乙型肝炎病毒A1762T/G1764A突变与原发性肝细胞癌的关系

目的：对原发性肝细胞癌（HCC）、慢性乙型病毒性肝炎（CHB）及肝硬化（LV）患者肝组织中乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）X基因基本核心启动子区（BCP）常见变异位点A1762T/G1764A进行检测分析,以探讨HBVX基因A1762T/G1764A变异与HCC发生发展的关系。方法：采用聚合酶链反应（PCR）方法检测67例患者（包括37例HCC,35例非HCC患者）肝组织中HBV X基因,并对PCR产物进行基因测序分析。结果：HCC组患者A1762T/G1764A突变率为85.7%（30/35）,非HCC组患者（包括CHB及LV）A1762T/G1764A突变率为40.6%（13/32）,HCC组双突变率明显高于非HCC组（P〈0.001）。结论：HBVA1762T/G1764A突变在HCC发生发展中可能起重要作用。     

原发性肝癌与乙型肝炎病毒基本核心启动子和前C区基因变异的相关性

目的 研究原发性肝癌（PLC）与HBV基本核心启动子（BCP）和前C区基因变异的相关性。方法对144例HBsAg（＋）PLC患者的血清进行HBV标志物和HBVDNA检测,对HBeAg（-）但HBVDNA（＋）的样本再采用实时荧光定量PCR进行前C区和BCP区基因变异检测。随机选取120例慢性乙型肝炎（CHB）患者作为对照组。结果PLC患者血清HBV标志物中HBeAg（＋）46例,占31．94％,HBeAg（-）98例,占68．06％。在98例HBeAg（-）患者的血清中,HBVDNA（＋）56例,占57．14％,其中前C1896变异43例,占76．79％,BCP1762／1764基因变异50例,占89．29％,共同变异38例,占67．86％。PLC患者中的前C1896和BCP1762／1764基因变异率高于CHB患者,且差异有统计学意义（X^2值分别为9．36和5．77,P值均〈0．05）。结论PLC的发生可能与前C区和BCP区基因变异有关。     

HBV基本核心启动子和前C区变异的深度测序分析

目的利用Ion Torrent PGM深度测序技术,探讨乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）阳性慢性乙型肝炎（CHB）患者乙型肝炎病毒（HBV）基本核心启动子和前C区突变特征。 方法收集HBeAg阳性CHB患者血清样本25例,提取HBV DNA,采用巢式PCR方法扩增HBV基本核心启动子和前C区片段,构建深度测序文库,基于Ion Torrent PGM平台深度测序,生物信息学分析突变位点及其突变率;构建HBV基本核心启动子和前C区突变型和野生型参考质粒,作为深度测序质控品。 结果在25例HBeAg阳性CHB患者HBV基本核心启动子和前C区检出流行率达20%的突变位点10个：G1746A、A1752G/T、T1753C/G、A1762T、G1764A、C1817G/A、T1825C/A、A1846T、G1896A、G1899A;G1746A和T1825C/A的流行率分别达92%和100%。突变位点在HBV B基因型和C基因型感染者的分布情况显示,A1752G/T和G1896A主要流行于B基因型感染者（63.6% vs 0.0%,χ² = 12.374、P = 0.0007;72.7% vs 28.6%,χ² = 4.812、P = 0.0472）,A1762T和G1764A主要流行于C基因型感染者（27.3% vs 78.6%,χ² = 6.579,P = 0.0172）;C基因型感染者A1762T/G1764A突变率显著高于B基因型感染者,但差异无统计学意义（25.7% ± 28.4% vs 68.4% ± 42.7%,t = 1.614、P = 0.1326）。25例HBeAg阳性CHB患者中,32.0%患者仅有A1762T/G1764A突变,24.0%患者仅有G1896A突变,24.0%患者同时携带A1762T/G1764A和G1896A突变。 结论深度测序分析可用于定量检测HBV基本核心启动子和前C区突变,为HBV突变研究的临床应用提供了技术平台。     

慢性HBV感染者TNFα-308位点多态性与HBV C基因区突变的关系

目的 研究慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者肿瘤坏死因子α（TNFα）-308位点的基因多态性与HBV C基因区突变的关系.方法 对95例慢性HBV感染者进行研究,采用聚合酶链反应.限制性片断长度多态性（PCR-RFLP）技术分析患者TNFα-308位点的多态性.对PCR产物直接测序,检测HBV C基因区nt1762/1764、nt1896、nt1899、nt1862、aa60、as87及aa97位点是否存在突变.采用Fisher＇s精确概率法比较TNFα-308位点不同基因型患者HBV C基因区常见突变的检出率.结果 TNFα-308位点共发现3种多态性,分别为G/G型63例（63/95,66.3%）,G/A型28例（28/95,29.5%）,A/A型4例（4/95,4.2%）.TNFα-308位点G/G、G/A、A/A基因型患者HBV C基因区aa87位点及as97位点突变型检出率均分别为39.3%（24/61）、11.5%（3/26）和50.0%（2/4）,差异有统计学意义（F=7.658,P〈0.05）;而nt1762/1764、nt1896、nt1899、nt1862以及aa60位点突变型检出率比较差异无统计学意义（F值分别为0.669、1.542、1.123、2.420和0.966,P值均〉0.05）.结论 慢性HBV感染者TNFα-308位点G/A基因型相对于G/G基因型不易发生HBV抗原性变异,有利于HBV的清除.     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者三年的疗效观察

目的探讨拉米夫定（lamivudine,LAM）长期治疗HBeAg阳性和HBeAg阴性的两组慢性乙型肝炎（CHB）患者相关指标之间的关系。方法将63例入院诊断为CHB的患者分为HBeAg阳性CHB患者组（30例）及HBeAg阴性CHB患者组（33例）,拉米夫定100mg/d治疗,进行3年的随访观察,同时检测HBV血清标志物、HBV DNA、ALT、AFP等生化指标,并进行χ2检验来分析两组之间的关系。结果 63例CHB患者中,HBeAg阳性患者30例（47.6%）,HBeAg阴性33例（52.4%）。拉米夫定治疗两组患者间ALT复常率、HBV DNA阴转率、肝细胞癌发生率及HBsAg阴转率两组比较差异均无统计学意义;其YMDD变异率、肝硬化的发生率两组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。HBeAg阳性组YMDD变异率为43.3%,显著高于HBeAg阴性组的18.2%（χ^2=4.720,P〈0.05）;HBeAg阴性组肝硬化患者占37.0%,显著高于HBeAg阳性组的5.9%（χ^2=3.866,P〈0.05）。结论拉米夫定治疗HBeAg阳性CHB患者较HBeAg阴性患者更易发生YMDD变异,HBeAg阴性CHB患者较HBeAg阳性患者更易发生肝硬化。     

52例HBeAg阴性HBV相关性肝细胞癌患者的临床分析

目的通过对HBeAg阴性慢性乙型肝炎进展为肝癌（HCC）患者的临床资料进行回顾性分析,探讨该病的发生规律和临床特征。方法对本院收治的52例HBeAg阴性HCC患者的性别、年龄、生化学指标、HBV DNA载量、免疫学状态以及服药情况等进行综合分析并进行统计学处理。结果52例HBeAg阴性HCC患者的血清HBV DNA分布：＜103拷贝/ml者18例（34.63%）,103～105拷贝/ml者22例（42.30%）,＞105拷贝/ml者12例（23.07%）。血清HBV DNA载量愈高的患者肝损伤愈重。抗-HBe （-）/抗-HBe（＋）和抗-HBs（-）/抗-HBs（＋）不同血清HBV DNA的分布无相关性,HCC的发生与抗-HBe和抗-HBs是否出现无关。经抗病毒药物治疗的HCC发生例数显著低于未使用过药物者,提示抗病毒药物能降低或延缓HCC的发生。结论对于HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者,尤其是有重症化和肝硬化病理基础、年龄偏大的患者,其HBeAg转阴可能是在药物作用下实现的自然血清学转换伴HBV DNA水平下降至正常,甚至有患者出现HBSAg阴转;也可能是病毒发生变异所致;此两类患者均应警惕HCC的发生。     

高发区乙型肝炎病毒致肝细胞癌风险的病毒学特征

目的 研究启东高发区人群慢性乙型肝炎病毒（HBV）HBeAg、共价闭环DNA（CCCDNA）的表达和HBV核苷酸1762／1764错义突变与肝细胞癌发生的关系。方法 自1989年1月至2002年12月,随访启东地区377例临床诊断为慢性HBV感染的中年男性,选取发生肝癌的32例患者,与年龄、职业、生活环境相匹配的慢性HBV感染患者32例组成巢式病例对照研究队列。采用ELISA法检测血清HBeAg表达情况,半巢式PCR扩增HBVcccDNA,巢式PCR扩增HBVX基因并测序,分析核苷酸1762／1764点突变,比较肝癌组和对照组在HBV风险特征上的差异。结果肝癌组和对照组血清HBeAg的阳性率分别是53．1％（17／32）和15．6％（5／32）（P〈0．01）;HBVcccDNA的阳性率分别是62．5％（21／32）和25．0％（8／32）（P〈0．01）;HBV核苷酸1762／1764的突变率分别为82．1％（23／28）和71．4％（20／28）（P=0．425）。结论 HBeAg和CCCDNA所反映的HBV滴度和活跃复制状态与肝癌的发生密切关联,可作为预测肝癌发生的风险指标。     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎停药后的复发病例分析

目的从拉米夫定治疗慢性乙型肝炎停药后复发的病例分析中,找寻可汲取的经验教训.方法共51例病人.44例擅自停药或误用他药后复发,其中37例原为HBeAg阳性,4例发生HBeAg血清转换不足3个月,7例原为HBeAg阴性,平均用药时间12个月.另7例系遵医嘱停药后复发,5例原为HBeAg阳性,发生HBeAg血清转换后6个月停药,平均用药时间18个月;2例原为HBeAg阴性,平均用药时间32个月.结果所有病人停药时ALT、AST、TBIL正常、HBV DNA降至检测水平以下.两组停药至复发平均时间为4个月和6个月.擅自停药或误用他药组复发后病情较重,特别是治疗前已有严重肝损害或肝硬化者,因肝癌或肝衰竭死亡3例.遵医嘱停药组复发后临床经过较轻.复发时呈代偿性肝病的35例再次予以拉米夫定治疗,其中13例联合应用干扰素,病情恢复顺利,但9例于12个月后出现YMDD变异.复发时呈失代偿肝病的10例中6例再次服用拉米夫定,5例病情得以恢复,1例恶化死亡.结论拉米夫定治疗慢性乙型肝炎未达停药标准而停药者,极易复发,治疗前已有严重肝损害或原有肝硬化者,复发后可致肝衰竭,即使达到停药标准遵医嘱停药后少数仍有复发.复发者再次服用拉米夫定依然有效,但长期服药会增加病毒的耐药变异.因此,急需研发新的、更为有效的抗病毒药物或疗法.     

乙型肝炎病毒基因型及S、P基因变异与肝移植术后乙型肝炎病毒感染的关系

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因型和S、P基因变异与肝移植术后HBV再感染的关系.方法 因乙型肝炎相关终末期肝病接受肝移植,术后随访1.5～3年,发生HBV再感染者14例(再感染组),移植前服用拉米夫定,移植后采用拉米夫定和抗乙型肝炎球蛋白(HBIG)预防HBV再感染.采用聚合酶链反应测定血清中HBV DNA水平,基因测序法分析HBV基因型、S基因及P基因变异,微粒子捕捉酶免法检测血清HBIG浓度.随机选取同期因乙型肝炎相关终末期肝病接受肝移植而未发生HBV再感染者20例为对照.结果 再感染组移植前血清HBV DNA≥103拷贝/ml者占71.4%,明显高于对照组的30%(P<0.05).再感染组移植前HBV基因型有B型(2例)和C型(12例),移植后基因型不变;对照组B型11例,C型9例.再感染组3例术前发生拉米夫定耐药位点变异者,9例C型者在P区拉米夫定耐药位点变异以外发生多位点氨基酸变异,且变异位点差异较大.再感染组50%的患者HBIG浓度为0,其S区"a-决定簇"的基因均发生变异.结论 乙型肝炎相关终末期肝病患者肝移植后的HBV再感染与HBV基因型有关,C基因型者更易发生HBV再感染;再感染可能与P基因区存在多位点变异及S区的"a-决定簇"基因变异密切相关.     

乙型肝炎后肝硬化肝移植乙型肝炎病毒再感染检测

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）DNA、YMDD变异及血清标志物在乙型肝炎肝硬化患者肝移植后HBV再感染检测的临床意义。方法定量聚合酶链反应（PCR）检测HBV DNA；HBV PCR产物限制性片段长度多态性分析检测YMDD变异；酶联免疫检测HBV血清标志物；分析乙型肝炎患者肝移植后YMDD变异、HBV DNA及血清标志物检测结果。结果乙型肝炎肝硬化患者肝移植术后HBV再感染率为8．9％（17／189）；YMDD变异病例达HBV再感染病例58．8％（10／17）；HBV DNA定量检测有较高的灵敏度，能早期诊断HBV的再感染，有利于临床治疗；对HBV DNA阴性但HBsAg阳性病例，PreS1和HBeAg血清标志物可用于病毒复制的补充检测。结论乙型肝炎肝硬化患者肝移植后预防乙型肝炎复发应采用HBV DNA、YMDD变异及血清标志物联合检测。     

Fibrosing cholestatic hepatitis secondary to precore/core promoter hepatitis B variant with lamivudine resistance: successful retransplantation with combination adefovir dipivoxil and hepatitis B immunoglobulin.

Fibrosing cholestatic hepatitis (FCH) is a peculiar variant of hepatitis B virus (HBV) infection in immunocompromised patients characterized by rapid viral replication. Posttransplant patients receiving lamivudine for prophylaxis or treatment of HBV infection may develop drug resistance due to viral mutants, but FCH is rare because escape mutants are usually replication deficient. We report the development of FCH due to lamivudine-resistant HBV mutants in 2 patients at 12 and 13 months after liver transplantation. Rapidly progressive graft failure, accompanied by an escalating HBV DNA level, developed within weeks of onset. Analysis of gene sequence variation by polymerase chain reaction (PCR) and direct sequencing showed that both had a core promoter variant A1762T/G1764A and 1 had a concomitant precore stop codon G1896A variant in prelamivudine and postrecurrence serum samples. Comparison of the HBV polymerase gene in the 2 serum samples revealed a single mutation with methionine-to-isoleucine substitution at codon 552 (M552I) in both patients. "Add-in" treatment with adefovir dipivoxil resulted in a more than 2 to 3log10 reduction in HBV DNA level within 2 weeks and retransplantation was performed with adefovir dipivoxil and hepatitis B immunoglobulin (HBIG) prophylaxis. Both patients were alive at 15 months and 48 months after retransplantation, with normal graft function and serum negative for HBsAg and HBV DNA by quantitative PCR (< 200 copies/mL). The current report demonstrates that recurrent graft infection by precore/core promoter variant with lamivudine-resistant escape mutation may result in FCH. With combination of adefovir and high-dose HBIG, however, long-term survival can be achieved after retransplantation.     

肝移植术后HBV再感染患者HBV X区基因变异研究

目的 分析肝移植术后HBV再感染患者血清乙型肝炎病毒(hepatitis B viral,HBV)DNA X区基因的变异情况.方法 选择2002年6月至2003年12月期间因乙肝相关终末期肝病在本院行肝移植手术的320例患者,移植术后患者血清采用聚合酶链反应(PCR)法扩增HBV DNA X区,并做直接测序分析.术后随访1.5～3年.结果 本组11例患者肝移植前、后HBV X区基因序列都有程度不等的点突变(5～39),有6例术前与术后同时具有nt1762(A→T)、ntl764(C→A)变异,11例患者同时存在ntl636～nt1741多处位点变异.结论 HBV DNA X区核苷酸nt1762、nt1764双位点变异在肝移植术后HBV再感染患者中是常见现象,免疫抑制剂不能改变该双位点变异.     

HBV基本核心启动子区和前C区变异与肝病进展的关系

乙型肝炎病毒（HBV）感染是我国严重的卫生健康问题,目前大约有1．7亿慢性HBV感染者,约占世界慢性HBV感染者的一半。HBV基因组结构为部分环状双链DNA,全长约3．2kb,其核心启动子对于HBV的复制和形态构成发挥了关键性作用。     

Prevention of hepatitis B virus reinfection after orthotopic liver transplantation

OBJECTIVE: We discuss the prevention of hepatitis B virus reinfection following orthotopic liver transplantation. METHODS: Sixty-eight cases of chronic fulminant hepatitis B, the end stage of liver cirrhosis and liver carcinoma complicated with HBV cirrhosis, were given antiviral drugs pre- and posttransplantation to prevent hepatitis B virus reinfection. Lamivudine was administered to two cases and lamivudine + HBIG to 63 cases. Adefovir + HBIG was administered to three cases. The serum HBV, HBV DNA, liver biopsy immunohistochemistry and clinical examinations were performed. RESULTS: One of two cases given lamivudine developed reinfection with serum HBSAg, HbeAb, HBcAb, HBV DNA, and positive and liver biopsy immunohistochemistry showing HBSAg phenotype. Two of the 63 cases given lamivudine + HBIG developed reinfection with serum HBSAg, HBeAb, HBcAb positive and liver biopsy immunohistochemistry showing HBSAg phenotype. The serum HBV DNA was positive in one of the two cases. Three cases given adefovir developed no reinfection with HBV. CONCLUSION: Orthotopic liver transplantation is an effective treatment for HBV infection; lamivudine + HBIG or adefovir + HBIG prevent hepatitis B virus reinfection.