高糖暴露对小鼠脑微血管内皮细胞通透性的影响

【目的】探讨高糖暴露对脑微血管内皮细胞通透性的影响。【方法】选取小鼠脑微血管内皮细胞系(bEnd.3)作为研究模型,检测跨内皮细胞电阻值(TEER)、碱性磷酸酶(ALP)及γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)的活性,对细胞模型的血脑屏障特征进行鉴定;再通过细胞形态学、细胞活力、细胞内乳酸脱氢酶活性及ZO-1、Occludin基因相对表达量的变化评价高糖暴露对脑微血管内皮细胞通透性的影响。【结果】细胞的TEER值、ALP及γ-GT的活性随细胞培养时间的增加而逐渐升高;细胞形态学结果显示,高糖作用下细胞数目明显减少,贴壁不稳;细胞活力实验显示,经葡萄糖暴露处理后,受试细胞活力呈剂量和时间依赖性降低;随着葡萄糖暴露浓度的增高,细胞内乳酸脱氢酶活性逐渐增高,各剂量组差异均有统计学意义(P<0.05)。此外,对紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的mRNA表达水平进行检测发现,高糖暴露可抑制ZO-1、Occludin基因的表达,且表达水平呈剂量依赖性降低。【结论】体外培养的bEnd.3细胞模型具有血脑屏障的特征,高糖暴露能够抑制紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达,该结果可能与脑微血管内皮细胞通透性的改变有关。     

PKCα/β通过调控紧密连接蛋白参与百草枯致脑微血管内皮细胞的通透性异常

目的 探讨经典型蛋白激酶C(cPKC:PKC α、PKC β)是否通过调控紧密连接蛋白(tight Junction,TJ)的表达,引起百草枯(paraquat,PQ)致小鼠脑微血管内皮细胞通透性的异常。 方法 体外培养小鼠脑组织来源的血管内皮细胞株(bEnd.3)作为单层血脑屏障模型,通过Millicell-ERS细胞电阻仪测定跨内皮细胞电阻(TEER)、荧光素钠(Na-FLU)通透性测定以评价体外血脑屏障模型的功能。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞相对存活率:终浓度0、50、100、200、300 μmol/L PQ处理细胞24 h,确定剂量-效应关系;终浓度200 μmol/L PQ分别处理细胞6、12、24、48、72 h,确定时间-效应关系。终浓度0、100、200、300 μmol/L PQ处理细胞24 h,免疫荧光(IF)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别测定紧密连接蛋白(ZO-1、Occludin、Claudin-5)和基因的表达水平,免疫印迹法(Western blot)测定PKC α、PKC β、p-PKC α、p-PKC β蛋白表达水平;经典PKC抑制剂(Go 6983)1 μmol/L预处理细胞1 h后,200 μmol/L PQ染毒细胞24 h,Western blot法测定ZO-1、Occludin、Claudin-5及p-PKC α、p-PKC β蛋白表达水平。 结果 bEnd. 3细胞的TEER随培养时间延长逐渐升高,于第6 d达到峰值[(114.3±6.9)Ω· cm^2],荧光素钠通透性检测显示,细胞通透性随培养时间延长逐渐降低,于第6天降至(1.7±0.2)cm/min,说明细胞屏障功能良好。与对照组比较,100、200、300 μmol/L PQ染毒组细胞存活率明显降低,200 μmol/L PQ染毒细胞12、24、48、72 h,细胞存活率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),呈剂量依赖和时间依赖关系。IF和qRT-PCR显示,随着PQ浓度的升高,ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白和基因表达量明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot法检测显示,与对照组比较,PQ染毒组的p-PKC α、p-PKC β蛋白表达水平明显升高,ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白表达量明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);Go 6983干预组的ZO-1、Occludin、Claudin-5蛋白表达水平较染毒组明显升高,p-PKC α、p-PKC β蛋白表达水平明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论 PQ通过激活cPKC(PKC α、PKC β)导致紧密连接蛋白/基因表达降低,引起小鼠脑微血管内皮细胞通透性升高。     

波动性高糖对内皮细胞自噬基因表达的影响

【目的】探讨波动性高糖对内皮细胞自噬的影响及其可能的机制。【方法】体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)用于实验。实验分正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)和葡萄糖交替处理组(5.5/28 mmol/L葡萄糖)。其中葡萄糖交替处理模拟人血糖波动状态,方案是前12 h内每隔4 h交替培养,后12 h内葡萄糖维持5.5 mmol/L水平,按此循环,共培养48 h。用CCK-8检测细胞活性,酶标仪检测氧化应激相关指标,实时荧光定量PCR检测自噬相关基因的表达情况。【结果】与正常对照组相比,葡萄糖交替处理组降低HUVEC细胞活性(P<0.01);降低细胞内抗氧化酶活性,增加丙二醛和8-羟基脱氧鸟苷的含量(P<0.01);增加自噬相关基因Atg4和Atg5的表达(P<0.001)。【结论】波动性高糖可能是先通过诱导HUVEC产生氧化应激,进而使HUVEC产生自噬,最终降低细胞活性。     

蓬子菜总黄酮调节 miR - 205 保护心肌微血管内皮细胞损伤的机制研究

目的 研究蓬子菜总黄酮（FGVL）对缺氧/复氧（H/R）诱导的心肌微血管内皮细胞损伤的影响及机制。方法 实验分为对照（Con）组、缺氧/复氧组、蓬子菜总黄酮低、中、高浓度（H/R + FGVL - L、M、H）组、H/R + miR - NC组、H/R + miR - 205组、H/R + FGVL + anti - miR - 205组。试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）水平、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性；流式细胞术检测细胞凋亡；蛋白质印迹（western blot）法检测蛋白表达；实时荧光定量PCR（RT - qPCR）检测miR - 205表达水平。结果 低、中、高浓度蓬子菜总黄酮处理后，缺氧/复氧诱导的心肌微血管内皮细胞中LDH水平降低，MDA含量降低，SOD活性升高（P＜0.05）；细胞凋亡率降低，Bcl - 2表达水平升高，Bax表达水平降低，miR - 205表达水平升高，且呈浓度依赖性（P＜0.05）。miR - 205过表达可抑制缺氧/复氧诱导的心肌微血管内皮细胞氧化应激和凋亡。抑制miR - 205表达逆转了蓬子菜总黄酮对缺氧/复氧诱导的心肌微血管内皮细胞损伤的作用。结论 蓬子菜总黄酮可能通过上调miR - 205表达保护缺氧/复氧诱导的心肌微血管内皮细胞损伤。     

红景天苷对氯气致大鼠肺损伤的保护作用

目的 观察红景天苷对氯气损伤大鼠肺通透性的干预作用,探讨其改善肺损伤的可能作用机制.方法 雄性SD大鼠24只,随机分为4组,分别为阴性对照组,氯气吸入损伤组,单纯红景天苷对照组及红景天苷干预组.常规HE染色观察染毒大鼠肺组织病理损伤;Lowry's法分别测定血浆与肺泡灌洗液中蛋白计算大鼠的肺通透指数;测定大鼠动脉血气计算肺动脉氧合指数;Western blotting检测肺组织中缺氧诱导因子α(HIF-1α)、内皮细胞生长因子(VEGF)、紧密连接蛋白Occludin与ZO-1的变化.结果 损伤后3h,可见肺泡结构破坏,肺泡腔内出现大量红细胞,肺间隔可见轻度炎细胞浸润;氯气可使大鼠肺通透指数与氧合指数显著下降(P＜0.05);红景天干预组可显著下降肺组织中因损伤升高的HIF-1α、VEGF、Occludin及ZO-1蛋白含量.结论 氯气这种窒息性毒剂在亚致死剂量吸入中毒后,3h可出现肺通透性增加和肺组织缺氧,这种作用与激活肺组织中HIF-1α/VEGF通道,进而影响维持肺通透性的紧密连接蛋白Occludin与ZO-1的表达有关.红景天苷干预可改善相关因子的异常表达,有效改善氯气引起的急性肺损伤.     

迷迭香酸拮抗H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡及作用机制

目的研究迷迭香酸(Rosmarinic acid,RA)对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞株ECV304凋亡的抑制作用及其机制。方法以H2O2诱导ECV304细胞凋亡为模型,用MTT比色法检测RA对细胞活性的影响;流式细胞仪检测法和Tunel法检测RA对细胞凋亡率的影响;用Western-blotting检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白的表达情况和第24hcaspase-3活性。结果用0.5mmol/LH2O2孵育细胞24h细胞凋亡明显。不同浓度的RA(1、3、10μmol/L)预处理细胞后,呈浓度依赖性的增加内皮细胞活性,降低细胞凋亡率,并且Bcl-2蛋白表达呈浓度依赖性的上调,而Bax蛋白的表达和caspase-3蛋白活性呈浓度依赖性下降。结论迷迭香酸可以拮抗H2O2诱导的内皮细胞凋亡,其抑制内皮细胞凋亡与激活Bcl-2活性有关。     

IRE1通路在高碘诱导甲状腺细胞凋亡中的作用

目的 观察IRE1通路在高碘诱导甲状腺细胞凋亡中的特征,进一步分析高碘诱导甲状腺细胞凋亡的作用机制.方法 用0(对照)、1、10、50 mmol/L的碘化钾(KI)染毒体外培养的Nthy-ori 3-1细胞,24h后采用流式细胞术检测Nthy-ori 3-1细胞凋亡率,用荧光定量PCR及Western blot检测葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、肌醇需求酶-1(IRE1)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)基因蛋白的表达水平.结果 与0(对照)、l、10 mmol/L KI染毒组相比,50 mmol/L KI染毒组细胞凋亡率升高(P＜0.05);与对照组相比,各染毒组GRP78、IRE1 mRNA表达水平均无统计学差异(P＞0.05),CHOP mRNA表达水平升高(P＜0.05),GRP78、IRE1和CHOP蛋白表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 内质网应激中IRE1通路可能没有参与高碘诱导的Nthy-ori 3-1细胞凋亡过程.     

阿魏酸钠对ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及p53蛋白表达的影响

[目的]探讨阿魏酸钠(SF)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞株(HUVECCRL1730)凋亡的抑制作用及可能机制.[方法]体外ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞损伤,用阿魏酸钠进行干预.采用四甲基偶氮唑盐法检测细胞存活率;Hoechst33258细胞核荧光染色法观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡率:Western-blot检测内皮细胞p53蛋白表达.[结果]ox-LDL可明显抑制人脐静脉内皮细胞生长和增殖,诱导细胞发生凋亡,上调p53蛋白表达水平;阿魏酸钠干预后细胞存活率明显上升(P<0.05),细胞凋亡率明显下降(P<0.05),p53蛋白表达水平明显下调(P<0.05).[结论]ox-LDL可通过上调p53蛋白表达诱导人脐静脉内皮细胞凋亡,阿魏酸钠可通过下调p53蛋白表达抑制内皮细胞凋亡.     

柚皮素对脂多糖诱导的脓毒症小鼠肠粘膜损伤保护作用研究

目的:研究柚皮素(Nar)对脂多糖(LPS)诱导的脓毒症小鼠肠道粘膜损伤的保护作用。方法:将雄性25～30 g ICR小鼠随机分为对照组(control组,腹腔注射等量的PBS)、脓毒症模型组(LPS组,腹腔注射LPS)和柚皮素治疗组(LPS+Nar组),每组12只,造模后24 h取材进行肠道组织病理检测及评分;免疫荧光法检测细胞凋亡、肠道上皮紧密连接蛋白闭锁小带蛋白-1(ZO-1)和Occludin表达;免疫组织化学方法检测细胞凋亡关键蛋白Caspase3表达。结果:与脓毒症模型组相比,Nar治疗组小鼠肠道病理损伤显著减轻。脓毒症模型组小鼠肠道上皮细胞凋亡显著增加,Nar治疗后肠道上皮细胞凋亡减轻,Caspase3表达下降,差别有统计学意义(P 0.01)。荧光染色检测显示,与对照组相比,脓毒症模型组小鼠肠道Occludin表达显著下降,Nar干预组较脓毒症模型组表达上升(P 0.05);脓毒症模型组小鼠肠道ZO-1表达显著下降,Nar干预组较脓毒症组表达上升(P 0.05)。结论:Nar对LPS诱导的脓毒症小鼠肠道粘膜具有一定的保护作用,有望为保护脓毒症肠粘膜屏障功能提供新的治疗方法。     

碘过量对胰岛β细胞功能的影响及机制

目的探索碘过量暴露对小鼠胰岛素瘤细胞系β-TC-6胰岛素分泌功能影响及机制。方法β-TC-6细胞在对数生长期暴露于0、0.01、0.1、1、10和100 mmol/L碘24 h,采用四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率。细胞经0.01、1、和100 mmol/L碘干预24 h后,用5.6 mmol/L葡萄糖刺激细胞1 h,酶联免疫分析(ELISA)法检测上清胰岛素含量。蛋白印迹法(Western blot)检测GRP78、IRE1α、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果与对照组比较,1~100 mmol/L碘处理组细胞存活率显著降低(P<0.05);1 mmol/L组细胞胰岛素分泌量显著增加(P<0.05),100 mmol/L组细胞胰岛素分泌量显著下降(P<0.05),1和10 mmol/L组GRP78、IRE1α和Bax蛋白表达量显著增加(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。5.6 mmol/L葡萄糖+0 mmol/L碘组、5.6 mmol/L葡萄糖+0.01 mmol/L碘组和5.6 mmol/L葡萄糖+1 mmol/L碘组分别与相应对照组比较,细胞胰岛素分泌量组间差异显著(P<0.05)。结论过量碘可降低β-TC-6细胞胰岛素分泌量,损害胰岛素分泌功能,其机制很可能与内质网应激和Bcl-2/Bax蛋白表达比例失衡密切相关。     

北京石景山区疾病死因监测

通过对石景山区１９８４～１９９３年死亡资料分析，提示１０年中全区总死亡率为４０１．３５／１０万。心脑血管病和恶性肿瘤是主要死因，位居前三位。占总死因的５９．０６％     

六种鳞翅目昆虫的食用营养成分分析

目的：分析６种鳞翅目昆虫的蛋白质含量和蛋白氨基酸的组成。结果：６种昆虫均含有较丰富的蛋白质，除亚洲玉米螟、棉红铃虫和米蛾的幼虫以外，其余的蛋白质含量均在４１％以上，最高的达７５．２％。脂肪的含量变化较大，菜粉蝶、桑蚕的含量在８．５２％～１５．６７％之间，其余的在１９．３５％～４９．４８％之间。氨基酸含量为２５％～７１％；必需氨基酸占总氨基酸含量的３２．５０％～４９．７６％，除５龄桑蚕外，其余的种类均在４０％以上。６种昆虫的第一限制性氨基酸为含硫氨基酸，即蛋氨酸和胱氨酸，其氨基酸分（ＡＡＳ）在３１～６６之间。桑蚕、菜粉蝶、亚洲玉米螟、米蛾等幼虫的第二限制性氨基酸为亮氨酸。棉红铃虫则无第二限制性氨基酸。６种昆虫均含有一定的微量元素和矿物质，其中桑蚕含有较高的钙     

麻疹发病年龄与免疫接种探讨

[目的]针对2008年初常州市麻疹流行情况及发病年龄进行分析,根据发病年龄变化的原因,对初免月龄及再免问题进行探讨. [方法]选择2008年1月1日～5月31日所有在感染科住院的麻疹患者,按年龄进行分组,对不同年龄发病情况和免疫接种状况进行分析. [结果]麻疹发病年龄呈现两极分化,小婴儿和成人发病率明显上升.[结论]提前初免,坚持原有再免,加强二次强化免疫及婚前再免,以降低麻疹发病率.     

子宫腺肌症228例的临床分析

目的探讨子宫腺肌症的发病因素与诊治方法。方法对228例子宫腺肌症临床资料进行回顾性分析。结果人流史占57%,妊娠3次以上占67.5%。 B超诊断率42.5%。对于简单的子宫腺肌症,腹腔镜手术的术中出血量和术后住院天数小于开腹手术,两者有显著性差异。结论发病与多次妊娠,宫腔操作及雌激素有关。目前仍需通过病史,临床症状体征结合辅助检查如B超或阴道B超进行诊断。对于简单的子宫腺肌症,腹腔镜手术疗效好。     

唐山市社区老年人生命质量研究

[目的]利用SF-36量表分析唐山市社区老年人生命质量状况,探讨影响生命质量的因素,为今后制定和改善老年人的健康保健措施提供科学依据。[方法]采用整群随机抽样的方法,在唐山市区随机抽取4个街道办事处,每个街道办事处随机抽取3个居委会,对居住满30年的60岁及以上老年人登记造册,每个居委会随机抽取20～40名老年人,共抽取370人进行面对面访谈,调查生命质量及影响因素,利用t检验、方差分析和多元线性回归方法进行统计分析。[结果]在影响生命质量的诸多因素中,年龄、文化程度、个人收入、生活来源、生活事件、心理及健康状况等对生命质量的影响有统计学意义。[结论]一些人口社会学特征影响老年人的生命质量,因此,家庭和社会应该更多地关注老年人的生活环境、医疗条件及心理卫生,提高老年人的健康水平,并且从影响生命质量的因素出发制订老年卫生保健政策,有针对性、有重点地开展社区卫生保健项目,以促进老年人生命质量的提高。     

某市性病流行特征及数学模型在发病趋势中的应用

目的：探讨广州市近5年性病疫情流行特征，为政府部门制订预防控制措施提供科学依据。方法：对近5年性病疫情报告资料进行流行病学分析，并对近5年性病报告发病率进行曲线拟合，运用线性模型预测未来3年广州市性病发病率。结果：广州市近五年性病报告发病率逐年下降，但AIDS／HIV、胎传梅毒及三期梅毒发病数及发病率呈上升趋势；性病人群中老年患者人数增加。拟合的4种数学模型均有统计学意义，其中以直线模型为佳。经预测，未来3年性病发病率仍保持下降势态。结论：根据近几年性病流行特征及未来几年发病趋势，该市应及时调整性病工作防治策略及控制工作重点。     

重庆市消除碘缺乏病阶段目标评估

目的：评估考核各级政府和相关部门是否建立了可持续消除碘缺乏病的工作机制,掌握防治工作进程,为制定防治策略提供科学依据。方法：采用抽样问卷调查,以区县为单位自评,在自评基础上市级抽查。采取核实资料的方法对组织领导、碘盐管理、健康教育三项指标进行综合评分。结果：自评三项综合指标评分40个区县均在85分以上;2个碘盐生产厂合格率均达90％以上;全市36个批发企业合格率＞90％者39个区县,占97．5％;居民户合格率＞90％者35个区县,占87．5％;尿碘中位数均＞100μg/L;儿童甲状腺肿大率＜10％者11个区县,占27．5％,10％－19．9％者27个,占67．5％,＞20％者2个,占5％。市级抽查20个区县,综合评分在85分以上者19个;碘盐生产厂合格率均在90％以上,20个区县有19个批发企业,合格率＞90％者18个占94．74％,零售单位经均＞90％,居民户合格率＞90％者18个,占90％,尿碘中位数均＞100μg/L;儿童甲肿率无＜10％的区县,10％－19．9％者19个,＞20个者1个。结论：对照消除磺缺乏病阶段目标标准判断,无实现消除碘缺乏病阶段目标的区县,实现基本消除目标的有17个区县,未实现阶段目标者23个区县。     

抗生素应用对葡萄球菌耐药性的影响

目的了解儿科抗生素的应用对葡萄球菌耐药性的影响。方法对呼吸系统感染患儿葡萄球菌的检出率及耐药性进行调查研究,分析未应用抗生素及应用抗生素两组葡萄球菌的检出率及耐药性是否存在差异。结果两组菌株葡萄球菌、MRSA与MRCNS的分离率无显著性差异(p>0.05)。两组菌株青霉素的耐药率为93.10%和92.50%,对耐青霉素酶的苯唑西林的耐药率分别为100%和92.50%,而对AMP/SBT的耐药率为6.90%和25.00%,敏感率为72.41%和50.00%。结论两组葡萄球菌对青霉素和苯唑西林表现高度耐药,而对AMP/SBT敏感性较高,因此青霉素和苯唑西林单独应用对葡萄球菌引起的感染失去治疗意义,必要时可根据联合药敏试验结果与其他抗生素联用,AMP/SBT抗葡萄球菌作用肯定,可广泛用于儿科葡萄球菌感染性疾病。     

宜宾市职业人群OGTT结果分析

[目的]了解某市体检人群的血糖代谢状况,探讨糖代谢异常和耱尿病的发生率.[方法]体检人群中符合条件的参加口服葡萄糖耐量试验(OGTT),在测OGTT(0 min)的同时作TG,CHO,HDL-C测量,了解该人群的糖代谢情况以及糖尿病和糖调节受损(IGR)的血脂代谢情况.[结果]在参加OGTT试验的1 033例人群中,符合单纯空腹高血糖型糖尿病(IFH)和单纯餐后高血糖型糖尿病(IPH)诊断的共84例,占8.13%,糖调节受损(IGR)184例,占全部人群的比例为17.81%;HDL-C在统计的各组中其结果与糖耐量正常(NGT)组之间的差异有统计学意义(P＜0.001),而TG除IPH组外、CHO除IFH/IPH外其结果与NGT组之间的差异有统计学意义(P＜0.001).[结论]该市成人DM人群中,IFH人群比IPH人群的比例高,且发病年龄更早;TG,CHO,HDL-C在DM组和IGR组均较NGT组有显著性差异,提示DM和IGR者多合并血脂紊乱,具有高度发生心血管疾病的危险性.     

甘肃省居民主要死因潜在减寿年数和减寿率的分析

本文运用ＰＹＬＬ指标，对蒜处１９８６￣１９８８年居民死因回顾调查资料进行分析，前５位死因依次为意外死亡、恶性肿瘤、传染病、呼吸系疾病、循环系疾病、寿命损失男性高于女性，以婴幼儿及中青年为甚。胃癌的减寿年数，减寿率明显高于肝癌、肺癌等，是造成居民“早死”的主要癌症。为减少人口寿命损失，应加强安全教育，建立健康的人生观，减少意外事故的发生，开展恶性肿瘤等慢性病的知识普及和防治工作，搞好传染病的监测、控