抑制率高于单独用药（F=8．38～16．39,P〈O．05）,G2／M期细胞比例较对照组增加（F=210．60,q=4.08,P％0.05）。与恩度组、多西他赛组比较,恩度与多西他赛联合组的MMP～9、MRP、Bcl-2mRNA表达明显降低（F=48．32～201．27,q=8．47～16．87,P％0．05）,BaxmRNA表达明显升高（F=101．60,q=4．46～11．29,P〈0．05）,Bcl2蛋白表达明显降低（F=121．80,q=2．95～26．92,P〈0．05）,Bax蛋白表达明显升高（F=342．80,q=3．23～5．26,P〈0．05）。结论多西他赛与恩度对PC-3细胞的生长均有-定的抑制作用,两药联合应用的效果优于单独用药,其机制与降低MMP-9、MRP、Bcl2表达、增高Bax表达有关。     

强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞凋亡和细胞周期的临床实验研究

[目的] 探讨强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞凋亡和细胞周期与HLA-B27的关系。[方法] 采用流式细胞技术测定HLA-B27^＋和B27^-的强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞凋亡和细胞周期。[结果] 在对照组中细胞凋亡（Apo）百分比无性别差异（t=1．95，P=0．0527），S期比率（SPF）和增殖指数（PI）分别存在统计学差异（t=5．39，P=0．0000；t=4．02．P=0．0001），男性SPF高于女性，男性PI低于女性；在B27^＋组中Apo百分比和SPF分别存在统计学差异（t=6．68，P=0．0000；t=4．08，P=0．0001）．男性高于女性，PI无性别差异（t=0．51，P=0．6125）；在B27^-组中Apo百分比和SPF分别存在统计学差异（t′=4．10，P〈0.05：t′=13．22，P〈0．05），男性均低于女性，PI无性别差异（t=0，P=1）。在男性组中Apo百分比、SPF和PI均存在有统计学疋片（F=4258，F=434，F=220，P均〈0．05），表现为Apo：B27^＋者〉B27-者〉对照（q检验，P均〈0．05）；SPF：B27^＋者〉B27一者和对照（q检验，P均〈0．05）；PI：B27^-者〉B27^＋者〉对照（q检验，P均〈0．05）。在女性组中Apo百分比、SPF和PI均存在有统计学差异（F=18，F=137，F=66，P均〈0．05），表现为Apo：B27^＋者〉B27者〉对照（q检验，P均〈0．05）；SPF：B27者〉B27’者〉对照（q检验，P均〈0．05）；PI：B27^-者〉B27^＋者〉对照（q检验，P均〈0．05）。[结论] 强直性脊柱炎患者HLA-B27的表达与外周血淋巴细胞凋亡及其细胞增殖周期具有一定程度的关联性，为进一步深入研究提供了有益的线索。     

非小细胞肺癌组织Ezrin表达及意义

目的探讨非小细胞肺癌组织Ezrin表达特点及其临床意义。方法采用实时荧光定量RT—PCR的方法,对70例非小细胞肺癌组织和20例癌旁相对正常肺组织（距癌组织5cm之外）Ezrin表达进行检测。结果非小细胞肺癌Ezrin的表达显著高于癌旁相对正常肺组织（x^2=12．07,P〈0．05）。肺癌病人肿瘤组织Ezrin阳性表达与临床分期、病理分型和肿瘤分化程度无相关性（x^2=0．05～4．39,P〉0．05）,与淋巴结转移密切相关（x^2=5．93,P〈0．05）。结论Ezrin表达可能与非小细胞肺癌发生及转移相关,其检测可作为判断病人肺癌转移的一项重要参考指标。     

iNOS在EGCG促A549细胞凋亡中的作用

目的观察诱导型一氧化氮合酶（iNOs）在表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）促A549细胞凋亡中的作用。方法体外培养A549细胞,随机分为对照组、EGCG组,MTT方法检测筛选EGCG最佳作用浓度,流式细胞仪检测EGCG促A549细胞凋亡作用,免疫组化染色法、蛋白质印迹定量分析法与Real time—PCR方法检测各组中iNOS蛋白和mRNA的表达情况。结果200mg／L的EGCG组细胞增殖活性与其他组比较差异有显著意义（F—1000．35,q=3．43～60．00,P〈0．05）。EGCG组晚期A549细胞凋亡率与对照组比较,差异有显著性（x2 =65．23,P〈0．05）。与对照组比较,EGCG同样可以降低A549细胞中iNOS蛋白与mRNA的表达量,差异有显著性（t=9．4、5．7,P〈0．05）。结论EGCG促A549细胞凋亡可能与下调iNOS蛋白与mRNA的表达量有关。     

丹参对全脑缺血后神经元PTEN表达的保护机制

目的：探讨丹参对大鼠全脑缺血再灌注后PTEN蛋白表达的影响及其神经保护机制。方法：实验于2005—03／10在解放军第三军医大学大坪医院外研所实验室进行。清洁级健康成年雄性SD大鼠90只，利用随机数字表将动物分为缺血再灌组18只；生理盐水组18只；丹参治疗组54只，丹参治疗组又分为3．0，10.0，15．0g／kg3个亚组，每组6只。①丹参治疗组和生理盐水组大鼠在缺血前30min腹腔分别注射丹参注射液（3．0，10．0，15．0g／kg）和生理盐水再进行4血管阻断建立全脑缺血模型；缺血再灌组模型建立同前，但不注射丹参和生理盐水。②缺血再灌注72h后取脑组织采用Western blotting和免疫组织化学法检测各组海马PTEN蛋白的表达，细胞被染成棕黄色者为蛋白表达阳性细胞，计数400个细胞，按阳性细胞所占百分比进行比较；应用原位末端标记法和吖啶橙／溴乙啶技术检测各组海马神经元的凋亡，。结果：①大鼠海马PTEN Western blotting检测结果：缺血再灌注组与生理盐水组相比灰度值无明显差异（P〉0．05）；与生理盐水组相比丹参各治疗组PTEN表达量明显减少（F=68．73，P〈0．05）。②大鼠海马PTEN免疫组织化学检测结果：缺血再灌注组PTEN阳性细胞与生理盐水组相比差异不显著（P〉0．05）；与生理盐水组相比，丹参各治疗组PTEN阳性细胞所占比例明显减少（F=185．44，P〈0．05）。③各组细胞凋亡情况：与生理盐水组相比，丹参各治疗组吖啶橙／溴乙啶检测凋亡率下降显著（F=58．42，P〈0．05）。原位末端标记法结果表明，经丹参治疗后各组凋亡细胞数量明显下降（F=32．68，P〈0．05）。结论：丹参能下调PTEN的表达，抑制细胞的凋亡，从而达到神经元保护的目的。     

HBV相关性肝细胞癌病人Fas检测及意义

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）相关性肝细胞癌病人外周血淋巴细胞表面所表达的Fas／FasL与血清sFas／sFasL的变化规律及意义。方法对47例HBV相关性肝细胞癌病人、50例无症状HBV携带者及57例健康志愿者（健康对照组）外周血淋巴细胞的凋亡率、膜性Fas／FasL表达和血清sFas／sFasL含量进行检测。结果与无症状HBV携带组及健康对照组比较,HBV相关性肝细胞癌组外周血淋巴细胞早期凋亡率增高,膜性Fas表达率升高,而FasL表达率则显著降低,差异有显著性（F=6．13～15．34,q=4．02～32．10,P〈0．01）;血清sFas含量升高,sFasL含量降低,差异有显著性（F=7．30、4．20,q=6．19～42．35,P〈0．01）。无症状HBV携带组与健康对照组各指标比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论HBV相关性肝细胞癌病人体内依赖Fas介导的细胞毒性T淋巴细胞失去杀伤性识别作用,对淋巴细胞的清除能力下降,导致肿瘤细胞获得异常生存能力。     

Mcl-1和Bax基因在2-甲氧基雌二醇诱导骨髓增生异常综合征细胞凋亡中的调控作用

本研究探讨bcl-2基因家族成员调控2-甲氧基雌二醇（2-ME）诱导骨髓增生异常综合征（MDS）细胞凋亡的机制。用2一ME预处理MUTZ—1细胞,荧光比色法检测凋亡信号蛋白半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）活性,用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测凋亡相关基因-髓细胞白血病基因-1（mcl-1）和bcl-2相关X蛋白（bax）mRNA的表达。结果表明：与对照组相比,2-ME增强MUTZ-1细胞内caspase-3活性,并呈浓度和时间依赖性（P〈0．05）;随着2-ME浓度的增加,细胞内mcl—1mRNA表达下降（P〈0．05）,且mcl-1mRNA表达量与相应时间点caspase-3活性呈负相关（r=-0．992,P〈0．01）,而baxmRNA表达没有明显变化（P〉0．05）。结论：2-ME可能通过下调mcl-1表达和增强caspase-3活性的途径来调控MDs细胞凋亡。     

人表皮角质形成细胞急性光损伤模型的构建

目的探讨长波紫外线(UVA)和中波紫外线(UVB)对人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)造成急性损伤所需要的最小剂量,为构建人表皮细胞急性光损伤模型提供科学依据。方法用不同剂量的UVA或UVB照射HaCaT细胞。观察细胞形态学改变,检测细胞增殖活性(吸光度)和凋亡率。结果 2.5～10 J/cm2UVA照射对HaCaT细胞无损伤,20～40 J/cm2可致细胞出现形态学改变,与空白对照组相比增殖活性降低,凋亡率增加(P<0.01);11.4～34.2 mJ/cm2UVB照射对HaCaT细胞无损伤,随照射剂量增加,细胞出现不同程度损伤,与空白对照组相比增殖活性降低,凋亡率增加(P<0.01)。结论 UVA和UVB照射均可构造急性光损伤模型。HaCaT细胞对UVB敏感性更高,引起急性光损伤所需的最小剂量更低。     

2-甲氧基雌二醇对慢性髓系白血病K562细胞Caspase-3及Survivin表达的影响

本研究探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）对慢性髓系白血病（CML）K562细胞caspase-3和survivin表达的影响。实验分3组：对照组,培养基中不含2-ME;实验组,分别用1、2、4、8及16μmol／L的2-ME处理K562细胞;阴性对照组,培养液中以不合RNase的灭菌蒸馏水代替K562细胞。应用TUNEL、流式细胞术（FCM）、半定量RT—PCR分别检测K562细胞凋亡率、caspase-3及survivin蛋白及其基因表达水平。结果表明：2-ME在一定的浓度范围内呈剂量依赖形式诱导K562细胞凋亡,与对照组比较差异均有统计学意义（P均〈0．01）,且TUNEL和FCM方法检测的K562细胞凋亡率呈正相关（γ=0．845,P=0．034）。随着2-ME浓度增加,caspase-3蛋白表达量逐渐增加,而survivin蛋白表达量逐渐降低,两者与对照组比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）;且caspase-3与survivin蛋白表达量之间呈负相关（γ=-0．956,P=0．001）。随着2-ME浓度增加,caspase-3基因表达量逐渐增加,而survivin基因表达量逐渐降低,两者与对照组比较差异均有统计学意义（p均〈0．01）,且caspase-3与survivin基因表达量之间呈负相关（γ=0．966,P=0．001）。结论：2-ME能够以剂量依赖形式诱导K562细胞凋亡,显示了其对CML有潜在的治疗价值。     

复方丙酸氯倍他索软膏联合UVB治疗寻常型银屑病的临床疗效及护理

目的探讨用复方丙酸氯倍他索软膏联合UVB照射，并配合护理措施治疗寻常型银屑病的临床疗效。方法治疗组于患处外涂复方丙酸氯倍他索软膏，每天2次，行UVB全身照射，1周2～3次，并配合适当的护理措施。对照组于患处外涂复方丙酸氯倍他索软膏，每天2次。根据PASI评分标准评价疗效。结果治疗组有效率88．46％，对照组有效率65．38％，经统计学处理，x^2=7．8000，P〈0．01；治疗组复发率19．05％，对照组复发率53．85％，经统计学处理，x^2=4．4472，P〈0．05。结论复方丙酸氯倍他索软膏联合UVB照射并配合适当的护理措施是治疗寻常型银屑病的有效方法。     

AML病人MN1和PTEN基因表达及临床意义

目的探讨脑膜瘤1（MN1）基因和PTEN基因表达与急性髓系白血病（AML）病情发展及预后的关系。方法采用RT-PCR技术检测38例AML病人（初治组16例,缓解组12例,复发组10例）骨髓单个核细胞中MN1和PTEN mRNA的表达水平,另取非恶性血液病病人及正常人骨髓共13例作正常对照组。结果 MN1和PTEN mRNA在AML病人骨髓单个核细胞中阳性表达率分别为76.3%和60.5%。初治组MN1 mRNA表达水平较正常对照组显著升高,PTEN mRNA表达水平较正常对照组显著下降（F=2.385、2.054,q=2.305、2.867,P〈0.01）;缓解组MN1 mRNA表达水平下降,PTEN mRNA表达水平上升,与初治组比较差异均有统计学意义（q=2.121、2.756,P〈0.05）;在复发组中MN1 mRNA的表达水平复又升高,PTEN mRNA的表达水平复又下降,与正常对照组比较,差异均有统计学意义（q=2.361、2.723,P〈0.05）。MN1和PTEN基因在AML中的表达水平呈负相关（r=-0.321,P〈0.05）。结论 MN1和PTEN基因的表达与AML发病及预后密切相关,可作为AML发病、复发及预后判断的有意义指标。     

RNA干扰survivin基因对人肝癌HepG2细胞增殖影响

目的探讨RNA干扰技术抑制survivin基因表达对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖的影响。方法构建针对人肝癌HepG2细胞survivin基因3个不同靶序列的shRNA真核表达载体pshRNA-survivin-323/387/52,用Lipofectamine 2000脂质体介导转染法转染质粒,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测survivin基因mRNA表达水平。选择对survivin基因表达抑制作用最强的shRNA载体转染HepG2细胞后,免疫细胞化学法（ICC）检测HepG2细胞survivin蛋白的表达情况,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各组细胞的增殖情况。结果与对照组比较,构建的3个shRNA质粒中pshRNA-survivin-387转染组survivin mRNA水平下调,差异有显著性（F=18.64,q=4.293～4.925,P〈0.05）,而pshRNA-survivin-323/52质粒对survivin的表达及mRNA水平的影响差异无显著性（q=0.631～0.126,P〉0.05）。转染pshRNA-survivin-387质粒的HepG2细胞survivin蛋白表达较对照组明显下调（F=68.39,q=13.71、14.37,P〈0.01）,其增殖能力较对照组显著下降（F=20.06～47.65,q=11.186、12.601,P〈0.01）。结论构建的针对人survivin基因387位靶序列的shRNA表达载体pshRNA-sur-vivin-387可显著抑制survivin的表达及HepG2细胞增殖。     

靶向survivin的siRNA并氟尿嘧啶转染对HepG2增殖影响

目的研究靶向survivin的小分子干扰RNA（siRNA）和氟尿嘧啶（5-FU）联用对肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用及对凋亡的影响。方法将HepG2细胞分为空白对照组、阴性对照组、5-FU处理组、siRNA转染组及5-FU＋siRNA转染组。转染采用脂质体法。采用RT-PCR法分别检测HepG2细胞survivin mRNA转录水平;MTT法分别检测靶向survivin的siRNA和5-FU对HepG2细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况。结果 siRNA转染组、5-FU＋siRNA转染组survivin mRNA表达较空白对照组、阴性对照组、5-FU处理组明显下降（F=326.78,q=5.78～7.12,P〈0.05）。5-FU＋siRNA转染组细胞增殖抑制率为51.58%±1.35%,与其他各组相比明显增高（F=1 293.24,q=15.31～82.26,P〈0.01）。5-FU＋siRNA转染组与其他各组相比细胞凋亡率明显增高（F=13 568.68,q=110.47～327.16,P〈0.01）。结论将靶向survivin的siRNA和5-FU联合应用可以显著抑制肝癌细胞survivin基因表达,并协同抑制HepG2细胞增殖,共同发挥诱导细胞凋亡作用。     

β1整合素表达下调对人结肠癌细胞增殖和化疗敏感性影响

目的 观察β1整合素表达下调对人结肠癌HT-29细胞增殖和化疗敏感性的影响.方法 采用反义寡核苷酸（ASODN）技术转染HT-29细胞,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测β1整合素表达下调情况.MTT法检测HT-29细胞相对存活率.给予梯度浓度氟尿嘧啶（5-FU）,计算IC50.结果 实验组β1整合素条带吸光度积分（IAD）值/β-actin条带IAD值的比值及HT-29细胞的存活率与对照组相比显著降低（F=1 630.08,q=72.40,P〈0.01;t=4.37,P〈0.05）.5-FU＋ASODN组HT-29细胞对5-FU的IC50与5-FU组比较显著下降（t′=37.71,P〈0.05）.结论 β1整合素表达下调可抑制结肠癌细胞增殖,增强结肠癌细胞对化疗药物敏感性.     

子宫颈癌患者新辅助化疗前后癌组织中mdr1、肺耐药蛋白mRNA及其蛋白的表达变化和意义

目的寻找预测子宫颈癌新辅助化疗效果的分子生物学指标。方法采用real time RT—PCR和免疫组织化学法检测40例子宫颈癌患者新辅助化疗前后癌组织中mdr1、肺耐药蛋白（LRP）mRNA及其编码蛋白P-gP、LRP表达水平。结果新辅助化疗前后子宫颈癌组织中mdr1的表达量分别为（45．800±0．636、62．381±0．743,t=-66．582,P〈0．01）;新辅助化疗前后子宫颈癌组织中LRP mRNA的表达量分别为（50．048±0．770、66．912±0．752,t=-78．604,P〈0．01）;新辅助化疗前后子宫颈癌组织中P-gP的阳性表达分别为40．0％（16／40）、70．0％（28／40）,x^2=7．273,P=0．007;新辅助化疗前后子宫颈癌组织中LRP的阳性表达分别为62．5％（25／40）、92．5％（37／40）,x^2=10．323,P=0．001,新辅助化疗后mdr1、LRPmRNA及其编码蛋白P-gP、LRP表达水平较化疗前明显升高,2组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。P-gP、LRP表达与患者年龄、肿瘤大小、临床分期、病理分级无关（P〉0．05）;P-gP蛋白的阳性与阴性患者其化疗有效率分别为6（37．5％）、17（70．8％）,2组比较差异有统计学意义（x^2=4．365,P〈0．05）。LRP蛋白的阳性与阴性患者其化疗有效率分别为12（48．0％）、13（86．7％）,2组比较差异有统计学意义（x^2=5．980,P〈0．05）;P-gP与LRP成正相关（x^2=4．177,r=0．323,P〈0．05）。结论P-gP、LRP表达状态有可能作为预测化疗效果的参考指标。     

吸烟者内皮型一氧化氮合酶基因G894T多态性与冠心病的相关性研究

目的探讨吸烟者内皮型一氧化氮合酶基因（eNOS）G894T多态性与冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）的发生及其严重程度间的关系。方法将203例吸烟者和182例非吸烟者根据冠状动脉造影结果分为冠心病组（196例）和对照组（189例），以冠状动脉病变支数判定严重程度。以聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFIP）检测eNOS基因G894T多态性，按吸烟与否分析G894T多态性与冠心病的关系。结果冠心病组GT＋TT基因型分布与T基因突变频数明显高于对照组（x^2=4．26、6．21，P均〈0．05）；吸烟者基因GT＋TT型及T等位基因频率均显著高于非吸烟者（x^2〈5．82、5．77，P均〈0．05）；冠心病组eNOS基因型分布在单支与多支病变组之间差异无统计学意义（x^2=3．36，P〉0．05），而吸烟的冠心病患者差异有统计学意义（x^2=6.48，P〈0．05），吸烟的GG＋TT型者更可能发生多支病变，OR=3．42，95％CI（1．440—4.400）。结论eNOS894位点G→T、吸烟与冠心病的发生及其严重程度间的关系密切。     

急性白血病病人骨髓细胞BAALC基因表达及意义

目的通过检测脑和急性白血病胞质（BAALC）mRNA在急性白血病（AL）病人表达,探讨其与AL病情进展及预后关系。方法应用逆转录聚合酶链反应技术,检测20例急性髓系白血病（AML）、8例急性淋巴细胞白血病（ALL）及11例特发性血小板减少性紫癜（ITP）、缺铁性贫血（IDA）等非恶性血液病病人（对照组）骨髓单个核细胞BAALC mRNA表达水平。结果初治组AL病人BAALC mRNA表达水平较对照组显著升高（F=8.59,q=5.62,P〈0.05）;经治疗获完全缓解后,与初治组比较,其表达水平显著下降,两组比较差异有显著性（q=3.99,P〈0.05）。BAALC mRNA表达水平与AL病人外周血白细胞计数及骨髓原始细胞比例无明显相关性（P〉0.05）。结论 BAALC mRNA表达与AL疾病进展及预后密切相关,可作为AL预后判断的有意义指标。     

乙酰肝素酶表达及其与喉鳞状细胞癌生物学行为关系

目的探讨乙酰肝素酶（HPA）在喉鳞状细胞癌（喉癌）组织表达及其与喉癌临床分期、淋巴结转移和预后的关系。方法采用免疫组化技术检测45例喉癌和癌旁组织组织中HPA的表达。结果HPA在喉癌组织中表达阳性率为53.3%,癌旁组织为13.3%,二者比较差异有显著性（χ2=16.2,P〈0.05）;HPA表达阳性率与喉癌的临床分期、淋巴结转移及5年生存率明显相关（χ2=4.86~5.18,P〈0.05）,与喉癌的组织分化程度无关（χ2=2.13,P〉0.05）。结论HPA在喉癌的侵袭和转移中可能起到重要作用,可作为判断喉癌生物学行为和预后的有用指标。     

子宫内膜样腺癌组织PELP1／MNAR表达及其与雌激素受体相关性

目的探讨脯氨酸-谷氨酸-亮氨酸富集蛋白1／雌激素受体非基因组活性辅助调节因子（PELP1／MNAR）和雌激素受体（ER）在子宫内膜样腺癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组化PV二步染色法,对40例正常子宫内膜组织、60例子宫内膜增生过长组织和60例子宫内膜样腺癌组织中PELP1／MNAR、ER进行测定。结果子宫内膜样腺癌及不典型增生组织腺上皮细胞核中PELP1／MNAR阳性表达率高于正常子宫内膜及单纯性、复杂性增生组织（x^2=6．25～16．90,P〈0．05）;子宫内膜样腺癌绝经后组织间质中PELP1／MNAR阳性表达率低于未绝经组织（x^2=7．17,P〈0．05）;子宫内膜样腺癌及增生期内膜腺上皮细胞核中ER阳性表达率高于分泌期及增生过长组织（x^2=5．208～12．907,P％0．05）。子宫内膜样腺癌组织中ER与PELP1／MNAR的阳性表达率呈正相关（x^2=0．315,P〈0．01）。结论PELPl／MNAR在子宫内膜各个时期的表达异常可能与子宫内膜样腺癌的发生发展有关。