补肾活血中药复方对实验性糖尿病大鼠视路神经元病理损害的影响及机理探讨

目的:观察实验性糖尿病大鼠视路神经元组织形态学的病理改变,并探讨补肾活血中药复方防治实验性糖尿病大鼠视路损害的作用机理。方法:用免疫组化及Nissl染色结合图像分析半定量测定视网膜、外侧膝状体及视皮质的神经营养因子-3(neurotrophic-3,NT-3)、突触素I(synapsin I,Syn I)的表达强度和Nissl小体的含量。结果:与正常对照组相比,阴性对照组大鼠视路三级神经元的NT-3、Syn I的表达强度和Nissl小体的含量均明显降低(P<0.05或0.01);与阴性对照组相比,中药治疗组大鼠视网膜、外侧膝状体及视皮质的NT-3、Syn I表达强度和Nissl小体的含量均明显增高,尤以中药高剂量组明显(P<0.05或0.01)。结论:补肾活血中药能减轻实验性糖尿病大鼠视路三级神经元病理损害,其作用机制之一可能是通过增加糖尿病大鼠视路NT-3的表达,一定程度恢复糖尿病大鼠视觉通路神经细胞突触的密度和分布(轴突再生),并改善其神经递质释放调节功能。     

补肾活血中药对糖尿病大鼠视路SynⅠ和Nissl小体的影响

目的观察实验性糖尿病大鼠视路神经元组织形态学的病理改变,并探讨补肾活血中药复方防治实验性糖尿病大鼠视路损害的作用机理。方法选用SD大鼠,采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立实验性糖尿病模型。实验大鼠随机分为7组:正常对照组、阴性对照组(模型组)、阳性对照Ⅰ组、阳性对照Ⅱ组、中药低、中、高剂量组。以Nissl染色法和免疫组织化学方法染色显示视网膜、外侧膝状体(external genic-ulate body,EGB)、视皮质(visual cortex,VC)中Nissl小体、突触素I(synapsin I,Syn I)的表达,应用Mias-2000图形分析系统对其进行测定和分析。结果与正常对照组相比,阴性对照组大鼠视路三级神经元的Syn I的表达强度和Nissl小体的含量均明显降低(P0.05或P0.01);与阴性对照组相比,中药治疗组大鼠视网膜、外侧膝状体及视皮质的Syn I表达强度和Nissl小体的含量均明显增高,其中中药高剂量组最为明显(P0.05或P0.01)。结论实验性糖尿病大鼠在高血糖状态持续6个月后,其视路神经元发生不同程度的退行性改变;补肾活血中药能在一定程度上恢复糖尿病大鼠视觉通路神经细胞突触的密度和分布(轴突再生),并改善其神经递质释放调节功能,从而减轻实验性糖尿病大鼠视路神经元病理损害。     

补肾活血中药对糖尿病大鼠视路突触素1和髓鞘硷性蛋白的影响

目的：探讨补肾活血中药对糖尿病大鼠视路突触素1和髓鞘硷性蛋白（myelin basic protein,MBP)的影响。方法：以链佐菌素造成大鼠糖尿病模型后，给予补肾活血中药加降糖灵混悬液连续6月，采用免疫组化结合图像分析半定量检测视网膜，外侧膝状体，视皮质17例区三级神经元轴突突触素Ⅰ和神经纤维髓鞘硷性蛋白的含量。结果：与正常组相比，模型组大鼠三级神经元轴突突触素Ⅰ和神经纤维MBP的含量明显降低（P＜0．001），补肾活血中药组大鼠三级神经元轴突突触素Ⅰ和神经纤维MBP的含量明显增加（P＜0．001）。结果：补肾活血中药能够增加糖尿病大鼠视路三级神经元突触的密度，并可提高神经纤维MBP合成，恢复髓鞘，有利于神经纤维传导功能的恢复。     

补肾活血中药对糖尿病大鼠视路胶质纤维酸性蛋白和髓鞘碱性蛋白表达的影响

目的观察补肾活血中药复方对糖尿病大鼠视路星形胶质细胞和少突胶质细胞的影响。方法以STZ制作大鼠实验性糖尿病模型。用免疫组化染色结合图像分析半定量测定视网膜、外侧膝状体、视皮质中胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)的表达。结果与正常对照组相比,阴性对照组糖尿病大鼠视网膜、外侧膝状体及视皮质中GFAP和MBP阳性染色均不同程度的降低(P<0.05或P<0.01);与阴性对照组相比,中药各剂量组视路3个部位的GFAP、MBP阳性染色均增高,尤以中药高剂量组明显(P<0.05或P<0.01);在同等使用降糖灵的基础上,中药高剂量组视路GFAP、MBP的阳性染色较阳性对照Ⅰ组明显增高(P<0.05或P<0.01)。结论STZ性糖尿病大鼠在高血糖持续6个月后,视路3个部位的星形胶质细胞和少突胶质细胞出现免疫组织化学病理改变;补肾活血中药复方能够诱导糖尿病大鼠视路星形胶质细胞发生反应性胶质化,促进神经纤维髓鞘结构的恢复,这可能是补肾活血中药复方减轻糖尿病视功能损害的重要机制之一。     

补肾活血中药对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的影响

目的 探讨补肾活血中药对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的影响。方法 以链脲佐菌素造成大鼠糖尿病模型。利用微机图像分析技术夺视网膜神经细胞胞体中Ｎｉｓｓｌ小体进行定量测定和分析。结果 中药治疗组的糖尿病大鼠视网膜神经节细胞胞体中Ｎｉｓｓｌ小体减少程度明显低于阴性对照组和阳性对照Ⅰ组。结论 补肾活血中药有减轻实验性糖尿病视网膜神经节细胞病理损害的作用。     

补肾活血中药对糖尿病大鼠视网膜胶质纤维酸性蛋白的影响

目的：探讨补肾活血复方制对糖尿病大鼠视网膜保护作用的机制。方法：以链脲佐菌素赞成大鼠糖尿病模型,免疫组化方法显示视网膜上胶质纤维酸性蛋白的表达,利用微机图像分析技术进行测定,结果：在病程6个月时,视网膜上胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的染色强度中药中剂量组明显高于正常对照组,中药高剂量组明显高于其余各实验组,结论：补肾活血中药可诱导糖病大鼠视网膜Mueller细胞发生反应性星形胶质化,提示Mueller细胞反应性星形胶质化可能对糖尿病视网膜损伤具有保护作用。     

《金匮》肾气丸对阿尔茨海默病模型大鼠额叶皮质神经元NT-3表达的影响

目的 探究《金匮》肾气丸对阿尔茨海默病模型大鼠额叶皮质NT-3表达的影响.方法 利用脑立体定位仪精确定位右侧海马,注射2μL的Aβ25～35,建立老年性痴呆大鼠模型,《金匮》肾气丸煎剂灌胃给药进行防治,4周后取脑做NT-3免疫组化染色.结果 正常对照组大鼠额叶皮质内NT-3阳性神经元数目多,染色深;AD模型组大鼠额叶皮质内NT-3阳性神经元数目少,染色浅;《金匮》肾气丸治疗组大鼠额叶皮质内NT-3阳性神经元数目和染色与正常对照组大鼠接近.结论 《金匮》肾气丸对老年性痴呆大鼠大脑额叶皮质神经元的退变具有一定的防治作用.     

益气养阴活血法对糖尿病大鼠海马神经元NT-3表达的影响

近年来,糖尿病性脑病引起了人们的广泛关注,本实验用NT-3免疫组织化学方法,观察了糖尿病大鼠海马神经元NT-3的表达及益气养阴活血法对这种表达的影响,为临床上糖尿病的预防和治疗提供一定的理论和实验依据.     

补肾活血中药对大鼠慢性高眼压模型视网膜神经节细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响

目的:观察补肾活血中药对SD大鼠慢性高眼压(elevated intraocular pressure,EIOP)模型视网膜神经节细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响。方法:采用烙闭上巩膜静脉法,制作大鼠慢性EIOP模型,随机分为模型对照组,补肾活血高剂量组、中剂量组、低剂量组,空白对照组。连续灌胃8周,并于8周末处死大鼠,观察其对EIOP大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)凋亡基因的影响。结果:补肾活血中药可上调大鼠EIOP视网膜神经节细胞抗凋亡基因Bcl-2、抑制凋亡促进基因Bax。结论:补肾活血中药可调控大鼠EIOP视网膜神经节细胞凋亡基因的表达。     

糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡及补肾活血中药抑制其凋亡的机制

目的 探讨糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGC)凋亡及补肾活血中药抑制凋亡的机制。方法 以链脲佐菌素造成大鼠糖尿病模型，给予补肾活血中药加降糖灵混悬液，连续6月，采用甲苯胺蓝—伊红染色及免疫组化染色结含图像分析半定量检测RGC数目、尼小体、bcl—2、bax、NT—3的含量，计算bcl—2／bax蛋白的比值，并使用逐步引入剔除模型进行多元线性回归分析。结果 与正常组相比，模型组RGC数目明显减少(P＜0．001)，尼氏小体、bcl—2、NT—3、bcl—2／bax蛋白含量显著降低(P＜0．001)，bax含量显著增高(P＜0．001)；与模型组相比，补肾活血中药组RGC细胞数目明显增多(P＜0．001)，尼小体、bcl—2、NT—3、bcl—2／bax蛋白含量显著增高(P＜0．001)，bax含量显著降低(P＜0．001)。回归分析结果显示RGC数目和尼小体含量分别与bcl—2／bax蛋白比值呈正相关，前者r＝0．754，P＜0．001，后者r＝0．578，P＜0．001。结论 糖尿病大鼠RGC凋亡及补肾活血中药抑制其凋亡的可能机制之一是通过调节bcl—2／bax的比值，神经营养因子NT—3量的改变也有一定的作用。     

补肾活血中药对实验性糖尿病大鼠肾脏皮层血流值影响的观察

目的:应用激光散斑成像技术观察补肾活血中药对实验性糖尿病大鼠肾脏皮层血流值的影响。方法:将高糖高脂饲料联合链脲佐菌素诱导的实验性糖尿病大鼠20只,按血糖分为模型组和治疗组,每组10只,分别予生理盐水(10 m L/kg)、补肾活血中药煎剂(6.7 m L/kg),另取10只正常大鼠为正常组(生理盐水10 m L/kg)。连续灌胃8周后,观察各组大鼠肾脏皮层血流值。结果:模型组大鼠肾脏皮层血流值(338.55±28.55)明显高于正常组(239.27±33.27)(P0.01);补肾活血中药组大鼠肾脏皮层血流值(247.63±11.49)明显低于模型组(338.55±28.55)(P0.01);补肾活血中药组大鼠肾脏皮层血流值(247.63±11.49)较正常组(239.27±33.27)比较没有差异(P0.05)。结论:实验性糖尿病大鼠肾脏损害的早期表现可能为肾脏皮层血流值增加,补肾活血中药能降低实验性糖尿病大鼠肾脏皮层血流值,其防治糖尿病肾病的机制可能与降低肾脏皮层血流值从而改善肾脏微循环有关。     

补肾活血中药复方对AGEs条件下体外纯化培养视网膜Müller细胞活力的影响

目的:探讨补肾活血中药对体外糖基化终末产物(AGEs)条件下视网膜Müller细胞活力的影响。方法:体外纯化培养7天SD大鼠视网膜Müller细胞至P2代;中药血清药理学方法制备补肾活血中药含药血清;体外纯化培养的P2代视网膜Müller细胞置于AGEs状态下,以补肾活血中药含药血清干预,检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量。结果:(1)低AGEs组较正常对照组LDH值有升高趋势,其差异无统计学意义(P0.05);高AGEs组较正常对照组LDH值明显升高,其差异有统计学意义(P0.05)。(2)正常中药干预组与正常对照组LDH值比较,其差异无统计学意义(P0.05)。(3)AGEs中药干预组较AGEs组LDH值明显降低,其差异有统计学意义(P0.05)。结论:AGEs条件可导致体外纯化培养的大鼠视网膜Müller细胞细胞膜稳定性下降,通透性增加,细胞活力降低,补肾活血中药含药血清可提高AGES条件下视网膜Müller细胞活力,这可能是补肾活血中药防治糖尿病性视网膜病变(DR)的药物干预途径之一。     

补肾活血法中药(糖络通)对糖尿病大鼠视网膜病变中RAGE mRNA表达的影响

目的观察和验证补肾活血通络法为治则组成的糖络通胶囊对防治糖尿病视网膜病变的疗效并探讨其作用机制。方法随机将33只正常雄性Wistar大鼠分为正常对照组(N)11只,糖尿病对照组(D)11只,糖络通治疗组(DT)11只。糖尿病大鼠采用腹腔注射链脲佐菌素造模。D组与DT组均用长效胰岛素2U隔日皮下注射。DT组同时用糖络通胶囊连续给药8周后观察肾皮质RAGE mRNA的表达水平。结果与结论糖络通具有降低大鼠视网膜RAGE mRNA表达水平的作用,可延缓糖尿病视网膜病变的发展。     

补肾活血中药对早期糖尿病大鼠视网膜内屏障损伤的影响

目的探索补肾活血中药复方对高脂高糖饮食联合STZ诱导大鼠早期发生糖尿病视网膜内屏障(i BRB)损伤模型的影响。方法高糖高脂饮食和STZ诱导对标准大鼠进行造模,随机将早期糖尿病i BRB损伤的大鼠模型分为5个组,分别是空白模型组、阳性对照组、高中低3种剂量中药组,另设正常对照组。6组均在1周、2周、4周、8周后观察并设相应亚组。对大鼠的活体进行灌注并固定,行视网膜血管消化铺片,观察并记录大鼠视网膜血管的形态学变化。视网膜屏障渗漏情况通过异硫氰酸罗丹明(RHIC)检测。结果各组大鼠第8周时间亚组的糖尿病SD大鼠视网膜形态学未见明显改变。在各组糖尿病SD大鼠的第2周亚组、4周亚组、8周亚组RHIC渗漏主要出现在大鼠视网膜的外丛状层、内核层、内丛状层、神经节细胞层以及神经纤维层,且外丛状层RHIC渗漏情况最为明显,其中以模型组RHIC渗漏最多,中、高剂量中药组RHIC渗漏情况相近且仅次于模型组,低剂量中药组RHIC渗漏量低于中、高剂量中药组,阳性对照组RHIC渗漏最少。结论糖尿病SD大鼠在患病后8周内的视网膜形态不会发生显著改变。i BRB损害从第2周开始出现并逐渐加重。补肾活血中药复方对糖尿病视网膜病变大鼠i BRB损伤后渗漏有一定缓解作用。     

滋养肝肾、活血化瘀中药对实验性糖尿病大鼠视网膜超微结构的影响

目的：观察６个月病程四氧嘧啶性糖尿病大鼠视网膜病理改变以及滋养肝肾、活血化瘀中药对实验性糖尿病大鼠视网膜超微结构的影响。方法：将６０只四氧嘧啶所致的糖尿病大鼠随机分为４组：中药高剂量组、中药低剂量组、达美康对照组及生理盐水对照组，并设正常对照组。每日灌药１次，６个月后每组随机处死２只大鼠取视网膜制片作电镜观察。结果：生理盐水对照组糖尿病大鼠视网膜毛细血管内皮细胞、周细胞核异染色质聚集、靠边，胞质内线粒体肿胀变性；基底膜结节样增厚；毛细血管壁断裂；视杆外节变性、破坏；色素上皮微绒毛结构紊乱。中药治疗组糖尿病大鼠视网膜超微结构病理损害明显轻于生理盐水对照组。结论：６个月病程时四氧嘧啶性糖尿病大鼠已具有糖尿病性视网膜病变的早期病理改变。滋养肝肾、活血化瘀中药对早期糖尿病性视网膜病变具有较好的防治作用。     

加味金匮肾气丸对糖尿病大鼠脑海马CA_1区神经营养因子-3表达的影响

目的探讨加味金匮肾气丸对糖尿病大鼠脑海马CA1区神经营养因子3（NT-3）表达的影响。方法腹腔内注射链脲佐菌素（STZ）制作糖尿病大鼠模型,造模后以免疫组化法观察加味金匮肾气丸对大鼠脑海马CA1区NT-3表达的影响。结果加味金匮肾气丸治疗组比糖尿病组大鼠脑海马CA1区NT-3表达增加。结论加味金匮肾气丸可以有效防治糖尿病大鼠脑海马CA1区神经元退行性变化。     

加味金匮肾气丸对糖尿病大鼠脑海马CA1区神经营养因子-3表达的影响

目的探讨加味金匮肾气丸对糖尿病大鼠脑海马CA1区神经营养因子3(NT-3)表达的影响。方法腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病大鼠模型,造模后以免疫组化法观察加味金匮肾气丸对大鼠脑海马CA1区NT-3表达的影响。结果加味金匮肾气丸治疗组比糖尿病组大鼠脑海马CA1区NT-3表达增加。结论加味金匮肾气丸可以有效防治糖尿病大鼠脑海马CA1区神经元退行性变化。     

补肾活血中药“杜仲-当归”治疗骨性关节炎的作用及机制研究

目的:骨性关节炎(OA)是临床常见病、多发病,目前缺乏切实有效的治疗方法。研究明确补肾活血中药的作用,探寻补肾活血中药对OA的调控机制。方法:通过建立OA模型,以补肾活血中药为代表,进行对MMP13表达的调控研究,OA模型分别灌胃给予补肾药、活血药和补肾活血药,观察各组中药干预后MMP13的回调及回调程度,并结合组织病理学实验结果,明确补肾活血中药的作用:采用HE染色和SO染色观察OA大鼠膝关节软骨的层次、软骨细胞及软骨下骨的变化;ELISA检测大鼠血清和关节滑膜组织IL-1β﹑TNF-α和MMP13的表达情况;免疫组化观察补肾活血中药对OA大鼠膝关节MMP13表达的影响。结果:HE和SO染色初步可判断病变程度从高到低依次为OA模型组、活血组、补肾组、活血补肾组、阳性药物组;ELISA检测显示:OA模型组与正常对照组比较,血清中炎症因子IL-1β﹑TNF-α、MMP13含量明显上升(P0.01),与OA模型组比较,各给药组显著降低IL-1β﹑TNF-α含量,且补肾活血组血清中的IL-1β﹑TNF-α、MMP13含量要低于单独用药组;免疫组化结果显示:正常组大鼠膝关节未见MMP13阳性表达。OA鼠具有明显的MMP13阳性染色且阳性染色面积和累积光密度值显著升高(P0.01)。相对于OA模型组,补肾组、活血组、补肾活血组和阳性药物组大鼠MMP13阳性表达、阳性染色面积和累积光密度值均明显降低,降低程度从高到低依次为阳性药物组、补肾活血组、补肾组、活血组。结论:补肾活血中药(杜仲+当归)对OA具有明确治疗作用,且补肾活血组优于补肾组、活血组,揭示补肾活血治则意义,其治疗主要机制可能是通过降低关节软骨中MMP13含量以及血清中的IL-1β和TNF-α含量。     

滋养肝肾、活血化瘀中药对实验性糖尿病大鼠视神经组织形态的影响

目的：观察滋养肝肾、活血化瘀复方制剂对实验性糖尿病大鼠视神经组织形态的影响。方法：用四氧嘧啶造成Ｗｉｓｔａｒ大鼠糖尿病模型，于造模后７天开始给中药复方制剂灌胃６个月，以达美康作对照。光镜下观察比较大鼠视神经组织结构。结果：中药治疗组的糖尿病大鼠视神经纤维退变和神经髓鞘脱失的程度均显著低于阴性对照组和阳性对照组（Ｐ＜０．０１，０．００１）。结论：滋养肝肾、活血化瘀中药有减轻实验性糖尿病大鼠视神经病理损害的作用。     

补肾活血中药对实验性血瘀证大鼠内皮细胞功能的影响

目的：观察补肾活血中药对实验性血瘀证大鼠血管内皮细胞功能的影响。方法：采用补肾活血中药药液灌服实验性血瘀证大鼠模型，将动物随机分为对照组、模型组、大剂量和小剂量共4组，每组10只。造模成功后，给药组灌服药物40天，然后下腔静脉取血，测定各观察指标和主动脉血管壁组织学变化。结果：补肾活血中药组血脂、血流变、内皮功能、凝血纤溶各项指标及组织形态学均有明显变化，接近正常组，与模型组有显著差异。结论：补肾活血中药有降低血液黏度、调节血脂和改善血管内皮细胞功能的作用。