介绍一种原位PCR检测方法

原位PCR就是将PCR的高效扩增与原位杂交的细胞定位相结合，在组织细胞原位检测单拷贝或低拷贝的特定DNA或RNA序列。作者介绍一种原位PCR方法是利用卵白素与生物素问的极高亲和力，通过一段外源性DNA片段，来达到连接标记NTPs的目的，再通过原位杂交技术来检测目的DNA。具体方法如下。     

PCR为基础的DNA甲基化检测技术进展

人类基因组中ＣｐＧ位点的普遍低甲基化导致癌基因表达增强及５’ＣｐＧ岛的高甲基化导致抑癌基因失活是细胞恶性转化的重要机制之一。为准确理解ＤＮＡ甲基化与细胞恶性转化的关系，有必要了解肿瘤ＤＮＡ中特定序列的甲基化改变，本文对国外学者运用ＰＣＲ技术检测基因组中ＤＮＡ特定序列的甲基化状态的进展作一介绍。     

应用原位PCR、原位杂交技术对比检测尖锐湿疣组织中人乳头状瘤病毒DNA

为探讨原位ＰＣＲ(ＩＳＰＣＲ)的敏感性 ,对原位杂交 (ＩＳＨ)检测阴性或弱阳性的尖锐湿疣组织 (ＣＡ)进行ＩＳＰＣＲ检测 ,为其推广应用提供依据。1　材料与方法1.1　材料　标本来自我院和西京医院 ,从 80例光镜诊断为ＣＡ或可疑ＣＡ中选择 2 7例ＨＰＶ6 11ＤＮＡ弱阳性 (ＩＳＨ)和 18例ＨＰＶ6 11阴性的标本行ＩＳＰＣＲ对比检测。标本经 10 %福尔马林固定 ,石蜡切片 4μｍ厚。ＨＰＶ6 11ＤＮＡ探针为第四军医大学病理教研室制备 ,试剂盒购自德国ＢｏｃｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司。ＨＣ 2 0 0型多功能ＰＣＲ仪为西安飞机工业…     

荧光定量PCR法检测乙肝病毒DNA和乙肝病毒标志物检测的临床价值分析

目的 探讨荧光定量PCR法(FQ-PCR)检测乙肝病毒DNA(HBV-DNA)和乙肝病毒标志物(HBV-M) ELISA法检测的临床价值.方法 选取本院收洽的乙肝患者653例,先采用ELISA法对其血液标本进行HBV-M模式定性检测,再采用FQ-PCR法进行HBV-DNA定量检测,观察不同HBV-M模式检测结果.结果 大三阳(1、3、5模式)和1、3模式的HBV-DNA阳性率分别为97.97％和94.74％,显著高于其他模式(P＜0.05).大三阳(1、3、5模式)的HBV-DNA表达水平为(5.59×106±2.42×105),显著高于其他模式(P＜0.05).结论 不同HBV-M模式的HBV-DNA表达水平及阳性率存在显著差异,联合HBV-M定性及HBV-DNA定量检测对临床早期诊断及用药具有重要指导价值.     

DNA芯片检测肝组织及血清中乙型肝炎病毒DNA的临床研究

目的：研究DNA芯片检测乙型肝炎和肝硬化患者肝组织及血清中乙型肝炎病毒（HBV）DNA的应用价值。方法：用点样仪将聚合酶链反应（PCR）扩增的HBV DNA探针制成基因芯片。对15例慢性乙型肝炎病人的血清和肝活检组织，99例乙型肝炎后肝硬化肝组织，分别用基因芯片、原位分子杂交、免疫组织化学和雅培试剂检测HBV DNA、乙型肝炎核心抗原(HBcAg)、乙型肝炎表面抗原（HBsAg)和乙型肝炎e抗原（HBeAg)。结果：用基因芯片对15份HBsAg,HBeAg阳性的乙型肝炎患者血清进行检测，HBV DNA均阳性，阳性率符合率为100％；15份肝活检组织标本，免疫组化法检测HBcAg阳性15例，原位分子杂交法和基因芯片检测HBV DNA均阳性14例，阳性率93％。99份肝炎后肝硬化患者肝组织标本，HBcAg阳性67份，HBV DNA阳性53份，基因芯片检测HBV DNA阳性46份，阳性率分别为69％、88％。32例HBcAg、HBV DNA阳性的肝组织中，基因芯片检测HBV DNA均为阴性。结论：肝炎基因诊断芯片可检测肝组织及血清中HBV DNA，诊断准确率高，假阳性率低。     

标本因素对荧光定量PCR法测定乙肝病毒DNA的影响

目的探讨脂血、溶血标本及血清标本常温储存48小时和4℃保存7天对乙肝病毒DNA(HBVDNA)荧光定量测定结果的影响。方法将乙肝大三阳血清标本进行即时检测、4℃保存7d后检测、室温保存48h检测及高脂血和非脂血、溶血血清和未溶血血清同时作HBVDNA荧光定量PCR,并两两间进行配对t检验。结果乙肝大三阳溶血与未溶血血清标本、脂血和非脂血血清标本HBVDNA含量都在同一数量级。血清标本在室温下短期贮存(48h内)、4℃保存7d内分别与即时检测HBV-DNA含量比较均无统计学意义(P>0.05)。结论脂血、溶血,血清标本不同储存温度及时间对HBV-DNA定量结果测定尤影响。     

PCR为基础的DNA甲基化检测技术进展

人类基因组中CpG位点的普遍低甲基化导致癌基因表达增强及5’CpG岛的高甲基化导致抑癌基因失活是细胞恶性转化的重要机制之一。为准确理解DNA甲基化与细胞恶性转化的关系，有必要了解肿瘤DNA中特定序列的甲基化改变，本文对国外学者运用PCR技术检测基因组中DNA特定序列的甲基化状态的进展作一介绍。     

荧光定量PCR法与ELISA法检测乙肝病毒感染相关性的研究

目的　采用荧光定量PCR法与ELISA法检测乙肝病毒标志物 ,探讨两种检测方法的相关性。方法　对 95 2份深圳服务行业从业人员体检乙肝表面抗原阳性的血清 ,应用HBV荧光定量PCR法和ELISA法检测并对结果进行分析。结果　荧光定量PCR检测不同乙肝标志物分组阳性率存在一定的差异 ;E抗原阳性的HBVDNA阳性对数均值为 6 . 4 9± 1 .2 9,表面抗原阳性而E抗原阴性的HBVDNA阳性对数均值为 4. 4 6± 1. 2 9,两者间差异具有显著性 (P <0 . 0 1) ,而不同性别和籍贯间无明显差异。结论　两种方法检测乙肝标志物有密切的相关性 ;对从业人员用ELISA法检测乙肝表面抗原阳性者应进一步进行荧光定量PCR检测。     

荧光定量 PCR 法检测乙肝病毒 DNA 和乙肝病毒标志物检测的临床价值分析

目的：探讨荧光定量 PCR 法（FQ-PCR）检测乙肝病毒 DNA（HBV-DNA）和乙肝病毒标志物（HBV-M）ELISA 法检测的临床价值。方法选取2013年4～12月在该院检测的653例乙肝患者,先采用 ELISA 法对其血液标本进行 HBV-M 模式定性检测,检测顺序为乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（HbsAb）、乙型肝炎 e 抗原（HbeAg）、乙型肝炎 E 抗体（Hbe-Ab）、乙肝表面核心抗体（HbcAb）;再采用 FQ-PCR 法进行 HBV-DNA 定量检测,观察不同 HBV-M 模式检测结果。结果 HB-sAg、HbeAg、HbcAb 检测同时阳性简称“大三阳”。大三阳[1（＋）、3（＋）、5（＋）模式]和[1（＋）、3（＋）模式]的 HBV-DNA 阳性率分别为97．97％、94．74％,显著高于其他模式的 HBV-DNA 阳性率（P ＜0．05）。大三阳的 HBV-DNA 表达水平（5．59×10^6±2．42×10^5）copies/mL,明显高于其他模式（P ＜0．05）。结论联合 HBV-M 定性及 HBV-DNA 定量检测,对临床早期诊断及用药具有重要指导价值。     

应用PCR技术检测喉肿瘤组织中HPV DNA

目的 探讨乳头瘤状病毒在喉癌发病中的作用。方法 采用PCR技术对70例喉癌、24例乳头状瘤、114例声带息肉标本应用HPV16型及HPV6，11型探针进行DNA检测。结果 70例喉癌组织中HPV16型DNA阳性22例，阳性率31．42％。在HPV6／11型DNA检测中，24例喉乳头状瘤组织中，阳性18例，阳性率75．7％，均高于其他两组，经统计处理，差异有显著性P＜0．05。结论 经研究证实高危HPV16型DNA与喉癌发病有密切关系，低危HPV6／11型DNA是成人乳头状瘤的主要致病因素。HPV感染可能在喉癌发生过程中发挥一定作用。     

荧光定量PCR法检测乙肝病毒DNA和乙肝病毒标志物检测的临床价值分析

目的 探讨荧光定量PCR法(FQ-PCR)检测乙肝病毒DNA(HBV-DNA)和乙肝病毒标志物(HBV-M)ELISA法检测的临床价值。方法 选取2013年4~12月在该院检测的653例乙肝患者,先采用ELISA法对其血液标本进行HBV-M模式定性检测,检测顺序为乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(HbsAb)、乙型肝炎e抗原(HbeAg)、乙型肝炎E抗体(HbeAb)、乙肝表面核心抗体(HbcAb);再采用FQ-PCR法进行HBV-DNA定量检测,观察不同HBV-M模式检测结果。结果 HBsAg、HbeAg、HbcAb检测同时阳性简称“大三阳”。大三阳[1(+)、3(+)、5(+)模式]和[1(+)、3(+)模式]的HBV-DNA阳性率分别为97.97%、94.74%,显著高于其他模式的HBV-DNA阳性率(P<0.05)。大三阳的HBV-DNA表达水平(5.59×106±2.42×105)copies/mL,明显高于其他模式(P<0.05)。结论 联合HBV-M定性及HBV-DNA定量检测,对临床早期诊断及用药具有重要指导价值。     

荧光定量PCR方法检测乙肝病毒DNA实验条件的研究

乙肝病毒血清标志物 (ＨＢＶ -Ｍ)检测是目前诊断乙型肝炎最常用的指标 ,即俗称的“两对半”。主要反映人体对乙肝病毒 (ＨＢＶ)的免疫反应状态 ,由于不同血清标志模式反映不同的临床意义 ,非传染病专业的医师很难准确掌握。因此采用简单快捷的诊断指标对乙肝早期诊断、准确判断乙肝患者的带毒状态具有重要意义。定量检测ＨＢＶＤＮＡ是衡量乙肝传染性的最精确的指标 ,是确定ＨＢＶ感染不同复制状态的非常有价值的检测手段。荧光定量ＰＣＲ(ＦＱ -ＰＣＲ)克服了常规ＰＣＲ假阳性率高的缺点 ,实现对ＨＢＶＤＮＡ的定量检测 ,可为乙型肝炎提供…     

原位PCR技术及其进展

原位聚合酶链反应(ISPCR)是1990年由Haase创立的，它是PCR与原位杂交两种方法的结合。该方法不仅使组织细胞内的靶基因扩增，而且不改变靶基因的定位，它集PCR的敏感性、特异性及原位杂交的定位性于一体。ISPCR包括直接法、间接法和标记引物法，近年来很多学者用此方法进行了爱滋病毒和肝炎病毒等的研究；并不断使之完善。影响ISPCR敏感性及特异性的因素较多，如标本固定的时间、蛋白酶的浓度及PCR的条件等，因此掌握好每一技术环节十分必要。     

ELISA法和DNA荧光定量PCR法检测乙肝病毒的相关性研究

乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus,HBV）DNA定量检测对乙型肝炎的诊断、抗病毒疗效观察及预后判断均具有重要意义。随着荧光定量（Fluorescent Quantitative,FQ）PCR技术的发展,由于其灵敏、快速、极低的假阴、假阳性率,该技术在临床上已被广泛应用于检测HBV-DNA,而酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清中HBV免疫标志物（Hepatitis B Virus—Marker,HBV—M）仍旧是诊断乙型肝炎的常用方法。     

乙肝病毒e抗原与乙肝病毒DNA定量的相关性分析

乙肝是由HBV引起的以肝损害为主的传染性疾病,我国是乙型肝炎的高发区,据统计我国有〉1亿的HBV携带者。HBeAg是HBV的核心部分,故一般认为HBeAg阳性是具有传染性的标志。随着HBV—DNA检测技术推广,     

乙肝病毒DNA与血清标志物的关系分析

当前乙型肝炎的诊断上,由于PCR技术的快速发展,临床上过分的依赖基因诊断技术,把HBV DNA检测作为HBV感染的唯一指标,甚至不再进行血清学指标检测,为了探讨这些检测指标的关系,笔者对288例HBV DNA检测结果与HBV血清学标志物进行了比较分析。     

原位PCR实验技术及其应用前景

原位ＰＣＲ（ＩｎＳｉｔｕＰＣＲ）技术自１９９０年Ｈａａｓｅ〔１〕等人建立以来,在最近几年得到了快速的发展和应用。聚合酶链反应（ＰＣＲ）是一种快速测定核酸的高效、敏感方法,已在许多疾病的研究与诊断中得到了广泛应用。但是,ＰＣＲ技术须从混合的组织细胞中提取核酸,由于无法将扩增的核酸片段在特定的组织细胞中定位分析,所以难以肯定扩增产物的真正细胞来源。原位杂交虽具有细胞内定位能力,但对于核酸中个别少数变异或差异的序列和细胞内靶核酸含量少时则难以鉴别出来,而且有假阳性的干扰。原位ＰＣＲ技术把ＰＣＲ和原位杂…     

PCR检测乙肝病毒的体会

PCR技术即聚合酶链反应，是体外扩增基因，具有特异性强，快速，简便、灵敏度高等特点．目前广泛应用于微生物学、遗传基因检测以及肿瘤的诊断．现将二年来应用PCR诊断乙肝的体会小结如下。     

从固定的组织中提取DNA用于PCR扩增

随着聚合酶链反应(PCR)技术的普及和发展,对石蜡和福尔马林固定组织进行的研究,需要一种快速、简便的DNA 提取方法.尽管国内外已有相关报道,但研究发现这些方法所处理的标本差异很