一种特异性检测细胞凋亡和细胞周期的新方法

目的 应用流式细胞技术，建立一种特异性的同时检测细胞凋亡和细胞G0／G1期、S期以及G2／M期各时相百分比的快速测定方法。方法采用Annexin V—FITC/PI双标记染色凋亡细胞，再在该染色样品基础上，进一步地打孔，同时加入高剂量的DNA染色试剂进行活细胞DNA饱和染色，流式细胞仪检测分析。结果 可在同一份细胞样品上获得特异性较强的细胞凋亡、细胞坏死和细胞周期各时相的百分数变化。结论 该方法测量结果准确，检测时间短，人为影响因素少，节约细胞样品用量，为细胞生物学、肿瘤学研究，尤其是细胞动力学研究提供了一种新的、更为实用的分析方法。     

flavopiridol体外诱导人尤文肉瘤细胞凋亡机制的研究

目的:探讨细胞周期蛋白激酶抑制剂flavopirido(lFP)体外抑制人尤文肉瘤细胞(WE-68细胞)增殖及诱导凋亡作用机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)还原法测定细胞活力;流式细胞计数法检测细胞周期和凋亡率。免疫印迹(Western blot)法检测Bcl-2、Bax、活化型多聚ADP核糖多聚酶(PARP-85)、pro-caspase-3和活性型caspase-8蛋白水平的表达。结果:FP通过诱导细胞凋亡抑制WE-68细胞生长,并呈时间和剂量依赖性,Bcl-2和Bax的蛋白表达无变化,PARP-85和活性型caspase-8的表达上调,pro-caspase-3的表达下调。结论:FP可诱导WE-68细胞发生凋亡,其机制可能与死亡受体激活信号转导途径有关。     

恶性肿瘤细胞“逃避凋亡”之辩

细胞凋亡是一种在基因控制下细胞主动参与的“自杀”过程。目前由Hdnahan D和WeinbergRA提出的恶性肿瘤细胞六大特征影响范围很广,近十年已被引用上万次。但其中肿瘤细胞“逃避凋亡”这一特征无论是从哲学角度还是实验角度,都存在不合理性,事实上恶性肿瘤的细胞凋亡应该是增多的。     

钙激活性中电导钾离子通道在人宫颈癌组织中的表达及其在细胞凋亡和细胞周期进展中的作用

目的 研究钙激活性中电导钾离子通道(IKCa1)在宫颈癌组织中的表达变化及其在宫颈癌HeLa细胞凋亡和细胞周期进展中的作用.方法 应用RT-PCR技术研究18例正常宫颈组织及15例宫颈癌组织中IKCa1 mRNA的表达;利用IKca1通道的阻断剂--克霉唑处理宫颈癌HeLa细胞,MTT法观察细胞增殖的变化,流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期变化.结果 宫颈癌组织中IKCa1 mRNA的阳性表达率及表达水平(分别为73.33%、1.14±0.45)明显高于正常宫颈组织(分别为11.11%、0.86±0.23).克霉唑以浓度和时间依赖的方式阻滞HeLa细胞的增殖,随着克霉唑农度的增加,细胞凋亡率增加,G1期细胞比率增加,细胞IKCa1mRNA的表达水平降低.结论 IKCa1的异常表达可能与宫颈癌的发生、发展密切相关,可能通过影响细胞凋亡和细胞周期进展从而参与宫颈癌的发生、发展过程.     

山竹果皮提取物对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响

目的 探讨山竹提取物对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响及其作用机制.方法 采用MTT法检测不同浓度山竹提取物对HepG2细胞增殖的影响;分别应用Annexin-V/PI双重染色、PI单染法检测山竹提取物对HepG2凋亡和细胞周期的影响;天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)试剂盒检测山竹提取物对HepG2细胞Caspase-3酶活化的影响.结果 不同浓度(100 μmol/L、200μmol/L、400 μmol/L、600 μmol/L、800 μmol/L)山竹提取物均可抑制人肝癌细胞HepG2的增殖活性,且随着山竹提取物浓度及其作用时间的增加,细胞抑制率升高(P＜0.05);山竹提取物浓度为256.67 μmol/L时可诱导人肝癌细胞HepG2出现早期凋亡,并且随着山竹提取物作用时间的增加,凋亡早期癌细胞的比率增高.细胞周期分析结果显示随着山竹提取物的浓度升高(0 μmol/L、200 μmol/L、400 μmol/L、600 μmol/L、800 μmol/L),G1期HepG2细胞比例升高,而S期细胞比例下降(P＜0.05).与对照组(0 μmol/L)比较,各浓度(200 μmol/L、400 μmol/L、600 μmol/L、800 μmol/L)山竹提取物组HepG2细胞的Caspase-3酶活性均升高(P＜0.05),给药组的酶活力单位随给药浓度的增加而明显增加(P＜0.05).结论 山竹提取物对人肝癌细胞HepG2有抑制增殖和促进凋亡的作用,其作用机制可能与抑制HepG2细胞进入S期和激活Caspase-3有关.     

TUNEL技术原位检测多种癌组织中的细胞凋亡

用TUNEL法对肝细胞肝癌、乳腺癌、胃腺癌以及结肠腺癌组织中的凋亡细胞进行形态学观察。主要采用附加蛋白酶K和微波预处理的TUNEL试剂盒(德国宝灵曼 公司和武汉博士德公司生产)对福尔吗啉固定、石蜡包埋的上述肿瘤组织进行TUNEL染色,荧光、光学显微镜观察凋亡细胞的形态特征。结果:TUNEL阳性信号位于胞核,呈环形、小圆形或颗粒状。TUNEL阳性细胞大多为凋亡的瘤细胞和肿瘤浸润的淋巴细胞。结论:TUNEL技术是目前原位观察凋亡的理想方法,特别适用于凋亡细胞的早期检测。     

BTG1在HK-2和786-O细胞株中的表达及其对细胞周期和细胞凋亡的影响

目的：探讨B细胞易位基因1（ BTG1）在人肾小管上皮细胞株（ HK-2）和肾透明细胞腺癌细胞株（786-O）中的表达及BTG1基因对HK-2和786-O细胞周期、细胞凋亡的影响。方法：采用Western blotting方法检测BTG1蛋白在HK-2、786-O细胞株中的表达,构建BTG1表达质粒转染786-O细胞,合成BTG1干扰RNA转染HK-2细胞,通过流式细胞仪（ FACS）观察BTG1对HK-2、786-O细胞周期和细胞凋亡的影响。结果：Western blotting检测显示,BTG1蛋白在HK-2中的表达高于786-O。786-O中高表达BTG1蛋白能够促进其凋亡,增加其G0/G1期比率;HK-2中低表达BTG1蛋白能够抑制其凋亡,减少其G0/G1期比率。结论：BTG1可能通过对细胞凋亡及细胞周期的调控抑制肾细胞癌的生长。     

Chk1基因在二烯丙基二硫诱导的乳腺癌细胞MCF-7凋亡中的作用

目的:探讨Chk1基因在二烯丙基二硫诱导的乳腺癌细胞MCF-7凋亡和细胞周期中的作用。方法:采用siRNA转染MCF-7细胞靶向干扰Chk1基因,采用Western blot检测Chk1蛋白表达;采用流式细胞术检测Chk1基因沉默对二烯丙基二硫诱导乳腺癌细胞凋亡及细胞周期的影响。结果:转染Chkl siRNA后,乳腺癌细胞MCF-7中Chkl蛋白表达水平降低,明显低于对照组(P<0.05)。FCM检测结果显示,转染Chkl siRNA后,G2/M期乳腺癌细胞数量有所降低(P<0.05),并且si-Chkl+DADS组G2/M期比率明显低于NC siRNA+DADS组(P<0.05)。Chk1基因沉默后,二烯丙基二硫诱导的细胞凋亡率由(14.7±1.0)%上升到(29.8±1.7)%。结论:siRNA抑制Chk1基因表达可明显消除G2/M期阻滞,并显著增强二烯丙基二硫诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡的敏感性。     

分子影像学技术在细胞凋亡研究中的应用进展

分子影像学技术有着巨大的潜力,无论在基础研究,还是在临床应用中均有广阔的应用前景。分子成像可无创、重复的提供活体、实时、动态、可视化的分子或基因信息,同时进行定量研究,所获得的数据与常规研究手段所得到的数据比较,更加接     

褪黑素联合顺铂对人胃癌细胞增殖及相关凋亡蛋白表达的影响

目的 探究褪黑素（MLT）联合顺铂（CDDP）对人胃癌AGS细胞的疗效及相关凋亡蛋白表达的影响。方法 将体外培养的人胃癌细胞AGS细胞株分为4组,即AGS对照组、AGS MLT组（2mmol/L）、AGS CDDP组（4μg/ml）和AGS MLT+CDDP组（2mmol/L MLT和4μg/ml CDDP）。采用CCK8试验检测各组细胞增殖的抑制情况,Annexin Ⅴ FITC/PI凋亡试剂盒检测各组细胞早晚期细胞凋亡情况,Western blot法检测各组细胞凋亡蛋白表达情况。结果 MLT+CDDP组细胞的生存率明显低于AGS对照组和AGS 单药组;流式细胞术检测细胞凋亡情况表明,正常对照组、单药组和联合组细胞的早期凋亡率依次增加;蛋白水平研究表明,相比单药组和正常组,联合组的Bcl-2、原形态caspase-3表达显著降低,Bax及活化态cleaved-caspase-3表达明显增高。结论 与单用顺铂相比,褪黑素联合顺铂能明显抑制胃癌AGS细胞增殖并加强促凋亡能力,这可能与联合药影响相关凋亡蛋白表达有关。     

替普瑞酮对香烟提取物引起的气道平滑肌细胞凋亡中p-JNK表达的影响

目的:探讨替普瑞酮(GGA)诱导的热休克蛋白70(HSP70)在香烟提取物(CSE)引起的气道平滑肌细胞(ASMCs)凋亡中对C-Jun N-terminal激酶(JNKs)的影响。方法:在体外培养Wistar大鼠的气道平滑肌细胞中,给予GGA处理前后,给予CSE刺激3 h。用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡情况,Western blot的方法检测HSP70和p-JNK的表达。结果:CSE诱导ASMCs凋亡随CSE浓度的增加而逐渐增加,两者相比有显著性差异(P<0.05);GGA预处理后再加入不同浓度的CSE处理的气道平滑肌细胞的凋亡较单纯CSE组相比有显著性差异(P<0.05)。在给予CSE刺激后,各组中的HSP70的表达较对照组有明显的降低,而且随CSE浓度越高降低越明显(P<0.05);p-JNK的表达随CSE浓度的增高而增多(P<0.05)。GGA预处理后的各组细胞的HSP70的表达与对照组比较有明显的增多(P<0.05)。在给予GGA预处理后,再加入CSE处理的气道平滑肌细胞中,与对照组比较HSP70的表达有所降低但无显著差异,p-JNK的表达在GGA+CSE组中的表达较单纯CSE组中有所下降(P<0.05)。结论:较高浓度的CSE能引起气道平滑肌细胞的凋亡并且伴随p-JNK的表达的增多。GGA处理气道平滑肌细胞后引起HSP70表达的增加,并且抑制较高浓度CSE所致的平滑肌细胞的凋亡,这可能与HSP70下调p-JNK的活性有关。     

声动力疗法促肿瘤细胞凋亡的研究进展

肿瘤是危害人类健康的主要疾病之一,近年来,人们发现诱导肿瘤细胞凋亡是更加理想的肿瘤治疗方法。声动力疗法是一种以超声和声敏剂的协同作用为基础的治疗肿瘤的新方法。声动力疗法能够改变细胞的膜结构,破坏细胞骨架以及改变细胞膜电位,导致线粒体膜受损和钙离子通道发生变化,并且上调Bax、细胞色素C、caspase-3、caspase-9的表达,从而促进肿瘤细胞凋亡。     

天然自身抗体在清除凋亡细胞中的作用研究

凋亡每时每刻都在发生,对凋亡细胞的清除是免疫系统的基本功能,其中天然抗体发挥了重要的作用。天然抗体可以通过Fab部分结合凋亡细胞表面的LPC,LPC由PLA2水解凋亡细胞膜表面的PC形成。这种抗原抗体的结合可以激活补体C1q,进一步激活经典补体激活途径,于是补体C3b/bi在凋亡细胞表面沉积。巨噬细胞表面的CR3和CR4两个补体受体可以结合C3b/bi,完成对凋亡细胞的吞噬。所以天然抗体参与了凋亡细胞的吞噬,在避免凋亡细胞导致的自身免疫疾病的发生中可能具有重要的作用。     

银杏提取物细胞调节作用的研究进展

银杏提取物具有重要的药理学作用,如抗氧化清除活性氧自由基的能力,减少血小板聚集和增强神经保护的活性。其在治疗阿尔茨海默病、学习记忆减退、心脑血管疾病、绝经后综合征等疾病中具有重要意义。同时银杏提取物还具有诱导肿瘤细胞凋亡与分化的抗肿瘤能力。该文就银杏提取物在分子水平上对细胞调节作用的研究进展予以综述,以便进一步明确银杏提取物的作用机制。     

骨髓间质干细胞与肝癌细胞之间的作用及临床意义

目的 研究肝癌细胞HepG2与大鼠骨髓间质干细胞(BMSCs)共培养后二者生物学行为的变化及其临床意义.方法 分离SD大鼠BMSCs,经过鉴定后进行体外培养.利用Transwell小室将BMSCs与HepG2建立共培养模型,通过Transwell迁移实验、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和TUNEL法检测BMSCs和HepG2的生物学行为变化.结果 HepG2能够促进BMSCs增殖,并对BMSCs具有明显的趋化作用.BMSCs、HepG2单独培养组和经过共培养后的BMSCs和HepG2组所测得的细胞凋亡率分别为(5.8±0.3)%、(6.0±0.2)%、(6.3±0.2)%和(6.6±0.3)%,差异无统计学意义(F=13,P>0.05).结论 肝癌细胞HepG2对BMSCs具有明显的促增殖和趋化作用,利用携带细胞毒性药物或者抑癌基因的BMSCs向肝癌部位的趋化作用,有助于提高肝癌治疗的特异性和减少全身毒副作用.     

不同浓度的氯化钴对 PC12分化细胞增殖与凋亡的影响

目的：观察不同浓度的氯化钴（CoCl2）对肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）分化细胞增殖与凋亡的影响,探讨合理的体外化学模拟缺氧模式。方法应用不同浓度CoCl2作用于PC12分化细胞不同时间,建立化学性缺氧诱导细胞凋亡的实验模型;将PC12细胞分为空白对照组、不同浓度不同时间的CoCl2处理组;应用细胞计数、MTT、Hoechst33342/PI双染色法检测不同浓度CoCl2对PC12分化细胞的增殖与凋亡的影响。结果①CoCl2（≤200μmol/L）在6h内使PC12细胞存活率轻度增加,12h后开始出现细胞存活率降低,并呈现比较明显的剂量和时间依赖关系;CoCl2（≥300μmol/L）诱导PC12分化细胞6h即开始出现存活率降低（P＜0．01）;②150μmol/L CoCl2诱导PC12分化细胞24h后细胞数量明显减少（P＜0．01）;③通过荧光显微镜可见150μmol/L CoCl2诱导PC12分化细胞24h内受损细胞多为早期凋亡,48h后开始出现晚期凋亡和坏死细胞增多。结论 CoCl2对PC12分化细胞增殖与凋亡的影响呈时间和浓度依赖性,进行化学模拟缺氧要考虑CoCl2的作用浓度和作用时间。     

苯乙酸钠对肺癌A549细胞生长的影响

目的:研究抗肿瘤药物苯乙酸钠(NaPA)对体外培养的人肺腺癌细胞株A549抑制率、细胞周期和凋亡的影响。方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色、流式细胞仪等方法,观察不同浓度NaPA对人肺腺癌A549细胞株生长、细胞周期和凋亡的影响。结果:NaPA对A549有明显的生长抑制作用,且呈剂量时间依赖性,最大抑制率可达79%。NaPA可阻滞A549细胞的细胞周期,使G1/G0期细胞增多,S期细胞减少,同时诱导A549细胞的凋亡,凋亡率最高可达30.5%。结论:苯乙酸钠抑制A549细胞生长,其抑制作用可能是通过NaPA使细胞周期抑制于G1/G0期和诱导细胞凋亡而实现。     

低表达miR-27a对胶质瘤细胞侵袭和凋亡的影响

目的 探讨下调miR-27a表达后对U87胶质瘤细胞的影响。方法 常规培养U87细胞系,分别用慢病毒干扰质粒miR-27a-3p、miR-27a-5p转染U87细胞（Lt-I）,同时设立无义序列转染组（Lt-NC组）和空白对照组。通过嘌呤霉素处理后筛选出稳定感染的U87胶质瘤细胞。采用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测转染后miR-27a-3p、miR-27a-5p在U87细胞系中的表达水平,划痕实验、Transwell侵袭试验检测胶质瘤细胞的侵袭、迁移能力,Western blot法分析转染后的侵袭和凋亡的变化,流式细胞术分析转染前后细胞凋亡的变化,磁共振成像（MRI）和裸鼠皮下胶质瘤模型分析裸鼠肿瘤的形态、直径等特征及随时间的变化规律。结果 相对于未感染慢病毒的空白U87胶质瘤细胞,稳定感染Lt-I的U87胶质瘤细胞miR-27a表达明显下调,同时迁移、侵袭能力降低,而感染Lt-NC组（阴性对照组）则未见此改变。Western blot法检测结果显示,低表达miR-27a细胞侵袭能力降低,同时也促进细胞凋亡。流式细胞术结果显示,敲减miR-27a后,细胞凋亡率增高。磁共振成像（MRI）和裸鼠皮下胶质瘤模型显示,实验组裸鼠肿瘤的生长明显受到抑制。结论 敲减miR-27a可抑制人脑胶质瘤细胞系U87细胞的迁移、侵袭,促进其凋亡,同时抑制其成瘤能力,这可能成为胶质瘤基因治疗的新靶点。     

赖氨匹林对宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响

目的研究赖氨匹林(aspisol)对人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法取处于对数生长期的Hela细胞,实验分为4组:阴性对照组只加等体积的低糖DMEM培养液Hela细胞;实验组加入不同浓度的aspisol,使其终浓度分别为1 mmol/L、5 mmol/L、10 mmol/L。采用描计细胞生长曲线法检测细胞增殖状态;HE染色、AO/EB方法进行凋亡细胞形态学的观察。Annexin V-FITC/PI双染检测赖氨匹林对Hela细胞作用24 h后细胞凋亡情况;流式细胞术分析赖氨匹林对Hela细胞作用24 h后细胞周期的变化。结果与对照组比较,aspisol(1,5,10 mmol/L)可呈时间、浓度依赖性抑制Hela细胞的增殖;HE染色光镜下见Aspisol组细胞密度减小,细胞变圆,胞核染色变浅。赖氨匹林(1,5,10mmol/L)作用24 h后诱导Hela细胞的早期凋亡率分别为(5.73±0.87)%、(19.11±2.86)%、(33.72±5.06)%,与对照组(0.46±0.69)%比较,差异有统计学意义(P<0.01),并呈浓度依赖性。细胞周期检测显示赖氨匹林对Hela细胞有G0/G1期阻滞作用。结论 aspisol对宫颈癌Hela细胞有抑制增殖、诱导其凋亡和改变其细胞周期分布,阻滞Hela细胞于G0/G1期。