c-jun氨基末端激酶在UVA诱导人角质形成细胞IL-10表达中的作用

目的探讨c-jun氨基末端激酶(JNK)是否介导UVA诱导的人角质形成细胞IL-10的表达。方法以2.4J/cm2UVA照射体外培养的2×104个/ml人角质形成细胞系(HaCaT)细胞,于照射后不同时点(0～48h)收集细胞并应用免疫荧光法检测磷酸化、非磷酸化JNK的水平。以JNK抑制剂SP600125(终浓度为10μmol/L)预处理人角质形成细胞,收集UVA照射后各时点(0～48h)的细胞及培养上清液,采用RT-PCR和双抗夹心ELISA方法检测IL-10mRNA及其蛋白表达。结果照射组角质形成细胞磷酸化JNK水平在各采样时点均明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);照射组角质形成细胞非磷酸化JNK水平于0、2、12、24、48h均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。SP600125预处理的细胞于照射后的各时点均未检测到IL-10mRNA及其蛋白的表达。结论 JNK可能介导UVA诱导的人角质形成细胞IL-10的表达。     

扇贝多肽对紫外线A诱导HaCaT细胞Fas、c-fos表达的影响

目的观察扇贝多肽(PCF)对紫外线A(UVA)照射后HaCaT角质形成细胞Fas、c-fos表达的影响,以探讨PCF保护UVA致HaCaT细胞损伤的分子机制。方法体外培养的HaCaT角质形成细胞分为5组:对照组、UVA模型组、5.69mmol/LPCF组、2.84mmol/LPCF组、1.42mmol/LPCF组。蛋白质印迹法检测Fas、c-fos蛋白表达;RT-PCR检测FasmRNA表达;荧光定量PCR检测c-fosmRNA表达。结果 UVA照射后模型组Fas、c-fos表达均显著增加(P0.01),1.42～5.69mmol/L剂量范围内的PCF可抑制UVA引起的HaCaT细胞Fas、c-fosmRNA及蛋白表达(P0.05),且有剂量依赖性。结论 PCF可通过抑制Fas、c-fos表达而抑制UVA诱导的HaCaT细胞损伤。     

亚砷酸钠对人皮肤角质形成细胞内过氧化氢酶的影响

目的 探讨亚砷酸钠（NaAsO2）作用于体外培养的人皮肤角质形成细胞（HaCaT）后,细胞内过氧化氢酶（CAT）的活力、mRNA和蛋白表达的变化.方法 对生长至80%融合的HaCaT细胞株,分别加入0.0、2.5、5.0、10.0和20.0 μmol/L的NaAsO2作用24 h.用紫外速率直接法测定细胞内CAT的活力;用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测CAT的mRNA表达水平;用免疫印迹（Western blot）方法检测CAT蛋白表达水平.结果 5.0 μmol/L以上的NaAsO2可明显降低CAT的活力,且呈剂量-反应关系,差异有统计学意义（P＜0.05）;RT-PCR电泳结果可见,5.0 μmol/L以上的NaAsO2作用于细胞后CAT/β-actin吸光度比值与对照组比较明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）;Western blot检测结果与RT-PCR电泳结果一致.结论 NaAsO2可降低HaCaT内CAT基因的mRNA及蛋白表达水平并抑制细胞内CAT活力.     

长波紫外线照射对HaCaT细胞氧化损伤作用的研究

目的研究长波紫外线(UVA)照射导致永生化人皮肤角质形成细胞(HaCaT)中活性氧簇(ROS)和8-异构前列腺素(8-isoprostane)生成量的变化以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活力的改变,探讨长波紫外线对HaCaT细胞的氧化损伤作用及机制。方法用8J/cm2UVA照射HaCaT细胞,采用荧光探针(CM-H2DCFDA)标记ROS的方法测定UVA照射对细胞ROS生成量的影响,以ELISA法检测UVA照射对细胞8-isoprostane生成量的影响,以酶生化法测定UVA照射对细胞内SOD、GSH-Px和CAT活力的影响,并与非照射组比较。结果经8J/cm2UVA照射后,HaCaT细胞ROS和8-isoprostane的生成量与未经UVA照射的细胞相比显著上升(P0.05),而SOD、GSH-Px、CAT活力则显著下降(P0.05)。结论 UVA对HaCaT细胞的氧化损伤作用与ROS生成增多及细胞抗氧化能力下降有关。     

HSF1/HSP70通路抑制c-Jun氨基末端激酶的活化保护UVA诱导的HaCaT细胞凋亡

目的观察热休克转录因子1(HSF1)与热休克蛋白70(HSP70)对紫外线A(UVA)诱导HaCaT细胞凋亡的保护作用及其机制。方法建立8mJ/cm2UVA辐射损伤HaCaT细胞的病理模型。将细胞随机分为对照组、8mJ/cm2UVA照射组、HSP70转录抑制剂组(50μmol/L槲皮素)。Honechst 33258荧光染色观察细胞凋亡;蛋白质印迹法检测UVA辐射HaCaT细胞后p-HSF1和HSP70蛋白的经时变化及UVA辐射后孵育6h JNK(c-Jun氨基末端激酶)、p-JNK的蛋白表达;Real-Time PCR检测HSP70 mRNA的表达。结果 UVA辐射后HaCaT细胞内p-HSF1、HSP70蛋白表达量均出现先增加后减少的时间依赖性趋势,其中p-HSF1于1h开始增加,3h达高峰,HSP70于6h达高峰,24h基本恢复原始水平;UVA辐射前预先加入HSP70转录抑制剂槲皮素能显著抑制HSP70 mRNA的表达,增加p-JNK的表达量,同时Honechst 33258荧光染色观察其与UVA辐射组比较凋亡率明显升高。结论 8mJ/cm2UVA辐射HaCaT细胞在一定时间内可使HSF1活化致HSP70表达增加。HSF1/HSP70通路对UVA诱导的HaCaT细胞凋亡具有保护作用,其机制与HSP70大量表达后抑制JNK的活化有关。     

短期暴露于纳米SiO_2对HaCaT细胞基因组DNA甲基化的影响

目的探讨纳米SiO2对体外培养细胞基因组总体DNA甲基化水平的影响。方法分别以2.5、5、10μg/ml纳米SiO2溶液和10μg/ml微米级SiO2处理人皮肤表皮细胞系(HaCaT)24h;以3μmol/L DNA甲基化转移酶抑制剂5-脱氧杂氮胞苷(DAC)处理48 h的10μg/ml组为阳性对照,并设立溶剂对照组。应用高效毛细管电泳(HPCE)定量分析纳米SiO2处理细胞24h后,基因组DNA总体甲基化的变化,用Q-PCR和Western Blot方法检测甲基化相关蛋白mRNA和蛋白的表达变化,并用DNA甲基化转移酶活性试剂盒检测DNA甲基化转移酶的活性。结果 HPCE定量分析结果显示纳米SiO2可引起HaCaT细胞总体甲基化程度降低,呈剂量依赖性关系;与正常细胞相比,微米SiO2以及2.5、5和10μg/ml纳米SiO2组分别降低37.8%、43.9%、54.9%和52.8%,差异有显著性(P<0.05);对照组5-aza-dC处理后使HaCaT细胞甲基化程度减少27.3%。各组酶的蛋白表达与mRNA表达水平及DNMTs活性变化具有相同的变化趋势,经纳米SiO2处理的HaCaT细胞,DNMT1、DNMT3a及MBD2表达随着纳米SiO2剂量的上升而下降,DAC组表达水平最低。结论纳米SiO2能引起HaCaT细胞整体基因组DNA甲基化水平降低,可能与DNA甲基化转移酶的酶活性降低有关。     

缝隙连接蛋白43在长波紫外线诱发人皮肤光老化中的作用

目的 探讨缝隙连接蛋白43（connexin 43，Cx43）在长波紫外线（ultraviolet A，UVA）诱发人皮肤光老化中的作用。方法（1）体外培养原代人皮肤成纤维细胞（human dermal fibroblasts，HDFs），分为对照组、UVA照射组，采用CCK-8实验筛选出安全条件后，使用5 J/cm2 UVA照射实验组细胞1 h；在照射后0 h、6 h、12 h、24 h分别收集细胞及培养上清液，采用ELISA法检测细胞上清中基质金属蛋白酶-1（matrix metalloproteinases-1，MMP-1）和MMP-9的水平；采用qRT-PCR法和Western blot法检测细胞内Cx43 mRNA和蛋白的表达水平。（2）瞬时转染Cx43-siRNA，采用ELISA法检测细胞上清中MMP-1和MMP-9的水平。（3）将HDFs分为对照组、UVA组、UVA+TNF受体1中和抗体组，经UVA照射后，采用qRT-PCR和ELISA法检测细胞中Cx43 mRNA表达和上清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和MMP-1水平。结果（1）与对照组相比，UVA组MMP-1和MMP-9水平呈时间依赖性上升（P<0.001），同时Cx43 mRNA和蛋白表达水平均明显下降（P<0.01）；（2）Cx43-siRNA显著下调Cx43表达后，MMP-1和MMP-9水平显著上升（P<0.001）；（3）与对照组相比，UVA组TNF-α和MMP-1水平显著上升（P<0.01），同时UVA+TNF受体1中和抗体组Cx43和MMP-1水平无明显升高。结论 Cx43可能参与介导了UVA通过诱导TNF-α信号通路引发的皮肤光老化过程，这种介导作用可能是通过Cx43对皮肤中MMP-1的调控得以实现。     

长波紫外线暴露致大鼠神经细胞能量代谢降低的恢复实验研究

目的利用体外培养神经元探讨长波紫外线(UVA)对细胞能量代谢的影响以及去除UVA暴露后,细胞能量代谢的恢复。方法将体外原代培养的大鼠神经元暴露于UVA,剂量分别为0、3、9J/cm2。照射后继续培养4和28h,以细胞化学方法进行单细胞细胞色素氧化酶活力测定,用图像分析仪进行定量分析。结果各暴露组细胞经过UVA照射及4h恢复培养后,与对照组相比,光镜下,生命征象未见明显改变,细胞色素氧化酶活力随照射剂量增加明显下降。UVA照射后,经28h恢复培养,3J/cm2剂量组细胞色素氧化酶活力与对照组未见显著差别。9J/cm2剂量组虽有所恢复,但未达到对照组水平。结论低剂量UVA暴露在未导致细胞出现明显损伤情况下,可使细胞能量代谢明显降低。经去除UVA暴露,在一定时间内,较低剂量暴露致细胞能量代谢降低可明显可恢复;但较高剂量暴露后,短期内难以恢复至正常水平。     

UVB诱导A375细胞自噬与凋亡调控机制探讨

目的探究中波紫外线(UVB)对人表皮黑色素瘤细胞株A375细胞自噬与凋亡的诱导效应。方法 (1)取对数生长期A375细胞,分别予剂量为10.0、15.0 m J/cm~2的UVB照射,于照射后3、6、9、12 h收集细胞,用单丹磺酰戊二胺染色法观察细胞自噬,用吖啶橙/溴乙锭染色法观察细胞凋亡。(2)予相应剂量的UVB照射10.0、15.0 m J/cm~2组A375细胞,于照射后18、24、36、48 h收集细胞,以CCK-8法检测细胞存活率。(3)予剂量为10.0、15.0 m J/cm~2的UVB照射A375细胞,于照射后3、6、9、12 h收集细胞;予剂量为2.5、5.0、7.5、10.0、15.0 m J/cm~2的UVB照射A375细胞,于照射后9 h收集细胞;用免疫印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2相互作用蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ的表达。上述3个实验均另设不予UVB照射(予假照射)的对照组。结果 (1)剂量为10.0、15.0 m J/cm~2的UVB照射诱导的A375细胞自噬和细胞凋亡均表现为随着照射后时间的延长而增强,但在15.0 m J/cm~2UVB照射后12 h,细胞自噬已观察到降低。(2)10.0、15.0 m J/cm~2组细胞活力均随照射后时间的推移而增加(P0.05);在照射后18~48 h,10.0和15.0 m J/cm~2组细胞活力均低于对照组(P0.05);在照射后24~48 h,15.0 m J/cm~2组细胞活力均低于10.0 m J/cm~2组(P0.05)。(3)10.0 m J/cm~2组细胞Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白相对表达水平在照射后0~12 h内均随照射时间的增加而增加(P0.05),而15.0 m J/cm~2组细胞仅在照射后0~9 h内观察到上述改变,在12 h时间点上述2个自噬相关蛋白明显下降(P0.05);10.0和15.0 m J/cm~2组细胞Bcl-2蛋白相对表达水平在照射后3~12 h内均随照射时间的增加而下降(P0.05),Bax蛋白相对表达水平均在照射后0~12 h内随照射时间的增加而增加(P0.05)。0.0~10.0 m J/cm~2组细胞Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白相对表达水平,0.0~15.0 m J/cm~2组细胞Bax蛋白相对表达水平,均随照射剂量的增加而增加(P0.05);5.0~15.0 m J/cm~2组Bcl-2蛋白相对表达水平随照射剂量的增加而下降(P0.05)。结论剂量为10.0和15.0 m J/cm~2UVB照射均可诱导A375细胞发生自噬和凋亡;10.0 m J/cm~2UVB照射诱导的细胞自噬可部分抵抗UVB对凋亡的诱导而使细胞活力增强,15.0 m J/cm~2UVB诱导的自噬不足以发挥上述作用,且以诱导凋亡为主导效应。     

紫外线暴露对细胞能量代谢的影响

目的 利用体外培养神经元探讨长波紫外线(UVA)对细胞能量代谢的影响.方法 将体外原代培养的SD大鼠神经元暴露于UVA,剂量分别为0、3、6、9 J/cm2.照射后继续培养4 h,继之用细胞化学方法进行单细胞的细胞色素氧化酶活力测定,用图像分析仪进行定量分析.结果 各实验组细胞经过UVA照射及4 h恢复培养后,与对照组比较,光镜下,生命征象未见明显改变,细胞色素氧化酶活力随照射剂量增加明显下降.结论 低剂量UVA暴露在未导致细胞出现明显损份情况下,可使细胞能量代谢明显降低.     

构树总黄酮对长波紫外线引起人角质形成细胞损伤的防护作用

目的研究长波紫外线(UVA)照射对人角质形成细胞的氧化损伤以及构树总黄酮(totalflavonoids of broussonetia papyrifera,TFBP)的防护效果。方法在人角质形成细胞培养的基础上,实验组在照射前加入不同剂量的TFBP,然后和处理组一起接受UVA照射,通过噻唑蓝(MTT)染色法检测细胞活性、裂解液中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,对构树叶提取物的抗氧化效果进行评价。结果随着UVA剂量的增高(0.46~2.76J/cm2),细胞的活性逐渐降低(96.3%~37.5%),添加TFBP10~200mg/L后,细胞活性升高,MDA含量由(5.14±0.58)nmol/mg pro降低到(2.98±0.14)nmol/mg pro,SOD活力由(23.09±3.91)U/mg pro增加到(34.50±1.59)U/mg pro,GSH-Px活力也有所升高。结论本试验条件下,UVA对人角质形成细胞有明显的氧化损伤,TFBP对这种氧化损伤有防护作用。     

UVA与UVB对人体黑素细胞生长的影响

[目的]探讨长波紫外线（UVA）和中波紫外线（UVB）照射人体黑素细胞作用的差异。[方法]以不同剂量UVA和UVB分别照射黑素细胞,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）测量细胞增殖率,比色法测定酪氨酸酶活性,吸光度测定黑素含量的变化。[结果]人体黑素细胞经0-2．25J／cm^2UVA照射后,黑素含量和酪氨酸酶活性无明显改变,其中较高剂量UVA（〉1．8J／cm^2）可使黑素细胞存活率下降。0-0．06J／cm^2UVB能明显抑制黑素细胞存活率,并能激活酪氨酸酶和促进黑素细胞的黑素合成。[结论]离体水平UVB对黑素细胞的促黑素合成作用明显强于UVA。     

60Co γ射线照射对体外培养的心肌细胞活性及凋亡的影响

目的研究60Co γ射线照射对体外培养的心肌细胞活性及凋亡的影响。方法体外培养新生大鼠心肌细胞,分为对照组和照射组,照射组细胞分别用60Co γ射线5Gy、10Gy、20Gy单剂量照射心肌细胞,照射后48h检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)浓度,流式细胞仪检测60Coγ射线照射对体外培养的心肌细胞凋亡的影响,照射后48h及120h用结晶紫试验及MTT试验检测照射后心肌细胞活性变化,结果照射组LDH浓度明显高于未照射组,且随照射剂量增加而升高。照射后48h凋亡细胞较对照组升高,凋亡细胞比例与照射剂量呈正相关。结晶紫试验及MTT试验均提示照射后48h照射组心肌细胞活细胞活性与对照组无明显差异,照射后120h照射组活细胞活性明显低于对照组,且与照射剂量相关。结论60Co γ射线单剂量照射可直接损伤心肌细胞,降低体外培养的心肌细胞活性,促进心肌细胞凋亡。     

长波紫外线对大鼠皮肤脂质过氧化和胶原的影响及防晒剂的防护

[目的 ]　探讨长波紫外线 (UVA )对大鼠皮肤脂质过氧化和胶原合成的影响及防晒化妆品的防护效果。　[方法 ]　UVA照射组和涂抹防晒化妆品组大鼠经UVA照射 8周后 (总计量为 30 6 1.8J/cm2 ) ,测定皮肤丙二醛 (MDA)、超氧化物歧化酶 (SOD)、总胶原和可溶性胶原的含量。　 [结果 ]　UVA照射组大鼠皮肤MDA(11.36± 1.92nmol/mL)高于对照组 (7.0 3± 1.11nmol/mL) (P <0 .0 1) ,高于防晒化妆品组 (8.0 5± 1.2 8nmol/mL) (P <0 .0 1)。UVA照射组总胶原(2 5 .98± 3.0 6mg/g)低于对照组 (31.36± 3.99mg/ g) (P <0 .0 5 ) ,与防晒化妆品组 (2 8.71± 3.72mg/ g)差异无显著性 (P>0 .0 5 )。UVA照射组可溶性胶原 (4.2 5± 0 .83mg/ g)低于对照组 (6 .33± 1.19mg/g) (P <0 .0 1) ,低于防晒化妆品组(5 .70± 1.14mg/g) (P <0 .0 5 )。对照组、UVA照射组和防晒化妆品组的SOD分别为 18.6 9± 2 .82 U/mL、16 .40± 2 .14U /mL、17.86± 2 .95U/mL ,三者差异没有显著性 (P >0 .0 5 )。　 [结论 ]　UVA能使皮肤脂质发生过氧化和降低皮肤可溶性胶原的含量 ,防晒化妆品有一定的防护效果。     

The development of classically and alternatively activated macrophages has different effects on the varied stages of radiation-induced pulmonary injury in mice

The classical and alternative activation of macrophages has been proposed to play a role in radiation-induced pneumonitis and fibrosis, respectively. To test this hypothesis, the thoraces of C57BL/6 mice were irradiated with 12 Gy X-rays, and irradiated and control mice were euthanized at 1, 8, 12, 24 and 72 hours, and 2, 4, 8, 16 and 24 weeks after irradiation. The expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and arginase type 1 (Arg-1) was evaluated at the mRNA and protein levels at different stages post-irradiation. We demonstrated that the enhanced mRNA and protein expression of iNOS occurred within the pneumonic stage, whereas the high levels of Arg-1 expression occurred within the fibrotic phase. Immunohistochemistry revealed that iNOS and Arg-1 were mainly expressed in macrophages. The expression of iNOS and Arg-1 may be associated with acute radiation pneumonitis and the development of radiation fibrosis, respectively. Although the function of macrophages cannot explain the whole process of radiation-induced pulmonary injury development, it may play an important regulatory role during this process.     

Comparing cytotoxicity and genotoxicity in HaCaT cells caused by 6-aminochrysene and 5,6-chrysenequinone under ultraviolet A irradiation

Chrysene is one of the basic polycyclic aromatic hydrocarbons that are toxic environmental pollutants. The photoproducts of 6-aminochrysene (6AC) include 5,6-chrysenequinone (5,6-CQ) along with some minor products. In this study, cytotoxicity and genotoxicity of 6AC and 5,6-CQ to a human skin cell line, HaCaT, were measured with the fluorescein diacetate uptake (FDA) test and comet assay, respectively, in the presence or absence of ultraviolet A (UVA) irradiation. The FDA test result showed that HaCaT cell viability decreased dose dependently after exposure to UVA irradiation in both 6AC (0, 0.1, 0.5, 1, 5, 10, 50 microM) and 5,6-CQ (0, 0.05, 0.25, 0.5, 2.5, 5, 25 microM) groups, with the 6AC group having lower cell viability at the same substrate concentrations; therefore, 6AC was more cytotoxic. Results of the comet assay showed that the extent of DNA damage was also dose dependent after the combined UVA and 6AC treatment (0, 0.05, 0.1, 0.5, 1 microM), although no DNA damage was detectable in the 6AC group without UVA irradiation. In addition, no DNA damage was found in the 5,6-CQ group with or without UVA irradiation. Our study indicated that 5,6-CQ, the major photoproduct of 6AC, was less photocytotoxic than the parent compound and was not photogenotoxic to HaCaT cells under the experimental conditions.     

Protective effect of atorvastatin on radiation-induced vascular endothelial cell injury in vitro

Vascular endothelial cells are very sensitive to ionizing radiation, and it is important to develop effective prevent agents and measures in radiation exposure protection. In the present study, the protective effects of atorvastatin on irradiated human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) and the possible mechanisms were explored. Cultured HUVEC were treated by atorvastatin at a final concentration of 10 μ mol/ml for 10 minutes, and then irradiated at a dose of 2 Gy or 25 Gy. Twenty-four hours after irradiation, apoptosis of HUVEC was monitored by flow cytometry, and the expression of thrombomodulin (TM) and protein C activation in HUVEC was respectively assessed by flow cytometry and spectrophotometry. After treatment with atorvastatin for 24 h, the rate of cell apoptosis decreased by 6% and 16% in cells irradiated with 2 Gy and 25 Gy, respectively. TM expression increased by 77%, 59%, and 61% in untreated cells, 2 Gy irradiation-treated cells, and 25 Gy irradiation-treated cells, respectively. The protein C levels in 2 Gy and 25 Gy irradiation-treated cells were reduced by 23% and 34% when compared with untreated cells, but up-regulated by 79% and 76% when compared with cells which were irradiated and treated with atorvastatin. In conclusion, these data indicate that atorvastatin exerts protective effects on irradiated HUVEC by reducing apoptosis by up-regulating TM expression and enhancing protein C activation in irradiated HUVEC.     

长波紫外线对人皮肤成纤维细胞生长的影响

[目的 ]　观察长波紫外线 (UVA)对人皮肤成纤维细胞生长的影响 ,探讨皮肤光老化机制。　 [方法 ]　将原代培养的人皮肤成纤维细胞经UVA照射后 ,采用细胞成像、四唑盐比色实验 (MTT)、乳酸脱氢酶 (LDH)检测UVA对皮肤细胞的损伤。　 [结果 ]　随UVA照射剂量增加 ,成纤维细胞由正常细长梭状逐渐变圆、皱缩 ;UVA照射剂量为 9J/cm2 时 ,LDH从 ( 5 6.82± 4.78)U /dl上升至 ( 12 0 .40± 7.16U ) /dl;UVA照射剂量为 45J/cm2 时 ,成纤维细胞抑制率达到67.12 %。　 [结论 ]　UVA可损伤原代培养的人皮肤成纤维细胞