溶血对双抗原夹心法检测HIV抗体的影响

目的:探讨溶血对双抗原夹心法检测HIV抗体的影响.方法:制备HIV抗体阴性非溶血和配对溶血(Hb 2～7 g/L)血清48份.另制备HIV抗体阴性非溶血和重度溶血(Hb 80 g/L)血清1份、HIV抗体阳性非溶血和重度溶血(Hb 108 g/L)血清1份,用HIV抗体阴性血清对HIV抗体阴性重度溶血血清、HIV抗体阳性非溶血和配对重度溶血血清进行倍比稀释,得到不同溶血程度的样品.测定HIV抗体,检测溶血及不同溶血程度对HIV抗体的影响.结果:48份HIV抗体阴性非溶血和溶血血清比较,差异无统计学意义(t=0.078,P=0.938);对HIV抗体阴性重度溶血倍比稀释血清的A值和Hb浓度做相关性分析,两组间无相关性(r=-0.382,P=0.221);对HIV抗体阳性溶血、非溶血倍比稀释血清的A值进行比较,差异无统计学意义(t=0.236,P=0.817).△A(溶血血清A-非溶血血清A)与Hb浓度作相关性分析,两组间无相关性(r=0.149,P=0.644).结论:溶血对双抗原夹心法检测HIV抗体无影响.但是如果试剂反应孔包被、封闭的质量差可能引起Hb的非特异吸附而造成假阳性,故日常工作中要尽量避免样品溶血,严格按照全国艾滋病检测技术规范操作.     

双抗原夹心酶联免疫技术检测丙型肝炎病毒抗体

1993年3月，国家卫生部下发文件要求对献血员进行抗HCV抗体的检测，随后有10几家检测HCV抗体的ELISA试剂上市，并进行批批检定，但全是间接ELISA法。由于间接法技术自身的缺陷及各生产厂家的产品存在一定的质量问题，导致了一些误诊和漏检。为此，应从根本上解决试剂本身的质量问题，建立双抗原夹心ELISA技术检测抗HCV抗体可大大提高检测试剂的特异性和敏感性。目前双抗原夹心法大多用于检测抗HIV和Tp抗体。此类试剂的敏感性和特异性均优于标记抗人免疫球蛋白的间接法。而丙型肝炎病毒抗体的检测仍采用间接ELISA技术，目前已有快速金标试剂采用双抗原夹心法原理，通过免疫层析检测抗HCV抗体。但灵敏度较低，不能用于献血员的筛选。我们通过对基因工程抗原进行改造，以适应标记辣根过氧化物酶，建立双抗原夹心ELISA法检测抗HCV抗体。     

丙型肝炎病毒抗体桥式双抗原夹心时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的建立丙型肝炎病毒抗体桥式双抗原夹心时间分辨荧光免疫分析法。方法采用丙型肝炎病毒基因重组多表位嵌合蛋白作为包被抗原,生物素标记抗原作为桥接抗原,链霉亲和素标记铕作为示踪物,配制以β-萘甲酰三氟丙酮为主要成分的增强液,自建方法的校准品以国家标准血清物质GBW（E）090047为溯源,应用桥式双抗原夹心法建立丙型肝炎病毒抗体时间分辨荧光免疫分析法。结果自建方法在0．031—4．00NCU／ml内,相关系数可达0．99;分析内和分析间变异系数均小于10％;灵敏度可达0．016NCU／ml;校准品的效价比在0．90～1．10,平均回收率为101．47％;与相关疾病的抗原或抗体无明显交叉反应,其表观浓度值均小于0．03NCU／ml;参考值为0．05NCU／ml;符合国家检定标准的要求;37℃恒温箱烘烤7d后检测性能无明显改变;与同类方法学比对符合性好。结论自建方法精密度好,灵敏度高,特异性强,准确性好,线性范围宽,符合率高,能满足临床检测需要。     

双抗体夹心ELISA检测肺炎支原体抗原方法的建立

目的　建立检测肺炎支原体(MP)抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA),并探讨其临床应用的可行性。方法　采用不同株MP单抗,用双抗体夹心ELISA检测MP抗原,优化该方法检测MP抗原的最佳实验条件。对MP标准株及147份临床标本进行测定,观察双抗体夹心ELISA的敏感性和特异性及该方法与聚合酶链反应(PCR)检测的符合率。结果　包被单抗量为20μg/ml,酶标记单抗1∶200稀释时,阳性对照与阴性对照吸光度之比(P/N值)最大,检测MP抗原敏感度达2μg/ml,和其他支原体没有交叉反应; 147份临床标本PCR检测阳性率13. 6% (20 /147),双抗体夹心ELISA检测阳性率12. 2% ( 18 /147 ),两者符合率达95. 9%。结论　建立的双抗体夹心ELISA检测MP抗原具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点。     

双抗体夹心ELISA检测肺炎支原体抗原方法的建立

目的建立检测肺炎支原体(MP)抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA),并探讨其临床应用的可行性。方法采用不同株MP单抗,用双抗体夹心ELISA检测MP抗原,优化该方法检测MP抗原的最佳实验条件。对MP标准株及147份临床标本进行测定,观察双抗体夹心ELISA的敏感性和特异性及该方法与聚合酶链反应(PCR)检测的符合率。结果包被单抗量为20μg／ml,酶标记单抗1：200稀释时,阳性对照与阴性对照吸光度之比(P／N值)最大,检测MP抗原敏感度达2μg／ml,和其他支原体没有交叉反应;147份临床标本PCR检测阳性率13．6％(20／147),双抗体夹心ELISA检测阳性率12．2％(18／147),两者符合率达95．9％。结论建立的双抗体夹心ELISA检测MP抗原具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点。     

EDTA-K2对双抗原夹心ELISA检测HIV抗体的影响

目的探讨乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)对双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体的影响。方法用HIV抗体阴性和阳性静脉血分别制备EDTA-K2浓度为1.5、2.5、5、10、15、20、25、30、35、40 mg/mL的抗凝血并留取无抗凝剂血,分别分离血浆和血清,测定各样本HIV抗体,读取吸光度(A)值,对A值与EDTA-K2浓度进行相关性分析;制备EDTA-K2最终浓度分别为1.5、2.5、5、10 mg/mL的HIV抗体阳性和阴性抗凝血各20份并留取无抗凝剂血,分别分离血浆和血清,平行测定各样本HIV抗体,血浆与血清样本进行配对t检验。结果 EDTA-K2浓度与HIV抗体阴性样本A值无相关关系(P=0.933),与HIV抗体阳性样本A值呈明显负相关(P<0.01);当EDTA-K2≥5 mg/mL时,HIV抗体阳性血浆样本A值明显低于血清样本(P<0.01),当EDTA-K2≤2.5 mg/mL时,血浆与血清样本A值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论EDTA-K2对HIV抗体阴性样本测定无干扰;血浆EDTA-K2≤2.5 mg/mL时,对HIV抗体阳性样本测定无干扰,EDTA-K2≥5 mg/mL时,对HIV抗体阳性样本测定呈明显负干扰。     

双抗体夹心ELISA检测血小板相关抗体的临床应用

用双抗体夹心酶免疫法对４０例原发性血小板减少性紫癜（ＩＴＰ）患者治疗前联合测定了ＰＡＩｇＧ、ＰＡＩｇＭ、ＰＡＩｇＡ，并与正常组（３０例）测定值比较，结果表明：三次免疫指标均高于正常测定值，其敏感性达９３％，联合检测可提高ＩＴＰ的阳性率至８９％～１００％，该法特异性强，阳性检出率高，重复性好，快速简便，不需要特殊仪器设备，适于基层单位推广应用。     

人可溶性补体受体1型双抗体夹心ELISA法的建立及初步应用

摘要：目的：建立定量检测人血清可溶性补体受体1型（sCR1）双抗体ELISA夹心法。 方法：用鼠抗人CD35单克隆抗体(mAb)包被反应板,以兔抗人sCR1抗体（PcAb）为夹心抗体,辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔IgG为检测抗体,纯化后的人sCR1蛋白为标准品,建立定量检测人血清sCR1双抗体夹心ELISA法,并检测50例体检健康者和32例肝硬化患者血清样本中sCR1水平。 结果：建立的双抗体夹心ELISA法检测人血清sCR1的线性范围为15.6～250 ng/mL。低、高浓度批内变异系数（CV）分别为9.3％、7.1％;批间CV分别为11.2％和9.82％;回收率分别为89.5％和92.5％。50例健康人和32例肝硬化患者血清sCR1水平分别为（33.82±5.88） ng/mL和（152.99±9.51） ng/mL,两者比较有统计学差异（t=70.18, P＜0.001）。 结论：成功建立了检测人血清sCR1的双抗体夹心ELISA法,重复性和准确性较好。初步发现肝硬化患者血清sCR1水平显著升高。     

免疫层析法在HIV(1/2)抗体检测中的应用

卫生部要求 HIV初筛实验室必须备有两种不同实验原理的试剂 ,对可疑结果进行复检。国内已经推广使用 ELISA双抗原夹心法检测 HIV(1 / 2 )抗体 ,笔者发现初筛复检用免疫层析法检测 HIV(1 / 2 )抗体 ,具有较高的准确性。为了进一步验证其结果 ,与 ELISA双抗原夹心法进行比较 ,实验结果如下。1　材料和方法1 .1　血清标本　 HIV(1 / 2 )抗体阳性血清 45份 ,分别由丽珠、华美试剂公司提供 ,本院住院患者血清标本 2 0 0 0份。1 .2　试剂　免疫层析法 :批号 2 0 0 30 81 8,美国雅培制药有限公司产品 ,HIV(1 / 2 )快速检测试剂 ;ELISA…     

双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测粉尘螨2组变应原方法的建立

尘螨是最常见、最主要的过敏性疾病变应原。螨体中最主要的致敏成分是1组和2组变应原（Der1、Der2）。酶联免疫吸附测定（ELISA）是检测尘螨变应原含量应用最广泛的方法．但国内定量检测尘螨变应原的方法学研究鲜见报道。本研究用重组粉尘螨2组Der f 2（rDer f 2）．制备免疫血清，建立一种以辣根过氧化物酶系统为基础的双抗体夹心ELISA，以快速检测Der f2．现报告如下。     

梅毒螺旋体多表位抗原的改构及在双抗原夹心检测梅毒抗体中的应用

[目的]研制用于包被和标记重组梅毒螺旋体表位抗原，建立双抗原夹心酶联免疫检测梅毒抗体。[方法]利用计算机Godlkey软件分析梅毒螺旋体基因，确立优势抗原表位(rTpN17-TpN15-TpN42-TpN47)，并分别克隆表达四个抗原，然后将四个抗原串联成一个嵌合表达蛋白用于包被，在此抗原的末端连接4个赖氨酸，作为辣根过氧化物酶标记用梅毒抗原，建立双抗原夹心检测梅毒抗体。[结果]在一端连接4个赖氨酸梅毒抗原活性高于未加赖氨酸的抗原，梅毒抗原标记辣根过氧化物酶的ELISA双抗原夹心法与TPHA法阳性符合率为97．5％，特异性明显好于TRUST、间接ELISA法。[结论]改进的梅毒抗原标记辣根过氧化物酶用于双抗原夹心检测梅毒抗体获得了满意的结果。     

双抗体夹心酶联免疫吸附法检测IgG0的研究及应用

类风湿关节炎(RA)患者IgG分子糖链末端2个半乳糖缺失(称为IgG0 ) [1] ,缺失后,N 乙酰葡萄糖(GlcNAc)暴露。本研究用特异性识别GlcNAc的蘑菇凝集素(PVL) ,建立一种检测IgG0 的双抗体夹心酶联免疫吸附试剂(ELISA)检测法,并对正常人和RA患者进行检测。一、材料和方法1 标本来源:4 2份RA活动期患者血清采自1999年8月～2 0 0 1年12月本院就诊患者,(女33例,男9例,均符合1987年美国RA诊断标准)。对照组为12 6份志愿者血清,(女95名,男31名)。血清库( pool) :参照Tsuchiya法[2 ] 取4份活动期RA患者血清各2ml,混合成pool,用作参考血清,代…     

双抗原夹心法与间接法检测抗-HIV（1＋2）的比较

抗-HIV(1 2)检测已列入采供血机构筛查的常规项目中,但随着全球HIV感染率的逐渐升高,对HIV抗体检测的准确性急需加强。因此,对体外免疫诊断试剂的质量要求也逐步提高,本站应用新创公司双抗原夹心法诊断试剂检测抗-HIV(1 2),敏感性与特异性较其他间接法有大幅度提高,现将有关数据报告如下。     

双抗原夹心酶联免疫吸附试验对丙型肝炎病毒抗体检测灵敏度及特异性的影响

目的:探究双抗原夹心酶联免疫吸附试验对丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)检测灵敏度及特异性的影响。方法:选取2016年5月~2017年4月我院进行手术和血液透析前抗-HCV检测的患者270例,经血液筛查(荧光定量PCR法)抗-HCV阳性12例,抗-HCV阴性258例,采用双抗原夹心酶联免疫吸附法(ELISA)和间接ELISA分别对270例患者血清进行抗-HCV检测,比较两种检测方法的特异性、灵敏度。结果:双抗原夹心ELISA法灵敏度、特异性均高于间接ELISA法(P<0.05)。结论:双抗原夹心酶联免疫吸附试验可提高丙型肝炎病毒抗体检测灵敏度及特异性,可作为临床血液标本筛查首选方法。     

1例男男HIV抗体不确定者的跟踪随访

<正>HIV抗体检测是目前诊断艾滋病最常用的方法,我国HIV抗体常规检测包括筛查试验和确证试验,确证试验常用方法为免疫印迹(WB)。WB的实验结果常常出现"HIV抗体不确定",而不确定的结果不但给受检者带来沉重的心理负担,还会延误患者早期干预和治疗,这需要引起重视。2013年笔者发现1例HIV抗体不确定进展阳性后快速发病,现报道如下。1资料与方法1.1一般资料患者,男、27岁、未婚、大学本科文化程度,     

登革热病毒快速检测NS1抗原和IgG/IgM抗体的临床应用评价

目的采用胶体金免疫层析法(GICA)检测登革热病毒(DENV)NS1抗原和/或IgG/IgM抗体,初步评价其临床应用效果。方法将2633例经聚合酶链反应(PCR)-荧光探针法检测DENV核酸的血清样本分为3组:Ⅰ组为948例样本,用GICA检测NS1抗原;Ⅱ组为1156例样本,用GICA检测IgG/IgM抗体;Ⅲ组为529例样本,用GICA同时检测NS1抗原和IgG/IgM抗体。另5例流行性出血热抗体阳性样本、4例风疹/麻疹抗体阳性样本和50名健康人群样本为Ⅳ组,用GICA检测NS1抗原和IgG/IgM抗体。结果Ⅰ组结果与PCR结果相比,阳性、阴性、总体符合率分别为89.09%、92.41%、89.87%(P0.01);Ⅱ组结果与PCR结果相比,阳性、阴性、总体符合率分别为64.68%、66.41%、64.88%(P0.01);Ⅲ组结果与PCR结果相比,阳性、阴性、总体符合率分别为93.56%、61.82%、86.96%(P0.05),Ⅲ组中有419例样本经PCR检测结果为阳性,NS1抗原阳性率为85.20%,IgG/IgM抗体阳性率为63.25%,NS1抗原和/或IgG/IgM抗体阳性符合率为93.57%;Ⅳ组结果均为阴性,特异性为100%。结论GICA对NS1抗原和IgG/IgM抗体的联合检测结果与PCR检测结果较接近,且特异性良好,可用于DENV感染的早期辅助诊断和筛查。     

抗CCP抗体斑点免疫印迹试验测定方法的建立与初步应用

目的建立检测抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体的斑点免疫印迹试验，探讨其在类风湿关节炎（RA）疾病诊断中的价值。方法通过方阵滴定法选择斑点免疫印迹试验检测抗CCP抗体的最佳实验条件，并用该法检测RA、其他疾病及健康人血清，同时与自行建立的ELLSA法及欧蒙试剂抗CCP抗体检测结果作对比分析。结果斑点免疫印迹试验检测抗CCP抗体对RA的诊断敏感性为52％，特异性为94％，并具有较好的方法学稳定性和特异性。在48例被诊断为RA患者中有25椤甘抗CCP抗体阳性，显著高于其他疾病组和正常对照组（P〈0．01）。对比研究结果表明，该法与基于RSA-CCP固相模式建立的ELISA法具有高度的相关性（X^2=131．712）和一致性（Kappa=0．771，P〈0．001），与欧蒙试剂检测结果亦具有高度的相关性（X^2=24．147）和很好的一致性（Kappa=0．714，P〈0．001）。结论成功建立了抗CCP抗体检测的斑点免疫印迹试验，实验结果稳定，特异，可靠，值得进一步推广和研究。     

Ⅱ型糖尿病的胰岛素、C-肽、胰岛细胞抗体检测及临床意义

目的通过检测Ⅱ型糖尿病胰岛素、C-肽及血清胰岛细胞抗体(ICA)，揭示胰岛素、C-肽水平及峰值与Ⅱ型糖尿病的关系，确诊成人自身免疫性糖尿病(LADA)患者，指导临床治疗。方法对148例Ⅱ型糖尿病患者和48例健康体检者用胰岛素释放试验进行胰岛素、C-肽检测，用酶免疫法进行胰岛细胞抗体检测。结果Ⅱ型糖尿病胰岛素和C-肽峰值明显延迟，其胰岛素FINS值有差异。有12例ICA检测阳性，阳性率为8．1％。健康人胰岛细胞抗体均为阴性。结论胰岛素和C-肽检测可准确了解胰岛8细胞功能，胰岛素FINS值的差异可以对Ⅱ型糖尿病进一步分型，ICA检测可及早发现其中的成人自身免疫性糖尿病，对指导Ⅱ型糖尿病的临床治疗有重要意义。