季节性流感裂解疫苗在小鼠中半数有效剂量ED50a的测定

Objective To evaluate the seasonal influenza spilt vaccine's immunogenicity and the 50% effective dose ( ED50a ) of hemagglutin ( HA ) that can make 50% of the mice hemagglutination inhibition antibody ( HI ) titers to 40. Methods The 2008-2009 seasonal influenza spilt vaccine's two components, with HA from H1N1 and H3N2 influenza virus respectively, were used as a model. Mice were immunized once or twice with different doses, and the HI antibody titers were tested to determine the immunization procedure and to evaluate the immugenicity of seasonal influenza spilt vaccine in mice;Consequently, HI antibody response kinetics of the two components were observed to determine the time point when the HI antibody titer reached the peak point; Finally, mice were immunized with different doses of HA to evaluate the ED50a that can make 50% of mice HI titers reach 40. Results Immunization procedures study showed that one-dose of seasonal influenza vaccine induced the HI antibody titem ranged from 10 to 120, while two-dose of influenza vaccine improved the HI antibody titer 10-100 times as compared with one dose; antibody kinetics study suggested that the time point of HI antibody produced to peak is 28-35 days post one dose immunization ; and the ED50a detection results indicated that one dose of 1.5 μg HA could make 50% of the mice HI antibody titer reach 40. Conclusion Seasonal influenza spilt vaccine is very immunogenic in mouse; the time point of HI antibody produced to peak is 28-35 days post one dose immunization; and the ED50a of HA is 1.5 μg, which can make 50% of the mice HI titer reach 40. The experimental results provided foundation for the establishment of influenza vaccine evaluation system based on seasonal influenza vaccine.     

深圳市龙岗区2010年人群血清流感抗体水平监测

目的了解深圳市龙岗区部分健康人群的流感病毒抗体水平,为预防和控制疫情提供依据。方法应用血凝集抑制试验对深圳市龙岗区不同年龄组健康人群的血清进行流感病毒抗体检测。结果人群中各型及亚型病毒株的抗体阳性率均在50%以下,对新H1N1、H1N1、H3N2、BV和BY毒株的抗体阳性率分别37.4%、35.7%、36.9%、21.7%和39.8%,抗体几何平均滴度分别为43.3、47.5、42.0、33.2和29.5。结论应继续加强流感病毒抗原变异株和人群流感病毒抗体水平的监测,预测流感流行趋势,为预防和控制流感疫情提供科学依据。     

甲型H1N1流感患者血清流感病毒血凝抑制抗体滴度变化分析

目的 了解甲型H1N1流感患者发病后体内流感病毒特异性血凝抑制抗体滴度变化.方法 采集28例甲型H1N1流感患者发病后不同时间的血清,采用血凝抑制试验测定其抗体滴度并分析.结果 患者距发病1、5、15、22、37、49天和58天的血凝抑制抗体滴度分别为5.36、9.39、39.02、57.99、137.92、55.19和57.99,患者的最高抗体滴度几何均数为148.55,其中96.4％( 27/28)的患者在病程中产生保护性抗体和发生抗体血清转换.结论 甲型H1N1流感患者能有效产生保护性水平的抗体,有较好的免疫反应.     

脂质体流感疫苗制备及体液免疫应答的研究

目的：制备脂质体流感疫苗并对其体液免疫效果和保护效率进行研究.方法：采用薄膜法与冷冻干燥法相结合的方法制得多层脂质体;用制得的脂质体流感疫苗和普通疫苗分别免疫小鼠,用血凝抑制实验（HI）和酶联免疫吸附试验（ELISA）对免后2～13周的小鼠血清的抗体水平进行检测,HI检测其特异性抗体,ELISA检测IgG抗体水平并对小鼠的保护效率进行检测.结果：实验中,脂质体流感疫苗在2μg/mouse组和4μg/mouse两个剂量组中,不同免疫时间内其HI值可分别较非脂质体疫苗组高出2～3和4倍,产生抗体的水平经ELISA实验得出较非脂质体疫苗组高出1倍左右,故可激发更高的体液免疫;保护效力为4/6.结论：脂质体流感疫苗能够刺激机体产生更高的体液免疫和更高的保护效力.     

流行性感冒病毒裂解疫苗的安全性和免疫原性研究

目的 研究流行性感冒(流感)病毒裂解疫苗的安全性和免疫原性。方法 根据国家食品药品监督管理局2002SL0043号《新药临床研究申请批件》的要求，选择876例观察对象按随机双盲法分成试验组和对照组，观察局部反应和全身反应。用微量血凝抑制(H1)试验检验抗体应答反应，计算抗体阳转率、保护率及几何平均滴度(GMT)增长倍数。结果 试验疫苗和对照疫苗间全身和局部不良反应发生率差异无显著意义；两组间H1抗体阳转率、保护率及H3N2亚型和B型H1抗体GMT增长倍数差异无显著意义；然而，两种疫苗H1N1亚型的H1抗体GMT增长倍数间差异有显著意义。结论 两种疫苗均具有很好的安全性和免疫原性。     

利用RV-IgG标准品对风疹疫苗免疫后血清血凝抑制抗体保护浓度的测定

目的 利用风疹病毒的IgG标准品(RV-IgG)进行定量ELISA试验和血凝抑制试验,以测定风疹疫苗免疫后血清血凝抑制(HI)抗体的保护浓度,并验证试剂盒的准确性.方法 RV-IgG标准品和10对风疹疫苗免疫前后血清的定量ELISA试验;风疹病毒血凝素的粗提以及血凝试验;RV-IgG标准品的血凝抑制试验测定其血凝完全被抑制时RV-IgG浓度.结果 将RV-IgG标准品稀释为8个不同浓度梯度做定量ELISA,所测得的浓度值与已知浓度相比无统计学意义(P ＞0.05);10对风疹疫苗免疫前后人血清抗体浓度进行比较,免疫后血清抗体浓度显著升高(t =2.151,P＜0.05);风疹病毒血凝素的凝集效价为1∶128,RV-IgG标准品血凝抑制效价为1∶32,对应的HI抗体浓度为25 IU/ml.结论 实验结果证实血清中风疹病毒HI抗体保护浓度为25 IU/ml;风疹疫苗初次免疫后血清抗体保护性阳转率可达到80％.     

不同佐剂细胞基质四价流感裂解疫苗的小鼠免疫效果评价

目的:评价犬肾细胞基质四价流感裂解疫苗(MDCK-Va)配伍不同佐剂后的免疫原性。方法:将高、中、低剂量的MDCK-Va和鸡胚基质四价流感裂解疫苗(egg-Va)原液分别肌肉免疫BALB/c小鼠2次,间隔3周,小鼠眼静脉采血,分离血清,血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)试验检测抗体...     

小鼠气道反应性的测定

目的:测量各种小鼠呼吸模型的肺功能，尤其是非离体的动态肺功能，对于呼吸疾病的研究具有重要意义。 方法:主要包括整体测量方法和离体测量方法。而整体法又主要分为有创法（主要为气道阻力、顺应性的测定）和无创法（Penh，enhanced pause的测定）。本篇主要介绍整体的测量方法。 结论:不同的方法各有利弊，适用于不同的实验要求。     

2009—2010年广州甲型H1N1流感的流行特征分析

目的分析甲型H1N1流感在广州的流行特征。方法 2009年5月至2010年4月,每周分别从广州四家监测医院采集流感样症状患者的嗽口液或咽拭子,采用real-time PCR方法鉴定甲型H1N1流感病毒;在广州5大城区采集不同年龄的人群血清,通过血凝抑制实验检测血清中甲型H1N1流感抗体;对其时间和年龄的分层进行分析。结果全年共采集嗽口液或咽拭子3580份,甲型H1N1流感核酸检测阳性530份,阳性率为14.8%,阳性率最高的月份出现在10～12月,为36.5%～42.3%,阳性率最高的年龄组为5～岁和15～岁组,为18.5%和24.2%,最低的年龄组为≥60岁组,为4.1%。人群血清标本共采集1527份,甲型H1N1流感抗体阳性439份,阳性率为28.7%,阳性率最高的年龄组为5～岁和15～岁组,为36.1%和39.5%,最低的年龄组为≥60岁组,为8.6%。结论甲型H1N1流感的流行期发生在10～12月,流行时间短,感染的主要人群是学龄组人群,而老年人群的感染率相对较低。预防流感的工作重点应放在学校内。     

大剂量HBsAg疫苗对小鼠细胞免疫应答的调节作用

目的:探讨大剂量HBsAg疫苗对机体细胞免疫应答的影响。方法:不同剂量HBsAg疫苗两次免疫小鼠后, 用氚-胸腺嘧啶核苷(-[H³]TdR)掺入法, ELISA方法分别测定免疫鼠T淋巴细胞增殖能力, 细胞培养上清中白细胞介素-2(IL-2), γ干扰素(IFN-γ)含量及血清中抗HBsIgG2a阳转率。结果:大剂量HBsAg疫苗单次免疫后, 小鼠T淋巴细胞增殖能力显著强于对照组(P＜0.05);Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ显著多于对照组(P<0.05);抗HBsIgG2a阳转率显著高于小剂量组(P＜0.01)。加强免疫后, 各项指标增高更显著, 小剂量组才呈现显著性增高。结论:大剂量HBsAg疫苗可诱生特异性细胞免疫应答, 并使细胞免疫趋向Th1型。     

Immunization with a low dose of hemagglutinin-encoding plasmid protects against 2009 H1N1 pandemic influenza virus in mice

A vaccine against the novel pandemic influenza virus (2009 H1N1) is available, but several problems in preparation of vaccines against the new emerging influenza viruses need to be overcome. DNA vaccines represent a novel and powerful alternative to conventional vaccine approaches. To evaluate the ability of a DNA vaccine encoding the hemagglutinin (HA) of 2009 H1N1 to generate humoral responses and protective immunity, BALB/c mice were immunized with various doses of 2009 H1N1 HA-encoding plasmid and anti-HA total IgG, hemagglutination inhibition antibodies and neutralizing antibodies were assayed. The total IgG titers against HA correlated positively with the doses of DNA vaccine, but immunization with either a low dose (10 μg) or a higher dose (25-200 μg) of HA plasmid resulted in similar titers of hemagglutination inhibition and neutralizing antibodies, following a single booster. Further, 10 μg plasmid conferred effective protection against lethal virus challenge. These results suggested that the DNA vaccine encoding the HA of 2009 H1N1 virus is highly effective for inducing neutralizing antibodies and protective immunity. DNA vaccines are a promising new strategy for the rapid development of efficient vaccines to control new emerging pandemic influenza viruses.     

抗三价流感病毒亚单位疫苗IgY防治小鼠流感病毒感染的实验研究

目的:探讨抗三价流感病毒亚单位疫苗IgY(Immunoglobulin Yolk)预防及治疗流感病毒感染小鼠的作用。方法:建立A/fm/1/47(H1N1)流感小鼠模型;分5组,观察各组小鼠死亡率,脾、肺指数及肺指数抑制率。结果:0.2%抗三价流感病毒亚单位疫苗IgY于攻毒前24、6、1小时滴鼻3次显著地预防流感病毒致死率(30.0%),而攻毒后1、6、24小时分别滴鼻3次,此后每天滴鼻1次,持续5天,致死率为20.0%,两组与阳性对照组(致死率90.0%)、非特异性IgY预防和治疗组(致死率80.0%,70.0%)比较差异显著(P<0.01)。0.2%抗三价流感病毒亚单位疫苗IgY预防组和治疗组肺指数显著低于阳性对照组(P<0.05~0.01),其治疗组也低于非特异性IgY预防和治疗组(P<0.05)。结论:抗三价流感病毒亚单位疫苗IgY感染前后24小时内多次滴鼻能有效地预防和治疗流感病毒感染。     

甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗对小鼠的免疫原性观察

目的:观察国产甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗对小鼠的免疫原性.方法:将不同血凝素含量(20、30、40 μg/ml)各3批甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗分别免疫小鼠,腹腔注射0.5 ml/只,每批疫苗又分为1针组、2针组,每组10只,2针间隔1周,同时设对照组.首针免疫后21天,分别采血,分离血清,检测血凝抑制抗体效价和中和抗体效价,观察疫苗的免疫原性.结果:血凝素含量为20 μg/ml的甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗1针组、2针组血凝抑制抗体效价均小于1:40,中和抗体效价均小于1∶200;血凝素含量为30、40 μg/ml的甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗1针组、2针组的血凝抑制抗体效价均大于1∶40,中和抗体效价均大于1∶200;血凝素含量为30、40 μg/ml的甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗1针组和2针组的血凝抑制抗体和中和抗体效价比较,差异均无统计学意义.结论:血凝素含量为30 μg/ml的甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗接种1针即可达到理想的免疫效果.     

流感疫苗研究进展

在过去几十年里,流感疫苗经历了灭活、减毒、亚单位疫苗等几次变革,并且是最早进行核酸疫苗研究的一种疫苗,本文就不同的流感疫苗研究近况作一综述。     

流感疫苗的安全性和效果效益研究

目的 评价流感裂解疫苗的安全性和效果效益.方法 随机选取北京市西城区587名接种流感裂解疫苗的老年人作为试验组研究对象.与试验组同一社区,年龄、性别相匹配的618名未接种者作为对照组.随访试验组研究对象接种疫苗后3-6个月的发病情况.结果 疫苗不良反应发生率为3.46％,不良反应较轻,可在短时间内恢复.接种后3个月,流感疫苗对呼吸系统疾病的保护率为64.29％.第3个月和第6个月,接种流感疫苗的效益-成本比分别为6.24:1和1.24:1.结论 流感裂解疫苗对老年人有良好的保护作用.     

Antibody responses to influenza a H1N1 vaccine compared to the circulating strain in influenza vaccine recipients during the 2013/2014 season in North America

BackgroundInfluenza strain A/California/07/2009 H1N1 (H1N1-09) reemerged in 2013/2014 as the predominant cause of illness. We sought to determine if antigenic drift may have contributed to the decreased responses to influenza vaccine.MethodsFifty adults who received trivalent inactivated influenza vaccine (IIV3) and 56 children who received live attenuated quadrivalent influenza vaccine (LAIV4) had hemagglutination inhibition (HAI) and microneutralizing (MN) antibodies measured in plasma against H1N1-09 and H1N1 2013/2014 (H1N1-14) influenza. Partial sequencing of the hemagglutinin gene (nt 280–780) was performed on 38 clinical isolates and the vaccine prototype.ResultsIn IIV3 recipients, HAI and MN titers against H1N1-14 were significantly lower than against H1N1-09 (p < 0.0001 and 0.04, respectively). In LAIV4 recipients, only MN titers were significantly lower (p = 0.02) for H1N1-09 compared with H1N1-14. A combined analysis showed significantly lower HAI and MN titers for H1N1-14 compared with H1N1-09 (p = 0. 016 and 0.008, respectively). All 38 clinical isolates encoded the HA gene K166Q non-synonymous substitution; other non-synonymous substitutions were observed in <10% of the clinical isolates.Conclusions2013/2014 IIV3 and LAIV4 recipients had consistently lower MN antibody titers against H1N1-14 compared with H1N1-09. The HA K166Q mutation, located in a neutralizing epitope, probably contributed to these findings.     

甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的研制和临床观察初步结果

目的 研制甲型H1N1流感疫苗并进行人体安全性和有效性观察.方法 用WHO推荐的甲型H1N1流感疫苗毒种按照季节性流感裂解疫苗工艺研制甲型H1N1流感疫苗,成品参照流感病毒裂解疫苗质量标准进行各项指标检定,用2批血凝素含量不同的试制产品进行临床验证.结果 血凝素含量15μg/剂和30μg/剂各1批试制产品经检定并由中国药品生物制品检定所复检,符合暂定质量标准要求.临床观察显示,960名受试者接种15μg或30μg试验疫苗1针,21 d后血清抗体阳性率、保护率均大于70%.3～11岁、12～17岁、18～59岁及≥60岁,15μg组几何平均滴度(GMT)分别较免疫前增长15、39、37和25倍;30μg组GMT分别较免疫前增长26、72、68和36倍.安全性观察结果显示15μg和30μg组总的不良反应发生率为29.38%和43.75%,其中2级反应率为6.25%和15.42%,3级反应率为0.83%和1.46%,未观察到严重不良反应.结论 按照季节性流感生产工艺研制的甲型H1N1流感病毒裂解疫苗具有良好的安全性和有效性.