ΔNp73基因对不同p53基因状态肺癌细胞系体外生长的影响

目的探讨p73基因N末端转录活化区缺失的异构体ΔNp73转染对不同p53基因状态肺癌细胞系体外生长的影响.方法利用脂质体将ΔNp73α基因分别转染P53蛋白表达阴性与表达野生型P53蛋白的肺癌细胞系H1299和A549,筛选出稳定的表达株,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生长情况,平板克隆形成率观察细胞增殖能力的变化,流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡率. 结果ΔNp73α基因转染使H1299和A549细胞生长明显增快,克隆形成率明显提高,细胞凋亡率明显降低但对细胞周期没有明显的影响.结论ΔNp73基因在肺癌的发生发展过程中发挥癌基因的功能,并且其作用不受p53基因状态的影响.     

p73基因转染抑制肺腺癌细胞系H1299和A549体外生长的研究

目的探讨p73基因转染对肺腺癌细胞体外生长的抑制作用及p73基因治疗肺腺癌的可能性. 方法利用脂质体将p73β基因转导入两株分别对p53基因治疗敏感和耐受的肺腺癌细胞系H1299(p53-null)和A549(wtp53)中,对p73蛋白过表达的细胞进行细胞生长曲线、克隆形成率分析,并用流式细胞术分析p73β基因对肺腺癌细胞周期的影响和细胞增殖的抑制作用. 结果导入p73β基因能使H1299和A549细胞发生G1期阻滞,生长速度明显减慢,克隆形成率下降.结论外源性p73β基因转染可以抑制肺腺癌细胞体外生长,且这种抑制作用与p53基因无关.因此该基因在肿瘤基因治疗上有广泛的应用前景.     

p73基因在肺腺癌组织中的表达

目的：p73基因在肺腺癌与癌旁正常组织中表达情况及突变的研究。方法：采用竞争性定量RT－PCR和PCR－SSCP方法检测62例肺腺癌及其癌旁非癌组织中p73基因突变情况。结果：（1）通过定量PCR分析，肺腺癌组织中p73的表达量与正常对照组表达量存在显差异（P＜0．01）。（2）在21例中高分化标本中检出9例呈中高表达，在41例低分化标本中检出32例呈中高表达，两之间存在显差异（P＜0．01）；（3）p73基因表达程度在29例Ⅰ-Ⅱ期标本中检出14例呈中高表达，33例Ⅲ-Ⅳ期标本中检出18例呈中高表达，两之间无显差异（P＞0．05）。（4）PCR－SSCP未检测出基因突变。结论：p73基因mRNA的表达可能与肺腺癌发生，发展和分化程度有关，与临床分期无关。     

p73基因的研究进展

p73基因被公认为是p53基因家族中的一员,其编码蛋白质在序列上的同源性和功能性上都与p53蛋白相似;而p53基因是经典的抑癌基因,野生型的p53基因维护正常的细胞分裂并诱导凋亡,阻止肿瘤的发生.因此p73基因作为候选抑癌基因,倍受广泛研究者的关注.     

p73、p63和p53基因在人非小细胞肺癌组织中的表达

目的：探讨p73、p63和p53在非小细胞肺癌（NSCLC）的表达及与预后的关系。方法：免疫组化法测定93例NSCLCp73、p63和p53的表达并对其与年龄、性别、吸烟、病理类型、组织分化等因素进行统计学分析。结果：p53、p63和p73在正常肺组织表达阳性率分别为25％、25％和12．5％，在NSCLC的表达阳性率分别为65．6％、54．8％和71％，差异有显著性（P〈0．05）。p53表达阳性率与淋巴结转移相关（P〈0．05）；p63表达阳性率与肺癌的组织类型和淋巴结转移有关（P〈0．05）；肺鳞癌组织p63随分化程度降低表达增强（P〈0．05）。结论：p53、p63和p73均参与了NSCLC的发展、浸润和转移，可作为了解NSCLC的生物学行为和判断预后的指标。     

特异点突变型p53 minigene对人肺癌PG细胞的转染效应

目的 观察一种编码密码子１７２＾Ａｒｇ→Ｌｅｕ的特异点突变型小鼠ｐ５３ ｍｉｎｉｇｅｎｅ对恶性肿瘤细胞的转染效应,并探讨该基因恶性肿瘤基因治疗中的潜在价值。     

人肺癌细胞转染野生型P53基因对生长的影响

目的：研究转染野生型Ｐ５３基因对人肺癌细胞的生长影响作用。方法：将带有野生型Ｐ５３基因的ｐＣＥＰ４质粒,通过Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染肺癌细胞,用四甲基偶氮唑（ＭＴＴ）法观察细胞的生长情况。结果：转染野生型Ｐ５３基因,可使肺腺癌、肺鳞癌和小细胞肺癌细胞的生长明显受到抑制。结论：野生型Ｐ５３基因有效抑制肺癌细胞的生长,可作为肺癌基因治疗的一种手段。     

人肺腺癌细胞系GLC-82中p21WAF1和p53基因的过表达

目的 探讨p21^WAF1和p53基因过表达对人肺腺癌细胞生长和细胞凋亡的影响。方法 用带有p21cDNA的真核表达载体pCEP和带有p53的腺病毒表达载体pAdCMV,分别通过基因转染和腺病毒感染,使其在人肺腺癌细胞系(GLC—82)中过表达;通过流式细胞仪、透射电镜和原位末端分析(TUNEL)观察细胞的生长和凋亡情况。结果 p21过表达的细胞系G1期细胞增加,细胞生长抑制,克隆形成率下降,电镜下未见特征性凋亡小体,原位细胞凋亡分析未见凋亡信号;p53腺病毒感染的肿瘤细胞增殖明显抑制并出现死亡,原值细胞凋亡检测到凋亡信号。结论 P21和p53基因的过表达能够抑制人肺腺癌细胞的生长,其中p53能够诱发细胞凋亡,因此这两种基因在肿瘤基因治疗上有着广泛的应用前景。     

p53家族新成员—p73、p51与肺癌

p5 3基因是已公认的在人类肿瘤中突变率较高的抑癌基因 ,肺癌患者中约 5 0 %以上有 p5 3基因失活。随着对肿瘤基因的深入研究 ,近年来相继发现了p5 3家族的两个新成员— p73与 p5 1 ,很多研究对其结构、功能、分布和表达情况都有了较为深入的认识。本文就 p73基因、p5 1基因的研究现状及其在肺癌中的表达和意义作一综述。1　p73基因1 .1　发现与定位　 1 997年 ,kaghad等 [1] 在对胰岛素信号介质的研究中 ,偶然发现了一个假阳性的COS细胞 c DNA克隆。其编码序列与 IRS- 1连接区无任何同源性 ,却与 p5 3基因高度同源。根据此序列编码的多…     

野生型p53基因对人肺癌细胞SPC-A1凋亡的诱导

目的：观察外源性野生型p53基因特染对人肺腺癌细胞SPC-A1增殖和凋亡的影响。方法：用脂质体Lipofectamine将真核表达载体pCMV-p53和pCMV-p53mtl35分别转染SPC-A1细胞，MTT法检测转染前后的细胞生长情况，于转染后24、48、72h分别收集细胞，以流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率，并进行染色体DNA断裂的测定。结泉：pCMV-p53转染后的SPC-A1细胞生长受到明显抑制，转染后24、48、72h的凋亡率分别为1．78％、24．11％、35．75％，转染后48、72h的细胞染色体断裂明显。结论：野生型p53基因瞬间转染可诱导肺癌细胞SPC-A1凋亡。     

野生型p53基因转染对人肺腺癌细胞系A549 VEGF表达和肿瘤生长的影响

目的:研究外源性野生型p53(wtp53)基因对人肺腺癌细胞系A549血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响. 方法:将含有wtp53基因的pcDNA3.1-wtp53和空载体pcDNA3.1-neo质粒,通过阳离子脂质体转染A549细胞,应用半定量RT-PCR和ELISA技术检测其对VEGF表达情况的影响;将A549,A549/pcDNA3.1-neo和A549/ pcDNA3.1-wtp53细胞分别接种至裸鼠皮下,观察成瘤时间及瘤块大小;免疫组化法计数VEGF阳性细胞百分数并进行半定量分级. 结果:pcDNA3.1-wtp53转染组VEGF mRNA和蛋白表达均明显低于其他2组. pcDNA3.1-wtp53转染后裸鼠成瘤时间延长,瘤块生长缓慢. 结论:wtp53基因转染可抑制VEGF表达和肿瘤的生长.     

抑癌基因p27对肾癌细胞系GRC-1生长的抑制作用

目的：探讨p27基因对肾癌GRC－1细胞系生长的抑制作用,为肾癌发生机制的研究和基因治疗提供理论依据。方法 采用基因转染技术,将p27 cDNA转染到肾癌GRC－1细胞系中,了解其对细胞增殖能力及细胞周期的影响。结果 转染p27基因的肾癌细胞生长受到抑制,其在软琼脂上克隆形成能力降低了大约4倍。对细胞周期分析表明,处在G0－G1期的细胞由32．2％增加到66．9％,经Dot blot和Western blot杂交证实,p27 mRNA表达有明显差异（P＜0．01）,p27的蛋白表达量有明显差异（P＜0．01）,说明p27蛋白具有生长抑制功能,其作用点为G1－S。结论 提高肾癌细胞中p27的表达,能抑制肿瘤细胞的生长,导入p27基因是一种治疗肾癌的新途径。     

野生型p53基因转染对人胃癌细胞系HGC27生长的抑制作用

目的 研究野生型p53基因对人未分化胃癌细胞系HGC27生长的抑制作用。方法 用表达人野生型p53基因全长cDNA的真核载体pcDNA3—p53，转染人未分化胃癌细胞系HGC27，对转染后细胞进行生长曲线、细胞生长抑制率及流式细胞术分析，观察其生物学特性变化。结果 外源野生型p53基因在HGC27细胞内稳定表达，经pcDNA3—p53转染的HGC27细胞生长速度受到明显抑制，流式细胞分析显示G1期增加，S期下降，细胞出现凋亡。结论 野生型p53基因能在HGC27细胞内表达，且能抑制其生长并促进细胞凋亡。     

p73蛋白表达与老年人和非老年人肺癌临床病理特征的比较研究

目的 探讨p73与老年人肺癌和非老年人肺癌发生、发展的关系.方法 应用免疫组化SP法检测72例老年人肺癌组织、38例非老年人肺癌组织及34例癌旁组织中p73蛋白的表达.结果 p73蛋白在老年人肺癌组织和非老年人肺癌组织中的阳性表达率分别为62.5%、76.3%,均明显高于癌旁组织(26.5%),差异有统计学意义(P<0.05).老年人肺癌中,在不同性别和不同淋巴结转移状况的患者中,p73蛋白表达均有统计学差异(P<0.05);在不同肿瘤大小、不同组织学类型、不同分化程度、不同临床分期的患者中,p73蛋白表达无统计学差异(P>0.05).非老年人肺癌中,在不同性别的患者中p73蛋白表达有统计学差异(P<0.05);在不同肿瘤大小、不同组织学类型、不同分化程度、不同临床分期及不同淋巴结转移状况的患者中,p73蛋白表达均无统计学差异(P>0.05).结论 p73表达上调可能是肺癌发生、发展的重要因素;p73在老年人和非老年人肺癌组织中的表达有差异.推测p73上调可能与老年人肺癌的转移有关.     

肺癌组织中p53及p16基因蛋白表达的检测

目的　通过检测纤支镜支气管肺活检组织中抑癌基因p5 3及p16蛋白的表达 ,探讨基因诊断在肺癌早期诊断中的意义和两者在肺癌发生中的关系及作用机制。方法　采用免疫组化技术检测 5 3例纤维支气管镜活检的石蜡包埋支气管黏膜肺组织p5 3及p16基因蛋白的表达情况。结果　在正常和炎症支气管肺黏膜组织中p5 3基因蛋白阳性表达率为 0 ,p16基因蛋白阳性表达率为 10 0 % ;而在肺癌组织中 ,p5 3蛋白阳性表达率为 5 4 %(18/ 33) ,其中鳞状上皮癌为 5 5 % (11/ 2 0 ) ,腺癌为 5 4 % (7/ 13) ;p16蛋白阳性表达率仅为 4 2 % (14 / 33) ,阴性表达率为 5 8% (19/ 33) ,其中鳞状上皮鳞为 6 5 % (13/ 2 0 ) ,腺癌为 4 6 % (6 / 13)。统计学分析显示正常和炎症组织与肺癌组织间两种蛋白表达差异均有显著性 (P <0 0 0 5 ) ,而鳞癌与腺癌间表达差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　肺癌与正常和炎症患者相比 ,p5 3蛋白表达明显增高 ,p16蛋白表达明显下降 ,其改变在肺癌的发生发展中可能起重要作用 ,对肺癌的早期诊断和疗效观察有一定的临床意义 ,其两者间的相互关系需进一步观察。     

p73基因在卵巢肿瘤中的表达及意义

目的：探讨p73在卵巢肿瘤发展中的作用。方法：用免疫组化方法检测p73基因在上皮性卵巢肿瘤中的表达变化。结果：在卵巢良性，交界性及恶性肿瘤中，p73的表达率无明显差异性，但其表达与细胞分型相关，粘液性肿瘤p73以胞阳性表达为主，浆液性肿瘤p73以胞浆阳性表达为主。结论：p73基因的表达率与卵巢肿瘤发展无明显相关性。但其表达类型与细胞分型有关。     

野生型p53对胃癌细胞系的生长抑制作用

目的：观察野生型p53对胃癌细胞系的生长抑制作用。方法：以逆转录病毒为载体将野生型p53基因导入胃癌细胞系MKN28和BGC823，检测p53对肿瘤细胞的影响。结果：p53在转染细胞中表达水平提高。外源性p53的导入使肿瘤细胞增殖细胞核抗原（PCNA）水平明显降低；G0／G1期细胞数增加，S期降低。转染p53基因的MKN28细胞探鼠体内成瘤能力明显下降。结论：野生型p53基因参与调节DNA复制及细胞周期，抑制癌细胞过度增殖。     

乳腺癌中p73α和p53表达与化疗药物敏感性的关系

目的:研究乳腺癌细胞p73α、p53表达与化疗药物敏感性的关系.方法:选取病理诊断为乳腺癌(术前未行放疗、化疗)的手术切除标本12例,体外分离细胞作培养,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法分析表阿霉素(EPI)、丝裂霉素(MMC)、5-氟脲嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)4种化疗药物对乳腺癌细胞的相对抑制率,通过免疫细胞化学染色法分析乳腺癌细胞p73α、p53的表达.结果:0.1×PPC浓度时乳腺癌细胞对4种化疗药物的敏感率分别为MMC(42%)、EPI(33%)、5-Fu(17%)、DDP(17%);p73α( )的乳腺癌细胞对4种化疗药物敏感性均高于p73α(-)的乳腺癌细胞(P＜0.05),p73α阳性表达程度与乳腺癌细胞对EPI、MMC、5-Fu、DDP4种化疗药物的敏感性存在正相关关系(r=0.736,P＜0.05;r=0.744,P＜0.05;r=0.674,P＜0.05;r=0.721,P＜0.05).结论:p73α的表达与乳腺癌细胞对化疗药物敏感性有关.     

野生型p53基因转染对卵巢癌细胞株端粒酶活性的影响

目的 :探讨野生型 p5 3(wt- p5 3)基因转染对卵巢癌细胞端粒酶活性的影响。方法 :利用脂质体介导 ,将含有人全长 wt- p5 3基因 c DNA的真核表达载体质粒 p CEP4 / p5 3和空载体质粒 p CEP4分别转染人卵巢浆液性乳头状囊腺癌 SKOV3细胞株 ,分别命名为 SKOV3- p CEP4 / p5 3细胞 (C组 )、SKOV3- p CEP4细胞 (B组 ) ,另设 SKOV3细胞为空白对照组 (A组 ) ,观察 3组细胞周期和端粒酶活性变化。结果 :外源性 wt- p5 3基因在 C组细胞中获表达 ,而 A、B组细胞中无 wt- p5 3基因的表达。流式细胞仪检测示 C组细胞 G0 ～ G1 期百分比 (5 7.79% )及凋亡细胞率 (13.91% )均高于 B组 (46 .0 2 %、2 .0 8% )和 A组 (43.6 2 %、0 ) ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ,A、B、C3组细胞中端粒酶活性均呈阳性 ,但 3组细胞端粒酶活性无显著性差异 (P =0 .6 5 )。结论 :wt- P5 3基因转染可介导 SKOV3细胞 G0 ～ G1 期停滞和诱导细胞凋亡 ,但对 SKOV3细胞内端粒酶活性无影响     

扁平苔藓中p53和p73的表达情况

目的:检测p53 p73蛋白在扁平苔藓(LP)中的表达,探讨二者在LP发病中的作用。方法:采用免疫组化的方法检测30例LP和30例正常人对照的p53蛋白和p73蛋白的表达,统计分析。结果:p53和p73的表达在LP组均高于正常对照组,阳性单位值分别为(15.12±2.72)和(13.71±2.43),P<0.01差别有统计学意义。结论:p53和p73可能参与了LP的发病,并且二者之间具有协同作用。