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目的通过体外分离、增殖培养获取 γδΤ细胞、NK细胞和 L AK细胞 ,并比较 3种细胞的抗肿瘤的生物学特性。方法收集用不同单抗分别包被粘附的细胞 ,通过 MACS细胞分选仪的分选 ,获取的细胞进行细胞增殖动力学、细胞表型、细胞杀伤活性的测定以及单抗阻断效应的分析。结果经 MACS分离得到的 γδΤ细胞 ,培养 2周后细胞数扩增 6 0 0~ 80 0倍 ,CD3、CD8和 γδ细胞表达阳性率分别是 72 .2 9%、5 8.0 2 %和 6 5 .98%。γδΤ细胞对 NK敏感细胞 K5 6 2以及 NK不敏感细胞 Raji和 XG- 7这 3种不同靶细胞均有较高的杀伤率 ,分别为 35 .98%、5 2 .2 7%和 6 9.0 8;NK细胞对此 3种细胞的杀伤率分别是45 .2 1%、12 .34%和 2 9.2 7% ;L AK细胞的杀伤率分别为 44 .0 1%、2 9.2 7%和 2 5 .6 8%。γδΤ细胞对经 MHC- 类单抗阻断前后的 K5 6 2、Raji和 XG- 73种靶细胞的杀伤率无明显改变。结论γδΤ细胞、NK细胞和 L AK细胞都具有一定非特异性杀伤肿瘤细胞的作用 ;γδΤ细胞对 MHC- 类单抗阻断后的肿瘤细胞的杀伤无明显变化。提示 γδΤ细胞较 NK细胞和 L AK细胞有更广泛的抗瘤谱 相似文献
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目的:探讨Ⅰ型干扰素(IFN)对人来源γδT细胞杀伤骨肉瘤作用的影响。方法:取健康人和骨肉瘤患者外周血来源的单个核细胞,分别使用唑来膦酸(Zol)、Zol和Ⅰ型IFN体外刺激扩增,流式细胞技术检测γδT细胞的纯度,计算扩增倍数。以Zol刺激体外扩增的γδT细胞为对照组,Zol联合Ⅰ型IFN刺激体外扩增的γδT细胞为实验组,LDH法检测不同方法扩增的γδT细胞的细胞毒活性,ELISA法检测γδT细胞分泌的IFN-γ。结果:Zol、Zol联合Ⅰ型IFN均可高度选择性扩增健康人和骨肉瘤患者外周血单核细胞中的γδT细胞,扩增后γδT细胞具有杀伤骨肉瘤细胞的能力。Ⅰ型IFN预处理γδT细胞后可显著增强γδT细胞的杀伤活性。结论:Ⅰ型IFN能够促进人γδT细胞的抗骨肉瘤作用。 相似文献
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目的:探讨唑来膦酸(Zol)联合IL-2对健康人和骨肉瘤患者末梢血γδT细胞的扩增和细胞毒性作用的影响。方法:取健康人和骨肉瘤患者外周血来源的单个核细胞,分别使用IL-2和Zol联合IL-2刺激体外扩增,流式细胞技术检测γδT细胞的纯度,并计算其扩增倍数。以Daudi细胞作为阳性对照、Raji细胞为阴性对照,并以人成骨细胞系hFOB细胞作为正常对照,用LDH法检测扩增后γδT细胞的细胞毒活性的变化。结果:健康人和骨肉瘤患者外周血单核细胞经过体外14 d的培养,Zol联合IL-2组可高度选择性扩增γδT细胞,并且扩增后γδT细胞具有杀伤活性,而对正常细胞无杀伤活性。结论:健康人和骨肉瘤患者PBMCs经唑来膦酸联合IL-2刺激后,可获得高纯度具有较强的杀伤作用的γδT细胞。 相似文献
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探讨IL-21对人外周血γδT细胞抗肿瘤活性的影响。分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),分别在有或无IL-21参与的条件下,加入到含异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)、IL-2或IL-15的RPMI 1640完全培养基中诱导培养γδT细胞。在培养的第10天用台盼蓝染色计数细胞;采用流式细胞术检测各组γδT细胞的纯度及γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达;用CCK-8试剂盒检测γδT细胞对K562细胞的体外杀伤效应。结果显示,不同细胞因子组诱导10d后γδT细胞纯度均达到70%以上,IL-2+IL-21、IL-15+IL-21和IL-2+IL-15+IL-21组与IL-2、IL-15组相比,细胞纯度和扩增倍数没有显著性变化;IL-2+IL-21、IL-15+IL-21和IL-2+IL-15+IL-21组γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达及对K562细胞的杀伤活性均显著高于IL-2、IL-15单独组。以上结果表明,IL-21可通过上调γδT细胞穿孔素和颗粒酶B的表达增强其抗肿瘤活性。 相似文献
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目的:探讨外周血γδT细胞经唑来膦酸刺激后对骨肉瘤细胞株HOS的体内外杀伤作用及相关机制。方法:取健康人外周血5 mL,经唑来膦酸刺激后,在含IL-2的培养液中,培养14 d。用流式细胞仪测定γδT细胞所占的比例,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测其对骨肉瘤细胞株HOS的体外杀伤作用,并用抗人γδTCR抗体、抗人NKG2D抗体和穿孔素/颗粒酶阻滞剂CMA分别预处理γδT细胞,观察杀伤作用的变化。另用骨肉瘤细胞株HOS注入BALB/c裸鼠皮下建立骨肉瘤裸鼠种植瘤模型。随机将裸鼠分为2组,分别为未治疗组、γδT细胞治疗组。观察裸鼠瘤体大小及称量瘤重。结果:PBMCs经唑来膦酸刺激14 d后γδT细胞阳性率达到(95±3)%。当效靶细胞比为6∶1、12∶1、25∶1、50∶1时,对HOS细胞的杀伤率分别为26.8%、31.5%、37.8%、40.9%。用Anti-γδTCR抗体、Anti-NKG2D抗体及CMA预处理γδT细胞后,当效靶细胞比为25∶1时,对HOS的杀伤率分别为32.3%、4.7%、16.7%。体内抑瘤实验中,γδT细胞治疗组的肿瘤生长抑制率为42.78%。结论:PBMCs经唑来膦酸刺激后,可获得高纯度的γδT细胞,在体内外其对骨肉瘤细胞株HOS有较强的杀伤作用。 相似文献
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T细胞受体γδ表型淋巴细胞与肿瘤免疫 总被引:4,自引:0,他引:4
T细胞受体γδ表型细胞是一个新发现的T淋巴细胞亚群,约占人外周血淋巴细胞总数的3%~10%。实验证明,此类细胞具有多种细胞因子的分泌能力且可表现出对多种自体及建系肿瘤细胞较强的细胞毒活性。因其具有特殊的MHC非限制性的抗原识别方式,在某些肿瘤浸润淋巴细胞中的存在以及经过继免疫实验可获明显的抗肿瘤效应而引起了免疫学工作者们的兴趣。本文仅就γδT细胞在肿瘤免疫研究的近年进展作一综述。 相似文献
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《现代免疫学》2016,(4)
探讨辣椒素对人γδT细胞体外增殖及杀伤骨肉瘤细胞的影响及作用机制。分离健康人PBMC,加入到含异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)和IL-2的DMEM-F12完全培养基中诱导培养γδT细胞。不同浓度的辣椒素作用于γδT细胞48h后,CCK-8法检测各药物浓度组γδT细胞的增殖能力,采用流式细胞术检测各组γδT细胞穿孔素、颗粒酶B、CD107a及IFN-γ的表达,用LDH释放法检测各组γδT细胞对骨肉瘤HOS细胞的体外杀伤活性。结果显示,培养7d时各组γδT细胞纯度达到了(85.33±6.07)%。浓度为3.2~50μmol/L的辣椒素能显著促进γδT细胞的增殖,在浓度为25μmol/L时其穿孔素、颗粒酶B、CD107a及IFN-γ的表达均显著高于对照组,且对人骨肉瘤HOS细胞的体外杀伤活性显著增强。以上结果提示辣椒素在体外能通过促进γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和IFN-γ的表达上调显著增强其抗骨肉瘤细胞活性。 相似文献
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目的 探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人外周血γδT细胞体外增殖及抗肿瘤活性的影响.方法 分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),加入到含异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)和IL-2的RPMI 1640完全培养基中诱导培养γδT细胞.不同浓度的DHA作用于γδT细胞4δ h后,MTT法检测各药物浓度组γδT细胞的增殖能力,采用流式细胞术检测各组γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达,用CCK-8试剂盒检测各组γδT细胞对SW1990细胞的体外杀伤效应.结果 培养8d时各组γδT细胞纯度达到了75.46% ±5.32%.浓度为50~100μmol/ml的DHA能显著促进γδT细胞的增殖.DHA处理后γδT细胞杀伤胰腺癌SW1990细胞能力及其穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达均显著高于对照组.结论 DHA可增强γδT细胞抗肿瘤活性,其机制可能与其促进γδT细胞穿孔素和颗粒酶B的表达上调有关. 相似文献
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一种简单快速的γδT细胞扩增方法 总被引:2,自引:0,他引:2
建立一种特异快速地诱导扩增人外周血γδT细胞的方法。用 5~ 10ml外周血通过CD3细胞的富集、γδ单抗的诱导以及肿瘤细胞刺激的培养体系进行γδT细胞的体外扩增。结果显示 ,γδT细胞能在短时间内快速大量扩增到 10 9~ 10 10 的数量级 ;诱导 4周的CD8、γδ阳性的细胞百分率分别为 42 6 9%和 5 8 6 7% ,明显高于诱导前的 2 3 97%和 6 6 2 % ;γδT细胞对NK敏感的K5 6 2细胞和NK抵抗的Daudi细胞均有较高的杀伤活性 ;γδT细胞对经抗HSP单抗封闭后的Daudi细胞的杀伤率明显下降。该培养体系是一种用血量少、特异、经济、快速的人外周血γδT细胞体外扩增方法。 相似文献
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γδT细胞的生物学意义 总被引:5,自引:1,他引:5
<正>T淋巴细胞表面可分别表达两种与CD3分子相关联的T细胞抗原受体(T cell re-ceptor,TCR):由α链和β链(TCRαβ)或γ链和δ链构成的异质二聚体.人们一直对αβT细胞的结构和功能研究予以很大程度上的关注,而对于γδT细胞研究投入要少些.主要原因可能是人们认为TCRγδ细胞是一个外周淋巴细胞库中的数量较小的亚群,不大可能在免疫应答中起主要作用.γδT细胞约占正常人外周血淋巴细胞总数的3%~10%,在其表面表达CD3分子,但绝大多数不表达CD4及CD8分子.然而在长期进 相似文献
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目的:探讨MAPK信号转导途径在结核杆菌抗原(Mtb-Ag)活化的γδT细胞杀伤肿瘤细胞中的作用。方法:用Mtb-Ag刺激正常人PBMC以诱导γδT细胞扩增,并用磁珠阳性分选法分离高纯度的γδT细胞;用MTT比色法测定γδT细胞对肿瘤细胞系K562和Raji的细胞毒活性,并观察MEK/Erk特异性抑制剂PD98059和p38 MAPK特异性抑制剂SB203580,对细胞毒活性的阻断作用:用流式细胞仪检测肿瘤细胞诱导γδT细胞上CD69的表达,并观察PD98059和SB203580对CD69表达的抑制作用。结果:新鲜分离的PB-MC,用Mtb-Ag刺激培养第10天,用磁珠阳性法分离的细胞中γδT细胞的比率,分别为3.56%、74.63%和98.20%。PD98059可抑制γδT细胞的杀瘤活性,且对γδT细胞杀伤Fas低表达的K562细胞的抑制率(39.27%)高于对γδT细胞杀伤高表达Fas的Raji细胞的抑制率(26.58%)。PD98059还能明显抑制肿瘤细胞诱导γδT细胞表达CD69;而SB203580对γδT细胞的杀瘤活性和肿瘤细胞诱导的CD69的表达均无影响。结论:MAPK途径中的Erk通路(而不是p38通路)参与了γδT细胞对肿瘤细胞细胞毒活性的启动,且可能对γδT细胞的颗粒外吐作用较大,而对Fas/FasL介导的细胞毒活性的作用较小。MAPK途径的Erk通路可能还参与肿瘤细胞诱导γδT细胞的活化。 相似文献
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γδT细胞 总被引:2,自引:0,他引:2
一小部分T细胞的受体不是由α和β多肽链构成的“常规”T细胞受体(TCRαβ),而是分别由γ和δ链取而代之(TCRγδ)。TCRγδ能够识别抗原。出现在T细胞个体发生的早期。在机体的某些部位,如小鼠的皮肤和肠道TCRγδ占优势,提示γδT细胞可能在抗感染的第一线起着防御作用γδT细胞能分泌淋巴因子,并具有细胞毒活性。由于MHC的非限制性以及CD_4、CD_8两阴性γδT细胞的发现,表明其激活过程可能与已知的αβT细胞不同。结核杆菌抗原能够优先激活γδT细胞,提示γδT细胞可能有一种特异的功能。γδT细胞的数量在许多疾病中稍有增加,但到目前的研究还未能证实γδT细胞有病原性作用。 相似文献
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粘膜免疫和固有免疫在对肿瘤的防御中起着重要作用。γδ型T细胞大量的分布于粘膜相关淋巴组织,其作用介于固有免疫和适应性免疫之间并且是MHC非限制性的。因此其在抗肿瘤免疫中的作用也是不可忽视的。以下将对其两个主要的功能亚群VγVδ2 T细胞和Vδ1 T细胞向肿瘤组织内浸润、对肿瘤细胞的识别及杀伤机制进行简要综述。 相似文献
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人LAK细胞体外抗肿瘤作用机理探讨 总被引:2,自引:0,他引:2
在对人LAK细胞体外杀伤作用研究的基础上,进一步探讨了该群细胞体外抗肿瘤的机理。实验结果证实,LAK细胞的杀伤是由多种因素参与的,杀伤时既有因子作用,又有直接接触杀伤。杀伤后靶细胞核破坏,DNA碎片释放到细胞外。在一定的培养时间内,LAK细胞的杀伤能力和细胞本身的增殖成正相关关系。 相似文献
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γδT细胞的抗原识别机制 总被引:10,自引:1,他引:9
T细胞表面表达两类抗原受体(TCR):TCRαβ和TCRγδ。TCRαβ可特异地识别由抗原呈递细胞(APC)表面Ⅰ类或Ⅱ类MHC分子呈递的抗原肽,而TCRγδ则主要以MHC非限制方式识别各类抗原。最近对TCRγδ所识别的抗原类型及方式进行了较为深入的研究,本文就其进展作一述评。1 TCRγδ的多样性和分布特点提示其抗原识别的特殊性 同TCRαβ和免疫球蛋白(Ig)类似,TCRγδ基因由重组的V、D、J和C区组成。虽然γ、δ位点的V区多样性不及α和β,但其连接区多样性则使TCRγδ存在甚至超过T… 相似文献