白藜芦醇对高脂饮食去卵巢肥胖大鼠脑组织炎症反应及海马Aβ1-42水平的影响

目的 探讨白藜芦醇对高脂饮食去卵巢肥胖大鼠海马组织炎症反应及β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)水平的影响.方法 健康3月龄Wistar雌性大鼠30只随机分为假手术普通饮食组(SHAM组)、去卵巢高脂饮食组(OH组)、白藜芦醇[40 mg/(kg·d)-1]干预组(OHR组).相应干预3个月后检测大鼠血清雌二醇(E2)、胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,RT-PCR法检测海马组织中白细胞介素6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α) mRNA的表达,ELISA法检测海马匀浆IL-6、TNF-α与3淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)表达.结果 OH组大鼠血清E2水平较SHAM组明显降低(P＜0.01),OHR组大鼠血清中E2水平较OH组显著升高(P＜0.05);OH组大鼠血清TC、LDL-C含量较SHAM组升高(P＜0.01),OHR组大鼠血清TC含量较OH组降低(P＜0.01);OH组大鼠海马组织IL-6、TNF-α mRNA及IL-6、TNF-o、Aβ1-42蛋白含量较SHAM组明显升高(P＜0.01),OHR组IL-6、TNF-α mRNA及Aβ1-42蛋白含量较OH组明显降低(P＜0.05).结论 白藜芦醇能减轻高脂饮食去卵巢肥胖大鼠海马组织中Aβ1-42的沉积,其机制可能与白藜芦醇升高大鼠血清E2水平、降低血清TC含量、改善肥胖相关大脑炎症反应有关.     

β淀粉样肽42及神经生长因子在实验性糖尿病脑病小鼠海马内表达的变化研究

目的 本研究通过观察β淀粉样肽（amyloid β peptide,Aβ） 42及神经生长因子（nerve growth factor,NGF）在实验性糖尿病（diabetes mellitus,DM）脑病小鼠海马表达的长时程变化,探讨DM脑病发病的相关机制.方法 64只雄性昆明小鼠采用数字表法随机分为对照组（C组,n=32）和DM组（n=32）.小鼠禁食12 h后,按200 mg/kg腹腔注射新鲜配制的链脲佐菌素,3 d后尾部测非禁食血糖,大于15 mmol/L者为DM模型复制成功.分别在造模后1、4、8及12周应用免疫组织化学染色方法观察C组与DM组小鼠海马CA1区Aβ42及NGF阳性细胞的变化.结果 1）C组小鼠海马CA1区Aβ42阳性细胞数量少,染色浅;而造模后1、4、8及12周DM组小鼠海马CA1区Aβ42阳性细胞数量较C组增多,染色深.细胞计数结果显示,造模后1周,DM组小鼠海马CA1区Aβ42阳性细胞数量14.10±3.60比C组13.20±3.08略有增加,但差异没有统计学意义（P〉0.05）.造模后4、8及12周,DM组小鼠海马CA1区Aβ42阳性细胞数量（16.10±3.67,16.20±2.86,17.50±3.10）比C组（11.70±2.54,12.00±2.67,10.80±2.92）明显增加,差异有统计学意义（P〈0.01）.2）C组小鼠海马CA1区NGF阳性细胞数量较多,染色深;造模后1、4、8及12周 DM组小鼠海马CA1区NGF阳性细胞染色较C组稍浅.细胞计数结果显示,1、4、8及12周DM组小鼠海马CA1区NGF阳性细胞数量相比,差异无统计学意义（P 〉 0.05）.结论 M中期（4周）小鼠海马内Aβ42表达明显增加,并持续至实验终点（DM 12周）.DM小鼠海马内NGF表达在本研究中没有明显变化.Aβ42参与DM小鼠海马神经元的变性过程,在DM脑病的发病机制中发挥重要作用.     

人β淀粉样蛋白1-42在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定

目的在大肠杆菌中表达人源性β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42),纯化表达蛋白并进行Western blot鉴定。方法根据Gen Bank中人源性Aβ1-42编码序列,分为3个片段人工合成,经退火延伸为全长dsDNA序列,酶切后连接至表达质粒pET-28a(+)构建为重组质粒pET-28a-Aβ1-42,转化至大肠杆菌BL21株中,筛选高表达株,诱导表达,利用Ni+株亲和纯化表达蛋白,SDS-PAGE后,转印PVDF膜,进行Western blot鉴定。结果获得纯化的大肠杆菌表达蛋白Aβ1-42,表达形式为包涵体,经Western blot鉴定为人源性Aβ1-42蛋白。结论本研究获得了纯化的Aβ1-42蛋白,为下一步采用Aβ1-42标记该蛋白作为诊断分子奠定了基础。     

贝伐单抗对纤维化炎症因子白细胞介素IL-1β表达的影响

〔目的〕研究贝伐单抗对纤维化炎症因子白细胞介素IL-1β表达的影响作用。〔方法〕建立正常氧含量和缺氧两种条件,进行人脐静脉内皮细胞的培养,根据不同的处理时间进行试验分组,并进行RT-PCR检测纤维化炎症因子白细胞介素IL-1β的mRNA表达和酶联免疫吸附试验(ELISA),检测纤维化炎症因子白细胞介素IL-1β的蛋白表达的检测。〔结果〕正常氧含量条件下,相较于对照组,各实验组纤维化相关炎症因子的蛋白表达增加,12 h组、24 h组、48 h组纤维化相关炎症因子IL-1β的mRNA和蛋白表达明显增加,而6 h组的mRNA表达无统计学差异;缺氧条件下,各实验组纤维化相关炎症因子IL-1β的mRNA和蛋白表达明显增加,P<0.05,差异均显著。〔结论〕无论在正常氧含量还是缺氧条件下,贝伐单抗在正常氧含量和缺氧条件均可刺激纤维化相关炎症因子白细胞介素IL-1β的表达增加,说明此部分炎症因子可能参与了抗新生血管内皮生长因子治疗后的新生血管纤维化过程。     

脑尔康对阿尔茨海默病模型大鼠海马β淀粉样肽1-42及脑啡肽酶表达的影响

目的：观察复方中药脑尔康对阿尔茨海默病（Alzheimers disease, AD）模型大鼠海马β淀粉样肽1-42（β-amyloid peptide 1-42,Aβ1-42）及其降解酶——脑啡肽酶（neprilysin, NEP）表达的影响,探讨其抗痴呆的作用机制。 方法：48只健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、吡拉西坦组和大、中、小剂量脑尔康组,每组8只。除空白对照组外,其余各组大鼠双侧海马CA1区各一次性注射凝聚态Aβ1-425 μL（2 μg/μL）制备AD模型,空白对照组注射等体积生理盐水。3个剂量脑尔康组大鼠给予脑尔康［60、30、15 g/（kg·d）］连续灌胃28 d,吡拉西坦组给予吡拉西坦［0.375 g/（kg·d）］灌胃,空白对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃。采用Y型电迷宫检测大鼠学习记忆能力,采用免疫组织化学法检测海马内Aβ1-42和NEP的表达。 结果：大鼠海马注射Aβ1-42后,与空白对照组比较,模型组大鼠学习记忆能力下降,海马内Aβ1-42表达明显增多（P＜0.01）。用药干预28 d后,与模型组比较,吡拉西坦组和各剂量脑尔康组大鼠学习记忆能力改善（P＜0.05,P＜0.01）,海马内Aβ1-42的表达下降（P＜0.05,P＜0.01）,NEP的表达增加（P＜0.05,P＜0.01）,其中以大剂量脑尔康组效果最佳。 结论：复方中药脑尔康可能通过上调AD模型大鼠海马NEP的表达来降低Aβ1-42的含量,改善其学习记忆能力,发挥抗痴呆作用。     

胞壁酰二肽对人主动脉内皮细胞炎症因子表达影响的研究

目的:观察胞壁酰二肽对人主动脉内皮细胞数种炎症因子表达的影响.方法:用胞壁酰二肽(MDP)按要求对人主动脉内皮细胞(HAECs)进行处理,运用实时定量RT-PCR以及RT-PCR测定IL-1β,IL-8,MCP-1,IFN-α与IFN-β基因的表达.用Western blot与RT-PCR方法研究MDP影响IFN-α,IFN-β表达的机制.结果:经MDP处理后,HAECs细胞中炎症因子IFN-α,IFN-β,IL-1β,IL-8和MCP-1的表达上调.结论:MDP可以通过上调HAECs细胞炎症因子的表达.     

白藜芦醇对胰岛素抵抗模型小鼠炎症因子分泌的抑制作用

目的探讨白藜芦醇对胰岛素抵抗模型小鼠淋巴细胞和巨噬细胞炎症因子分泌的抑制作用。方法高脂喂养小鼠16周,通过游离脂肪酸、三酰甘油、总胆固醇检测和胰岛素敏感性曲线评价胰岛素抵抗模型的形成,无菌分离淋巴细胞培养,腹腔灌洗并分离巨噬细胞培养,培养板分两组,对照组加入脂多糖(LPS)混合培养,白藜芦醇组加入LPS和白藜芦醇(10 mg/L)混合培养。4 h后,流式细胞仪检测白细胞介素(IL)-2I、L-3I、L-6、γ干扰素、肿瘤坏死因子-αI、L-8的表达。结果白藜芦醇组炎症因子比对照组显著降低(P<0.05)。结论白藜芦醇能抑制胰岛素抵抗模型小鼠炎症因子的分泌,从而改善胰岛素抵抗。     

淀粉样蛋白Aβ1—42在阿尔茨海默病中的意义

目的：探讨老年人阿尔茨海默病（Alzheimer‘s disease,AD)脑脊液淀粉样蛋白Aβ1－42的含量及其意义。方法：采用ELISA法检测30例AD，非AD痴呆患者25例和对照组21例患者脑脊液中Aβ1－42的浓度。结果：AD患者脑脊液中Aβ1－42水平明显低于非AD痴呆和对照组。结论：Aβ1－42在AD的发病中起重要作用，脑脊液Aβ1－42值对AD的诊断具有一定的临床应用价值。     

转化生长因子-β1对大鼠腹膜间皮细胞炎症因子及细胞外基质表达的影响

目的 研究转化生长因子-β1（TGF-β1）对大鼠腹膜间皮细胞炎症因子表达和细胞外基质（ECM）积聚的影响。方法 体外培养SD 大鼠原代腹膜间皮细胞,静止24h 后,采用RT-PCR 检测TGF-β1（10ng/ml）刺激后0、3、6、12、24、48h 单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、白介素-6（IL-6）、Ⅰ型胶原（CollagenⅠ）、纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）mRNA 的表达情况;Western blot 检测TGF-β1（10ng/ml）刺激后0、4、12、24、48h CollagenⅠ和PAI-1 表达情况;ELISA 法检测MCP-1 和IL-6 表达情况。结果 TGF-β1处理6h 后MCP-1、IL-6 和PAI-1mRNA 即开始逐渐升高,与0h 组的差异均有统计学意义（均P＜0.05）,24h 后显著升高（均P＜0.01）;TGF-β1 处理12h 后CollagenⅠmRNA 表达开始明显升高,与0h 比较差异有统计学意义（P＜0.05）,24h 后有显著升高（P＜0.01）;TGF-β1 处理4h 后IL-6 表达水平升高（P＜0.05）,24h 后显著升高（P＜0.01）;处理12h 后MCP-1 和PAI-1 表达水平较0h 明显升高（P＜0.05）,处理24h 后CollagenⅠ表达水平显著升高（P＜0.05）;TGF-β1 显著增加MCP-1、IL-6、CollagenⅠ、PAI-1 及其mRNA 的表达上调。结论 TGF-β1可能通过诱导大鼠腹膜间皮细胞炎症因子上调表达和ECM积聚导致腹膜纤维化。     

白藜芦醇对白细胞介素-1β诱导软骨细胞iNOs表达的影响

目的:探讨白藜芦醇对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导下大鼠软骨细胞细胞一氧化氮合酶(i NOs)表达的影响。方法:体外培养大鼠膝关节软骨细胞,用IL-1β(10μg/L)刺激,并不加或加入不同浓度的白藜芦醇处理,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测i NOs基因及相关蛋白表达。结果:IL-1β诱导下软骨细胞i NOs的表达显著增加(和对照组比较,P<0.05),而加入不同浓度白藜芦醇能明显抑制IL-1β诱导软骨细胞i NOs的表达。结论:白藜芦醇抑制IL-1β诱导软骨细胞i NOs的表达是其保护骨关节炎软骨细胞的机制之一。     

梓醇对内皮细胞炎症因子表达的影响

目的:研究梓醇(Catalpol)对高糖高脂诱导的人脐静脉血内皮细胞(HUVECs)炎症反应的影响。方法:体外培养人脐静脉血内皮细胞,用CCK-8法检测不同浓度梓醇溶液对HUVECs细胞增殖活性的影响。将细胞分为空白对照组、高糖高脂组(给予33mmol/L葡萄糖+500μmol/L棕榈酸作用48h)、高糖高脂+1 000mg/L梓醇预处理组(梓醇1 000mg/L预处理24h后,给予33mmol/L葡萄糖+500μmol/L棕榈酸作用48h,以下简称梓醇预处理组),收集细胞上清液,用ELISA检测上清液中的炎症因子TNF-α、IL-6的浓度。结果:梓醇作用于HUVECs细胞的最佳浓度为1 000mg/L。高糖高脂组中TNF-α和IL-6浓度较空白对照组均明显增高(t=7.03、6.68,P均<0.01)。与高糖高脂组比较,梓醇预处理组上清液中炎症因子TNF-α及IL-6浓度均下降(t=-2.87、-3.76,P均<0.05)。结论:高糖高脂可诱导血管内皮细胞炎症反应,而梓醇对高糖高脂诱导的炎症反应有一定的改善作用。     

Sirt1抑制由ox-LDL诱导的人冠状动脉内皮细胞的炎症反应

目的:探讨Sirt1对动脉粥样硬化中人冠状动脉内皮细胞炎症反应的影响.方法:选取人冠状动脉内皮细胞,分别用不同浓度的ox-LDL诱导并筛选出最适浓度建立体外动脉粥样硬化细胞模型;将细胞分为正常对照组、空质粒对照组、空质粒+ox-LDL组、Sirt1过表达+ox-LDL组、Sirt1干扰+ox-LDL组;用荧光显微镜观察...     

炎症因子对胰岛素抵抗动物模型血管内皮细胞功能影响的研究

目的 探讨炎症因子在胰岛素抵抗状态下血管内皮细胞功能异常中的作用及可能的机理.方法 SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、肥胖组(OB组)和肥胖+阿司匹林干预组(OB-AS组).NC组给予普通饲料喂养;OB组给予高脂饲料喂养;OB-AS组在给予高脂饲料喂养4周后,在高脂饲养的基础上每天给予200 mg/kg体质量的阿司匹林灌胃4周.应用正常葡萄糖高胰岛素钳夹试验评价外周胰岛素敏感程度;测定不同浓度乙酰胆碱(Ach)及硝普钠作用下股动脉血流速度的改变以评价血管内皮细胞依赖性舒张功能及非内皮细胞依赖性血管舒张功能;测定循环中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和C-反应蛋白(CRP)的水平;检测血管组织中核转录因子κB抑制蛋白激酶β-核因子-κB(IKKβ-NF-κB)分子通路的激活情况.结果 OB组血中TNF-α和CRP的水平较NC组升高 (P<0.05),Ach刺激的血管舒张反应降低(P<0.05);血管舒张时血中一氧化氮(NO)水平低下(P<0.05).血管组织NF-κBp65和IKKβ的染色强度明显增强, 血管组织NF-κBp65的表达是NC组的1.7倍(P<0.05).与OB组比较,OB-AS组其炎症因子水平下降(P<0.05),给予Ach后血中NO水平增加(P<0.05),血管舒张强度增加(P<0.05).OB-AS组血管组织NF-κBp65和IKKβ的染色强度、内皮细胞NF-κBp65的表达水平较OB组下降(P<0.05).结论 胰岛素抵抗状态下循环中增多的炎症因子通过激活经典的IKKβ-NF-κB分子通路导致内皮源性NO产生减少,可能是胰岛素抵抗状态下血管内皮细胞功能异常的分子机理之一.     

姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠Aβ及Aβ寡聚体表达的影响

目的运用免疫组织化学方法和蛋白质印迹(Western-blot)方法观察淀粉样前体蛋白/早老素1(APP/PS1)双转基因小鼠治疗前后β淀粉样蛋白42(Aβ42)、β淀粉样蛋白40(Aβ40)和可溶性Aβ寡聚体(ADDLs)的变化,判断姜黄素(curcumin)对Aβ级联反应的影响。方法将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、阳性对照组(罗格列酮组)及姜黄素大、中、小剂量组。灌胃3个月后,以免疫组织化学方法和Western blot方法检测Aβ42、Aβ40和ADDLs蛋白表达量的变化。结果免疫组织化学检测模型组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs阳性细胞均较正常组增加,Aβ40和Aβ42相比,阳性细胞计数增加以Aβ42更加明显,各干预组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs阳性细胞明显降低。Western blot检测模型组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs蛋白表达比正常对照组明显增加(P<0.01);与模型组小鼠相比,虽然各干预组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs蛋白表达均减少,罗格列酮组和姜黄素中剂量组小鼠海马Aβ40和Aβ42的蛋白表达显著减低(P<0.01);罗格列酮组小鼠海马ADDLs的蛋白表达减低显著(P<0.01),姜黄素大、中剂量组小鼠海马ADDLs的蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论姜黄素给药3个月能显著减少APP/PS1双转基因小鼠脑内海马CA1区Aβ40、Aβ42和ADDLs的表达,对Aβ42减低更为明显。其潜在的神经保护机制是否通过下调Aβ42和ADDLs的产生,增强Aβ42和ADDLs的降解影响Aβ级联反应,有待进一步研究。     

补体对内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1的影响

目的：为了探讨旁路活化补体能否诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECS）表达单核细胞趋化蛋白1（MCP－1）以及核转录因子kappa B(nF-kB）的调控作用。方法：采用酵母多糖活化人血清（ZAHS）补体直接作用于体外培养的HUVECS单层后，①ELISA法检测MCP－1的表达水平，用原位杂交（ISH）检测胸浆中mRNA水平。②凝胶电泳迁移率（EMSA）方法测定NF－kB的活化。结果：①ZAHS（140μ1／孔）能诱导HUVECS表达MCP－1，表达水平从8小时开始有显增加。ZAHS作用6小时，HUVECS胸浆中MCP－1 mRNA含量明显增加；②ZAHS能激活NF－kB，30分钟时即有活化，60分钟明显增加，120分钟达到高峰；③对照组的HUVECS表达MCP－1水平及胸浆中MCP－1 mRNA含量均明显降低（P＜0.01）；④NF－kB抑制剂PDTC（20μmol/L）预先处理HUVECS单层2小时，可以明显降低MCP－1的表达（P＜0.05）。结论：旁路活化补体能直接在转录水平上诱导HUVECS表达MCP－1，这一过程可能通过NF－kB的活化来调控的。     

白藜芦醇对TNF-α诱导的血管内皮细胞炎性反应的影响

目的观察白藜芦醇对TNF-α刺激引起的内皮细胞炎症反应的影响,并围绕TNFR1探索相关作用机制。方法不同浓度(0.01、0.1、1、2.5、5、10、20、50、100、200、400 ng/ml)TNF-α处理人血管内皮细胞株EA.hy926,24 h后MTT法和ELISA法分别检测细胞增殖活力和细胞培养液中sICAM-1释放水平;白藜芦醇(浓度为0.1、1、10μmol/L)预处理24 h后,再用TNF-α(10 ng/ml)处理24 h,利用ELISA法检测细胞培养液中sICAM-1释放水平,qRT-PCR法检测ICAM-1mRNA和TNFR1 mRNA表达水平。结果高浓度TNF-α(≥100 ng/ml)刺激EA.hy926细胞后,细胞增殖活力显著下降(P<0.05),当TNF-浓度为200 ng/ml时,与对照组比较细胞增殖活力下降约59.7%;浓度为10 ng/ml的TNF-α刺激内皮细胞后,细胞的ICAM-1及TNFR1 mRNA表达明显上调(P<0.05);白藜芦醇预处理内皮细胞后可明显下调TNFR1 mRNA表达水平(P<0.05),并显著抑制TNF-α诱导的ICAM-1的表达(P<0.05),且抑制作用随着浓度的增加而增强。结论白藜芦醇可能通过抑制TNFR1表达,进而抑制TNF-α刺激引起的炎性因子释放,减轻内皮炎性损伤。     

睾酮对内皮细胞表达细胞因子的影响

目的观察睾酮对人脐静脉内皮细胞表达转化生长因子-β1和血红素加氧酶-1的影响。方法用ELISA法观察睾酮对内皮细胞表达TGF-β1和HO-1的影响。结果睾酮在生理浓度（3.0×10-8mol/L）或接近生理浓度下均能促进内皮细胞表达TGF-β1和HO-1的量。两者的表达呈时间（当t=24h达到最理想的分泌量）、浓度依赖关系。结论生理浓度睾酮或接近生理浓度的睾酮有一定的细胞保护作用。     

海马区注射Aβ1～42对不同年龄大鼠记忆能力和脑内Aβ1～42沉积的影响

目的:探讨不同年龄大鼠海马区注射同等量β-amylod protein 1～42(Aβ1～42)后记忆能力和Aβ1～42沉积情况的变化.方法:SD雄性幼年鼠(月龄1个月)、成年鼠(月龄3个月)、老年鼠(月龄12个月以上)各21只,每个年龄段大鼠分别随机平均分入正常对照组、假手术组和模型组3个组.模型组选择双侧海马区注射Aβ1～42,制备AD模型.假手术组操作同模型组,但注入等体积生理盐水.正常对照组不做任何处理.采用Y型电迷宫和改进的甲醇刚果红染色分别观察大鼠的记忆能力和海马区Aβ1～42沉积情况.结果:与正常对照组比较,模型组成年和老年鼠记忆能力减退,海马部位出现大量的Aβ1～42沉积,并伴有神经元的皱缩或丢失以及胶质细胞的浸润.而幼年鼠未出现记忆障碍,Aβ1～42沉积程度较轻,神经元的形态数目基本正常.结论:不同年龄的大鼠对Aβ1～42的代谢能力不同,这可能与AD发病有关.