内皮素-1在血管平滑肌细胞增殖作用中的研究进展

血管重构是血管壁功能和结构异常改变的过程,涉及血管内皮细胞、血管平滑肌细胞和细胞外基质的病理改变。血管平滑肌细胞增殖在血管重构中起关键性的作用。内皮素-1是一种活性多肽,参与调控血管平滑肌细胞收缩、增殖、迁移和基因表达等多项细胞功能。内皮素-1在平滑肌细胞增殖的作用机制可能是防止血管重构的关键靶点。     

血小板衍生生长因子—BB对血管内皮细胞、平滑肌细胞及成纤维细胞增殖的影响

目的 观察血小板衍生生长因子—BB对培养的人血管内皮细胞、兔平滑肌细胞和人成纤维细胞增殖的影响。方法 采用培养的人脐静脉血管内皮细胞、兔动脉血管平滑肌细胞和人血管成纤维细胞，应用^3H—TdR掺入方法，观察血小板衍生生长因子—BB对三种细胞DNA合成的影响。结果 血小板衍生生长因子—BB可促进处于静止状态的三种细胞DNA的合成，并呈现出明显的浓度依赖关系，在30ng／ml的浓度时成纤维细胞DNA的合成达到高峰，在40ng／ml的浓度时内皮细胞、平滑肌细胞DNA的合成达到高峰。成纤维细胞、平滑肌细胞分别在PDCF-BB作用24h和36h年到DNA合成的高峰，内皮细胞在48h时DNA合成量最高。结论 血小板衍生生长因子—BB可明显促进培养的人脐静脉血管内皮细胞、兔动脉血管平滑肌细胞和人血管成纤维细胞的增殖。     

血小板衍生生长因子-BB对血管内皮细胞、平滑肌细胞及成纤维细胞增殖的影响

目的观察血小板衍生生长因子-BB对培养的人血管内皮细胞、兔平滑肌细胞和人成纤维细胞增殖的影响.方法采用培养的人脐静脉血管内皮细胞、兔动脉血管平滑肌细胞和人血管成纤维细胞,应用3H-TdR掺入方法,观察血小板衍生生长因子-BB对三种细胞DNA合成的影响.结果血小板衍生生长因子-BB可促进处于静止状态的三种细胞DNA的合成,并呈现出明显的浓度依赖关系,在30 ng/ml的浓度时成纤维细胞DNA的合成达到高峰,在40 ng/ml的浓度时内皮细胞、平滑肌细胞DNA的合成达到高峰.成纤维细胞、平滑肌细胞分别在PDGF-BB作用24 h和36 h达到DNA合成的高峰,内皮细胞在48 h时DNA合成量最高.结论血小板衍生生长因子-BB可明显促进培养的人脐静脉血管内皮细胞、兔动脉血管平滑肌细胞和人血管成纤维细胞的增殖.     

川芎嗪对血管平滑肌细胞增殖及表达c-myc基因的影响

为观察川芎嗪对血管平滑肌细胞增殖的影响,在建立凝血酶诱导的体外培养的兔主动脉血管平滑肌细胞增殖模型后,应用免疫细胞化学方法观察川芎嗪对血管平滑肌细胞表达ｃ－ｍｙｃ基因蛋白的影响;并用流式细胞术观察了血管平滑肌细胞增殖周期的变化。结果发现,川芎嗪能够显著抑制凝血酶诱导的血管平滑肌细胞ｃ－ｍｙｃ基因蛋白表达增加,使血管平滑肌处于ＧＩ期的细胞数显著增多,Ｓ期和Ｇ２＋Ｍ期的细胞数显著减少。结果提示,川芎嗪对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖有显著抑制作用,其机制与抑制ｃ－ｍｙｃ基因表达有关。     

Production and Release of Inactive Renin by Human Vascular Smooth Muscle Cells

Human arterial smooth muscle cells were obtained from surgically excised tissues and cultured by the explant method. The cultured cells had both active and inactive forms of an angiotensin I forming enzyme. About a five-fold increase in the activity was obtained by trypsin treatment. This renin-like enzyme was also found in abundance in the culture media, mostly in an inactive form. Most of the enzyme activity, either before or after the activation, was suppressed by an antibody specific to human renin. The inactive enzyme was activated to some extent also by acidification and by cold exposure. The molecular weight of the inactive enzyme was estimated to be approximately 49,000 by gel filtration. These results suggest that human vascular smooth muscle cells can produce renin and release an inactive form of renin, and can be a potential source of plasma inactive renin under certain conditions such as the anephric state.     

血小板源生长因子BB对人血管平滑肌细胞钙调素的影响

为研究血小板源生长因子BB对培养的人血管平滑肌细胞钙调素的影响，采用培养的人血管平滑肌细胞，应用磷酸二酯酶法观察不同浓度的血小板源生长因子BB对钙调素含量变化的影响及其时间效应。结果发现，平滑肌细胞在进入细胞增殖周期后，细胞内钙调素含量逐渐增加，在9h时出现一个短暂的高峰，随后细胞内钙调素含量逐渐下降。血小板源生长因子BB可促进钙调素含量的增加，并呈现出明显的浓度依赖关系，30μg/L血小板源生长因子BB作用最为显著。结果提示，血小板源生长因子BB可明显促进培养的人血管平滑肌细胞钙调素含量的增加，并存在着一定的量效依赖关系及时间反应性。     

葛根素抑制凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖

目的　观察葛根素对T诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法　建立凝血酶(T)诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖模型,以细胞计数法和流式细胞仪DNA含量测定的方法观察T及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。结果　T对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在2 4小时末达峰,且T浓度在0 . 1U/L～1 . 0U/L之间有剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制T诱导的细胞增殖与DNA合成。结论　葛根素能抑制T诱导的VSMC增殖。     

花刺参粘多糖对血小板源生长因子BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察花刺参粘多糖对血小板源生长因子BB诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响,以探讨花刺参粘多糖抗动脉粥样硬化、预防经皮腔内冠状动脉成形术后再狭窄的可能机制。方法组织块贴片法体外原代培养大鼠血管平滑肌细胞,细胞增殖采用四甲基偶氮唑盐、流式细胞细胞周期分析;流式细胞术、TUNEL法观察细胞凋亡。结果血小板源生长因子BB刺激后可促进血管平滑肌细胞增殖,抑制其凋亡;花刺参粘多糖则呈浓度依赖性地逆转此作用,光密度值由0.406±0.003减少到0.187±0.017(P<0.01),G0/G1期细胞比例由77.4%±5.7%增加到88.1%±5.3%(P<0.05),细胞凋亡率由8.6%±2.3%增加到22.6%±2.3%(P<0.05),凋亡细胞比例由2.7%±0.4%增加到10.1%±0.9%(P<0.01)。结论花刺参粘多糖可抑制血小板源生长因子BB诱导的血管平滑肌细胞增殖,促进其凋亡,这可能对延缓动脉粥样硬化的发生发展、防止经皮腔内冠状动脉成形术后再狭窄的发生起到一定作用。     

基质相互作用分子1基因敲除抑制血管平滑肌细胞增殖

目的 探讨基质相互作用分子1(STIM1)基因敲除对血管平滑肌细胞内钙浓度和细胞增殖的调控作用.方法 原代培养血管平滑肌细胞,用构建好的大鼠STIM1干扰腺病毒载体(Ad-si/rsTIM1)和人重组STIM1腺病毒载体(Ad-hSTIM1)进行转染,Western blot检测细胞STIM1表达,3H胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法和细胞计数测定细胞增殖,激光共聚焦检测细胞内钙变化.结果 Ad-si/rSTIM1转染后48 h后细胞STIM1表达与转染对照腺病毒载体比较明显降低(P<0.05),细胞内钙浓度也明显下降(P<0.05),细胞增殖被显著抑制(P<0.05);Ad-hSTIM1共转染后48 h细胞STIM1表达恢复到正常水平;细胞内钙浓度和细胞增殖恢复到正常水平.结论 STIM1调节血管平滑肌细胞内钙浓度,并进而参与对血管平滑肌细胞增殖的调控.     

活化淋巴细胞诱导人血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶表达

为探讨活化的淋巴细胞直接接触对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶表达的影响 ,用乙酸肉豆蔻佛波醇活化并经 1%多聚甲醛固定的人外周血淋巴细胞 ,与培养的人类胚胎血管平滑肌细胞共同孵育 ,用聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定细胞培养上清液中基质金属蛋白酶的活性。结果发现 ,基础状态下的体外培养人血管平滑肌细胞合成基质金属蛋白酶 2的酶原形式 ,有少量基质金属蛋白酶 2的活性形式存在。经佛波醇活化淋巴细胞组上清液中可检测到基质金属蛋白酶 1、基质金属蛋白酶 3和基质金属蛋白酶 9活性 ,并且基质金属蛋白酶 2活性形式较对照组增加 198%± 2 7% (P <0 .0 1) ,未经佛波醇活化的淋巴细胞不影响血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶的合成和分泌。以上结果提示 ,活化固定的淋巴细胞可以通过细胞直接接触诱导血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶表达增加及活化 ,在动脉粥样硬化的斑块破裂过程中可能起重要作用     

基质相互作用分子1基因敲除抑制血管平滑肌细胞增殖

目的探讨基质相互作用分子1(STIM1)基因敲除对血管平滑肌细胞内钙浓度和细胞增殖的调控作用。方法原代培养血管平滑肌细胞,用构建好的大鼠 STIM1干扰腺病毒载体(Ad-si/rSTIM1)和人重组 ST1M1腺病毒载体(Ad-hSTIM1)进行转染,Western blot 检测细胞 STIM1表达,~3H 胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入法和细胞计数测定细胞增殖,激光共聚焦检测细胞内钙变化。结果 Ad-si/rSTIM1转染后48h 后细胞 STIMl表达与转染对照腺病毒载体比较明显降低(P<0.05),细胞内钙浓度也明显下降(P<0.05),细胞增殖被显著抑制(P<0.05);Ad-hSTIM1共转染后48 h 细胞 STIM1表达恢复到正常水平;细胞内钙浓度和细胞增殖恢复到正常水平。结论 STIM1调节血管平滑肌细胞内钙浓度,并进而参与对血管平滑肌细胞增殖的调控。     

氧化低密度脂蛋白在血管平滑肌细胞增殖过程中对血小板源性生长因子的作用

低密度脂蛋白是动脉粥样硬化的危险因子,而低密度脂蛋白氧化修饰成氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)则增加了它的致动脉粥样硬化性。ox-LDL能诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖,是致动脉粥样硬化的重要因素。近年来,从细胞信号、内含增殖活性成分、生长因子、及氧化效应等方面深入探讨了其作用机制。众所周知,血小板源性生长因子(PDGF)是强有力的促有丝分裂剂,在VSMC增殖及动脉粥样硬化发展过程中发挥重大作用,现就ox-LDL在致血管平滑肌细胞增殖过程中对PDGF的影响进行综述,揭示ox-LDL致动脉粥样硬化的机制,从而帮助了解临床药物治疗可能的途径。     

多沙唑嗪抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的实验研究

为探讨多沙唑嗪对大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。将不同浓度的多沙唑嗪作用于体外培养的血管平滑肌细胞，采用氚-胸腺嘧啶核苷（^3H-TdR)掺入的方法检测平滑肌细胞的增殖。结果发现，多沙唑嗪能够抑制血管平滑肌细胞和不表达α1受体的成纤维细胞的增殖，用不可逆的α1受体阻滞剂酚苄明处理平滑肌细胞，多沙唑嗪仍表现为抑制增殖的作用。以上提示，多沙唑嗪对大鼠平滑肌细胞增殖的抑制作用与其对α1受体的阻滞作用无关。     

水蛭素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

为研究重组水蛭素对凝血酶诱导的兔胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制.选用第2～5代培养的血管平滑肌细胞,在与凝血酶(4.0 ku/L)共同孵育的条件下,分别给予水蛭素(6.0 ku/L)和肝素(6.O ku/L)进行干预.通过四唑盐比色实验检测细胞生长活性,流式细胞术检测细胞周期,免疫组织化学检测血小板生长因子和增殖细胞核抗原在血管平滑肌细胞中的表达.结果发现,重组水蛭素能明显抑制凝血酶诱导的平滑肌细胞增殖,其抑制作用可能与减低了血管平滑肌细胞对血小板生长因子和增殖细胞核抗原的表达有关.     

水蛭素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

为研究重组水蛭素对凝血酶诱导的免胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响及其作用机制。选用第2～5代培养的血管平滑肌细胞，在与凝血酶(4．0ku／L)共同孵育的条件下，分别给予水蛭素(6．0ku／L)和肝素(6．0ku／L)进行干预。通过四唑盐比色实验检测细胞生长活性，流式细胞术检测细胞周期，免疫组织化学检测血小板生长因子和增殖细胞核抗原在血管平滑肌细胞中的表达。结果发现，重组水蛭素能明显抑制凝血酶诱导的平滑肌细胞增殖，其抑制作用可能与减低了血管平滑肌细胞对血小板生长因子和增殖细胞核抗原的表达有关。     

转录因子BTEB2与血管平滑肌细胞增殖

转录因子是一类脱氧核糖核酸(DNA)结合蛋白,它们与基因启动子中特定序列结合,从而调节基因的表达.血管平滑肌细胞(VSMC)增殖是血管成形术,特别是经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后再狭窄(RS)的主要病理特征.近年来,许多研究表明某些转录因子在VSMC增殖及RS形成的过程中起重要调控作用.在各种外界剌激的作用下,细胞外信号经过细胞内信号传递系统到达核内,诱导一系列VSMC增殖相关基因的表达,启动细胞周期,从而推动VSMC分裂、增殖.而这些基因表达又受某些核内转录因子的调控.对早期生长反应因子-1(Egr-1)、生长停止特异性同源框蛋白(Gax)和GATA结合蛋白-6(GATA-6)等转录因子的干预实验成功地抑制了VSMC的增殖和血管新生内膜形成.这些研究为制定新的RS防治策略提供了有用的线索.本文对新发现的转录因子BTEB2(基本转录元件结合蛋白2)的研究进展及其与VSMC增殖的关系作一综述.     

家兔主动脉平滑肌细胞条件培养基抑制血管平滑肌细胞增殖

为探讨血管平滑肌细胞自分泌和旁分泌对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用 ,采用家兔主动脉贴块培养法培养血管平滑肌细胞 ,并制备平滑肌细胞条件培养基。采用孔径 10 0kDa和 10kDa的Millipore滤膜 ,将平滑肌细胞条件培养基分部。平滑肌细胞增殖测定采用宝灵曼试剂盒XTT法。结果提示 ,家兔血管平滑肌细胞条件培养基抑制血管平滑肌细胞的增殖 ,浓度 5 0 %的平滑肌细胞条件培养基抑制血管平滑肌细胞的增殖率高达 45 % ,且该生长抑制活性物质具有剂量依赖、加热 5 6℃ 30min稳定和分子质量小于 10kDa的特点。     

灯盏花素对兔血管平滑肌细胞增殖的影响

观察灯盏花素对兔血管平滑肌细胞生长增殖、细胞超微结构及其细胞周期和核因子．κB活性的影响，以探讨其药理机制。胎牛血清刺激体外培养的兔血管平滑肌细胞使其快速增殖生长，加入不同浓度的灯盏花素作用一定时间后，通过MTT法测定灯盏花素对血管平滑肌细胞生长的抑制率，流式细胞技术测定细胞周期和核因子κB活性以及用透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果发现，灯盏花素能明显抑制胎牛血清刺激的血管平滑肌细胞增殖(IC50为17．9mg/L)，并改变细胞的超微结构，包括使细胞电子密度增大，部分胞膜断裂，粗面内质网和高尔基体呈空泡状扩张，部分线粒体呈凝固性变化，嵴减少或消失，或呈凝固性坏死。灯盏花素还以浓度依赖方式减少S期细胞，阻滞细胞于G0/G1期，并下调核因子κB活性。结果提示，灯盏花素能显著抑制血管平滑肌细胞的增殖生长。可能具有抗动脉粥样硬化的作用，其作用机理可能部分是通过调控血管平滑肌细胞核因子κB活性来实现的．     

γ射线对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :了解γ射线对血管平滑肌细胞 (SMC)增殖的影响及剂量—效应关系。方法 :在无菌条件下取猪的胸主动脉 ,用组织块贴壁法培养SMC ,取进入指数生长期的猪主动脉SMC分别用 0Gy、3 5Gy、7 0Gy、14 0Gy、2 8 0Gyγ射线照射 ,用3 H标记的胸腺嘧啶核苷 ( 3 H TdR)掺入试验分别在照射后 12h、2 4h、36h、48h测SMC的3 H TdR掺入量 (以每分闪烁计数值表示 ) ,同时观察细胞形态的变化。结果 :不同照射剂量在各时点3 H TdR掺入量均较照射剂量为 0Gy时明显减少 (P <0 0 5 ) ,γ射线对SMC增殖的抑制作用为 7 0Gy及 14 0Gy >3 5Gy ,而 2 8 0Gy抑制作用最强。形态学观察发现各组细胞轮廓明显增强 ,胞浆中可见颗粒状物质 ,14 0Gy照射细胞时出现空泡样变 ,照射剂量 2 8 0Gy可见大量细胞死亡。结论 :γ射线 ( 3 5Gy～ 2 8 0Gy)能明显抑制SMC增殖 ,且抑制作用随剂量增大而增强 ;照射剂量 <14 0Gy时以细胞抑制作用为主 ,照射剂量 2 8 0Gy时以致死效应为主