弗氏柠檬酸杆菌随机扩增多态性DNA法基因分型

目的建立弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)随机扩增多态性DNA(RAPD)法基因分型图谱. 方法以优化的反应体系及单一随机引物L8,对临床分离的116株C.freundii进行RAPD分析,并按指纹图上DNA条带数及片段大小绘制基因分型图谱. 结果 116株临床分离C.freundii共得78种RAPD型. 结论 RAPD法可将C.freundii分型78种.     

102株单核细胞增生李斯特菌随机扩增多态性DNA基因分型研究

目的:对单核细胞增生李斯特菌进行随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型研究。方法:以优化的随机引物和反应体系对生肉、熟肉、生奶、乳制品、水产品、冷冻食品、生食蔬菜共七大类食品中分离的102株单核细胞增生李斯特菌进行RAPD法基因分型,并按DNA条带数及片段大小绘制指纹图谱。结果:102株单核细胞增生李斯特菌共得26种RAPD指纹图谱,以第12、18、23和10型为主要型别,分别为15、14、8和6株。结论:RAPD技术可将单核细胞增生李斯特菌分型26种,我省食品中分离的单核细胞增生李斯特菌主要基因型为第12、18、23和10型。     

肺炎克雷伯菌随机DNA多态性分型研究

目的 建立肺炎克雷伯菌随机扩增DNA多态性分型技术,以应用于临床菌株流行病学调查。方法 对临床分离的29株肺炎克雷柏菌进行Etest检测,并用酚氯仿法提取其DNA后行RAPD分型。结果 29株临床分离菌有7株ESBL阳性,24株有稳定的RAPD带型,其中ICU分离的5株ESBL阳性株的4株RAPD指纹图谱相同。结论 RAPD基因分型技术不需已知核酸序列,分型率高,分辨力强,简便快捷可为肺炎克雷伯菌株提供分型标志,是分子流行病学研究的有效方法。     

随机扩增多态性DNA分型法在铜绿假单胞菌流行病学研究方面的应用

目的摸索适于铜绿假单胞菌随机扩增多态性DNA分型法(RAPD)分型的最佳实验条件,并对我院临床分离到的34株铜绿假单胞菌进行分型研究。方法从随机引物筛选、镁离子浓度、模板量、引物浓度4方面对RAPD反应体系进行优化。结果不同病区分离到的铜绿假单胞菌的指纹图谱互不相同;从烧伤病房分离到的8株高度耐药的铜绿假单胞菌中,其中7株为同一指纹图谱,另外1株为独特的指纹图谱,而外科重症监护病房、肺科病房、干部病房同一病区内分离到的铜绿假单胞菌均为同一指纹图谱。结论铜绿假单胞菌在病区内存在交叉感染的情况,但未出现病区间感染同一流行株。     

重庆市老年中心铜绿假单胞菌流行病学分型研究

目的对重庆市老年中心引起医院感染的铜绿假单胞菌(PAE)进行流行病学分型研究,了解其流行与耐药,以便更好地控制其引起的医院感染.方法采用随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型方法对重庆市老年中心分离的24株PAE进行RAPD基因分型.结果24株PAE共得RAPD 14型,分型率100%;同一病区不同患者分离出的PAE未检出相同基因型的PAE,3个不同病区间未检出相同RAPD型别的PAE;7例感染个体连续收集的PAE有5例RAPD指纹图谱完全一致,2例出现跳跃性指纹图谱,且与其他分型指纹图谱不相同.结论RAPD能满足对PAE进行分子流行病学分型;通过分型可判断内原性、外源性或突变PAE引起的感染.     

随机引物扩增技术对变形菌DNA多态性分型研究

目的建立变形菌随机扩增DNA多态性分型技术,应用于临床菌株流行病学调查. 方法优化随机扩增DNA多态性指纹技术(RAPD)的实验条件,利用RAPD技术成功地检测21株变形菌DNA指纹图谱. 结果 21株变形菌分为18型别,其中16株奇异变形菌分为13个型,5株普通变形菌分为5个型. 结论 RAPD分型技术可简便、快速为变形菌提供分型标志,是分子流行病学研究的有效方法.     

随机扩增多态性DNA在淋球菌基因分型中的应用

目的 建立随机扩增多态性DNA(RAPD)对淋球菌进行基因分型的方法。方法 用4种不同的预处理方法提取淋球菌基因组DNA,对其优劣进行比较;并运用RAPD对淋球菌菌株进行区分及对经性伴传播的淋病病例进行RAPD指纹图谱比较。结果 运用经典的十六烷基三乙基溴化铵法可以抽提较完整的基因组DNA,获得良好的RAPD指纹图谱;各菌株的RAPD指纹图谱间有明显不同DNA多态性;性伴传播的病例中获得了非常相似的RAPD指纹。结论 选择最佳的DNA抽提技术,运用RAPD可以对淋球菌进行有效基因分型,并可用于分子流行病学对传染源的追踪。     

RAPD技术在唐山市结核分枝杆菌指纹分型研究中的应用

[目的]RAPD DNA指纹分型方法的建立及其在分枝杆菌基因分型中的应用。[方法]收集结核病患者痰标本,分离培养获得分枝杆菌,进行表型鉴定及耐药性检测;提取基因组DNA,在建立RAPD DNA指纹分型方法的基础上对分枝杆菌进行DNA指纹图谱分析。[结果]RAPD指纹图谱分析将102株分枝杆菌分为7种菌型,其中Ⅰ型35株（34.31%）,Ⅱ型28株（27.45%）,Ⅲ型24株（23.53%）,Ⅳ型6株（5.88%）,Ⅴ型3株（2.94%）,Ⅵ型4株（3.92%）,Ⅶ型2株（1.97%）,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型是主要的3种类型。RAPD扩增特征条带大小为201～1 018 bp。分组统计显示,3种主要的RAPD DNA指纹的分布与患者的居住地、职业、结核菌耐药性有关,而与患者的性别、年龄、结核接触史等无关。[结论]RAPD DNA指纹分型方法是一种简单、快速的分枝杆菌的分型方法;3种主要类型的结核分枝杆菌在唐山地区流行。     

白色假丝酵母菌的随机扩增多态性DNA分型研究

目的建立医院感染白色假丝酵母菌的基因多态性DNA分型方法,了解白色假丝酵母菌医院感染的分子流行病学情况,并探讨其基因多态性与真菌药物敏感性检测结果的可能关系。方法收集临床各病区送检的住院患者白色假丝酵母菌感染标本30份和其相应患者资料、抗真菌药物敏感性检测结果,采用经优化的随机扩增多态性(RAPD)DNA方法,对30株白假丝酵母菌进行基因多态性分型,利用Phylip3.67聚类分析软件分别用邻接法和算术平均数的非加权成组配对法,对RAPD扩增条带结果进行聚类分析。结果随机引物OPE-03进行RAPD扩增的指纹图谱清晰,带型稳定,多态性丰富,可以作为分型引物;30株不同来源的菌株可大致分为3种亲缘关系;两种聚类分析结果相同,提示该实验结果可靠。结论白色假丝酵母菌基因多态性分布可能与菌株的来源有关;RAPD多态性可能与其耐药性有关;不同聚类分析方法的RAPD图谱分析结果相同。     

江苏省260株结核分枝杆菌Spoligotyping基因分型研究

目的 研究江苏省结核分枝杆菌DNA指纹图谱的分布特征,分析北京家族株与结核分枝杆菌耐药的关联性.方法 江苏省30个耐药监测点收集260株结核分枝杆菌分离株,应用比例法检测分离株对于一线抗结核药物(异烟肼、链霉素、利福平和乙胺丁醇)的耐药性,应用间隔区寡核苷酸分型(Spoligotyping)方法进行基因分型,使用Bio...     

某医院CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的分子流行病学研究

目的了解某医院产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌检出率,确定其基因型,并对其相关流行病学进行研究。方法收集2004年10月—2005年7月医院临床标本分离的多重耐药大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌134株,按美国临床实验室标准化研究所(CLSI/NC-CLS)所推荐的方法进行表型确证试验,以聚合酶链反应(PCR)法进一步检测CTX-M酶基因型,PCR产物测序并确定其基因型。随机扩增多态DNA(RAPD)对携带CTX-M酶的阳性菌株作流行病学分析。结果112株ESBLs表型阳性的肠杆菌科细菌中90株携带CTX-M基因,共检出3种基因型,即CTX-M-15、CTX-M-3和CTX-M-14。RAPD共测40株菌,19株大肠埃希菌有7种RAPD类型,11株肺炎克雷伯菌有5种RAPD类型,10株阴沟肠杆菌有7种RAPD类型。结论肠杆菌科细菌产CTX-M型ESBLs相当普遍,主要为CTX-M-15、CTX-M-3和CTX-M-14。CTX-M酶存在克隆传播。     

潮汕地区幽门螺杆菌DNA指纹图谱46例分析

目的通过检测潮汕地区消化性溃疡及胃炎患者幽门螺杆菌的感染情况,对病人胃内分离的Hp进行DNA指纹图谱分析,探讨本地区Hp基因型与疾病的相互关系。方法收集我院消化内科内镜检查显示胃黏膜尿素酶试验阳性患者46例(消化性溃疡30例,单纯性胃炎16例),取胃窦黏膜组织进行Hp培养、总DNA的提纯和纯化、随机扩增多态性DNA指纹法(RAPD)分析,采用聚类分析作基因分型,同时采用免疫印迹法测定血清空泡毒素VacA抗体。结果46例临床分离菌株指纹各不相同,分为3个基因型别(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型),Ⅰ型以胃炎多见,Ⅲ型以溃疡多见,有显著性差异(p<0·05);血清VacA抗体阳性率在各疾病组和基因型组间无显著性差别(p>0·05)。结论提示不同基因型别的Hp与不同的疾病类别有关,RAPD是有效的基因分型方法。     

Genomic fingerprints of Staphylococcus aureus of bovine origin by polymerase chain reaction-based DNA fingerprinting.

Staphylococcus aureus (n = 75) isolated from mammary secretions of cows with subclinical and clinical mastitis from several geographic locations in the USA were examined using polymerase chain reaction-based DNA fingerprinting. DNA fingerprints were produced using a synthetic oligonucleotide primer (5''GTAACGCC3'') to produce a distinct spectrum of amplified DNA fragments facilitating a high degree of resolution for differentiating S. aureus strains. PCR-based DNA fingerprinting grouped the 75 S. aureus isolates into 19 distinct profiles. The technique differentiated closely related strains within and between geographic locations. Findings suggest that certain types are found across geographic regions suggesting a common clonal type. Within herd data suggest heterogeneity among subclinical and clinical isolates of S. aureus strains. Compared to existing typing methods, PCR-based DNA fingerprinting is easy to perform and interpret. Use of PCR-based DNA fingerprinting may allow for a more detailed investigation of the epidemiology of S. aureus mastitis in dairy cows.     

阴沟肠杆菌AmpC酶的检测及耐药性分析

目的了解某医院阴沟肠杆菌产AmpC酶情况及其对10种常用抗菌药物的耐药性,以指导临床合理选择抗菌药物。方法收集该院2007年8月-2008年7月临床分离的非重复阴沟肠杆菌98株,采用头孢西丁纸片扩散法进行AmpC酶初筛,酶提取物三维试验确证阴沟肠杆菌高产AmpC酶,聚合酶链反应检测AmpC酶基因。以K B纸片扩散法进行药敏试验。结果98株阴沟肠杆菌中有36株携带AmpC酶,检出率36.73％。在36株产AmpC酶阴沟肠杆菌中,检测到仅携带DHA基因株6株(16.67%);仅携带ACC基因株20株(55.56%);同时携带ACC和MIR基因株8株(22.22%);同时携带ACC、MIR和FOX基因株2株(5.56%)。产AmpC酶菌株对头孢西丁全部耐药,对第三代头孢菌素、联合抑酶剂、氨曲南、阿米卡星及环丙沙星均有不同程度耐药（44.44%~91.67%）;对头孢吡肟及亚胺培南较敏感,耐药率分别为27.78%、0.00%。结论阴沟肠杆菌AmpC酶携带率高,是导致其对第三代头孢菌素耐药的重要原因;治疗阴沟肠杆菌感染应以药敏检测结果为依据。     

阴沟肠杆菌感染的临床分布与耐药性分析

目的 了解医院近两年阴沟肠杆菌临床分布及其耐药性.方法 药敏试验采用K-B法,AmpC酶和ESBLs检测采用三维试验.结果 共分离106株阴沟肠杆菌,烧伤科是检出最高的科室;菌株检出数最多的标本是痰、创面、胆汁和引流液;药敏结果表明,阴沟肠杆菌对青霉素类、一、二代头孢菌素及头孢西丁高度耐药,第三、四代头孢菌素的耐药率为24.5%～50.9%;共检出产ESBLs菌29株,检出率27.4%;检出产AmpC酶菌43株,检出率40.6%,其中有23株为同时产ESBLs和AmpC酶.结论 阴沟肠杆菌的临床检出率和耐药率日趋严重,应加强实验室的检测,以控制阴沟肠杆菌引起的医院感染.     

阴沟肠杆菌临床感染分析及药敏监测

目的分析医院阴沟肠杆菌感染的临床分布及耐药性,以指导临床合理用药。方法对医院近2年分离出的阴沟肠杆菌的临床分布特点及耐药情况进行总结分析。结果2005年1月-2006年12月共分离出148株阴沟肠杆菌,菌株来源主要为痰液、尿液,分别占53.4%、16.2%;菌株分布于多个病区;阴沟肠杆菌对碳青酶烯类、头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、莫西沙星的敏感性较高。结论阴沟肠杆菌主要引起呼吸道、尿路感染;对三代头孢菌素耐药严重,呈多药耐药性,亚胺培南仍为治疗阴沟肠杆菌严重感染的首选用药。     

高产AmpC酶阴沟肠杆菌的耐药性及同源性分析

目的掌握阴沟肠杆菌的耐药谱及分子流行病学特征.方法高产AmpC酶采用表型筛选法,耐药谱选用改良K-B法,基因分型采用随机扩增多态DNA(RAPD)法.结果50株阴沟肠杆菌中表现高产AmpC酶株有16株(32%)、单产ESBLs菌株有8株(16%)、同时产AmpC酶和ESBLs的菌株有8株(16%),未发现亚胺培南耐药株,产酶和不产酶菌株间的耐药率差异存在显著性,RAPD基因分型得的遗传聚类图,可分为4类.结论阴沟肠杆菌有很高的耐药性,阴沟肠杆菌感染的治疗应首选亚胺培南,RAPD技术对阴沟肠杆菌感染同源性分析是一个有效的方法.     

The use of the PhP-KE biochemical fingerprinting system in epidemiological studies of faecal Enterobacter cloacae strains from infants in Swedish neonatal wards

The PhenePlate (PhP) biochemical fingerprinting system is an automated method for typing of bacteria, based on the evaluation of the kinetics of biochemical reactions, performed in microtitre plates. In the present study the PhP-Klebsiella/Enterobacter (KE) system was evaluated for typing of Enterobacter cloacae and employed to study the epidemiology of faecal E. cloacae strains isolated from infants in 22 Swedish neonatal wards. The PhP-KE system showed a high reproducibility and discrimination for E. cloacae isolates. Among 64 epidemiologically unrelated E. cloacae strains, 49 distinct phenotypes were found, and the diversity index was 0.985. E. cloacae was found as a part of the dominating Gram-negative aerobic bacterial flora in 83 out of 953 infants studied. The incidences of E. cloacae colonization varied between 0 and 35% in different wards, but in contrast to previous data for Klebsiella spp. and Escherichia coli, there was little evidence of spread of particular strains in the wards. We also discuss two different measures of nosocomial transmission of bacterial strains: transmissible strains and epidemic index.