Delta mtDNA4977 is more common in non-tumoral cells from gastric cancer sample

BACKGROUND: The aim of this study was to determine the frequency of delta mtDNA4977 in tumoral cells as compared with adjacent normal cells in gastric cancer. METHODS: In order to investigate whether a high incidence of mutation exists in mitochondrial DNA of gastric cancer tissues, we screened one of common region of the mitochondrial genome by PCR amplification and Southern blot followed by DNA sequence analysis. DNA isolated from these cells was used to amplify hypervariable regions ATPase8/6, COXIII, ND3, ND4 and ND5 of delta mtDNA4977. RESULTS: In 107 cancer patients, delta mtDNA4977 was detected in 6 cases (5.60%) of the tumoral tissues and 18 cases (16.82%) of the non-tumoral tissues that were adjacent to the tumors. Levels of delta mtDNA4977 deletions were found to be more in non-tumoral tissues than in adjacent tumoral tissues. There was no correlation of patients with certain clinical parameters like age, sex, tumor location and tumor size; however, there was an obvious relationship with intestinal-type of gastric cancer. CONCLUSIONS: Unknown genetic aspects, ambiguous environmental factors and reactive oxygen species (ROS) can cause the delta mtDNA4977 mutation rate to be increased in gastric cancer. The results suggest that percentage level of delta mtDNA4977 is less common and intolerable in tumoral tissue, probably because of high metabolism and ROS generation. We supposed that the cells initially had delta mtDNA4977 transform to tumoral cells and the existed deletion conferred metabolic disadvantage; thus, cells containing such a mtDNA deletion would be overgrown by other cancer cells without this mtDNA deletion. As a result, the presence of delta mtDNA4977 will be low in tumoral cells.     

低密度脂蛋白受体LDLR基因在胃癌中的表达及意义

目的 检测低密度脂蛋白受体LDLR在胃癌肿瘤细胞系和组织中基因水平的表达,并探讨其与胃癌的相关性.方法 利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测7株胃癌细胞系及其56对胃癌组织和癌旁配对组织中LDLR基因的mRNA水平表达状况.并对所得数据做相关性研究分析.结果 LDLR在7株胃癌细胞系的mRNA水平均有表达且有差异,其中N87、MKN45表达较高.LDLR在56对胃癌和癌旁配对组织中的mRNA水平表达有差异,肿瘤组织表达水平71.4％ （40/56）,高于癌旁配对组织39.3％ （22/56）,差异有显著性（P＜0.01）.结论 LDLR基因在不同胃癌细胞系和胃癌组织中高表达,且胃癌肿瘤组织表达高于癌旁组织,提示低密度脂蛋白受体LDLR基因表达与胃癌相关.     

胃癌细胞系和胃癌组织中线粒体DNA4 977 bp缺失及其生物学意义

目的 明确线粒体DNA 4977bp大片段缺失在胃癌细胞系、胃癌组织及胃癌患者血清中的频率,为胃癌的早期临床诊断寻找简便准确的分子标记。方法 运用Primer-shift PCR和直接测序的方法对13个胃癌细胞系、52对胃癌组织及对应的癌旁正常组织（年龄从28-78岁）、40例胃癌患者血清及40名正常人血清进行筛查。取10例胃癌组织的石蜡切片,采用显微切割技术在同一患者的切片上同时分离3种组织（包括胃粘膜正常腺体、肠化上皮及胃癌组织）对mtDNA 4977bp缺失进行了分析比较。结果 在13个胃癌细胞系中12个有mtDNA4977bp缺失（缺失率为92.3%),52例胃癌组织中38例有缺失（缺失率为73.1%),52例癌旁正常组织中27例有缺失（缺失率为52%）,40名胃癌患者血清中17例有缺失（缺失率为42.5%),40名正常人血清中8例有缺失（缺失率为20%）。胃癌组织和癌旁正常组织mtDNA 4977bp缺失差异有显著意义,癌组织mtDNA 4977bp缺失率与胃癌的分型和患者的性别没有关联。胃癌患者血清与正常人血清mtDNA4977bp缺失差异也有显著意义。10例显微切割组织中2例肠化上皮及胃癌组织中有缺失,而胃粘膜正常腺体未见缺失。结论 线粒体DNA 4977bp大片段缺失可能在胃癌发生和胃粘膜病变演化及细胞癌变的过程中起重要作用,血清中可以检测到线粒体DNA 4977bp大片段缺失,而且在胃癌患者血清中检出率远高于正常人血清。检测胃癌患者血清中mtDNA 4977bp大片段缺失有望成为一种简便易行的胃癌生物学行为的分子标记物。     

早期生长反应因子1在消化系统肿瘤中的异常表达及其生物学意义

目的 明确早期生长反应因子1(EGRl)在胃癌、肝癌、大肠癌和食管癌中的表达水平变化,探讨其在肿瘤发生发展中的作用.方法 在获得胃癌差异基因表达谱的基础上,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)在胃癌组织和癌旁形态学正常组织及非癌患者正常胃黏膜组织中验证EGR1基因mRNA的表达水平;进一步利用RT-PCR和Western印迹分析比较EGR1在20株肿瘤细胞系(胃癌7株、肝癌5株、大肠癌5株及食管癌3株)中mRNA和蛋白水平表达的变化;采用组织芯片和免疫组织化学方法分析EGR1在179例癌组织及159例正常组织中的表达变化及生物学意义.结果 在非癌患者正常胃黏膜组织中EGR1基因呈低水平或阴性表达,而在癌和癌旁形态学正常组织均有较高水平的表达,与胃癌基因表达谱信息一致.在多种肿瘤细胞系和癌组织中及癌旁形态学正常组织中均存在EGR1的高表达.在检测的4种人肿瘤组织和癌旁形态学正常组织中EGR1均主要表达于胞质,其中胃癌及癌旁分别为87%(49/56)和79%(43/54);肝癌及癌旁分别为83%(43/52)和79%(32/42);大肠癌和癌旁分别为78%(41/52)和63%(22/35);食管癌和癌旁分别为79%(15/19)和78%(14/18).EGR1在肿瘤组织和癌旁形态学正常组织均呈现高水平表达,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 EGR1在癌和癌旁配对正常组织中以胞质为主高表达而在非癌患者正常组织以胞核为主低表达,EGR1可能与癌变早期的细胞异常增殖相关.     

线粒体DNA4977bp缺失检测肿瘤细胞辐射敏感性的初步研究

目的:探讨mtDNA4977bp缺失用于肿瘤细胞辐射敏感性检测的可行性。方法:分别采用MTT法和巢式PCR法测定人肿瘤细胞株—肝癌细胞(HepG2)、食管癌细胞(EC-9706)和乳腺癌细胞(MCF-7)不同剂量γ射线照射后的存活分数(SF)和mtDNA4977bp缺失率。结果:MTT法:2Gy、4Gy和8Gy照射后,HepG2和EC-9706的SF显著低于MCF-7,表明HepG2和EC-9706细胞具有更高的辐射敏感性,HepG2细胞照射后的SF略低于EC-9706细胞,但统计学差异不显著。PCR法:1Gy和4Gy照射后3种肿瘤细胞mtDNA4977bp缺失率无显著性差异。8Gy照射后HepG2和EC-9706 mtDNA4977bp缺失进一步增加,而MCF-7的缺失率下降,显著低于HepG2与EC-9706细胞的缺失率,但HepG2和EC-9706细胞的缺失率无统计学差异,提示HepG2和EC-9706细胞的辐射敏感性高于MCF-7细胞,这与MTT法测定结果相符。结论:测定mtDNA4977bp缺失作为快速、简便的检测方法,有望用于肿瘤细胞辐射敏感性预测。     

最小努力(惰性)原则与慢性病预防行为选择

目的:探讨长链非编码RNA MEG3在胃癌组织及细胞系中的表达水平,以及过表达MEG3对胃癌细胞增殖能力的影响,并探索其可能的作用机制?方法:用定量反转录PCR(qRT-PCR)技术检测胃癌组织及细胞系中MEG3的表达水平;通过转染pcDNA-MEG3上调MEG3的表达水平,并通过qRT-PCR检测转染效率?用MTT和克隆形成试验检测上调MEG3的水平对BGC-823细胞和MGC-803细胞的增殖能力的影响,Western blot检测这两种细胞中上调MEG3的水平对p53蛋白的表达水平的影响?结果:相比正常胃组织及细胞,在胃癌组织和细胞中MEG3的表达出现显著下调,SGC7901?MGC-803和BGC-823细胞中MEG3的表达水平分别是正常胃上皮细胞GES-1中的73.6%?42.0%和27.1%(P < 0.05)?BGC-823细胞和MGC-803细胞中转染pcDNA-MEG3能显著上调MEG3的表达,MEG3的表达水平分别为对照组的252倍和311倍(P < 0.05);MTT和克隆形成试验显示,上调MEG3的表达能降低BGC-823细胞和MGC-803细胞的增殖能力?Western blot实验显示,转染了pcDNA-MEG3的MGC-803和BGC-823细胞中p53的表达相较对照组中显著增加?结论:胃癌组织及细胞中MEG3的表达下调,且这可能通过抑制p53蛋白的激活从而促进胃癌细胞增殖,影响胃癌的发生和发展?     

胃癌中miRNA-340的体内外增殖能力检测及生物信息分析

目的了解miRNA-340在胃癌发生中的可能机制,在线预测与其相互作用的circRNAs及其下游靶基因和参与的信号通 路。方法利用芯片筛选胃癌细胞株中差异表达miRNA;利用Real-time RT-PCR,检测miRNA-340在21对胃癌组织与癌旁正 常组织中的表达水平;利用MTT及EdU细胞增殖实验,检测miRNA-340对正常胃上皮细胞HFE145与胃癌细胞BGC-823的体 外增殖能力;利用裸鼠成瘤实验检测miRNA-340在体内成瘤的能力。随后,通过在线软件Targetscan、David数据库及Starbase 分别对miRNA-340 的下游的靶基因、相关信号通路及相互作用的circRNAs 进行生物信息分析。结果与正常胃上皮细胞 HFE145相比较,miRNA-340在胃癌细胞株中的表达水平显著下调;Real-time RT-PCR结果显示,miRNA-340在胃癌组织中的 表达明显低于正常粘膜组织（P<0.048）;体内体外实验表明miRNA-340对细胞的体外增殖能力具有一定的抑制作用;生物信息 分析显示,预测的miRNA-340相互作用的下游靶基因中,筛选出21个具有3个及以上的保守结合部位的靶基因,其中多个靶基 因均参与肿瘤的发生及侵袭;相互作用的circRNAs中筛选出分值前10个circRNAs作为与miRNA-340可能作用最强的sponge circRNAs。结论miRNA-340 在肿瘤发生发展中可能起到了抑癌基因的作用,对胃癌细胞的增殖具有一定的抑制作用; miRNA-340与多个circRNAs可能存在相互作用,共同调控下游靶基因参与胃癌的发生发展。     

miRNA-671上调抑制胃癌细胞增殖与迁移

目的 探索miR-671在胃癌组织和细胞中的表达,并研究其对胃癌细胞增殖和迁移的影响.方法 通过qRT-PCR实验检测miR-671在胃癌组织和细胞中的表达,通过CCK-8实验检测miR-671表达上调对MKN45胃癌细胞增殖,通过划痕和Transwell小室实验检测miR-671表达上调对MKN45胃癌细胞侵袭和迁移的影响.结果 与癌旁正常组织相比,胃癌组织中的miR-671表达明显下调(P＜0.01);与正常人胃黏膜上皮细胞相比,胃癌细胞中的miR-671表达也明显下调(P＜0.01);miR-671表达上调明显抑制MKN45胃癌细胞增殖、迁移和侵袭(P＜0.01).结论 miR-671可以抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,在胃癌中发挥抑癌基因功能.     

CD59在胃癌中的表达及其生物学意义

目的探讨CD59基因在胃癌中的表达及其生物学意义。方法以胃癌细胞系,胃癌组织和癌旁正常配对组织为材料,采用RT-PCR法和Real-Time PCR法测定CD59基因的mR-NA表达水平。结果CD59 mRNA在7株不同来源、不同分化程度的胃癌细胞系中表达水平不相同;在19对配对组织中有16对(16/19,84%)肿瘤组织表达水平低于与其配对的癌旁正常组织。结论CD59 mRNA的表达在胃癌细胞系中表现出组织特异性,其表达水平与胃癌细胞分化程度有一定关系;并且CD59 mRNA在胃癌组织中普遍低表达可能是肿瘤发生的早期事件之一,对胃癌的发生发展可能具有重要生物学意义。     

人胃癌细胞和胃癌组织中胃肠富集Kruppel样因子和肠道富集Kruppel样因子的表达及其临床意义

目的研究人胃癌细胞株和胃癌组织中胃肠富集Kruppel样因子（GKLF）、肠道富集Kruppel样因子（IKLF）的表达及其临床意义。方法采用免疫细胞化学法检测人正常胃上皮细胞株GES-1及胃癌细胞株MKN28、SGC7901、BGC823、HGC27中GKLF、IKLF的表达;采用免疫组织化学法检测96例胃癌组织及其远端正常胃组织中GKLF、IKLF的表达。结果GKLF在人正常胃上皮细胞株内阳性表达,在胃癌细胞株内无表达;IKLF在人正常胃上皮细胞株内无表达,在胃癌细胞株内阳性表达。胃癌组织中GKLF阳性率为20.8%,显著低于远端正常胃组织（64.6%,P〈0.01）,胃癌组织中IKLF阳性率为71.9%,显著高于远端正常胃组织（21.9%,P〈0.01）。GKLF、IKLF表达与胃癌患者的年龄、性别、分化程度、Lauren分型无关（P〉0.05）,但与淋巴结是否有转移及TNM分期显著相关（P〈0.01）。结论GKLF、IKLF在胃癌发生、发展中起一定的作用,检测GKLF、IKLF的表达有助于判断胃癌患者的病情程度和预后。     

免疫球蛋白样转录子2在胃癌细胞中的表达及临床意义

目的检测免疫球蛋白样转录子2(ILT2)在胃癌组织及胃癌细胞系中的表达,分析其表达与胃癌生物学行为和临床特征的关系。方法采用免疫组织化学方法检测50例胃癌病理组织中ILT2蛋白的表达,并结合临床病理指标进行分析。采用实时荧光定量PCR和FACS流式细胞术检测6株高(MKN1)、中(SGC-7901,AGS)、低(MGC-803)及未分化(HGC-27,BCG-823)人胃癌细胞株ILT2的mRNA和蛋白表达。MTT法检测自然杀伤细胞(NK-92)和外周血淋巴细胞(PBMCs)对HGC-27、MKN1两种胃癌细胞的杀伤活性。结果 50例胃癌病理组织中ILT2表达阳性率为62.0%(31/50),正常胃组织不表达ILT2。在低分化型胃癌组织中ILT2表达阳性率为73.3%(22/30),在分化型组织中表达阳性率为45%(9/20),差异有统计学意义(χ2=4.089,P<0.05);肿瘤直径>5 cm时胃癌组织中ILT2表达阳性率为84.2%(16/19),明显高于肿瘤<5 cm时患者阳性率48.4%(15/31),差异有统计学意义(χ2=6.417,P<0.01)。6株人胃癌细胞均表达ILT2,ILT2在低分化和未分化胃癌细胞中表达阳性率高于中分化和高分化细胞(P<0.05)。在不同效靶比下人PBMC及NK-92细胞对MKN1细胞(ILT2低表达)的杀伤能力高于对HGC-27细胞(ILT2高表达)的杀伤(P<0.05)。结论胃癌组织细胞ILT2的表达与细胞分化程度和胃癌临床病理特征显著相关,PBMC和NK-92细胞对高表达ILT2的胃癌细胞的杀伤能力降低。提示ILT2可能参与肿瘤的免疫逃逸并可作为胃癌诊断和治疗的新靶点。     

Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1促进肝癌细胞的转移

目的:探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)在肝癌中的表达及在肝癌侵袭中的作用?方法:荧光定量PCR(real-time PCR)检测肝癌及癌旁组织中ROCK1的mRNA表达水平,同时检测肝癌细胞系及正常人肝细胞中ROCK1mRNA表达水平,免疫组织化学染色(IHC)法检测肝癌及癌旁组织中ROCK1蛋白的表达量,并通过在肝癌细胞株中过表达及干扰ROCK1分析ROCK1蛋白对肝癌细胞转移的作用?结果:60对样本中有42对ROCK1的mRNA表达水平在肝癌组织中高于癌旁组织,免疫组织化学染色提示肝癌组织中ROCK1蛋白表达量高于癌旁组织?在体外肝癌细胞的功能实验中,过表达ROCK1能促进HepG2细胞的侵袭和转移,而干扰ROCK1的表达能减少SMMC-7721细胞的侵袭和转移?结论:ROCK1在肝癌组织中高表达,过表达ROCK1能促进肿瘤的侵袭及转移,ROCK1可能成为临床治疗中抑制肿瘤侵袭和转移的靶点?     

ARNT2在胃癌中的表达及临床意义

目的 探讨人胃癌中芳香烃受体核易位蛋白2(ARNT2)的表达及临床意义。 方法 运用qRT-PCR和Western blotting检测ARNT2在正常胃细胞株及多种胃癌细胞株中的表达。通过免疫组织化学检测61例胃癌组织及相应癌旁胃黏膜组织中ARNT2的表达。 结果 ARNT2 mRNA和蛋白在胃癌细胞株中的表达水平显著低于正常胃细胞株。胃癌组织中ARNT2的阳性表达率显著低于癌旁胃黏膜组织(32.79% vs 80.33%,P<0.05),与细胞株的检测结果一致。并且,胃癌中ARNT2的表达水平与肿瘤的分化程度显著相关(P<0.05)。 结论 ARNT2在胃癌细胞及组织中低表达,并且其表达水平与胃癌的分化程度相关,提示其可能参与胃癌的发生与发展。     

肾母细胞瘤过表达基因促进肝癌细胞的侵袭与转移

目的:探讨肾母细胞瘤过表达基因(NOV CCN3)在肝癌中的表达及在肝癌侵袭中的作用?方法:荧光定量PCR(real-time PCR)检测肝癌及癌旁组织中的CCN3的mRNA表达水平,同时检测肝癌细胞系及正常人肝细胞中CCN3的mRNA表达水平,Western blot检测肝癌及癌旁组织中CCN3蛋白的表达量;通过肝癌细胞过表达CCN3分析CCN3蛋白对肝癌细胞转移的作用;运用Transwell侵袭实验和划痕迁移实验研究CCN3过表达对肝癌细胞侵袭和迁移能力的影响?结果:50对样本中有39对CCN3的mRNA表达水平在肝癌组织中高于癌旁组织,Western blot提示肝癌组织中CCN3蛋白表达量高于癌旁组织?体外肝癌细胞的功能试验中,过表达CCN3能促进MHCC-97H?SMMC-7721细胞的侵袭与转移?结论:CCN3在肝癌组织中高表达,过表达CCN3能促进肝癌的侵袭与转移,CCN3发挥作用机制的研究能为肝细胞肝癌的治疗提供新的思路?     

精索静脉曲张的不育病人精子线粒体DNA片段缺失的调查

目的分析精索静脉曲张导致的不育病人的精子线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）中一个长为4 977 bp的片段缺失的情况。方法收集60例精索静脉曲张的不育病人和90名健康男性的精液标本,并抽提精子的总DNA,用Gap-PCR技术检测DNA 4 977 bp片段的缺失情况。结果在81.66%的患有精索静脉曲张的不育病人和4.44%的健康人对照中存在DNA 4 977 bp片段的缺失。患有精索静脉曲张的不育病人中DNA缺失频率更高（OR=139.80,95%CI=40.08~487.30,P < 0.01）。结论精索静脉曲张可能会导致一些男性精子DNA缺失,并导致不育。且精子线粒体DNA 4 977 bp片段缺失与精索静脉曲张所致不育症存在一定的相关性。     

Pim-3在肺癌组织中的表达

目的探讨Pim-3在肺腺癌A549细胞系和肺癌组织中的表达及临床意义。方法免疫组化法检测Pim-3蛋白在肺癌细胞系、不同类型肺癌组织和非肺癌支气管肺组织中的表达,分析组间差异。结果 Pim-3蛋白在肺癌细胞系和不同类型肺癌组织中阳性表达率均为100%,而癌周组织未见明显阳性表达;在正常支气管肺组织中,未见阳性表达;不同类型肺癌组织阳性表达率无统计学差异。结论 Pim-3蛋白有可能成为新的肺癌标志物。     

RASSF1基因在胃癌组织及细胞中的表达

[摘要] 目的 研究RASSF1基因的三种转录本(RASSF1-A, -B, -C)在胃癌组织及细胞中的表达特点。方法 应用生物信息学分析RASSF1基因的3种转录本的结构特点; 同时利用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃癌组织、癌旁组织及不同胃癌细胞系BGC和SGC细胞中三种转录本的mRNA表达水平。结果 RASSF1基因3种转录本在胃癌不同分化程度的细胞系BGC-823和SGC-7901细胞中均有表达,在60例胃癌组织中RASSF1A,RASSF1B 表达缺失率分别为60.2%(37/60),25%（15/60）,RASSF1C基因在胃癌组织及癌旁组织表达率相近约为86.7%（55/60）。结论 RASSF1三种转录本在胃癌组织中的表达下调, RASSF1B和RASSF1C在胃癌中的表达无差异,其余基因比较有差异。RASSF1B的表达可能与细胞的分化程度有关。     

Up-regulated manganese superoxide dismutase expression increases apoptosis resistance in human esophageal squamous cell carcinomas

Background Esophageal cancer is one of the most common malignancies in the world. In order to identify the proteins associated with esophageal squamous cell carcinomas （ESCC）, we analyzed the protein profiles of ESCC cases with tumor and matched adjacent normal tissues. Methods Two-dimensional electrophoresis （2-DE） was carried out to analyze the protein profiles. Dysregulated protein spots were identified by Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Time-of-Flight （MALDI-TOF） and verified by liquid chromatography/electrospray ionization ion trap-mass spectrometry/mass spectrometry （LC-ESI-IT MS）. RT-PCR and immunohistochemistry on tissue microarray were performed to confirm the gene dysregulation in esophageal cancerous tissues. RNA interference （RNAi） was used to knock down the gene expression in ESCC cell lines. Apoptosis assay with annexin V-FITC/PI staining was conducted and cells were analyzed by flow cytometry. Results 2-DE showed that two protein spots with approximate molecular weights and different pl were elevated in 12 out of 18 ESCCs as compared to the corresponding normal tissues. Both the two spots were identified as MnSOD by MALDI-TOF and were verified by LC-ESI-IT MS. MnSOD overexpression was detected in 14 tumors out of 24 cases by RT-PCR and 52 tumors out of 116 cases by immunohistochemistry comparing to normal epithelia, siRNA-mediated silencing of MnSOD in KYSE450 and KYSE150 cell lines revealed that MnSOD protected ESCC cells from apoptosis induced by ultraviolet （UV） and doxorubicin （DOX）. Conclusions These findings suggest that there existed two isoforms of MnSOD protein in normal and tumor esophageal tissues. MnSOD was overexpressed in ESCC and its up-regulation in esophageal cancer cells was associated with apoptosis resistance.