胚胎源性干细胞分化研究的现状

目前，对于胚胎源性干细胞的分化研究已成为当今医学界研究的热点，但其分化的分子机制和定向分化的方法一直是人们需要解决的难点问题，近年来无论在分子机制研究还是在定向诱导分化研究方面都有了长足进展。将这三种胚胎源性干细胞从其分化机制及定向分化潜能等方面结合国内外研究进展进行综述。     

人胚胎生殖干细胞的分离和体外培养

目的：体外培养人胚胎生殖干细胞(EG),在不添加细胞因子的培养条件下,观察细胞生长情况。方法：取5～10周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜,进行组织块培养,采用组织化学及免疫细胞化学技术对培养的细胞进行鉴定。结果：培养4d后,在成纤维细胞的上面出现EG细胞集落;培养2周后,显示细胞呈圆形,胞质染成深蓝色;细胞染色体均为正常的二倍体核型;碱性磷酸酶活性强阳性;并检测到SSEA-1。结论：体外培养人胚胎生殖腺嵴,利用源于自身胚胎组织的成纤维细胞作为饲养层,可观察到EG细胞集落的形成;培养的细胞初步鉴定为人胚胎干细胞。     

人类胚胎生殖细胞体外分化为心肌细胞的研究

胚胎生殖（EG）细胞是来源于胚胎原始生殖细胞（PGCs）的多潜能干细胞。采用无饲养层细胞、无细胞因子等的基础培养液（DMEM＋20％NBS＋0．1mM 2Me）培养EG细胞，部分在基础培养液添加10μmol／LRA＋0．75％DMSO或10μmol／L 5-氮胞苷（5-AZA）诱导人类EG细胞向心肌细胞分化，以检测其是否具有向心肌细胞自发分化的能力。9例（8．49％，9／106）胎儿EG细胞在体外分化得到20个节律性心脏跳动样细胞团，其搏动节律为20～120次／min，体外维持节律性搏动最短2d，最长至15d，呈PAS，Myoglobin，α-actin阳性；对K^＋、Ca^＋、肾上腺素等具有与在体心脏相似的反应性；透射电镜观察具有心肌细胞样结构。添加DMSO和RA或5-AZA诱导未得到跳动样心肌细胞，但可提高心肌α-actin免疫组织化学染色阳性率；表明人类胚胎生殖细胞具有向心肌细胞分化的潜能。     

叙利亚地鼠原始生殖细胞体外培养方法的初步研究

为建立叙利亚地鼠原始生殖细胞的体外培养方法．在体外无菌分离孕龄10．5d的叙利亚地鼠胚胎的生殖嵴，采用酶机械分离方法获取原始生殖细胞，在条件培养基中培养于饲养层细胞上，然后用酶组织化学染色方法鉴定碱性磷酸酶（ALP）的活性。去除分化抑制因素并诱导原始生殖细胞体外分化后．观察拟胚体和分化细胞的产生。实验结果显示孕龄10．5d的地鼠胚胎生殖嵴．用酶机械分离方法能成功地分离出具有发育多能性的原始生殖细胞，ALP染色鉴定呈强阳性，体外诱导分化后可观察到3种胚层来源的细胞。结果提示该细胞体外培养体系的建立，为生物医学工程学提供了一种新的细胞来源。     

人胚胎干细胞体外培养并分化为心肌细胞

目的 :体外培养并鉴定人胚胎干细胞 (EG细胞 ) ,在不添加细胞因子的条件下 ,观察细胞集落分化情况。方法 :取 4～ 6周人胚胎生殖嵴、肠背系膜和中肾嵴 ,进行组织块培养 ,利用组织化学和免疫组织化学技术对培养的细胞进行鉴定。结果 :培养 7～ 8小时 ,在组织块周围出现成纤维细胞 ;5～ 7天后 ,在成纤维细胞上出现EG细胞集落 ,集落内细胞表达阶段特异性胚胎表面抗原SSEA 1和SSEA 3,并表达碱性磷酸酶 (ALP)活性 ;培养 1 8天后 ,有6个集落分化为有节律跳动的心肌细胞 ,这些细胞集落在继续培养 1 5天后 ,仍能有节律收缩。此时集落内细胞ALP表达呈阴性 ,但仍有少量细胞表达SSEA 1和SSEA 3。结论 :体外培养人胚生殖嵴、肠背系膜和中肾嵴组织块 ,以内源性的成纤维细胞作为饲养层 ,可以分离得到EG细胞集落 ,一些EG细胞集落可以自发地分化成心肌细胞。     

胚胎源性干细胞分化研究的现状

目前,对于胚胎源性干细胞的分化研究已成为当今医学界研究的热点,但其分化的分子机制和定向分化的方法一直是人们需要解决的难点问题,近年来无论在分子机制研究还是在定向诱导分化研究方面都有了长足进展。将这三种胚胎源性干细胞从其分化机制及定向分化潜能等方面结合国内外研究进展进行综述。     

胚胎干细胞向生殖细胞分化的研究进展

近年来,人们探索如何在体外诱导胚胎干细胞获得配子,以了解性别决定的基因调控和环境影响.这些研究都是用胚胎干细胞（embryonic stem cell,ES）建立1个类原始生殖细胞（primordial germ cell-like cells）的细胞群体,然后移植到睾丸或继续培养从而获得雄性或雌性配子.原始生殖细胞的迁移和向生殖干细胞的分化依赖于自身基因表达以及与周围细胞的相互作用.本文将对原始生殖细胞分化为雄性生殖细胞（有少许为雌性生殖细胞）的关键环节、原始生殖细胞和生殖干细胞分化过程中的标志物做一综述.     

胚胎源性干细胞特性及组织工程应用前景

种子细胞来源不足是目前限制组织工程发展的瓶颈问题,而免疫排斥则是限制器官和组织移植成功的一个重要原因。胚胎干细胞的多向分化潜能和无限扩增能力,结合细胞核移植技术使胚胎源性干细胞有希望同时解决这两个难题。本文综述了几种胚胎来源干细胞以及它们的生长特性、表面标志和体外诱导分化,并对其组织工程应用前景进行展望。     

人原始生殖细胞的研究现状

迄今为止干细胞有三种生殖细胞来源:(一)胚胎生殖细胞(EGs):来自原始生殖细胞(PGC);(二)胚胎癌性细胞(EGCs):可由成人睾丸肿瘤得到;(三)多能生殖干细胞(GSCs):已由小鼠精原干细胞的培养得到[1]。PGC在体外分离培养,建系成功后改称为胚胎生殖细胞。类胚体实验表明,EG细胞可分化形成包括所有3个胚层的组织细胞,证明其具有多能性,与胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)具有相似的多向分化潜力,因此ES细胞在发育生物学基础研究、动物胚胎工程和临床医学上具有重要的作用和诱人的前景。人EG细胞的研究对生命科学的发展有重要意义。…     

胚胎源性干细胞特性及组织工程应用前景

种子细胞来源不足是目前限制组织工程发展的瓶颈问题，而免疫排斥则是限制器官和组织移植成功的一个重要原因。胚胎干细胞的多向分化潜能和无限扩增能力，结合细胞核移植技术使胚胎源性干细胞有希望同时解决这两个难题。本综述了几种胚胎来源干细胞以及它们的生长特性、表面标志和体外诱导分化，并对其组织工程应用前景进行展望。     

卵巢早衰患者来源的诱导多能干细胞的建系、鉴定及诱导分化

 目的: 建立和鉴定卵巢早衰(又称原发性卵巢功能不全,primary ovarian insufficiency,POI)患者来源的诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs),研究其向原始生殖细胞分化的潜能。方法: 将表达Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4和Lin28基因的pEB-C5和表达SV40 T抗原的pEB-Tg质粒转染POI患者的外周血单个核细胞,将其重编程为iPSCs并检测其干细胞多能性特性。添加转化生长因子β1(transfroming growth factor-β1,TGF-β1)和骨形态发生蛋白 4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)后,应用real-time PCR和 Western blot方法分别检测原始生殖细胞标志物的mRNA及蛋白表达水平。结果: 通过碱性磷酸酶染色、细胞免疫荧光、拟胚体及畸胎瘤形成检测,证明了POI患者外周血来源的iPSCs可成功向3胚层细胞分化并保持多能性。添加TGF-β1和BMP4后,诱导组原始生殖细胞特异性标志物干细胞生长因子受体(stem cell growth factor receptor, c-Kit)、发育多能性相关蛋白 3 (developmental pluripotency-associated 3,STELLA/DPPA3)和DEAD盒多肽 4(DEAD box polypeptide 4,VASA/DDX4)的mRNA水平明显升高(P<0.05),VASA/DDX4蛋白表达水平亦明显增加(P<0.05)。结论: POI患者外周血单个核细胞在体外可被成功诱导成无外源性基因整合的iPSCs,并且具有多能分化特性,添加TGF-β1和BMP4后可向原始生殖细胞分化。     

睾丸生殖细胞肿瘤干细胞

Till和Mulloch(1961)最先从血液中发现各种血液细胞谱系共同的干细胞.此后,陆续从各种成体组织及早期胚胎组织中识别及分离出干细胞.干细胞的特征是产生能分化为各种不同形态功能类型的子代细胞,并能通过自我更新而保持其多能性.Lapidot等(1994)的实验证实人类急性髓性白血病的单个白血细胞移植于SCID小鼠后可以繁殖成急性髓性白血病.     

人胚胎干细胞表达生殖细胞分化相关基因的研究

目的 探讨人胚胎干细胞(hES)系H1生殖细胞分化相关基因的表达.方法 免疫荧光、碱性磷酸酶检测和核型分析等方法联合鉴定H1的基本生物学特性,RT-PCR方法检测未分化H1的生殖细胞分化相关基因的基本表达模式,分别以人正常睾丸组织和人胚胎成纤维细胞株HFF-1作为阳性和阴性对照组织.结果 H1保持正常核型并维持未分化状态.未分化H1表达减数分裂前生殖细胞标志基因STELLAR、DAZL、FRAGILIS、PUM1、PUM2和GDF3;不表达原始生殖细胞(PGCs)标志基因BLIMP-1、减数分裂特异标志基因SCP1、减数分裂启动标志基因STRA8以及生殖细胞分化后期标志基因VASA.结论 未分化Hl细胞表达生殖细胞减数分裂前标志基因,但不表达分化后期基因,BLIMP-1可能成为区分未分化hES细胞与PGCs的特异性标志基因.     

原始生殖细胞迁移的分子机理

脊椎动物原始生殖细胞（ＰＧＣｓ）的迁移是发育生物学最基本的问题之一。最近的研究结果表明细胞外基质、生殖腺嵴释放的趋化因子和细胞因子等，都是ＰＧＣｓ迁移过程中不可缺少的条件。对这些事件的了解不但有助于了解ＰＧＣｓ迁移的机理，而且对阐明由于ＰＧＣｓ异常迁移而引起的生殖细胞肿瘤等病理现象的机制都是有必要的。     

子宫内膜基质细胞作为饲养层培养人胚原始生殖细胞

目的探讨子宫内膜基质细胞作为饲养细胞培养人胚原始生殖细胞的可能。方法从5—9周人胚胎生殖嵴、中肾嵴、肠系膜中消化分离原始生殖细胞(PGCs),种植于经丝裂霉素c处理的人子宫内膜基质细胞饲养层上培养。结果PGCs可以在体外培养3个多月,传14代。这样培养的PGCs表达胚胎干细胞的多种标志,如碱性磷酸酶染色、SSEA和TRA抗原等。另外细胞保持正常的染色体核型。结论人子宫内膜基质细胞可以作为饲养细胞在体外培养人胚原始生殖细胞,保持未分化状态。     

单细胞基因诊断研究进展

细胞是生物的结构和功能的基本单位，一个完整的体细胞或原始生殖细胞含有整个生物的全部遗传信息。现代生物技术和显微技术的发展，使得对单细胞的基因操作成为现实。本文就单细胞的基因诊断方法、临床应用及存在的问题作一综述。     

中枢神经系统生殖细胞肿瘤中c-kit蛋白表达的临床病理学意义

目的 探讨c-kit(CD117)在原发性中枢神经系统(CNS)生殖细胞肿瘤(GCTs)中的表达及其临床病理学意义.方法 应用免疫组化EnVision法检测21例原发性CNS GCTs c-kit和PLAP的表达.结果 生殖细胞瘤100%表达c-kit,87.5%表达PLAP,c-kit和PLAP在畸胎瘤中均不表达.c-kit和PLAP在松果体母细胞瘤、垂体腺瘤、中枢神经细胞瘤、淋巴瘤、低级别星形细胞瘤、朗格汉斯组织细胞增生症和髓母细胞瘤中不表达.结论 c-kit和PLAP是原始生殖细胞较特异性标记之一,c-kit和PLAP高表达支持CNS GCTs起源于原始生殖细胞.c-kit在生殖细胞瘤中表达较PLAP更加敏感,是优于PLAP的诊断标记,可用于生殖细胞肿瘤诊断和鉴别诊断.同时也为药物靶向治疗生殖细胞瘤提供理论依据.     

卵巢原始生殖细胞瘤中D2-40、CD117和CD30的表达及意义

卵巢原始生殖细胞瘤是卵巢原发的一类含有恶性生殖细胞成分的肿瘤[1].由单一增生的原始生殖细胞构成的无性细胞瘤,或形态学上呈异质性的原始畸胎瘤样肿瘤--卵黄囊瘤,或沿胚胎外滋养层分化的非妊娠性绒毛膜癌,以及胚胎性癌、多胚瘤和混合性生殖细胞瘤等构成.     

精原干细胞研究进展

在哺乳动物的雄性成体中,存在着数套自我更新的系统,但就物种延续而言,最重要的莫过于精子发生(spermatogenesis),它承担着雄性配子的产生和进化所必需的基因传递的作用.青春期启动后,精子发生贯穿整个雄性生命过程,其通过有序而且严格调控的细胞增殖和分化步骤而产生大量的精子,这一系统的基础便是精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs).作为一种雄性生殖干细胞,精原干细胞是位于睾丸曲细精管生精上皮基膜上的As细胞,其前体是原始生殖细胞(primordial germ cell,PGCs).精原干细胞一方面可以自我增殖维持自身数目的相对恒定,另一方面可以经过数次有丝分裂后进入减数分裂,形成精母细胞,最终形成精子.而在此过程中,它还具有对可能的损伤维持更新的潜能和重新增殖的能力[1].精原干细胞的终生扩增性和永生性是产生雄性生殖细胞的保证,也使它成为生殖系中唯一在成年之后还能增殖的细胞.利用这一特性,精原干细胞可以作为成体多能性干细胞研究的前体.现对精原干细胞的体外培养、鉴定和目前进行的人类精原干细胞移植研究前景做简要概述.     

SVZ神经干细胞和祖细胞

神经干细胞不仅存在于发育中的哺乳动物神经系统 ,而且还存在于成年哺乳类动物神经系统。其中 ,位于侧脑室附近的脑室下带 (subventricular zone,SVZ)和海马是目前公认的成年个体神经干细胞最为集中之处 ,因此 ,这两个部位成为神经干细胞研究的重点内容 [1 - 3] 。此两区域的神经干细胞都具有自我更新能力和多分化潜能 ,可在体外被分离、克隆 ,都对疾病和损伤具有反应能力。但它们最大的区别在于海马神经干细胞不能长距离迁移 ,而位于 SVZ的神经干细胞分裂、增殖后产生的祖细胞可以长距离迁移 ,此点使 SVZ神经干细胞区别于海马神经干细…