体外鼠脑星形胶质细胞损伤后c-fos蛋白、GFAP及其mRNA的动态表达

研究ｃ－ｆｏｓ蛋白、ＧＦＡＰ—ｍＲＮＡ和ＧＦＡＰ在鼠脑星形胶质细胞（ａｓｔｒｏｃｙｅ，ＡＳ）损伤后反应性星形胶质化时的动态变化。用ＡＳ原代培养技术建立体外ＡＳ机械损伤模型．并结合应用免疫组织化学和原位杂交方法．结果：（１） ｃ－ｆｏｓ蛋白于损伤后 ４５ ｍｉｎ即有阳性表达，伤后 ２ ｈ消失； （２损伤边缘的 ＡＳ于损伤后 ６ ｈ开始表达 ＧＦＡＰ－ｍＲＮＡ， １ｄ达高峰，３ ｄ则在损伤边缘少数 ＡＳ中可检出 ＧＦＡＰ－ｍＲＮＡ；（３）损伤后 １ｄ，ＧＦＡＰ表达明显增强，胞体肥大，粗大突起伸向损伤区形成反应性星形胶质化。结论：（ｌ） ＡＳ受损后原癌基因 ｃ－ｆｏｓ首先被激活，ｃ－ｆｏｓ蛋白呈－过性的表达，参与调节ＡＳ的激活；（２）ＡＳ损伤后，ＧＦＡＰ－ｍＲＮＡ的转录增加，ＧＦＡＰ表达增强是由于在转录水平上ＧＦＡＰ－ｍＲＮＡ表达增强的结果；（３）反应性星形胶质化是ＡＳ的自身特性，以ＡＳ肥大为主，ＡＳ受损后，原癌基因ｃ－ｆｏｓ的蛋白参与调节ＡＳ激活的确切机制尚待阐明。     

人结核杆菌热休克蛋白70和卡介苗α抗原基因启动子序列测定

用Ｔ７ＤＮＡ聚合酶测序系统测定了人结核杆菌热休克蛋白７０（ｈｓｐ７０）基因的启动子序列和卡介苗（ＢＣＧ）α基因的启动子和信号肽序列，并比较了它们与大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）和其它分枝杆菌启动子之间的异同。结果所测的ｈｓｐ７０启动子序列为人结核杆菌ｈｓｐ７０编码基因起始密码（ＡＴＧ）上游１５０个脱氧核苷酸，其中在ＡＴＧ上游－１２￣－８核苷酸处有核糖体结合位点（ＳＤ序列）ＧＧＡＧＧ，在ＲＮＡ聚合酶的结合     

乙型肝炎病毒基因变异的研究进展及临床意义

乙型肝炎病毒基因变异的研究进展及临床意义ＡｄｖａｎｃｅｓａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＳｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆＲｅｓｅａｒｃｈｏｎＧｅｎｅＶａｒｉａ┐ｔｉｏｎｏｆＨｅｐａｔｉｔｉｓ┐ＢＶｉｒｕｓ谢苇（广西区南溪山医院肝病科桂林市５４１００２）乙型肝炎病毒...     

体外鼠脑星形胶质细胞损伤后c—fos蛋白,GFAP及其mRNA的动态…

研究ｃ－ｆｏｓ蛋白，ＧＦＡＰ－ｍＲＮＡ和ＧＦＡＰ在鼠脑星形胶质细胞损伤后反应性星形胶质化时的动态变化。用 ＡＳ原代培养技术建立体外ＡＳ机械损伤模型，并结合应用免疫组织化学和原位杂交方法。结果（１）ｃ－ｆｏｓ蛋白于损伤后４５ｍｉｎ即有阳性表达，伤后２ｈ消失Ｄ（２）损伤缘的ＡＳ于损伤后６ｈ开始表达ＧＦＡＰ－ｍＲＮＡ，１ｄ达主同峰，３ｄ则在损伤边缘少数ＡＳ中可检出ＧＦＡＰ－ｍＲＮＡ；（３）损伤后１ｄ，Ｇ     

NIH3T3细胞不同增殖时相c－fos和c－jun癌基因表达的动态分析

ＮＩＨ３Ｔ３细胞经血清刺激由静止期进入Ｇ１期，提取该期不同时相细胞的总体ＲＮＡ，并提取同步化于Ｇ１、Ｓ、Ｇ２和Ｍ期细胞的总体ＲＮＡ，分别与ｃ－ｆｏｓ（２．１ｋｂ）和ｃ－ｊｕｎ（１．８ｋｂ）基因探针进行斑点杂交。结果显示２个癌基因除了在血清刺激后１ｈ都出现ｍＲＮＡ聚集高峰外，ｃ－ｊｕｎ还在血清刺激后１６ｈ时出现第２个聚集峰，生长期细胞在细胞周期各时相均只有ｃ－ｆｏｓ基因的少量表达，而ｃ－ｊｕｎ在Ｓ期的表达量明显高于其他各期。说明ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ除了在细胞进入生长周期时发挥基因调控功能外，ｃ－ｊｕｎ还可能在晚Ｇ１／Ｓ期产生作用，这种作用不需ｃ－ｆｏｓ蛋白的参与。     

基因工程人生长激素的纯化及鉴定

将在中国仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯ）中基因克隆表达的人生长激素（ｈＧＨ）培养物经Ｏｃｔｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ疏水层析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析，ＤＥＡＥ－ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＤＥ５２离子交换层析，得到了较纯的ｈＧＨ。通过ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），Ｎ－末端氨基酸分析及放免分析，证明基因工程ｈＧＨ与天然ｈＧＨ性质相符。     

氧化修饰高密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞原癌基因c—fo …

动脉平滑肌细胞（ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ,ＳＭＣ）的增殖在动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ,ＡＳ）的形成过程中极其重要利用体外培养的人主动脉ＳＭＣ,观察了天然高密度脂蛋白（Ｎａｔｉｖｅ ｈｉｇｈ ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ＮＨＤＬ）及氧化修饰ＨＤＬ（ＯＸ－ＨＤＬ）对培养的人主动脉ＳＭＣ原癌基因ｃ－ｆｏｓ及ＰＤＧＦ受体基因转录表达的影响。     

Effect of the Extracts of Pumpkin Seeds on the Urodynamics of Rabbits：An Experimental Study

ＥｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅＥｘｔｒａｃｔｓｏｆＰｕｍｐｋｉｎＳｅｅｄｓｏｎｔｈｅＵｒｏｄｙｎａｍｉｃｓｏｆＲａｂｂｉｔｓ：ＡｎＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＳｔｕｄｙＺＨＡＮＧＸｕ（张旭），ＯｕｙａｎｇＪｉｎ－ｚｈｉ（欧阳金芝），ＺＨＡＮＧＹｏｎｇ－ｓｈａｎｇ...     

人凝血因子Ⅸ基因（pKG_5－Ⅸ）直接注入小鼠骨骼肌中瞬间表达的研究

我们将带凝血Ⅸ因子基因ｃＤＮＡ的ｐＫＧ_５－Ⅸ裸ＤＮＡ直接注入小鼠骨骼肌内，注射后第１４天取小鼠血分离血清进行研究。结果显示：十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析中能清晰地看到一与凝血因子ⅨｃＤＮＡ表达相关的特定蛋白带，进一步的实验ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ、ＥＬＩＳＡ及一期法有力地证实了ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果，人ＦⅨ基因转移小鼠出现５５ｋＤ特异带与人ＦⅨ相符，即证明它确系人ＦⅨ。     

NIH3T3细胞不同增殖时相c－fos和c－jun癌基因表达的动态分析

ＮＩＨ３Ｔ３细胞经血清刺激由静止期进入Ｇ１期，提取该期不同时相细胞的总体ＲＮＡ，并提取同步化于Ｇ１、Ｓ、Ｇ２和Ｍ期细胞的总体ＲＮＡ，分别与ｃ－ｆｏｓ（２．１ｋｂ）和ｃ－ｊｕｎ（１．８ｋｂ）基因探针进行斑点杂交。结果显示２个癌基因除了在血清刺激后１ｈ都出现ｍＲＮＡ聚集高峰外，ｃ－ｊｕｎ还在血清刺激后１６ｈ时出现第２个聚集峰，生长期细胞在细胞周期各时相均只有ｃ－ｆｏｓ基因的少量表达，而ｃ－ｊｕｎ在Ｓ期的表达量明显高于其他各期。说明ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ除了在细胞进入生长周期时发挥基因调控功能外，ｃ－ｊｕｎ还可能在晚Ｇ１／Ｓ期产生作用，这种作用不需ｃ－ｆｏｓ蛋白的参与。     

焦磷酸测序法在败血症常见病原体检测中的应用

目的将焦磷酸测序技术应用于败血症常见病原体的检测鉴定。方法根据细菌16S rRNA序列的特点,设计焦磷酸测序
用的PCR扩增引物和测序引物,提取败血症常见病原体的基因组DNA,进行焦磷酸测序,分析获得的序列,进行比对,对病原体
种类作出判断。结果经焦磷酸测序可以获取有效长度28 bp的序列,使用该测序序列可以有效区分化脓性链球菌、肺炎链球
菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷白杆菌、脑膜炎双球菌、沙门氏菌,但不能区分金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌。结论
应用焦磷酸测序可以较有效地对败血症常见病原体的种类实现种属水平的区分。
     

基因芯片技术及其在医学领域中的应用新进展

基因芯片技术是伴随人类基因组计划的实施而发展起来的一门新兴技术,该技术将成千上万个DNA或寡核苷酸片段固定在玻璃、尼龙膜或硅片等载体上,与标记的样品探针杂交,分析样品中基因表达、基因序列、基因突变和多态性变化等情况,这是一个高效率和大规模的基因组分析和基因表达的研究技术。可用于疾病特别是肿瘤分化、分型、诊断、发病机制、疗效观察和发现新的肿瘤相关基因等研究领域。     

改进的亚硫酸氢钠测序法检测HepG2 RASSF1A基因CpG岛甲基化状态

目的 改进亚硫酸氢钠测序法，并检验改进后方法在甲基化检测中的可行性。方法 提取人肝癌细胞株HepG2基因组DNA，亚硫酸氢钠化学修饰，针对修饰后Ras相关家族1A基因（RASSF1A）启动子序列设计特异引物并结合沉降PCR扩增，T-A载体克隆、测序。结果 HepG2细胞RASSF1A基因启动子CpG岛的16个CpG位点均被甲基化。结论 改进后亚硫酸氢钠测序法能明显减少非特异性扩增，提高PCR效率，更适于基因甲基化状态的检测。     

构建单纯疱疹病毒Ⅱ型胸苷激酶基因真核表达载体

从单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV－Ⅱ）Sav株感染的Hep-2细胞培养液和细胞裂解液中提取HSV－Ⅱ基因组DNSA，以此为模板，用PCR方法获取胸苷激酶（TK）基因，将获取的DNA片段克隆入真核表达载体pcDNA3中，筛选阳性克隆测序，结果表明：本研究获取的HSV－Ⅱ－TK基因全部编码区为1128bp，编码376个氨基酸，结果表明：本研究扩增出HSV－ⅡTK基因的全部编码区序列，并成功构建真核表达载体pcDNA3／TK.     

HBV转基因在C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU3小鼠基因组中的整合分析

目的:分析HBV转基因在乙肝转基因小鼠C57 TgN(HBVadr2.0)SMMU"3号"品系基因组中的整合特征.方法:以F6～F17代乙肝转基因小鼠C57 TgN(HBVadr2.0)SMMU为研究对象,采用基因组DNA PCR、Southern印迹和DNA测序的方法,分析HBV转基因在该品系转基因小鼠基因组中的整合特征.结果:PCR分析显示,F6～F17代乙肝转基因小鼠基因组中均已稳定整合了相同拷贝数的HBV转基因,整合的HBV DNA可通过生殖系在世代间稳定遗传.整合在转基因小鼠基因组中的HBV DNA含有HBVpres、s、c、x基因,Southern印迹证实HBV转基因含有全长HBV基因组DNA,DNA测序结果表明,该品系转基因小鼠所整合的转基因为adr亚型的HBV DNA.结论:C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU"3号"品系转基因小鼠基因组中均整合有adr亚型的全长HBV基因组DNA,从DNA水平证实该转基因小鼠品系已具备了乙肝实验动物模型的基本条件.     

结核杆菌早期分泌性蛋白ESAT-6基因测序质粒及真核表达重组质粒的构建

目的 构建结核杆菌早期分泌性蛋白ESAT—6基因测序质粒及真核表达重组质粒，为结核病的诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测打下基础。方法 以结核杆菌H37Rv株基因组DNA为模板，用PCR法对基因ESAT—6进行扩增，将扩增的产物连接于测序载体pUCm—T上，经测序反应确定无误，再将PCR反应产物经酶切后，克隆于真核表达载体pcDNA3．1( )上。结果 构建了结核杆菌基因ESAT—6的重组测序质粒，并对其进行了测序。真核表达重组质粒pcDNA3．1( )—ESAT—6亦构建成功。结论 结核杆菌早期分泌性蛋白ESAT—6真核表达重组质粒的成功构建为结核病的诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测以及相应抗原、抗体的制备打下基础。     

聚合酶链反应联合直接基因测序快速诊断感染性眼内炎的研究

目的 探讨利用聚合酶链反应(PCR)联合直接基因测序技术检测感染性眼内炎的可行性及有效性,为感染性眼内炎患者的快速诊断寻求一种新的检测方式.方法 对我院2005年10月至2006年10月手术治疗的感染性眼内炎患者47例47眼.手术取材进行PCR联合直接基因测序检查并与细菌涂片、细菌培养、真菌培养、厌氧菌培养检查结果对比.结果 PCR联合基因诊断方法检查时间较传统方法耗时少.PCR病原菌检测阳性率高,为25例,25例阳性者中经直接基因测序出病原体类型19例.与病原体培养相比,敏感性为91.67%,特异性为77.14%,Kappa值为0.577.结论 对于感染性眼内炎,PCR联合直接基因测序技术是一种快速、有效的临床检查技术.     

Republished review: Next generation sequencing for clinical diagnostics and personalised medicine: implications for the next generation cardiologist

The fast moving field of genomic medicine is already impacting on clinical care and cardiologists are fortunate to be in a position to benefit early from the transformative advances in genomics. However, the challenges associated with genomics in the clinic in general, and with next generation sequencing technologies in particular, are significant and cardiologists need to be prepared if they wish to surf the wave of genomic opportunity. This paper presents an overview of the implications of next generation sequencing for clinical diagnostics and personalised medicine in the cardiology clinic.     

视蛋白基因启动子-绿色荧光蛋白融合基因转基因小鼠模型的建立

目的：从小鼠基因组中克隆小鼠视蛋白基因启动子（ROP）并建立ROP－绿色荧光蛋白（GFP）融合基因转基因小鼠模型。方法：用PCR法从基因组内扩增ROP，通过基因重组的方法构建pmROP-EGFP表达载体，并用限制性内切酶消化和DNA测序进行鉴定。纯化的pMOP-EGFP表达质粒经Not I酶切线性化后，用原核显微注射的方法将其注射入小鼠受精卵雄原核，制作转基因小鼠。新生鼠通过PCR检测在基因组水平筛选首建小鼠，基因组表达阳性的小鼠与正常小鼠交配传化后，取眼球进行冰冻切片，在荧光显微镜下观察视网膜下GFP的表达。结果：从基因组内扩增出了2.1kb的小鼠ROP，成功构建了小鼠ROP－GFP融合基因表达载体pmROP-EGFP。获得了3只转基因小鼠首建，分别命名为C57－TgN(mROP-EGFP)SMMU21,C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU26,C57-TgN(mROP-EGFP)SMMU27。结论：成功建立了视网膜表达GFP蛋白的C57－TgN(mROP-EGFP)SMMU转基因小鼠，它们可用于研究脑和视网膜发育以及视网膜病变机制，还可为进行视网膜移植实验提供哺乳类动物模型。     

鼻咽癌的基因不稳定性

目的:探讨鼻咽癌基因不稳定性对预后的意义.方法:运用单一重复序列间多聚酶链反应(inter-SSR PCR)对38位鼻咽癌患者基因不稳定性进行评估;运用测序和巢式PCR对不同肿瘤的突变片段进行检测.结果:38位患者中有31位(81.6%)显示了基因组失稳,其失稳指数范围为0%～16.2%.6个肿瘤的6q27染色体上证实有获得性基因损害.低于5年生存期患者其基因失稳程度显著高于超过5年生存期的患者(P＜0.05).结论:基因组失稳可作为鼻咽癌发生的早期标志,并且基因组失稳程度加重提示肿瘤预后不良.