羧甲基化裂褶多糖抗肝癌作用的实验研究

目的:从细胞水平和整体水平探讨羧甲基化裂褶多糖的抗肝癌作用。方法:将两种不同取代度羧甲基化裂褶多糖加入H22小鼠肝癌细胞液中分别培养24、48、72h,用台盼蓝拒染法测试作用后的细胞死亡率;建立小鼠H22肝癌移植性实体瘤模型,将其分为空白对照组、阳性对照组和3种不同取代度羧甲基化裂褶多糖给药组,腹腔注射给药,各组小鼠均连续给药10d后处死并称瘤重,计算抑瘤率。结果:不同取代度、不同时间羧甲基化裂褶多糖作用于H22肝癌细胞的细胞死亡率差异无统计学意义。取代度为0.67和0.93的羧甲基化裂褶多糖,对荷H22肝癌肿瘤小鼠的抑瘤率分别为41.3%和37.9%;取代度为1.14的羧甲基化裂褶多糖则未表现出抑瘤作用。结论:羧甲基化裂褶多糖在细胞水平上对H22小鼠肝癌细胞株无抑制作用;取代度为0.67和0.93的羧甲基化裂褶多糖对小鼠H22肝癌具有一定的抗癌作用,其机制并不是直接抑制癌细胞,而是通过机体因素后间接抑制肿瘤的生长,是一种具有开发潜力的新的候选抗癌药物。     

咖啡酸锗对小鼠肝癌H22抑制作用的研究

目的:探讨一种新的有机锗化合物(咖啡酸锗)对小鼠肝癌H22的抑制作用。方法:通过体内抗肿瘤实验,观察咖啡酸锗对小鼠肝癌H22的影响(抑瘤率),并采用HE染色和迈-格-姬(MGG)染色在光镜下观察肿瘤细胞的病理形态变化。结果:咖啡酸锗能有效地抑制小鼠肝癌H22的生长,咖啡酸锗低、中、高剂量组的抑瘤率分别为46.48%、50.00%、52.11%,光镜下见咖啡酸锗各剂量组肿瘤细胞生长受抑,浸润程度、核分裂数、血管数目明显减少,而且坏死程度较严重。结论:咖啡酸锗对小鼠肝癌H22具有显著的抑制作用。     

叶酸在体外对人肝癌细胞生长的抑制作用

目的:体外采用叶酸对人肝癌细胞株SMMC-7721进行处理,分析叶酸抑制人肝癌细胞生长的作用。方法:实验于2003-09/2005-08在重庆医科大学完成。①人肝癌细胞SMMC-7721细胞株由四川大学华西校区分子生物学教研室提供;人胚肌腱细胞由四川大学华西校区分子生物学教研室提供。②细胞生长实验:常规培养细胞,待处于对数生长期时接种于24孔培养板内,每孔调整细胞数为1×104个,共分7组:加入叶酸,使各组叶酸的终浓度分别为15,75,375,750,1875nmol/L;加入顺铂,使顺铂组的终浓度为33nmol/L;以未加受试物、只单纯加入培养基为阴性对照组。通过绘制生长曲线计算各组细胞的增殖抑制率。③四唑盐比色实验:取对数生长期生长状态良好的SMMC-7721和人胚腱细胞,分别接种于96孔培养板,共分7组:加入叶酸,使各组叶酸的终浓度分别为15,75,375,750,1875nmol/L;加入顺铂,使顺铂组的终浓度为33nmol/L;以未加受试物、只单纯加入培养基为阴性对照组。继续培养24h后加入四唑盐(5g/L,20μL/孔)孵育。通过酶联免疫检测仪计算平均吸光度值和抑制率。④流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果:①叶酸对人肝癌细胞株体外增殖的影响:叶酸浓度为75,375,750,1875nmol/L时可显著抑制SMMC-7721细胞的增殖(P<0.05);随时间的延长和剂量的增加,SMMC-7721细胞的抑制率呈上升趋势,其生长曲线较阴性对照下移。②叶酸对肝癌细胞、人胚肌腱细胞活性及功能状态的影响:叶酸对人胚肌腱细胞的活性和功能状态无影响,但对人肝癌细胞株有抑制作用。③叶酸对SMMC-7721细胞周期各时相分布及凋亡率的影响:与S期及G2/M期比较,G0/G1期细胞比例增大(P<0.01或P<0.05),使其受阻于G0/G1期,细胞生长停滞,细胞凋亡率随浓度的增加而明显上升。结论:叶酸对人胚肌腱细胞无抑制作用,表明叶酸对正常人体细胞无不良影响;但叶酸对癌细胞存在明显的抑制作用。     

托瑞米芬联合顺铂促进非小细胞肺癌凋亡

目的探讨托瑞米芬对人非小细胞肺癌细胞株的增殖抑制作用。方法以MTT法检测顺铂和/或托瑞米芬对H1299细胞的增殖抑制作用,Annexin-V/PI染色法及流式细胞仪测定细胞凋亡。结果①托瑞米芬明显降低顺铂对H1299的半数生长抑制剂量(P<0.05);②托瑞米芬联合顺铂较单用顺铂诱导了更多的H1299细胞凋亡(P<0.05)。结论托瑞米芬可以通过诱导凋亡而增加化疗敏感性。     

5-杂氮脱氧胞苷对人膀胱癌细胞株T24增殖作用的影响

目的:探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮脱氧胞苷(5-aza-dc)对人膀胱癌细胞株T24增殖、凋亡的影响.方法:应用不同浓度(0.1、0.5、2.5、12.5μmol/L)的特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-dc,于不同作用时间(6、12、24、48 h)处理人膀胱癌细胞株T24,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度的5-aza-dc在不同时间作用下T24细胞株的生长抑制率:采用流式细胞仪检测不同浓度的5-aza-dc在处理T24细胞24 h后的凋亡率变化情况.结果:MTT提示各浓度的5-aza-dc对细胞生长均有抑制作用.流式细胞分析结果示,不同浓度5-aza-dc处理24 h后T24细胞凋亡率均明显增加.不同药物浓度组在同一作用时间下,T24细胞生长抑制率及凋亡率的差异有统计学意义(P<0.01);同一药物浓度在不同作用时间组之间的细胞生长抑制率差异也有统计学意义(P<0.01),且浓度为12.5 μmol/L的5-aza-dc作用24 h时对T24细胞的生长抑制及凋亡作用最明显.结论:5-aza-dc有抑制人膀胱癌细胞株T24生长及促进其凋亡的作用,其抑制作用呈时间依赖性及浓度依赖性.     

载血卟啉PLGA微泡用于声动力治疗小鼠H22肝癌移植瘤

目的 研究超声联合载血卟啉PLGA造影剂对小鼠H22肝癌皮下移植瘤的声动力治疗作用. 方法 自制载血卟啉高分子材料PLGA造影剂并检测其基本特性.选择30只荷H22肝癌皮下移植瘤小鼠,随机平均分为5组进行治疗,绘制治疗后15天内肿瘤体积生长曲线,比较其质量抑瘤率,并采用TUNEL和PCNA检测各组小鼠肿瘤细胞凋亡情况及增殖活性. 结果 自制的载血卟啉PLGA微泡造影剂平均粒径为602.3 nm,分布均匀,包封率63.50%,载药量2.15%.治疗后,与其他各组比较,超声加载药微泡治疗组肿瘤生长曲线最平缓,质量抑瘤率及凋亡指数均显著高于其他4组(P＜0.05),而增殖指数明显低于其他各组(P＜0.05). 结论 超声联合载血卟啉高分子纳米造影剂能够抑制小鼠H22肝癌移植瘤生长,促进其凋亡.     

莲子心抗肿瘤活性部位的筛选研究

目的:筛选莲子心抗肿瘤作用的活性部位。方法:采用MTT法测定了莲子心总生物碱、总黄酮和总多糖分别对人肝癌细胞株HepG2、胃癌细胞株SGC-7901、乳腺癌细胞株MCF-7和结肠癌细胞RKO的半数抑制浓度(IC50)结果:莲子心总生物碱对上述4种肿瘤细胞的增殖均具有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性;总黄酮和总多糖的抑制作用则不明显。结论:莲子心抗肿瘤作用的活性部位是总生物碱而非总黄酮和总多糖。     

地西他滨对NB4及K562细胞增殖和凋亡的影响

本研究旨在观察去甲基化药物地西他滨(DAC)对NB4及K562细胞增殖和凋亡的影响。用台盼蓝染色法检测DAC对NB4及K562细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测不同浓度DAC作用后细胞周期的变化和CD11b的表达水平;瑞氏染色法观察药物作用后细胞形态变化;DNA梯形片段电泳分析细胞凋亡。结果表明,DAC显著抑制NB4及K562细胞的增殖(P<0.05),且呈浓度和时间依赖性,DAC作用NB4及K562细胞72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为0.113μmol/L和0.138μmol/L;不同浓度DAC作用72 h后,0.15μmol/L DAC处理组两种细胞株G0/G1期细胞比例均显著增高,而S期细胞比例降低(P<0.05);两种细胞株的髓系分化抗原CD11b表达水平均升高(P<0.05);两种细胞株经不同浓度DAC处理48 h后,0.15μmol/L DAC处理组均出现典型的凋亡梯形DNA条带。结论:DAC抑制NB4及K562细胞增殖,诱导细胞分化,促进细胞凋亡;DAC对NB4细胞作用更明显。     

葛根总黄酮对不同急性髓系白血病细胞株增殖抑制的影响

为了探讨葛根总黄酮对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)的作用及其可能的机制,观察不同浓度葛根总黄酮体外对4种AML细胞株Kasumi-1、HL-60、NB4和U937的增殖抑制影响和细胞周期的变化。应用MTT法检测细胞株细胞的增殖抑制作用,用流式细胞术检测细胞周期的变化。结果表明:一定浓度葛根总黄酮对4种AML细胞株增殖抑制作用差异显著,抑制强度依次为NB4细胞Kasumi-1细胞U937细胞HL-60细胞;葛根总黄酮不同程度地改变NB4、Kasumi-1、U937及HL-60细胞周期进程,使G1期细胞比例下降,S期细胞比例增高,出现亚二倍体峰,呈现浓度依赖性。结论:葛根总黄酮体外对不同AML细胞株具有选择性增殖抑制作用,以对NB4细胞株的影响最为显著。     

内皮抑素联合阿霉素治疗鼠H22肝癌移植瘤研究

目的:研究内皮抑素联合阿霉素对鼠H22肝癌移植瘤血管生成及肿瘤生长的抑制作用.方法:将H22肝癌细胞接种到40只小鼠的背部皮下,肿瘤直径约1cm时随机分成4组;对照组,隔日尾静脉、腹腔注射生理盐水;联合用药组,隔日尾静脉推注内皮抑素+腹腔注射阿霉素;内皮抑素组,隔日尾静脉推注内皮抑素;阿霉素组,隔日腹腔注射阿霉素.比较各组的抑瘤率,绘制肿瘤生长曲线,检测血浆VEGF浓度、肿瘤组织MVD表达,观察小鼠生存期.结果:联合用药组小鼠肿瘤体积明显小于其他各组(P<0.05),血浆VEGF水平及瘤组织中MVD表达较其他各组明显减低(P<0.05),生存时间较其他各组延长(P<0.05);但内皮抑素组VEGF水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:内皮抑素联合阿霉素抗肿瘤作用优于内皮抑素或阿霉素单药治疗,并可使小鼠生存期延长.     

雷公藤内酯醇对卵巢癌细胞株A2780作用的实验研究

目的:观察雷公藤内酯醇对卵巢癌细胞株的A2780的抑制作用,以及与顺铂联合用药的协同作用,并与顺铂单独作用相比较,评价其作为抗肿瘤药物的价值。方法:MTT检测不同的用药方式对卵巢癌细胞A2780增殖的抑制作用;形态学观察经雷公藤内酯醇作用后细胞的生长情况;流式细胞仪检测雷公藤内酯醇作用后细胞的凋亡情况。结果:1)雷公藤内酯醇对卵巢癌细胞A2780的增殖有明显抑制作用,呈量-效、时-效关系(P<0.05)。其在较小的浓度下即可产生很好的抑制效果(5 mg/L时,抑制率80%;0.5 mg/L时,抑制率60%;(0.005 mg/L)时,抑制率40%)。2)雷公藤内酯醇与顺铂相比较,在浓度<5 mg/L雷公藤内酯醇队卵巢癌细胞A2780的抑制作用优于顺铂(P<0.05),但在大于此浓度下则两者无明显差异(P>0.05);在24、48、72 h作用点时,雷公藤内酯醇IC50均小于顺铂IC50。3)在低浓度下,雷公藤与顺铂两者联合用药后的抑制率大于顺铂单用药抑制率,而小于雷公藤内酯醇单用药抑制率,其抑制率受作用时间影响更大,随作用时间的延长其抑制率明显增高,尤其在作用48 h以后,抑制率增加更为明显(P<0.05)。4)流式细胞检测经雷公藤内酯醇作用后A2780细胞有凋亡(P<0.05)。倒置相差显微镜下观察经雷公藤内酯醇作用后细胞生长明显受到抑制。结论:雷公藤内酯醇对卵巢癌细胞株A2780有明显的抑制作用,有量-效、时-效关系;在较低的浓度下,其抑制率明显高于顺铂;雷公藤内酯醇与顺铂联合用药的作用,随时间的延长抑制率增大。雷公藤内酯醇抑制肿瘤的作用可能是通过诱导细胞凋亡实现的。     

Iron-dependent free radical generation from the antimalarial agent artemisinin (qinghaosu).

Artemisinin is an important new antimalarial agent containing a bridged endoperoxide. The in vitro antimalarial activity of an artemisinin derivative, arteether, is antagonized by two iron chelators, pyridoxal benzoylhydrazone and 1,2-dimethyl-3-hydroxypyrid-4-one. Similarly, the acute toxicity of artemisinin in mice is antagonized by another chelator, deferoxamine-hydroxyethylstarch. A combination of artemisinin and hemin oxidizes erythrocyte membrane thiols in vitro, and this oxidation is also inhibited by an iron chelator. Thus, iron plays a role in the mechanisms of action and toxicity of artemisinin. The combination of artemisinin and hemin also decreases erythrocyte deformability. Iron probably catalyzes the generation of free radicals from artemisinin since alpha-tocopherol antagonizes the thiol-oxidizing activity of artemisinin and since a spin-trapped free radical signal can be seen by electron paramagnetic resonance only when artemisinin is incubated in the presence of iron.     

ErbB-3结合蛋白-ebp1对ACC-M细胞生长的影响

目的：探讨ErbB-3结合蛋白-ebp1对腺样囊性癌ACC—M细胞生长增殖作用的影响。方法：通过免疫组化筛选到erbB-2／erbB-3双阳性的ACC—M细胞系；转染pcDNA3．1-ebp1质粒至ACC—M细胞，G418筛选被转染的阳性细胞；RT—PCR检测转染后细胞中ebp1的转录水平；细胞生长曲线及^3H—TdR摄入法观察转染前后细胞生长增殖能力的改变。结果：ACC—M细胞同时表达erbB-2／erbB-3；RT—PCR显示转染后细胞中ebp1转录水平明显升高；ACC—M—ebp1细胞生长曲线平缓，生长减慢，^3H—TdR摄入量明显减少，细胞增殖能力减弱。结论：ebp1在体外能显著抑制ACC—M肿瘤细胞增殖。     

成骨生长肽促进钛表面大鼠成骨细胞的增殖分化

背景:成骨生长肽具有促进多种基质细胞增殖活性,成骨活性,免疫原性低,自身调节极其敏感,提取制作工艺简单等众多优点。目的:体外观察成骨生长肽对大鼠颅盖骨来源成骨细胞在钛金属表面增殖分化的影响。方法:将体外培养的新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞以5×107L-1细胞浓度接种于6孔板中的纯钛试件表面,分别加入0(空白对照),10-10,10-9,10-8,10-7mol/L的成骨生长肽,干预1,3,5,7,9d后应用MTT法检测纯钛试件表面成骨细胞的增殖活性,应用酶联免疫法检测成骨细胞内碱性磷酸酶活性。结果与结论:与空白对照组比较,各浓度成骨生长肽组纯钛试件表面成骨细胞增殖活跃(P<0.05),且最佳作用浓度为10-9mol/L(P<0.05);各浓度成骨生长肽组细胞内碱性磷酸酶活性增强(P<0.05),且最佳作用浓度为10-8mol/L(P<0.05)。表明成骨生长肽可促进钛片表面成骨细胞的增殖活性,增强细胞内碱性磷酸酶活性。     

硼替佐米和柔红霉素联合应用对多发性骨髓瘤细胞株KM3的作用

为了研究硼替佐米（bortezomib,Bor）单用及与柔红霉素（daunorubicin,DNR）联合应用对多发性骨髓瘤（multiple mydoma,MM）细胞株KM3细胞的抑制作用,采用MTT法检测Bor单用及与DNR联合应用对KM3细胞的抑制作用,求出其IC50。结果表明：Bor、DNR对KM3细胞生长抑制作用呈浓度依赖性,IC50分别为0．27μmoL／L,0．16μmol／L;Bor联合DNR对KM3细胞生长抑制作用明显增强（P〈0．05）。结论：在体外,Bor联合DNR对KM3细胞生长抑制有协同作用。     

六磷酸肌醇对人胰腺癌细胞株PC-3和人胰腺原代培养细胞增殖分化的影响

目的观察六磷酸肌醇(IP6)在不同浓度、不同时间作用下对胰腺癌细胞株PC-3和正常胰腺原代培养细胞生长、分化的影响。方法直接细胞记数绘制生长抑制曲线、MTT法、流式细胞计检测细胞凋亡等方法观察PC-3细胞株和原代培养细胞增殖、分化特性。结果IP6对PC-3胰腺癌细胞的抑制呈时间、剂量依赖性,10 mmol/L时抑制作用达到最强,5mmol/L时的抑制效果稍小于10 mmol/L;IP6在<5 mmol/L时对人胰腺原代培养细胞的增殖几乎无影响,5 mmol/L时有轻度的抑制作用,10 mmol/L有明显的抑制作用。结论5 mmol/L的IP6既最大限度的杀伤肿瘤细胞,又最小程度的干扰非靶细胞,为最佳抑癌浓度。     

辛伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞增殖及FGFR1与p21ras表达的干预作用

目的:观察辛伐他汀对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中FGFR1、p21ras蛋白表达的影响。方法:体外培养大鼠VSMC,建立VSMC增殖模型,应用不同浓度的辛伐他汀干预,MTT法测定细胞增殖活力;免疫印迹法检测FGFR1与p21ras蛋白的表达。结果:与对照组比较,辛伐他汀各浓度组细胞增殖活力均显著降低(P<0.05);与对照组(FGFR1208.07±10.70,p21ras202.43±12.36)相比,低剂量组(FGFR1181.47±7.43,p21ras182.00±8.98)的FGFR1、p21ras表达差异无显著性(P>0.05),中剂量组(FGFR1144.90±9.03,p21ras147.03±9.13)、高剂量组(FGFR1104.43±8.08,p21ras100.3±8.37)的表达均较明显降低(P<0.05),中、高剂量组FGFR1、p21ras表达较低剂量组均显著降低(P<0.05),高剂量组表达又较中剂量组显著降低(P<0.05),呈剂量依赖性。结论:辛伐他汀能抑制VSMC增殖,该作用是通过抑制FGFR1、p21ras蛋白表达实现的,这可能是辛伐他汀治疗动脉粥样硬化、再狭窄及高血压等心血管疾病的重要机制之一。     

抑制pit-1基因表达对垂体生长激素腺瘤生物学行为影响的实验研究

目的:研究垂体特异转录因子-1(pit-1)反义寡核苷酸(ASODN)对垂体生长激素(GH)腺瘤细胞增殖和细胞凋亡的影响,为以pit-1为靶点治疗GH腺瘤提供理论和实验依据。方法:设计合成硫代磷酸化反义寡核苷酸(PS-ASODN),经脂质体(lipofectin)包裹转染瘤细胞,每隔24h取样。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测ASODN对细胞生长增殖的影响;用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡和周期分布的改变,用免疫组化SABC法、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定经ASODN作用后,pit-1蛋白和pit-1mRNA表达的变化。结果:ASODN组与正义组(SODN)及对照组相比较,48h、72h后细胞生长增殖受抑制(P<0.05),96h、120h时,差异有非常显著性(P<0.01);ASODN组对细胞凋亡有显著的促进作用,细胞多阻滞于G2/M期。其作用具有序列选择的特异性,在一定的时间范围内,呈时间依赖性。ASODN显著地抑制pit-1蛋白和pit-1mRNA的表达(均P<0.05)。结论:pit-1反义寡核苷酸能够有效地抑制GH腺瘤细胞的生长而促进其凋亡,具有较好的临床应用前景。     

In vitro susceptibility of Madurella mycetomatis, prime agent of Madura foot, to tea tree oil and artemisinin

OBJECTIVES: Eumycetoma caused by Madurella mycetomatis is treated with surgery and high doses of itraconazole and ketoconazole. These agents are toxic, and new therapies are required. METHODS: MICs were determined for artemisinin and tea tree oil, two natural herbal compounds. RESULTS: Artemisinin was not active against M. mycetomatis, but tea tree oil did inhibit its growth. Since tea tree oil's prime component easily penetrates the skin, tea tree oil could be a useful agent in the treatment of eumycetoma. CONCLUSIONS: Tea tree oil is active in vitro against M. mycetomatis.     

Artemisinin-resistant mutants of Toxoplasma gondii have altered calcium homeostasis

Artemisinin is a plant sesquiterpene lactone that has become an important drug for combating malaria, especially in regions where resistance to other drugs is widespread. While the mechanism of action is debated, artemisinin has been reported to inhibit the sarcoplasmic endoplasmic reticulum Ca(2+) ATPase (SERCA) in the malaria parasite. Artemisinin is also effective against Toxoplasma in vitro and in vivo, although it is less potent and, hence, is generally not used therapeutically to treat toxoplasmosis. To explore the mechanism of action, we generated chemically derived mutants of Toxoplasma gondii that were resistant to growth inhibition by this compound in vitro. Three artemisinin-resistant (ART(r)) mutant clones that differed in their sensitivities in vitro by three- to fivefold compared with that of the wild-type parasites were obtained. ART(r) mutants were cross-resistant to other derivatives of artemisinin, the most potent of which was artemisone. Resistance was not due to molecular alterations or differences in the expression of SERCA or other putative targets, such as proteins that code for multidrug resistance or translationally controlled tumor protein. ART(r) mutants were resistant to the induction of protein secretion from micronemes, a calcium-dependent process that is triggered by artemisinin. ART(r) mutants were not cross-resistant to secretion induced by thapsigargin but were more sensitive and were unable to regulate cytoslic calcium following treatment with this compound. These studies implicate calcium homeostasis in the mechanism of action of artemisinins against apicomplexan parasites.