白藜芦醇对多发性骨髓瘤细胞的增殖抑制作用及相关机制研究

目的：探讨白藜芦醇(resveratrol,RSV)对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖的影响及其分子机制。方法：不同浓度的RSV作用于MM细胞(MM1.S、RPMI-8226和U266)24-72 h,CCK-8法检测RSV对MM细胞增殖的影响；将RPMI-8226细胞分为RSV、miR-21 mimic、RSV+miR-21 mimic、miR-21 inhibitor和RSV+miR-21 inhibitor组，转染相应的质粒，碘化丙啶单染流式细胞术检测各组细胞的周期分布，Annexin V-FITC/PE-PI双染法观察各组细胞的凋亡情况，q RT-PCR技术检测RSV处理后MM细胞中miR-21的表达水平和各组细胞中的KLF5 miRNA表达水平，Western blot技术检测各组细胞中的KLF5蛋白的表达水平。结果：RSV呈时间-剂量依赖性抑制MM细胞增殖，诱导细胞凋亡发生；RSV处理MM细胞后，亚G₁期细胞增多，G2/M期细胞减少；同时RSV显著下调了MM细胞中miR-21的表达，且给予RSV后抵消了miR-21 mimic对MM细胞中KLF5表达的抑制...     

MiR-21靶向调控KLF5促进多发性骨髓瘤细胞增殖的机制研究

目的：探讨多发性骨髓瘤（MM）细胞中miR-21的表达及其作用机制。方法：从30例MM患者及20例健康者骨髓标本中分选出浆细胞,检测miR-21的表达水平;选取MM1.S、RPMI-8226和U266细胞,用q RT-PCR方法检测miR-21的水平;转染hsa-miR-21 mimics和hsa-miR-21 inhibitor后通过CCK-8和细胞克隆实验检测MM细胞增殖情况;预测miR-21调控的靶基因,通过荧光酶素报告基因实验检测miR-21与KLF5的结合位点;利用Western blot和q RT-PCR方法检测转染hsa-miR-21 mimics和hsa-miR-21 inhibitor后KLF5蛋白的表达水平;合成缺失3′UTR的KLF5质粒转染进入过表达miR-21的RPMI-8226细胞,利用CCK-8和细胞克隆实验检测MM细胞增殖情况。结果：MM患者浆细胞中miR-21表达水平较正常对照组显著升高（P<0.001）;MM1.S、RPMI-8226和U266细胞中miR-21的表达较对照组也显著升高（P<0.05）。转染hsa-miR-21 mimic...     

多发性骨髓瘤中miR-21与SPRY2基因表达的相关性研究

目的：检测多发性骨髓瘤（MM）患者外周血miR-21的表达水平,研究MM中miR-21与SPRY2基因表达的相关性。方法选择30例MM患者、15例意义未明单克隆丙种球蛋白病（MGUS）患者及20例正常对照（NC）的门诊患者,用实时荧光PCR定量检测miR-21和SPRY2表达水平;Western blot检测miR-21和SPRY2在MM细胞系中表达;在荧光显微镜下观察：U266用脂质体转染荧光标记的 miR-21 mimic/inhibitor后miR-21的表达。结果 MM组血清循环miR-21的表达水平较MGUS组和NC组显著增高,差异有统计学意义（P＜0.01）;在miR-21内源性高表达的MM细胞株中,SPRY2明显低表达;反之,明显高表达;荧光标记的 miR-21 mimic/inhibitor,转染效率90%以上,转染mimics细胞miR-21表达量（98.6±14.2）较未处理的U266细胞miR-21表达量（0.82±0.13）升高了120.2倍（差异有显著的统计学意义,P＜0.001）,转染inhibitor细胞miR-21表达量（0.37±0.06）较未处理细胞降低了61.9%（差异有明显的统计学意义,P＜0.05）。结论 miR-21可能是导致SPRY2在MM中表达下调的一个负性调控因子。miR-21与MM 的发生发展和疾病预后有密切关系,可作为判断MM 患者预后不良指标之一。     

miR-590-5p靶向TGF-β1/Smad3通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和侵袭的研究

目的 探讨miR-590-5p通过TGF-β1/Smad3通路调控瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和侵袭的作用。方法 获取瘢痕疙瘩成纤维细胞进行培养采用随机数字表法分组,分为空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p mimic组、miR-590-5p inhibitor组、miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组,其中空白对照组不进行转染,空载体转染组转染空载体、miR-590-5p mimic组转染miR-590-5p mimic、miR-590-5p inhibitor组转染miR-590-5p inhibitor、miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组转染miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1。采用CCK-8试验检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell试验检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测TGF-β1、Smad3蛋白表达。结果 miR-590-5p mimic和siRNA TGF-β1共转染组细胞培养24、48和72 h时细胞增殖活力明显低于空白对照组、空载体转染组、miR-590-5p...     

LncRNA NORAD靶向抑制miR-363-3p对多发性骨髓瘤细胞生物学行为的影响及机制

目的:探索长链非编码RNA NORAD(lncRNA NORAD)对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其与微小RNA-363-3p(miR-363-3p)的靶向关系。方法:RT-qPCR检测健康人成骨细胞h FOB1.19和多发性骨髓瘤细胞U266,LP-1,H929中NORAD和miR-363-3p表达。在U266细胞中转染si-NORAD,或共转染si-NORAD和anti-miR-363-3p,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。star Base软件预测结合双荧光素酶报告实验分析NORAD与miR-363-3p的靶向结合。结果:多发性骨髓瘤细胞系U266,LP-1和H929中NORAD表达明显上调(P0.05),miR-363-3p表达显著下调(P0.05)。沉默NOR A D表达显著降低48,72h的U266细胞活性和c yclin D1,CDK4,Bcl-2蛋白水平(P0.05),明显提高细胞凋亡率和cleaved caspase-3,Ba x蛋白表达量(P0.05)。NOR AD靶向调控miR-363-3p表达。抑制miR-363-3p表达逆转沉默NOR AD表达对U266细胞增殖、cyclin D1,CDK4和Bcl-2表达的抑制作用,以及逆转沉默NORAD表达对细胞凋亡、cleaved caspase-3和Bax蛋白表达的促进作用。结论:Lnc RNANOR AD通过靶向miR-363-3p表达影响多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡。     

miR-1976在帕金森综合征中的作用

目的探讨miR-1976在帕金森综合征(PD)中的作用。方法选取人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,随机将细胞分为四组,空白对照组、模型组、miR-1976抑制剂(inhibitor)转染组和空白转染组。空白对照组常规培养,不做处理,模型组采用1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导SH-SY5Y细胞建立PD细胞模型,miR-1976 inhibitor转染组转染miR-1976 inhibitor质粒,空白转染组转染空白质粒。采用MMT法检测各组细胞增殖,流式细胞仪检测各组细胞凋亡,荧光定量PCR检测自噬相关基因Beclin1、LC3Ⅰ/ⅡmRNA表达,Western blot检测各组Beclin1、LC3Ⅰ/Ⅱ蛋白表达。结果模型组和miR-1976 inhibitor转染组培养24 h、48 h和72 h时OD值明显低于空白对照组和空白转染组(P0.05);模型组和miR-1976 inhibitor转染组细胞凋亡率分别为(14.221±2.816)%和(11.016±2.910)%,明显高于空白对照组和空白转染组(P0.05);模型组和miR-1976 inhibitor转染组Beclin1 mRNA和LC3Ⅰ/ⅡmRNA相对表达明显高于空白对照组和空白转染组(P0.05),而miR-1976相对表达量明显低于空白对照组和空白转染组(P0.05);模型组和miR-1976 inhibitor转染组Beclin1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白相对表达明显高于空白对照组和空白转染组(P0.05)。结论 miR-1976在PD中有重要作用,miR-1976低表达可抑制神经细胞增殖,促进细胞凋亡及自噬。     

miR-373在老年多发性骨髓瘤中的作用机制及其临床意义

目的:探讨miR-373在多发性骨髓瘤中的作用机制及其临床价值。方法:RT-PCR检测多发性骨髓瘤细胞和正常浆细胞中miR-373的表达水平,同时采用细胞增殖实验、细胞周期与凋亡实验、荧光素酶实验和小鼠成瘤实验分析miR-373的生物学功能。结果:RT-PCR检测发现,MM患者血液样品和多发性骨髓瘤细胞系(H929、MM1S和U266)中miR-373的表达水平比正常浆细胞(对照组)明显降低(P0.05)。与对照组相比,转染miR-373的U266和H929细胞增殖受到显著抑制(P0.05);同时转染miR-373的H929细胞周期阻滞在G_0/G_1期并诱导其凋亡(P0.05)。荧光素酶实验发现,miR-373可显著抑制叉头框蛋白M1(FOXM1)的表达(P0.05)。小鼠成瘤实验发现,miR-373的过表达通过降低FOXM1水平明显抑制肿瘤生长(P0.05)。结论:miR-373通过直接靶向FOXM1抑制MM中的肿瘤生长,对治疗MM有重要的临床意义。     

多发性骨髓瘤细胞中P53介导的Ran转录调控的研究

目的:探讨P53是否在骨髓瘤细胞中对ran进行转录调控。方法:应用实时荧光定量PCR检测多发性骨髓瘤细胞系OPM-2、RPMI-8226、U-266、KAS6/1、ANML-6、H-929、MM1.S、MOLP-8中ran转录水平,使用Nutlin-3a培养骨髓瘤细胞株MM1.S 24、48和72 h后检测ran转录水平;蛋白免疫印迹方法检测ran和P53蛋白表达水平;使用不同剂量的表达P53荧光素酶报告基因质粒转染MM1.S细胞后检测ran表达水平。结果:在8株人骨髓瘤细胞株中H-929和MM1.S细胞中ran的转录活性最高,其差异具有统计学意义(P0.05)。Nutlin-3a处理MM1.S细胞后ran转录水平较空白对照组明显下降(P0.05),同时在蛋白表达水平这种变化呈现时间依赖性;P53蛋白表达增多(r=1.00,P=0.06),相应的ran蛋白表达减少(r=-1.00,P=0.04)。表达P53荧光素酶报告基因的质粒转染MM1.S细胞后发现,在质粒增加至25 ng后ran转录水平开始下降(P0.05)。结论:通过多发性骨髓瘤细胞中P53转录调控ran转录水平的实验证明了ran是受p53调控的一个靶基因。     

miR-124-3p靶向ABCA2增强慢性白血病细胞K562-R对伊马替尼的敏感性

目的:探讨miR-124-3p靶向ABCA2对CML细胞株耐药性及细胞活性的影响。方法:过表达miR-124-3p和ABCA2的CML细胞株K562-R及裸鼠皮下移植瘤模型用于本研究。设置K562-R空白对照组、miR-124-3p mimic对照组、ABCA2过表达组和mimic+pc ABCA2组,研究miR-124-3p和ABCA2对K562-R细胞的影响。Western Blot检测体系中增殖、凋亡和自噬相关分子表达;qRT-PCR检测体系中miR-124-3p和ABCA2的表达;荧光素酶系统及生物信息学软件预测miR-124-3p和ABCA2之间靶向关系。CCK-8染色检测细胞增殖,Hoechst染色检测细胞凋亡,免疫组织化学检测细胞凋亡和增殖相关分子。结果:miR-124-3p在K562耐药细胞(K562-R)中低表达,在K562敏感细胞(K562-S)中高表达;ABCA2在K562-R中高表达,在K562-S中低表达(P0.01);生物信息学和荧光素酶报告系统检测显示,miR-124-3p靶向调节ABCA2表达。miR-124-3p过表达能有效抑制K562-R细胞增殖,促进细胞凋亡和自噬发生(P0.01);而ABCA2过表达则促进K562-R细胞增殖,明显抑制凋亡和自噬发生(P0.01);进一步通过裸鼠体内皮下移植瘤模型表明,miR-124-3p可以有效抑制K562-R细胞增殖,促进细胞凋亡和自噬(P0.01)。结论:miR-124-3p可以通过靶向ABCA2来有效抑制白血病耐药细胞株K562-R的增殖,促进细胞凋亡和自噬。     

多发性骨髓瘤患者血浆miR-17-3p表达及其临床意义

目的探讨多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)患者血浆miR-17-3p的表达及其临床意义。方法 90例MM患者为MM组,30例其他血液疾病患者为非MM组,30例体检健康者为对照组;采用实时荧光定量PCR法检测3组血浆miR-17-3p相对表达量,分析MM患者血浆miR-17-3p相对表达量与临床病理特征的关系;以血浆miR-17-3p相对表达量均值3.125为临界值,将MM患者分为高表达(miR-17-3p≥3.125)组43例和低表达(miR-17-3p3.125)组47例,采用Kaplan-Meier生存分析法分析不同miR-17-3p相对表达量患者的预后情况。结果 MM组血浆miR-17-3p相对表达量(3.125±0.710)高于非MM组(1.205±0.353)和对照组(1.146±0.261)(P0.05),非MM组与对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。ISS分期Ⅲ期MM患者血浆miR-17-3p相对表达量(3.707±0.715)高于Ⅱ期(3.079±0.713)和Ⅰ期(2.915±0.708)患者(P0.05),Ⅱ期患者高于Ⅰ期患者(P0.05),不同年龄、性别、DS分期、诊断分型、血清乳酸脱氢酶、血钙及血红蛋白水平患者血浆miR-17-3p相对表达量比较差异均无统计学意义(P0.05)。高表达组患者3年总体生存率(25.6%)低于低表达组(65.9%)(P0.05)。结论 MM患者血浆miR-17-3p表达升高,与ISS分期和患者不良预后有关,有可能成为新的MM肿瘤标志物。     

Circ-CDYL通过miR-223-3p/PHF19轴调节多发性骨髓瘤对硼替佐米的敏感性

目的 探讨环状RNA Circ-CDYL调节多发性骨髓瘤(MM)对硼替佐米(BTZ)的敏感性,以及对miR-223-3p/PHD锌指蛋白19(PHF19)轴的影响。方法 收集盐城市第三人民医院118例MM患者血清标本,其中60例患者未接受任何化疗(BTZ敏感组),58例患者接受BTZ治疗并产生化疗耐药性(BTZ耐药组),比较两组Circ-CDYL及miR-223-3p、PHF19的表达情况。将MM1.R细胞根据细胞转染情况分为C组、sh-Circ-C组、sh-Circ-CDYL组、sh-Circ-CDYL+anti-miR-223-3p组和sh-Circ-CDYL+pcDNA-PHF19组,对5组细胞进行相应转染。采用荧光定量PCR(RT-qPCR)测定Circ-CDYL、miR-223-3p和PHF19 mRNA水平,CCK-8法测定MM1.R细胞活性。采用克隆形成实验和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况,采用免疫印迹法(Western blotting)检测凋亡蛋白[增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki67、剪切化半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶3(C-caspase 3)]及PHF19蛋白的表...     

体外诱导自噬对多发性骨髓瘤细胞增殖的影响

目的 探讨诱导自噬对多发性骨髓瘤(MM)细胞株增殖的影响.方法 在无血清培养条件下诱导MM细胞株U266细胞自噬并分别加入雷帕霉素和3-甲基腺嘌呤(3-MA),观察其细胞增殖,以正常培养条件培养U266细胞、淋巴瘤细胞株Jurkat及无血清培养Jurkat为对照组.采用CCK8法检测细胞的增殖;用流式细胞术检测细胞凋亡;单丹(磺)酰戊二胺(MDC)法检测细胞自噬泡数量;RT-PCR法检测自噬基因mtor、Beclinl表达;Western blot方法分析自噬标志蛋白-微管相关蛋白轻链3Ⅰ/Ⅱ(LC3 Ⅰ/Ⅱ)及溶酶体相关膜蛋白1(LAMP 1)含量的变化.结果 正常培养条件下U266细胞有基础水平的自噬,无血清培养可诱导U266细胞上调自噬水平;雷帕霉素促进无血清培养条件下U266细胞自噬并刺激其增殖能力,至培养96 h无血清培养及雷帕霉素处理U266细胞内自噬水平下降;3-MA具有上调U266细胞自噬和促进增殖作用,但仅维持24 h;正常培养条件下雷帕霉素及3-MA可显著抑制U266细胞增殖;无血清培养24 h后细胞凋亡率[(17.90±1.46)％]高于正常培养细胞[(1.33±0.09)％](P＜0.01);加入雷帕霉素及3-MA可使血清饥饿诱导的细胞凋亡率分别降至(6.23±0.12)％和(6.97±0.03)％(P＜0.01);培养至72 h,各处理组细胞凋亡率趋于一致[(30.37±0.27)％、(30.13±1.93)％和(28.57±2.83)％](P＞0.05);去除雷帕霉素及3-MA后U266细胞凋亡率减低至18.7％和12.6％.结论 MM细胞内存在高于淋巴瘤Jurkat细胞株基础水平的自噬;在常规培养条件下雷帕霉素及3-MA均可下调MM细胞增殖水平;血清饥饿条件下U266细胞可通过上调自噬水平维持生存和增殖;雷帕霉素诱导血清饥饿条件下U266细胞自噬,但是具有自限性;3-MA对U266细胞自噬具有双重作用.     

DOCK1通过AMPK/mTOR通路对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和自噬的调控机制研究

目的 探讨胞质分裂作用因子1(dedicator of cytokinesis 1,DOCK1)在多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）中的表达及其对癌细胞增殖、凋亡和自噬的影响及相关机制。方法 选取MM患者骨髓组织及人MM细胞株U266和RPMI 8266进行研究,采用实时荧光定量PCR(real time-quantitative PCR,RT-qPCR)法检测MM骨髓组织及细胞中DOCK1相对表达;构建敲低DOCK1表达细胞系,采用CCK-8法和流式细胞术检测DOCK1对MM细胞增殖与凋亡的影响;Western blot实验检测细胞增殖相关蛋白（c-Myc,cyclin D1）、凋亡相关蛋白（Bax,Bcl-2）、自噬相关蛋白（LC3-II/LC3-I,P62）及AMPK/mTOR通路相关蛋白的表达水平。结果 LV-DOCK1-shRNA2组的U266和RPMI8266细胞增殖率在24,48和72h均显著低于空白对照组和阴性对照组,差异均有统计学意义（FU266=21.130～100.108,FRPMI8266=35.067～95.677,均P<0.001）...     

miRNA-132、miRNA-125b、miRNA-143和miRNA-145表达对多发性骨髓瘤细胞自噬及凋亡的影响

目的:探讨多发性骨髓瘤细胞miRNA-132、miRNA-125b、miRNA-143和miRNA-145表达与自噬和凋亡的关系。方法:选取人骨髓瘤细胞株U266及正常CD138+浆细胞为研究对象,临床研究对象分为骨髓瘤组45例,健康对照组40例。实时定量PCR测定细胞中miRNA-132、miRNA-125b、miRNA-143和miRNA-145表达水平,Western blot测定自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ,LC3-Ⅰ、P62、Beclin-1)表达量,凋亡相关分子(cleaved-Caspase3、cleaved-Caspase7、BCL-2、BAX)表达量;流式细胞术测定细胞凋亡率。分析miRNA表达水平与临床相关指标包括M蛋白、血红蛋白、β2-MG、乳酸脱氢酶、白蛋白、肌酐、血清钙的相关性。结果:与正常浆细胞对比,骨髓瘤细胞的miRNA-132和miRNA-125b表达显著增加(P 0.05),miRNA-143,miRNA-145表达显著降低(P 0.05);LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ显著增加(P 0.05),Beclin-1表达显著增加(P 0.05),P62表达显著降低(P 0.05);BAX、cleaved-Caspase3、cleaved-Caspase7表达显著降低(P 0.05),BCL-2表达显著增加(P0.05);细胞凋亡率降低(P 0.05)。阳离子脂质体转染miRNA-125b mimic和miRNA-143 inhibitor后,正常浆细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ显著增高(P 0.05),Beclin-1表达显著增高(P 0.05),P62表达也显著增加(P 0.05),细胞凋亡率降低(P 0.05);上述反应体系加入自噬抑制剂3-MA后,细胞凋亡率则无明显改变(P 0.05)。miRNA-132、miRNA-125b、miRNA-143和miRNA-145表达在不同DS与ISS分期组,染色体核型异常组与正常核型组间均有显著性差异(P 0.05)。miRNA-125b和miRNA-143与β2-MG、白蛋白、血红蛋白水平均有显著相关性(P 0.05)。结论:miRNA-132、 miRNA-125b、 miRNA-143和miRNA-145表达与多发性骨髓瘤患者临床特征密切相关,miRNA-125b过表达和miRNA-143表达下调通过上调自噬水平抑制骨髓瘤细胞凋亡。     

MicroRNA-146b-5p对小鼠骨片来源的间充质干细胞成脂分化能力的影响

目的:探讨MicroRNA-146b-5p(miR-146b-5p)对小鼠骨片来源间充质干细胞(MSC)成脂分化能力的影响。方法:从C57BL/6小鼠骨片中分离培养MSC,应用q-PCR检测成脂诱导过程中miR-146b-5p表达量的变化。将miR-146b-5p mimic或inhibitor及其阴性对照转染细胞,应用q-PCR检测转染后细胞中miR-146b-5p的表达量及转染效率;并于转染培养14 d后进行油红染色,应用q-PCR检测成脂分化因子C/EBPα和PPARγ的表达量,Western blot检测PPARγ的表达量。结果:成功分离出小鼠骨片来源的MSC,miR-146b-5p在成脂诱导过程中随诱导天数的增加呈现上升趋势。转染miR-146b-5p mimic可上调miR-146b-5p表达(P0.001),而转染miR-146b-5p inhibitor可显著下调miR-146b-5p表达(P0.01)。培养14 d后油红染色结果表明,转染miR-146b-5p inhibitor可以抑制成脂分化,而转染miR-146b-5p mimic可促进成脂分化。诱导14 d后,与对照组相比,mimic组高表达PPARγ、C/EBPα(P0.01);与诱导组相比,inhibitor组低表达PPARγ、C/EBPα(P0.05)。mimic组PPARγ的表达量升高,而Inhibitor组则相反。结论:miR-146b-5p在小鼠MSC成脂肪分化过程中高表达,并可促进小鼠骨片来源的MSC向脂肪细胞分化。     

多发性骨髓瘤细胞和正常浆细胞miR-373表达水平及其对肿瘤生长的影响

目的分析多发性骨髓瘤细胞和正常浆细胞microRNA-373(miR-373)表达水平及其对肿瘤生长的影响。方法回顾性收集江苏大学附属句容医院收治的36例多发性骨髓瘤患者为病例组,另同期选取30例于该院健康体检者为对照组。采用实时荧光定量PCR法测定病例组细胞与对照组正常浆细胞中miR-373的表达量。通过Lipofectamine-2000将miR-373模拟物(转染miR-373组)或相应的阴性对照(阴性对照组)转染为H929细胞。分析H929细胞中细胞增殖、细胞周期和凋亡及肿瘤生长的情况。结果实时荧光定量PCR法检测结果显示,病例组细胞中miR-373的相对表达量(0. 40±0. 04)较对照组正常浆细胞的水平(1. 02±0. 05)显著下降(P 0. 01)。细胞增殖实验表明,相比阴性对照转染的H929细胞,经转染miR-373模拟物的H929细胞中miR-373表达明显升高(P 0. 01)。细胞周期实验结果发现,相比阴性对照组,转染miR-373组的H929细胞在S期的细胞百分比较低,而在G0/G1期的细胞百分比较高(P 0. 01)。细胞凋亡实验结果发现,相比阴性对照组,转染miR-373组的H929细胞凋亡率明显增高(P 0. 01)。小鼠成瘤实验表明,miR-373的过表达可通过下调叉头框蛋白M1(FOXM1)表达以明显阻滞肿瘤生长(P 0. 01)。结论 miR-373可通过调节FOXM1表达以发挥有效阻滞多发性骨髓瘤肿瘤生长的作用,提示其对多发性骨髓瘤的临床治疗具有重要意义。     

miR-103a-3p对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要：目的〓探讨miR-103a-3p在人肺癌组织中的表达及对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法：收集南通市肿瘤医院52例肺癌患者手术组织标本,qRT-PCR检测肺癌组织及癌旁组织中miR-103a-3p的表达;采用Lipofecta mineTM 3000 将miR-103a-3p mimic、mimic NC、miR-103a-3p inhibitor及inhibitor NC转染至A549细胞中,qRT-PCR检测miR-103a-3p的转染效率;CCK8实验检测其细胞增殖能力;流式细胞术检测其细胞凋亡能力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力。 结果：miR-103a-3p在肺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织（p＜0.01）;qRT-PCR结果显示,转染miR-103a-3p mimic组细胞中miR-103a-3p的表达水平明显高于mimic NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制;而转染miR-103a-3p inhibitor 组细胞中miR-103a-3p的表达水平低于inhibitor NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力增强;但细胞凋亡在4组中变化均不明显。 结论：miR-103a-3p在肺癌组织中低表达,miR-103a-3p能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-181a靶向RASSF1A促进多发性骨髓瘤U266细胞增殖、侵袭

目的探讨miR-181a靶向Ras相关区域家族1(RASSF1A)促进多发性骨髓瘤U266细胞增殖、侵袭的作用。方法收集40例多发性骨髓瘤患者骨髓组织及50例受试者的正常骨髓组织标本;培养多发性骨髓瘤U266细胞,并分为NC mimic组、miR-181a mimic组、NC inhibitor组、miR-181a inhibitor组。采用MTS法检测细胞增殖活力;Transwell试验检测细胞侵袭能力;实时荧光定量PCR检测各组miR-181a的表达水平;western blot检测RASSF1A、cyclinD1、RhoA蛋白的表达水平;荧光素酶报告试验验证miR-181a靶向RASSF1A 3′非翻译区(UTR)。结果实时荧光定量PCR结果显示,多发性骨髓瘤组织中miR-181a的表达量明显高于正常骨髓组织(P均<0.05);western blot检测结果显示,多发性骨髓瘤组织中cyclinD1、RhoA蛋白的表达量明显高于正常骨髓组织(P均<0.05),而RASSF1A蛋白的表达量明显低于正常骨髓组织(P<0.05);western blot检测结果还显示,miR-181a mimic组cyclinD1、RhoA蛋白的表达量明显高于NC mimic组(P均<0.05),而miR-181a inhibitor组cyclinD1、RhoA的表达量明显低于NC inhibitor组(0.32±0.07 vs 0.71±0.12,0.39±0.06 vs 0.66±0.10,P均<0.05);Transwell试验结果表明,miR-181a mimic组侵袭细胞数(个)明显高于NC mimic组(38.59±7.41 vs 10.29±2.12,P<0.05),而miR-181a inhibitor组侵袭细胞数(个)明显少于NC inhibitor组(7.28±1.24 vs 11.41±2.76,P<0.05);荧光素酶报告试验结果表明,miR-181a mimic组RASSF1A的表达量及RASSF1A 3′UTR荧光素酶报告基因的荧光活力均明显低于NC mimic组(0.81±0.15 vs 1.54±0.26,0.173±0.035 vs 0.291±0.062,P均<0.05),而miR-181a inhibitor组RASSF1A的表达量及RASSF1A 3′UTR荧光素酶报告基因的荧光活力明显高于NC inhibitor组(1.83±0.31 vs 1.25±0.21,0.399±0.067 vs 0.273±0.057,P均<0.05)。结论miR-181a能够促进多发性骨髓瘤U266细胞的增殖、侵袭,并靶向抑制RASSF1A的表达。     

miR-153-3p调控神经突的生长

目的探讨miR-153-3p在大、小鼠神经突生长中的作用。方法对数生长期C57BL/6小鼠N2A细胞和Rattus norvegicus大鼠PC12细胞,随机分为miR-153-3p过表达组(转染miR-153-3p过表达试剂miR-153-3p mimic)、miR-153-3p抑制组(转染miR-153-3p表达抑制剂miR-153-3p inhibitor)、过表达对照组(转染miR-153-3p mimic空白对照试剂miR-153-3p mimic NC)、抑制剂对照组(转染miR-153-3p inhibitor空白对照试剂miR-153-3p inhibitor NC)。转染48 h,采用实时荧光定量PCR法检测4组细胞miR-153-3p mRNA相对表达量,免疫荧光法检测神经突生长情况。结果 miR-153-3p过表达组N2A细胞、PC12细胞miR-153-3p mRNA相对表达量(28.98±1.63、19.67±0.88)均高于miR-153-3p抑制组(0.94±0.19、0.89±0.05)、过表达对照组(0.99±0.08、1.00±0.09)、抑制剂对照组(1.00±0.04、1.00±0.14)(P0.05),miR-153-3p抑制组、过表达对照组、抑制剂对照组比较差异均无统计学意义(P0.05);miR-153-3p过表达组N2A细胞、PC12细胞神经突总长度[(31.13±3.85)、(38.08±2.12)μm]和最长神经轴突长度[(18.04±2.58)、17.48±1.75)μm]均较miR-153-3p抑制组[N2A细胞:(54.53±1.83)、(31.74±2.36)μm;PC12细胞:(64.46±12.85)、(29.46±7.36)μm]、过表达对照组[N2A细胞:(42.53±6.29)、(24.99±3.47)μm;PC12细胞:(53.58±4.88)、(25.31±3.66)μm]、抑制剂对照组[N2A细胞:(41.33±2.77)、(24.57±3.86)μm;PC12细胞:(44.44±7.59)、(23.04±4.31)μm]短(P0.05),且过表达对照组、抑制剂对照组PC12细胞、N2A细胞神经突总长度和最长神经轴突长度较miR-153-3p抑制组短(P0.05),过表达对照组、抑制剂对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论miR-153-3p可抑制小鼠N2A细胞、大鼠PC12细胞神经突生长。     

多发性骨髓瘤患者骨髓瘤细胞中miRNA-19a的表达水平及其对骨髓瘤细胞相关特性的影响

目的:检测mi R-19a在人多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞株LP-1和U266中的表达水平,研究mi R-19a对多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266细胞增殖、侵袭、凋亡的影响。方法:应用RT-PCR检测mi R-19a在多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266中的表达水平;CCK8检测mi R-19a对多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266增殖的影响;Transwell方法检测mi R-19a对多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266细胞侵袭影响;流式细胞术检测mi R-19a对多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266细胞凋亡的影响。结果:mi R-19a在多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266中表达;mi R-19a促进多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266的增殖,促进多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266的侵袭,抑制多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266的凋亡。结论:mi R-19a在多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266中表达明显增加,且促进骨髓瘤细胞的增殖、侵袭及抑制骨髓瘤细胞的凋亡。