多发性骨髓瘤患者外周血中TCR Vβ亚家族nave T细胞水平变化

目的： 检测多发性骨髓瘤（MM）患者外周血中23个TCR Vβ亚家族的T细胞受体删除DNA环（sjTRECs）的存在特点，从而了解MM患者相应Vβ亚家族nave T细胞的近期胸腺输出情况。方法: 利用半巢式PCR分别扩增12例MM患者每5×104个外周血单个核细胞（PBMCs）中的23个Vβ亚家族sjTRECs，10例正常人外周血作为对照。结果: 在5×104个PBMCs中，检测到MM患者sjTRECs的Vβ亚家族数量约为（5.00±2.45）个，与正常人的（9.60±5.48）个相比，检出的亚家族数量明显减少（P<0.05）；23个Vβ亚家族sjTRECs在正常人中均可以检测到，而在MM患者仅检测到部分；并且Vβ2、Vβ10、Vβ16、Vβ17和Vβ21等5个亚家族sjTRECs的检出率明显低于正常水平。12例MM患者检出的亚家族数量（2-9个）不等，患者的年龄与检出的亚家族数量存在负相关（r=-0.892；P<0.01）。结论: MM患者胸腺近期输出的23个Vβ亚家族nave T细胞存在不同程度的缺失或水平降低，表明患者存在不同程度的细胞免疫功能缺陷以及T细胞谱系重建的能力和潜能受损。     

AML患者外周血中TCR Vβ亚家族naive T细胞的检测

目的 检测急性髓性白血病(AML)患者外周血中TCR 23个Vβ亚家族的T细胞受体删除DNA环(sjTRECs)的存在特点,从而间接了解AML患者相应Vβ亚家族naive T细胞的近期胸腺输出情况.方法利用半巢式PCR分别扩增32例AML患者每5×104和1×104个外周血单个核细胞(PBMCs)中的23个Vβ亚家族sjTRECs,10例正常人外周血作为对照.结果在5×104和1×104两种PBMCs水平,AML患者检出sjTRECs的Vβ亚家族数分别为(5.09±3.28)和(2.59±2.06)个,与正常人的(13.70±2.67)和(5.50±2.07)个相比,两组的差异均有统计学意义(两组均为P=0.000).AML患者5×104个PBMCs中约可检测到5/23(20%)个Vβ亚家族sjTRECs,并且有13个Vβ亚家族sjTRECs的检出率明显低于正常人水平,其中Vβ10-和Vβ14-Dβ1 sjTRECs的检出率最低,而Vβ21最高.不同FAB分型AML患者间的检出差别未显示出统计学意义.32例AML患者检出sjTRECs的Vβ亚家族数量差别较大(1～15个),年龄与检出的亚家族数量呈负相关,＜30岁者的检出量高于≥30岁者,尤其在5×104个PBMCs水平差异有统计学意义(r=-0.481,P=0.005).结论 AML患者胸腺近期输出的23个Vβ亚家族naive T细胞存在不同程度的缺失或水平降低,表明AML患者存在严重的细胞免疫功能缺陷以及T细胞谱系重建的能力和潜能严重受损.     

正常人外周血和脐血中TCR Vβ亚家族sjTRECs的检测情况

目的:检测TCR23个Vβ亚家族sjTRECs在正常人外周血中的存在特点,从而进一步了解正常人胸腺近期各Vβ亚家族初始T细胞的输出情况。方法:采用半巢式PCR对4例胸腺、10例脐血和10例正常人外周血分别在2×105、5×104、1×104和1×103个单个核细胞中的23个Vβ亚家族sjTRECs进行扩增。结果:在细胞数相同的情况下,各Vβ-Dβ1sjTRECs的检出率胸腺细胞最高,其次是脐血,正常人最低。当细胞数为2×105、5×104和1×104时,正常人Vβ2、Vβ4、Vβ7、Vβ11和Vβ19亚家族sjTRECs的检出率以及检出sjTRECs的亚家族数量均显著低于脐血。当细胞数为2×105和5×104时,正常人可检测到绝大多数Vβ亚家族的sjTRECs,随着细胞数的降低,部分Vβ亚家族的sjTRECs则检测不到,而少部分Vβ亚家族的sjTRECs则在1000个细胞时仍能检测到。结论:成功建立了半定量检测23个Vβ亚家族sjTRECs的检测方法;在2×105细胞中约可以检测到80%左右的Vβ亚家族初始T细胞,而在5×104细胞中约有半数的Vβ亚家族初始T细胞可检测到,提示不同Vβ亚家族初始T细胞的出现频率有所差异。     

CML中TCRVβ2、Vβ5和Vβ17亚家族sjTRECs的检测情况

目的检测慢性粒细胞白血病(CML)患者外周血TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs的存在情况,从而了解相应3种Vβ亚家族naive T细胞的近期胸腺输出情况.方法利用半巢式PCR扩增9例CML患者外周血单个核细胞(PBMC)、CD4+细胞和CD8+细胞DNA的Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs,13例正常人外周血作为对照.结果 TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs在部分正常人和1例CML患者CD4+或CD8+细胞可以检测到,而在CML患者PBMC中则未能检测到.结论在CML患者Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs检出率低,与其胸腺输出相应的TCR Vβ亚家族naive T细胞水平低下有关.     

TCR Vβ2、Vβ5和Vβ17-Dβ1 sjTRECs在正常人胸腺、脐血和外周血中的检测情况

目的建立检测TCR Vβ2、Vβ5和Vβ17-Dβ1 sjTRECs的方法,分析其在胸腺细胞、脐血和正常人外周血T细胞中的存在情况,从而了解近期胸腺输出相应的TCR Vβ亚家族naive T细胞的情况。方法利用半巢式PCR分别扩增3例正常胸腺细胞、10例脐血和10例正常人外周血单个核细胞DNA中的Vβ2、Vβ5和Vβ17与Dβ1基因片段重排时产生的sjTRECs。结果在正常胸腺细胞、脐血和正常人外周血单个核细胞中均可检测到Vβ2、Vβ5和Vβ17与Dβ1片段形成的sjTRECs,其中胸腺细胞和脐血单个核细胞DNA中3种删除环的检出率均为100％,正常人外周血3种删除环的检出率分别为50％、70％和40％。结论成功地建立检测3种Vβ-Dβ1 sjTRECs的方法,并提供了Vβ2、Vβ5和Vβ17亚家族sjTRECs在胸腺、脐血和外周血中的检测情况。     

CML中TCR Vβ2、Vβ5和Vβ17亚家族sjTRECs的检测情况

目的检测慢性粒细胞白血病（CML）患者外周血TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs的存在情况．从而了解相应3种Vβ亚家族naiveT细胞的近期胸腺输出情况．方法利用半巢式PCR扩增9例CML患者外周血单个核细胞（PBMC）、CD^4＋细胞和CD8^＋细胞DNA的Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs，13例正常人外周血作为对照．结果TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs在部分正常人和1例CML患者CD4^＋或CD8^＋细胞可以检测到，而在CML患者PBMC中则未能检测到．结论在CML患者Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs检出率低，与其胸腺输出相应的TCR Vβ亚家族naiveT细胞水平低下有关．     

MDS患者外周血中TCR Vβ1-24-Dβ1 sjTRECs的分析

目的检测骨髓增生异常综合征（MDS）患者外周血中TCRVβ1-24-Dβ1 sjTRECs的存在情况。方法利用半巢式PCR扩增9例MDS患者外周血单个核细胞DNA中TCRβ链基因重排时形成的T细胞受体DNA删除环（Vβ1-24-Dβ1 sjTRECs）,10例正常人外周血作为对照。结果所有TCRVβ1-24-Dβ1sjTRECs在正常人组外周血T细胞DNA中均有检出,除TCR Vβ12-Dβ1sjTRECs和TCRβ19-Dβ1sjTRECs外,其余TCRVβ-Dβ1 sjTRECs在MDS患者外周血T细胞DNA中均可检。大多数TCRVβ1-24-Dβ1sjTRECs在正常人组中的检出率较MDS患者高,但其中只有6种TCRVβ-Dβ1sjTRECs（分别是TCRVβ3、12、13、15、21、22-Dβ1sjTRECs）的检出率差异有统计学意义。结论本研究率先提供了MDS患者外周血T细胞中TCRVβ-Dβ1sjTRECs的存在情况。MDS患者TCRVβ-Dβ1sjTRECs出现频率低于正常人提示其胸腺近期输出功能存在部分缺陷情况。     

AML-M5患者外周血naive T细胞水平和TCR Vβ谱系利用特点

目的了解急性髓性白血病M5亚型(AML-M5)患者 T细胞受体重排删除DNA环(TRECs)的含量和TCR Vβ基因谱系利用和克隆性,从而了解AML患者的胸腺近期输出功能和TCR Vβ亚家族T细胞增殖特点.方法利用实时定量PCR(TaqMan)方法检测5例M5患者外周血单个核细胞TRECs的水平,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3细胞中TRECs水平.利用RT-PCR和基因扫描分析患者外周血单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因表达和克隆性.9例正常人外周血作为对照.结果 M5患者外周血中TRECs含量为0.76±1.21/1000 CD3+细胞,明显低于正常人TRECs水平(6.84±4.71/1000 CD3+细胞,p<0.05).5例患者外周血T细胞表达不同数量Vβ亚家族(2-16个).基因扫描分析显示4例病人外周血中的一些Vβ亚家族出现克隆性T细胞, Vβ1,Vβ15和Vβ21克隆性T细胞均分别见于3例病人中.结论率先报道了AML-M5型患者胸腺近期输出naive T细胞功能明显降低,尽管整体T细胞免疫功能低下,患者仍存在优势利用和克隆性增殖Vβ亚家族T细胞,提示其具有一定地对白血病细胞相关抗原产生特异性免疫反应的能力.     

AML-M5患者外周血naive T细胞水平和TCR Vβ谱系利用特点

目的　了解急性髓性白血病M5亚型 (AML -M5 )患者T细胞受体重排删除DNA环 (TRECs)的含量和TCRVβ基因谱系利用和克隆性 ,从而了解AML患者的胸腺近期输出功能和TCRVβ亚家族T细胞增殖特点 .方法　利用实时定量PCR(TaqMan)方法检测 5例M5患者外周血单个核细胞TRECs的水平 ,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3细胞中TRECs水平 .利用RT -PCR和基因扫描分析患者外周血单个核细胞的TCRVβ2 4个亚家族基因表达和克隆性 .9例正常人外周血作为对照 .结果　M5患者外周血中TRECs含量为 0 .76± 1.2 1/ 10 0 0CD3 细胞 ,明显低于正常人TRECs水平 (6 .84± 4 .71/ 10 0 0CD3 细胞 ,p <0 .0 5 ) .5例患者外周血T细胞表达不同数量Vβ亚家族 (2 - 16个 ) .基因扫描分析显示 4例病人外周血中的一些Vβ亚家族出现克隆性T细胞 ,Vβ1,Vβ15和Vβ2 1克隆性T细胞均分别见于 3例病人中 .结论　率先报道了AML -M5型患者胸腺近期输出naiveT细胞功能明显降低 ,尽管整体T细胞免疫功能低下 ,患者仍存在优势利用和克隆性增殖Vβ亚家族T细胞 ,提示其具有一定地对白血病细胞相关抗原产生特异性免疫反应的能力     

TCR Dβ-Jβ sjTRECs检测方法的建立和应用

目的：建立检测TCR Dβ-Jβ sjTRECs的方法，并了解不同T细胞受体Dβ-Jβ之间T细胞受体删除DNA环(sjTRECs)在胸腺细胞和外周血T细胞中的形成情况。方法：利用巢式PCR分别扩增10例正常人外周血单个核细胞和3例正常胸腺细胞DNA中不同的Dβ片段和Jβ重排时形成的sjTRECs的情况，PCR产物进一步进行克隆和序列分析以确定结合区的位置。结果：可检测到Dβ1与5个Jβ1基因片段、Dβ2与4个Jβ2基因片段分别形成的sjTRECs，其中以Dβ1-Jβ1S1、Dβ1-Jβ1S2和Dβ2-Jβ2S2sjTRECs最常见，PCR产物经克隆和序列分析证实其形成Dβ-jβsjTRECs的情况。结论：成功地建立了检测Dβ-Jβ-sjTRECs的方法，为分析各TCRβ亚家族的sjTRECs含量和确定TCRβ naive细胞提供了新方法。     

实时定量PCR检测正常人外周血T细胞和胸腺细胞中sjTRECs水平

目的了解正常人外周血T细胞和胸腺细胞中信号结合T细胞受体删除 DNA环(sjTRECs)的含量,从而推测正常人中幼稚T细胞的含量和胸腺的输出功能. 方法利用实时定量PCR和TaqMan方法检测11例正常人外周血单个核细胞、7例儿童和3例成人胸腺细胞DNA中sjTRECs的水平. 结果正常人中sjTRECs含量分别为8.83±4.81/1000个外周血单个核细胞;27.31±3.23/1000个成人胸腺细胞和170 .29 ±59.52/1000个儿童胸腺细胞. 结论 sjTRECs水平与年龄有关,正常人外周血中每1000个单个核细胞中约含4.5个幼稚T细胞.     

实时定量PCR检测正常人外周血T细胞和胸腺细胞中sjTRECs水平

目的了解正常人外周血T细胞和胸腺细胞中信号结合T细胞受体删除 DNA环(sjTRECs)的含量,从而推测正常人中幼稚T细胞的含量和胸腺的输出功能. 方法利用实时定量PCR和TaqMan方法检测11例正常人外周血单个核细胞、7例儿童和3例成人胸腺细胞DNA中sjTRECs的水平. 结果正常人中sjTRECs含量分别为:8.83±4.81/1000个外周血单个核细胞;27.31±3.23/1000个成人胸腺细胞和170 .29 ±59.52/1000个儿童胸腺细胞. 结论 sjTRECs水平与年龄有关,正常人外周血中每1000个单个核细胞中约含4.5个幼稚T细胞.     

原发性血小板减少性紫癜患者T细胞受体Vβ亚家族基因的表达特点

目的：了解原发性血小板减少性紫癜（ITP）患者T细胞受体 Vβ亚家族基因表达特点。 方法： 采用反转录酶－多聚酶链反应（RT-PCR）方法检测5例ITP患者外周血T细胞TCR Vβ 24个亚家族基因表达情况，10例正常人作为对照。 结果： 正常人外周血T细胞表达全部24个TCR Vβ亚家族，而5例ITP患者外周血T细胞仅表达4-11个Vβ亚家族，主要为Vβ2（100％）和Vβ3（100％），其次为Vβ19（80％）和Vβ21（80％）部分。全部样本未检测出Vβ4、Vβ6、Vβ17、Vβ20、Vβ24亚家族表达。 结论： ITP患者外周血T细胞TCR Vβ基因谱系呈限制性表达，与其存在细胞免疫功能异常有关。     

T-ALL及T细胞株相关TCR Vβ基因谱系和克隆性分析

目的了解T细胞-急性淋巴细胞白血病(T-ALL)患者外周血中的T细胞及T细胞株的TCR Vβ基因谱系及其克隆性增殖情况。方法利用RT-PCR方法扩增6个不同的T细胞株和6例初发未治T-ALL病人外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的互补决定区3(CDR3)，PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性，部分T细胞株的单克隆PCR产物进一步进行序列分析。结果与正常人外周血表达全部24个Vβ亚家族不同，6例T-ALL病人分别表达5～12个Vβ亚家族。6例病人均存在1个或多个Vβ亚家族的寡克隆或双克隆增殖T细胞，另外，还有一些Vβ亚家族多克隆模式发生改变，呈现寡克隆性增殖的趋势。T细胞株多显示为表达一个Vβ亚家族的单克隆T细胞，不同T细胞株的CDR3长度和序列不尽相同。结论T-ALL患者外周血T细胞的TCR Vβ谱系出现限制性改变，均可检测到克隆性增殖T细胞，尚需进一步鉴定其性质(肿瘤性或抗原特异性增殖)，对于检测微小残留病变和设计抗白血病独特型疫苗均有一定的意义。     

多发性骨髓瘤患者外周血淋巴细胞亚群分析及与预后因子的相关性

目的 通过对多发性骨髓瘤(MM)患者外周血淋巴细胞亚群的检测以评价MM患者机体的免疫功能状态.方法 采用流式细胞术检测36例MM患者和25例健康志愿者外周血T、B淋巴细胞、NK细胞及CD4+CD25T细胞的表达.结果 与正常对照组相比,MM患者外周血的CD4、CD19细胞的表达显著下调,CD8细胞的表达显著上调,CD4/CD8比值则显著降低(P＜0.05或＜0.01);MM患者外周血的CD4+CD25T细胞占CD3+T细胞的比例明显增高(P＜0.01),且与血清中的β2-MG浓度成正相关(γ=0.56,P＜0.05).结论 MM患者体内存在淋巴细胞亚群的异常表达、CD4+CD25+Treg细胞的异常扩增,可能是MM患者体内广泛存在免疫缺陷的一个主要原因.     

定量检测T细胞受体重排删除DNA环含量评价急性非淋巴细胞白血病患者胸腺近期输出功能

目的 检测急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者 T细胞受体重排删除DNA环(signal joint T-cell receptor excision DNA circles sjTRECs,TRECs)的含量,从而探讨患者的初始型naive T细胞水平和胸腺近期输出功能特点.方法利用实时定量PCR(TaqMan)方法,检测77例ANLL患者外周血单个核细胞(PBMC)TRECs的水平,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3细胞中TRECs水平.14例ANLL缓解期患者和14例正常人外周血作为对照.结果 ANLL患者外周血中TRECs含量为(0.43±0.92)拷贝/1 000 PBMCs, (2.02±3.25)拷贝/1 000 CD3+细胞,明显低于正常人TRECs水平[(4.10±3.65)拷贝/1 000 PBMCs和(6.84±4.71)拷贝/1 000 CD3+细胞,P=0.0000和P=0.0001]和缓解期患者[(2.19±2.49)拷贝/1 000 PBMCs和(6.30±7.13)拷贝/1 000 CD3+细胞,P=0.0000和P=0.0005].各亚型ANLL患者的TREC水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 绝大多数ANLL型患者胸腺近期输出naive T细胞功能明显降低,缓解期患者的胸腺近期输出功能有一定程度恢复.     

定量检测T细胞受体重排删除DNA环含量评价急性非淋巴细胞白血病患者胸腺近期输出功能

目的检测急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患者T细胞受体重排删除DNA环(signaljoint T-cell receptor exc ision DNA c irc les sjTRECs,TRECs)的含量,从而探讨患者的初始型naive T细胞水平和胸腺近期输出功能特点。方法利用实时定量PCR(TaqM an)方法,检测77例ANLL患者外周血单个核细胞(PBMC)TRECs的水平,并根据外周血中CD3阳性率计算CD3细胞中TRECs水平。14例ANLL缓解期患者和14例正常人外周血作为对照。结果ANLL患者外周血中TRECs含量为(0.43±0.92)拷贝/1 000 PBMCs,(2.02±3.25)拷贝/1 000 CD3+细胞,明显低于正常人TRECs水平[(4.10±3.65)拷贝/1 000 PBMCs和(6.84±4.71)拷贝/1 000 CD3+细胞,P=0.0000和P=0.0001]和缓解期患者[(2.19±2.49)拷贝/1 000 PBMCs和(6.30±7.13)拷贝/1 000 CD3+细胞,P=0.0000和P=0.0005]。各亚型ANLL患者的TREC水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论绝大多数ANLL型患者胸腺近期输出naive T细胞功能明显降低,缓解期患者的胸腺近期输出功能有一定程度恢复。     

白血病患者异基因造血干细胞移植后T细胞免疫重建的研究

目的 通过分析TCR Vβ基因片段选择性扩增，了解白血病患者异基因外周血干细胞移植后T淋巴细胞的免疫重建及其在移植物抗宿主病(GVHD)患者中的表达特点．方法 采用RT—PCR扩增10例移植后患者外周血的单个核细胞的TCR Vβ24个基因片段，分析其TCR Vβ基因的表达情况，GVHD患者的PCR产物进一步经基因扫描分析确定T细胞克隆性．结果 经24个Vβ引物所分别进行的RT—PCR检测TCR Vβ各亚家族基因的表达情况，发现10例病人外周血与正常人表达24个Vβ亚家族有明显的不同，病人的部分Vβ亚家族T细胞仍未能重建，仅表达5-22个亚家族基因；9例GVHD患者外周血仅表达2—8个TCR Vβ亚细胞生长．结论 移植后病人外周血淋巴细胞TCR Vβ基因片段部分受抑制，部分基因片段呈选择性扩增．GVHD患者有Vβ3和Vβ8基因的优势表达，并有克隆性T细胞生成．     

白血病患者异基因造血干细胞移植后T细胞免疫重建的研究

目的通过分析TCR Vβ基因片段选择性扩增,了解白血病患者异基因外周血干细胞移植后T淋巴细胞的免疫重建及其在移植物抗宿主病(GVHD)患者中的表达特点.方法采用RT-PCR扩增10例移植后患者外周血的单个核细胞的TCR Vβ 24个基因片段,分析其TCR Vβ基因的表达情况,GVHD患者的PCR产物进一步经基因扫描分析确定T细胞克隆性.结果经24个Vβ引物所分别进行的RT-PCR检测TCR Vβ各亚家族基因的表达情况,发现 10例病人外周血与正常人表达24个Vβ亚家族有明显的不同,病人的部分Vβ亚家族T细胞仍未能重建,仅表达5～22个亚家族基因;9例GVHD患者外周血仅表达2～8个TCR Vβ亚家族,其中7例均表达Vβ3.对6例GVHD患者的基因扫描显示,均存在克隆性T细胞生长.结论移植后病人外周血淋巴细胞TCR Vβ基因片段部分受抑制,部分基因片段呈选择性扩增.GVHD患者有Vβ3和Vβ8基因的优势表达,并有克隆性T细胞生成.     

T-ALL患者外周血TCRγ/δ T细胞的分布和增殖特点

目的:了解T细胞急性淋巴白血病(T-cell acute lymphocytic leukemia,T-ALL)患者外周血TCR Vγ和Vδ亚家族T细胞的分布和克隆情况。方法:利用RT-PCR扩增9例T-ALL患者和10例正常人外周血单个核细胞中3个TCR Vγ和8个Vδ亚家族基因的互补决定区3(CDR3),了解TCR亚家族Vγ和Vδ亚家族细胞的分布;阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度,从而了解其克隆性。结果:9例T-ALL患者3个Vγ亚家族的表达率都明显低于正常人Vγ亚家族的表达率(P<0.05);Vδ亚家族中只有Vδ1和Vδ3的表达率低于正常人(P<0.05)。3例T-ALL患者出现克隆性增殖的γ/δT淋巴细胞。结论:T-ALL患者外周血TCR Vγ和部分Vδ亚家族谱系出现限制性表达和克隆性增殖。同时存在克隆性增殖γδ T细胞提示可能为γδ 白血病性T细胞克隆。