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1.
【目的】 探讨硫化氢(H2S)对抗二氯化钴(CoCl2)诱导PC12细胞凋亡的作用及其初步机制｡【方法】 应用化学性缺氧模拟剂CoCl2在PC12细胞建立化学性缺氧损伤模型;以硫氢化钠(NaHS)作为H2S的供体;应用CCK-8比色法检测细胞存活率;碘化丙啶(PI)染色流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率; Hoechst33258 染色检测细胞凋亡的形态学变化; 罗丹明123(Rh123) 染色荧光显微镜照相检测细胞线粒体膜电位(MMP); 2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相检测细胞内的活性氧 (ROS)水平｡【结果】 CoCl2引起PC12细胞的存活率显著降低及凋亡率明显增加, 同时引起PC12细胞的MMP 明显降低及ROS 生成显著增加｡在600 μmol/L CoCl2处理PC12细胞前,应用100 ~ 400 μmol/L NaHS 预处理30 min,呈浓度依赖性地阻断CoCl2引起PC12细胞的存活率降低; 200 μmol/L､400 μmol/L NaHS 预处理能显著地降低600 μmol/L CoCl2 引起PC12 细胞的凋亡率增加并阻断CoCl2 引起的MMP降低及ROS升高｡【结论】 H2S 具有神经细胞保护作用, 能明显地对抗CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,此作用可能与其减少ROS生成,提高MMP有关｡ 相似文献
2.
【目的】 研究二烯丙三硫(DATS)对人前列腺癌PC-3细胞的生长抑制作用及相关机制｡ 【方法】 MTT法测定DATS对PC-3细胞生长的影响;细胞形态学,流式细胞仪(FCM)等检测细胞凋亡;western blot､比色法分别检测凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax和Bcl-xL/Bcl-xS的表达以及Caspase-3活性变化｡ 【结果】 DATS明显抑制PC-3细胞的生长,呈浓度和时间依赖性;DATS作用72 h的IC50为14 μmol/L;14 μmol/L DATS作用PC-3细胞不同时间后,细胞凋亡率增高;western blot显示凋亡抑制蛋白Bc1-2､Bcl-xL表达减少,比色法表明Caspase-3活性增高｡【结论】 DATS诱导细胞凋亡是其抑制前列腺癌PC-3细胞生长的重要机制,该机制可能与Bc1-2､Bcl-xL和Caspase-3表达及活性变化有关｡ 相似文献
3.
【目的】 观察不同剂量的三氧化二砷(As2O3)对成年大鼠生精细胞凋亡的影响｡ 【方法】 40只健康雄性SD大鼠随机分成对照组､低剂量组(0.0375 g/L)､中剂量组(0.075 g/L)､高剂量组(0.15 g/L) 4组,灌胃法连续给药16周后对各组大鼠睾丸取材进行精子头计数,并计算睾丸脏器系数､每日精子生成量(DSP)｡采用甲基绿-派诺宁染色法和TUNEL法检测大鼠生精细胞凋亡情况｡ 【结果】 ① 中､高剂量组睾丸精子头计数和DSP均低于对照组(P < 0.05); ② 与对照组相比,中､高剂量组生精细胞凋亡指数(AI)均显著升高(P < 0.01);③生精细胞AI与DSP呈负相关(r = -0.563, P < 0.01)｡【结论】 一定剂量As2O3可通过促进生精细胞凋亡而导致精子生成量的减少,从而产生雄性生殖毒性｡ 相似文献
4.
【目的】 观察神经生长因子(NGF)及TrKa阻断剂K252a对体外培养的人视网膜血管内皮细胞(HRCEC)增殖的影响｡ 【方法】 MTT法检测不同因子(NGF各浓度组､NGF + K252a各浓度组､bFGF组､bFGF + K252a组和正常培养液组)对正常和缺氧条件下培养的HRCEC的影响｡ 【结果】 随NGF浓度增加(20､50､100 ng/ml),HRCEC细胞数目明显增多(正常氧浓度NGF组分别为0.254 ± 0.033､0.696 ± 0.029､1.136 ± 0.051;缺氧条件相应各组为0.422 ± 0.036､0.798 ± 0.044､1.376 ± 0.052,P均 < 0.05)｡随K252a浓度增加(50､100､200 nmol/L),NGF + K252a组正常氧浓度时分别为0.864 ± 0.067､0.496 ± 0.025､0.202 ± 0.078,缺氧条件时相应为1.042 ± 0.047､0.700 ± 0.065､0.401 ± 0.078,较同浓度NGF(100 ng/ml)组HRCEC细胞数目减少(P < 0.05),随K252a浓度增加HRCEC细胞数目减少趋势愈加显著(P均 < 0.05)｡【结论】 NGF可促进HRCEC的增殖,该作用可被特异性TrkA阻断剂K252a所阻断｡ 相似文献
5.
【目的】 探讨红霉素､环丙沙星､左氧氟沙星､莫西沙星4种抗菌药物对细胞内嗜肺军团菌的抗菌活性｡【方法】 分别采用E-test法和有限稀释法测定上述4种药物对嗜肺军团菌ATCC 33152的细胞外抗菌活性,再用噻唑蓝比色法(MTT法)测定上述药物对嗜肺军团菌ATCC 33152的细胞内抗菌活性｡【结果】 细胞外抗菌活性E-test法:红霉素0.047 μg/mL､环丙沙星0.38 μg/mL､左氧氟沙星0.125 μg/mL､莫西沙星0.125 μg/mL;有限稀释法:红霉素0.125 μg/mL､环丙沙星0.03 μg/mL､左氧氟沙星0.016 μg/mL､莫西沙星0.016 μg/mL｡4种药物的细胞内抗菌活性分别为:红霉素0.25 μg/mL､环丙沙星0.016 μg/mL､左氧氟沙星0.016 μg/mL､莫西沙星0.004 μg/mL｡【结论】 氟喹诺酮类药物在U937细胞模型中对嗜肺军团菌ATCC 33152具有很强的细胞内抗菌活性｡其中莫西沙星的细胞内抗菌活性最强｡MTT法是一种行之有效的用于检测药物对细胞内嗜肺军团菌抗菌活性的方法,可同时检测并对比各种药物样本的细胞内抗菌活性｡ 相似文献
6.
【目的】 研究不同浓度内毒素(LPS)对NRK52E细胞生长和细胞间缝隙连接功能的影响｡【方法】 体外培养NRK52E细胞,随机分为对照组及LPS处理组,LPS处理组分别用5个不同浓度的LPS(10 ng/mL､50 ng/mL､100 ng/mL､500 ng/mL､1 000 ng/mL)作用24 h｡采用四甲基偶氮唑盐法检测NRK52E细胞的生长;细胞荧光免疫示踪法测定NRK52E细胞间缝隙连接传递的功能;Western Blotting测定对照组､LPS 10 ng/mL组和LPS 100 ng/mL组Cx43蛋白的表达｡ 【结果】 ① 与对照组和LPS 10 ng/mL组相比,LPS 50 ng/mL､100 ng/mL､500 ng/mL及1 000 ng/mL组细胞生长明显降低(P < 0.01)｡②与对照组相比,LPS 100 ng/mL､500 ng/mL及1 000 ng/mL组细胞间缝隙连接功能明显降低(P < 0.01)｡③内毒素浓度与NRK52E细胞生长和细胞间缝隙连接传递数目呈负相关(r = -0.941,-0.872,P < 0.01)｡④与对照组比较,LPS 10 ng/mL组和LPS 100 ng/mL组的Cx43蛋白表达明显降低(P < 0.05)｡ 【结论】 LPS对NRK52E细胞的生长呈浓度相关性的抑制,这种作用与细胞间缝隙连接功能有关｡ 相似文献
7.
【目的】 观察比较不同方法注射透明质酸酶(HA)诱导兔眼基底部玻璃体脱离｡【方法】 取新西兰白兔105只,随机分6组,其中A､B､C每组30只,D､E､F每组5只｡A､B､C各组一眼基底部玻璃体注射HA 0.05 mL,浓度分别为250､500､1 000 U/mL,另一眼相同部位注射等量平衡盐液体;D､E､F各组常规玻璃体腔注射HA 0.05 mL,浓度分别为250､500､1 000 U/mL,另一眼相同部位注射等量平衡盐液体｡于注射后6 h､1 d､3 d､7 d､14 d分别行裂隙灯､UBM检查,随机分批处死兔,取眼球标本行HE染色及基底部扫描电镜､透射电镜检查,观察基底部残余玻璃体｡【结果】 病理观察A组实验眼在3､7､14 d的脱离率分别为20%､20%､40%;B组为20%､40%､80%;C组为40%､60%､80%;UBM显示A组实验眼在各时间点脱离率为0;B组在14 d的脱离率为33.3%;C组在第7天和14天的脱离率为33.3%和66.7%,D､E､F组观察2周,未见基底部玻璃体脱离｡各组均未发生眼内炎性反应和视网膜毒性反应｡ 【结论】 局部注射透明质酸酶可成功诱导基底部玻璃体脱离｡ 相似文献
8.
【目的】 研究脂肪乳在布比卡因诱导大鼠的心跳骤停心肺复苏的应用,探讨脂肪乳是否能减弱布比卡因中毒后的心脏毒性｡ 【方法】 24只SD大鼠,随机分为2组:A组:对照组(n = 12),B组:脂肪乳组(n = 12)｡将大鼠麻醉后静脉注射布比卡因20 mg/kg,心跳停搏后行心肺复苏(CPR),间断注入肾上腺素｡A组随即注入生理盐水5 mL/kg,后持续静脉注入生理盐水;B组注入20%脂肪乳5 mL/kg后持续静脉注入脂肪乳0.25 mL•kg-1•min-1｡监测心率､血压和直肠温度｡在麻醉后､复苏成功5 min,30 min用超声探头测量心脏指标｡在麻醉后､恢复自主循环后1 h､6 h测血乳酸､血糖､TNF-α,IL-1β,IL-6｡ 【结果】 A组心肺复苏成功7只(58%),B组复苏成功10只,(83%),B组成功率高(P < 0.05)｡两组复苏后心率正常｡复苏后30 min,B组的收缩压比A组高,均在正常范围｡复苏后30 min B组大鼠心脏的射血分数､每搏输出量和心脏指数比A组高(P < 0.05)｡复苏后A组的血糖､血乳酸比B组高(P < 0.05)｡复苏后1､6 h的TNF-α､IL-1β､IL-6两组之间无统计学差异｡ 【结论】 布比卡因中毒心跳骤停的大鼠用脂肪乳联合肾上腺素比单纯肾上腺素心肺复苏心脏功能恢复较快,且有较高的复苏成功率｡ 相似文献
9.
【目的】 观察异丙酚对沙土鼠全脑缺血再灌注后脑保护作用｡【方法】 27只雄性清洁级蒙古沙土鼠,随机分为对照组､模型组､异丙酚组,每组9例｡对照组:游离双侧颈总动脉但不阻断脑血流｡模型组: 游离双侧颈总动脉并阻断脑血流,10 min后开放动脉,2 h后取材｡异丙酚组:在开放动脉后即经舌静脉以Grassby3000微量泵持续以10 mg•kg-1•h-1的速度输注异丙酚,2 h后取材｡实验结束后,处死动物取脑组织分别固定后行HE染色光镜观察,免疫组化SP染色类胰蛋白酶表达观察,透射电镜观察超微结构,脑含水量测定,脑组织匀浆测定MDA含量､SOD活性､TNF-α和IL-1β含量｡【结果】 模型组和异丙酚组脑组织含水量高于对照组(P < 0.05),异丙酚组低于模型组(P < 0.05)｡光镜下及电镜下模型组脑组织损伤严重,异丙酚组损伤较轻,对照组脑组织结构基本正常 ｡三组中, MDA含量､TNF-α浓度､IL-1β含量､类胰蛋白酶表达以模型组最高(P < 0.05)｡SOD活性以模型组最低(P < 0.05)｡ 【结论】 异丙酚对沙土鼠全脑缺血再灌注后有明显的脑保护作用,其机理与抗氧化及抑制炎性因子释放相关,而肥大细胞也可能参与了脑缺血再灌注损伤｡ 相似文献
10.
【目的】 探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对野百合碱 (MCT)诱导的肺动脉高压的作用及相关机制｡【方法】 雄性Sprague-Dawley大鼠80只随机分为: 正常对照组(control)､MCT组､MCT + Ang-(1-7)组､control + Ang-(1-7)组｡MCT组和MCT + Ang-(1-7)组颈静脉注射MCT 60 mg/kg,24 h后经微泵持续泵入生理盐水或Ang-(1-7) (24 μg•kg-1•h-1)｡control和control + Ang-(1-7)组颈部注射生理盐水,24 h后经微泵泵入生理盐水或Ang-(1-7) (24 μg•kg-1•h-1)｡治疗4周后测定大鼠的右室收缩压(RVSP)和右心室肥厚指数(RVHI),测定肺小动脉管壁厚度(WT)占动脉外径(ED)的百分比(WT%)及管壁面积(WA)占血管总面积的百分比(WA%)｡通过放射免疫方法检测血浆及肺组织中血管紧张素Ⅱ (AngⅡ)浓度｡Western blot分析肺组织中细胞外调节蛋白激酶1/2 ( ERK1/2)磷酸化水平｡ 【结果】 与control组相比,MCT组RVSP､RVHI､WT%､WA%､肺组织AngⅡ浓度､ERK1/2磷酸化水平显著升高(P < 0.01); MCT + Ang-(1-7)组与MCT组相比, RVSP､RVHI､WT%､WA%､ERK1/2磷酸化水平均明显降低(P < 0.01);control组､control + Ang-(1-7)组､MCT + Ang-(1-7)组三组间RVSP､RVHI､WT%､WA%､ERK1/2磷酸化水平差异无显著性意义(P > 0.05)｡ 【结论】 在MCT诱导的肺动脉高压模型中,Ang-(1-7)可能通过降低 ERK1/2磷酸化水平,抑制肺血管的重构,预防肺动脉高压的发生｡ 相似文献
11.
目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对PC12细胞的保护作用及机制。方法采用鱼藤酮(1μmol/L)处理PC12细胞24 h,建立帕金森病细胞模型;在该模型中,N-乙酰半胱氨酸(500μmol/L)预处理PC12细胞30 min。采用AnnexinⅤ-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,以双氢溴化乙啶(DHE)和双氢罗丹明123(DHR123)为染料,采用流式细胞术检测细胞内活性氧水平;比色法检测还原型谷胱甘肽(GSH)水平,同时检测细胞Caspase-3酶活性和线粒体膜电位。结果 1μmol/L鱼藤酮处理PC12细胞后,细胞凋亡率为42.0%,DHE和DHR123荧光强度分别为正常组的230%和333%,GSH含量为101 nmol/mg prot,细胞线粒体膜电位为正常组的46%,Caspase-3酶活性为正常组的141%,与正常组比较,上述指标的差异均具有统计学意义。而N-乙酰半胱氨酸预处理后,细胞凋亡率降至26.0%,DHE和DHR123荧光强度分别为正常组的177%和290%,GSH含量为120 nmol/mg prot,线粒体膜电位为正常组的53%,Caspase-3酶活性为正常组的116%,与鱼藤酮组相比,差异均具有统计学意义。结论 N-乙酰半胱氨酸对PC12细胞具有保护作用,保护机制与其抗氧化活性有关。 相似文献
12.
Objective： To investigate the mechanism of oxidative stress in rotenone neurotoxicity to dopaminergic neuron PC12. Methods： High differentiated PC12 cells as dopaminergic neurons were treated by different concentrations of rotenone. The morphology was observed with inverted phase contrast microscope and transmission electron microscope. Cell viability and proliferation inhibition were assessed by MTT. SOD and MDA were detected with biochemical assay. And the specific fluorescent probe （DCF-DA） was used to examine ROS in PC12 cells. Results： After treated with rotenone for 24 h, most of the PC12 cells became smaller and rounder. The process of axon was reduced, shortened or broken in a time and concentration dependent manner. The mitochondrial structure and metabolism were changed. Endoplasmic reticulum expanded and the free ribosome increased. Compared with the control group, cell proliferation inhibition increased and cell viability decreased. SOD increased and MDA decreased. The intensity of fluorescence was more obvious in PC12 cells treated by rotenone compared with control group. Conclusion： Rotenone is neurotoxic to cultured dopaminergic neuron PC12. Rotenone might exert this effect through the metabolism of oxidative stress on the pathogenesis of the neuron. 相似文献
13.
目的:观察半胱氨酰白三烯受体1(CysLT1受体)与鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的关系。方法:鱼藤酮及CysLT1受体拮抗剂孟鲁司特处理PC12细胞后,以MTT方法检测PC12细胞活性变化;以Western blotting检测鱼藤酮处理前后,PC12细胞CysLT1受体的表达变化;不同浓度鱼藤酮处理24 h及3μmol/L鱼藤酮处理不同时间,以免疫细胞化学方法观察CysLT1受体分布变化。结果:鱼藤酮(0.3～30μmol/L)可诱导PC12细胞损伤,孟鲁司特(1、5μmol/L)可显著减轻鱼藤酮诱导的细胞损伤。1～10μmol/L鱼藤酮作用PC12细胞24 h及3μmol/L鱼藤酮处理3 h和24 h,均可诱导CysLT1受体蛋白水平表达升高。鱼藤酮能浓度和时间依赖性引起CysLT1受体从细胞核移位到细胞浆。结论:CysLT1受体参与鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤。 相似文献
14.
目的 探讨人14-3-3 γ基因转移对鱼藤酮诱导的多巴胺能细胞损伤的保护作用.方法用腺病毒载体携带人14-3-3 γ基因(Ad/14-3-3 γ)感染PC12细胞,基因转移成功后,用鱼藤酮处理细胞.四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定细胞活性,DAP1染色法检测细胞凋亡,高效液相色谱检测细胞的分泌功能,激光共聚焦显微镜观察α-突触核蛋白(α-synuclein)的聚集.结果 Ad/14-3-3 γ组细胞吸光度A570 (0.46 ±0.09),高于Ad-null组(0.19 ±0.08)和鱼藤酮组(0.16±0.07),但低于正常对照组(0.63±0.11),分别与各组比较,差异均有统计学意义(均P＜ 0.01);Ad/14-3-3 γ感染组细胞培养液中多巴胺( 189±11) ng/ml和去甲肾上腺素(55±8)ng/ml,含量高于Ad-null感染组(79±12,38±7)ng/ml和鱼藤酮组(81 ±13,39±7)ng/ml(均P＜ 0.01);DAPI染色法显示Ad/14-3-3 γ组凋亡率(27％±6％),高于正常对照组(10％±5％),但明显低于Ad-null组(53％±10％)和鱼藤酮组(56％±12％),分别与各组比较,差异均有统计学意义(均P＜ 0.01);激光共聚焦显微镜下观察Ad/14-3-3 γ组细胞胞质内颗粒状α-synuclein聚集体较Ad-null组和鱼藤酮组显著减少.结论 腺病毒介导的14-3-3 γ基因转移对鱼藤酮诱导的多巴胺能细胞损伤具有保护作用. 相似文献
15.
目的：建立帕金森病细胞模型,研究鱼藤酮对多巴胺能神经元的毒性作用及机制。方法：PC12细胞诱导分化成多巴胺能神经元,加入不同浓度鱼藤酮（0、10、25、50、75和100 nmol•L-1）,观察细胞形态改变;鱼藤酮处理PC12细胞24、48和72 h,MTT法检测细胞活性;免疫组化和免疫荧光法观察α-synuclein 在胞内聚集情况;AO/EB双染检测细胞凋亡。结果：神经生长因子（NGF）诱导后PC12细胞形状不规则,突起增多变长,细胞间连接增多;染毒后细胞突起结构逐渐消失,细胞体积变小、形态变圆。50 nmol•L-1鱼藤酮作用24 h后PC12细胞活力开始低于对照组（P<0.05）,随着浓度增大,细胞活力进一步下降,呈浓度依赖性（P<0.01）;随着作用时间延长,细胞活力亦逐渐下降,不同时间组间比较差异有显著性(P<0.01)。免疫组化结果显示,胞浆中出现棕色的类圆形α-synuclein染色阳性颗粒;免疫荧光显示,胞浆中有α-synuclein标记的强绿色荧光的蛋白聚集。染毒细胞逐渐呈现出早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞和坏死细胞状态。结论：鱼藤酮对多巴胺能神经元有毒性作用,可形成类包涵体样蛋白聚集并诱导细胞凋亡。α-synuclein 代谢异常及细胞凋亡可能在鱼藤酮所致的帕金森病发病机制中发挥重要作用。 相似文献
16.
目的探讨6-氟基丁基苯酞对硝普钠(SNP)引起的PC12细胞损伤的保护作用。方法离体培养的PC12细胞用硝普钠造成一氧化氮(NO)损伤模型,通过细胞形态学观察、MTT微量比色、NO和活性氧(ROS)含量测定,钙离子敏感的荧光探针Fura-2/AM检测细胞内游离Ca2+浓度变化,吖啶橙染色观察凋亡细胞形态,PI染色测凋亡率等,研究了6-氟基丁基苯酞对该模型的保护作用。结果 6-氟基丁基苯酞可改善细胞形态,提高细胞存活率,降低NO和ROS水平,减少细胞内Ca2+内流,减少细胞凋亡。结论 6-氟基丁基苯酞对硝普钠造成PC12细胞缺氧损伤具有保护作用。 相似文献
17.
北五味子总木脂素对H2O2诱导PC12细胞凋亡的影响 总被引：1，自引：1，他引：0
目的： 探讨北五味子总木脂素(SCL)对过氧化氢(H2O2) 诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)凋亡的保护作用及其机制。方法： PC12细胞分为对照组、模型组及SCL高（SCL1）、低（SCL2）剂量组,用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位的变化,免疫组化方法检测与凋亡相关蛋白bcl-2和bax的表达。结果：与模型组比较,SCL组随着剂量的增加PC12细胞存活率升高（P<0.05),凋亡率下降（P<0.01),线粒体膜电位回升（P<0.01), bcl-2表达增加(P<0.05),bax的表达降低(P<0.05)。结论:SCL可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡有关。 相似文献
18.
目的 研究环孢素A(CsA)对人胃癌BGC823细胞的生长增殖以及凋亡的影响.方法 MTT法检测不同浓度CsA处理24、48、72 h后对BGC823细胞增殖抑制率;流式细胞术(FCM)检测细胞周期、活性氧(ROS)含量及细胞线粒体膜电位(△Ψm)改变;Annexin-V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率.结果 CsA在5～20 μmol/L浓度范围内和24 ～ 72 h时间范围对BGC823细胞增殖有显著抑制作用,与药物剂量、作用时间呈现量效和时效的依赖性;FCM结果显示CsA浓度依耐性使细胞周期阻滞于G0/G1期,与对照组相比差异有统计学意义(F=33.45,P＜0.05,P＜0.01);细胞凋亡率随CsA作用浓度增加而增加;5～ 20μmol/L CsA浓度范围细胞内ROS含量显著增加(F =46.17,P＜0.01),细胞线粒体膜电位明显降低.结论 CsA对BGC823细胞有抑制增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与阻滞细胞生长周期、细胞内ROS含量增加以及线粒体膜电位下降相关. 相似文献
19.
目的: 探讨利福平对α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)多聚体水平的影响及其与细胞自噬的关系。方法: 用不同浓度鱼藤酮、利福平、自噬抑制剂氯喹和自噬促进剂雷帕霉素处理SH-SY5Y细胞,MTT法检测细胞存活率,筛选最佳实验浓度;蛋白质印迹法检测氯喹和雷帕霉素处理后不同时间点细胞内Beclin-1表达水平,确定最佳作用时间;蛋白质印迹法检测鱼藤酮、氯喹和雷帕霉素处理后Beclin-1和α-syn多聚体的表达;将SH-SY5Y细胞分为对照组、鱼藤酮组、利福平+鱼藤酮组和利福平组,流式细胞术检测4组细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测α-syn多聚体及自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62的表达;在上述分组基础上,蛋白质印迹法检测氯喹和雷帕霉素预处理后各组细胞α-syn多聚体的表达。结果： 利福平浓度为150 μmol/L时细胞存活率最高;氯喹、雷帕霉素调节自噬的最佳处理条件分别为10 μmol/L(1 h)、10 nmol/L(2 h);与对照组相比,鱼藤酮、氯喹均能显著增加细胞内α-syn多聚体表达(P均＜0.01),降低Beclin-1表达(P均＜0.05),雷帕霉素能显著提高Beclin-1表达(P＜0.01);与对照组比较,鱼藤酮组细胞凋亡率明显上升(P＜0.05),p62和α-syn多聚体表达增加,Beclin-1和LC3-Ⅱ/Ⅰ表达明显降低(P均＜0.01);与鱼藤酮组相比,利福平+鱼藤酮组细胞凋亡率明显降低(P＜0.05),p62和α-syn多聚体表达明显减少,Beclin-1和LC3-Ⅱ/Ⅰ表达明显升高(P均＜0.01);与利福平+鱼藤酮组比较,氯喹预处理后α-syn多聚体表达明显增加(P＜0.01)。 结论： 利福平能减少鱼藤酮诱导的多巴胺能神经元凋亡,可能通过促进细胞自噬降低α-syn多聚体表达。 相似文献
20.
目的 探讨鱼藤酮致大鼠多巴胺能嗜铬细胞瘤（PC12）细胞凋亡中前列腺凋亡反应蛋白（Par-4）表达变化,为帕金森病（PD）的基因治疗提供新的靶点 方法 以1、5、10 μmol/L的鱼藤酮分别作用于PC12细胞6、24 h,采用MTT比色法检测细胞存活率;采用Western blot法筛选出Par-4表达改变明显的鱼藤酮浓度和作用时间,给予信号转导抑制剂,检测Par-4表达量的变化。 结果 1、5、10 μmol/L鱼藤酮干预后,PC12细胞出现同程度的受毒形态改变,6h后,10μmol/L组光密度比值显著升高（P＝0.029?646）;20μmol/L c jun氨基末端激酶（JNK）信号通路抑制剂Ginestin预处理1h,光密度比值与单纯鱼藤酮作用组比较显著降低（P=0.0131）;24h后,PC12细胞的存活率降低显著,1、5μmol/L 2组光密度值均升高,与对照组差异有统计学意义(P=0.018461, P=0.043?415)。 结论〓〖HTK〗 鱼藤酮可诱导PC12细胞Par-4凋亡蛋白表达升高,具有时间和浓度依赖性,JNK通路参与其信号转导途径。 相似文献